專利名稱：包含芽孢桿菌支鏈淀粉酶和葡聚糖酶的口腔保健組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種包含芽孢桿菌支鏈淀粉酶和葡聚糖酶的組合物。
本發(fā)明還涉及來源于芽孢桿菌的支鏈淀粉酶與葡聚糖酶相結(jié)合在口腔保健組合物和產(chǎn)品中的用途，另外還涉及祛除齒斑和/或防止形成齒斑的用途。
背景技術：
齒斑的形成能夠?qū)е慢x齒、牙齦炎、牙周疾病和最終牙齒脫落。齒斑是細菌、上皮細胞、白細胞、巨噬細胞以及其它口腔分泌液的混合物。所述細菌產(chǎn)生高度分支的多糖，后者與來自口腔的微生物一起形成一種使齒斑得以繼續(xù)增殖的粘性基質(zhì)。
隨著齒斑的繼續(xù)積聚，將產(chǎn)生堅硬的白色或淺黃色沉積物。這些沉積物被稱為鈣化斑、牙積石或牙垢，它們是由齒斑和礦物質(zhì)(尤其是比如鈣)在唾液中形成的。
口腔多糖口腔多糖是由進入口腔的蔗糖(例如食物或飲料成分)經(jīng)生長于口腔內(nèi)的生齲齒微生物作用產(chǎn)生的，所述微生物例如是變異鏈球菌或者血鏈球菌。
上述口腔多糖包括大部分為α-1，6糖苷鍵的水溶性葡聚糖和一種被稱為“齒斑葡聚糖”的水不溶性胞外多糖主要組分，該多糖由α-1，3糖苷鍵連接的主鏈和α-1，6糖苷鍵連接的支鏈組成。
齒斑葡聚糖與羥磷灰石(它構(gòu)成了牙齒的堅硬多孔外層)結(jié)合，并與附著在牙齒表面的生齲齒細菌細胞表面上的受體蛋白相結(jié)合。
支鏈淀粉酶支鏈淀粉酶是α-糊精內(nèi)切-1，6-α-葡糖苷酶(或者支鏈淀粉6-葡聚糖水解酶)，該酶水解支鏈淀粉(pullulan)、支鏈淀粉(amylopectin)和糖原中的1，6-α-D-糖苷鍵。已知能產(chǎn)生支鏈淀粉酶的幾種微生物包括氣桿菌屬(Bender等，(1959)，Biochim Biophys.Acta36，309頁)、芽孢桿菌屬(Novo Nordisk A/S的EP063909和Solvay SA的EP605040)、閃爍桿菌屬(Novo Nordisk A/S的WO92/16617)、熱球菌屬(Novo Nordisk A/S的WO92/02614)的細菌。
支鏈淀粉酶的商業(yè)產(chǎn)品包括Novo Nordisk生產(chǎn)的Promozyme，該產(chǎn)品是一種得自Bacillus acidopullulyticus的耐熱脫支酶，用于葡萄糖和麥芽糖生產(chǎn)中的糖化步驟。另一種商品化支鏈淀粉酶是得自Bacillus deramificans的Optimax(Solvay SA)。
葡聚糖酶葡聚糖酶是α-1，6-葡聚糖酶(又稱為1，6-α-D-葡聚糖6葡聚糖水解酶)，該酶降解葡聚糖中的α-1，6-糖苷鍵。能產(chǎn)生葡聚糖酶的幾種微生物包括青霉屬、擬青霉屬、曲霉屬、鐮孢霉屬、穗霉屬、輪枝孢屬、長蠕孢屬和毛殼菌屬的真菌；乳桿菌屬、鏈球菌屬、纖維弧菌屬、噬纖維菌屬、短桿菌屬、假單胞菌屬、棒桿菌屬、節(jié)桿菌屬和黃桿菌屬的細菌以及酵母菌，比如斯達氏油脂酵母。
該酶的商業(yè)產(chǎn)品包括Novo Nordisk A/S經(jīng)薄青霉(Penicilliumlilacium)發(fā)酵生產(chǎn)的Dextranase 50L。Dextranase 50L可用于制糖業(yè)中降解粗糖汁或糖漿中的葡聚糖。
已有建議向口腔保健組合物和產(chǎn)品中添加支鏈淀粉酶和/或葡聚糖酶和/或其他酶類以便防止齲齒、齒斑和牙垢的形成。
DE1965043(Aspro-Nicholas Ltd.)描述了一種包含葡聚糖酶和支鏈淀粉酶的口腔保健組合物。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供能安全(即不損害口腔組織和結(jié)構(gòu))并有效地防止齒斑形成和/或祛除已沉積齒斑的改進的口腔保健產(chǎn)品。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，包含來源于芽孢桿菌屬細菌菌株的支鏈淀粉酶與葡聚糖酶混合物的組合物和產(chǎn)品，對齒斑葡聚糖水解和齒斑祛除以及防止齒斑形成有協(xié)同效果。
本發(fā)明的第一個方面涉及包含芽孢桿菌支鏈淀粉酶和葡聚糖酶的組合物。
本發(fā)明的第二個方面涉及包含本發(fā)明所述口腔保健組合物的口腔保健產(chǎn)品。
本發(fā)明的目的還包括提供芽孢桿菌支鏈淀粉酶用于水解含有齒斑葡聚糖的材料以及祛除和/或預防齒斑的用途。
本發(fā)明最后一個方面涉及將本發(fā)明所述組合物和產(chǎn)品用于祛除和/或預防齒斑的用途。
附圖簡述

圖1比較了兩種芽孢桿菌支鏈淀粉酶和一種產(chǎn)氣腸桿菌支鏈淀粉酶單獨地以及與薄擬青霉葡聚糖酶組合起來對齒斑葡聚糖的水解效果。
發(fā)明詳述本發(fā)明的目的是提供改進的口腔保健產(chǎn)品。
“改進的”口腔保健產(chǎn)品意味著能安全(即不損害口腔組織和結(jié)構(gòu))并有效地防止齒斑形成和/或祛除已沉積齒斑的產(chǎn)品。
如上所述，包含支鏈淀粉酶和葡聚糖酶的口腔保健組合物是已知的。
本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，將來源于芽孢桿菌屬的支鏈淀粉酶與葡聚糖酶組合可以提供改進的口腔保健產(chǎn)品。這種口腔保健產(chǎn)品能比包含其他細菌支鏈淀粉酶以及葡聚糖酶的別的同類產(chǎn)品更有效地祛除齒斑。
就祛除齒斑而言，芽孢桿菌支鏈淀粉酶和葡聚糖酶之間可產(chǎn)生協(xié)同效應。當結(jié)合使用一種普通的細菌支鏈淀粉酶時，比如產(chǎn)氣腸桿菌支鏈淀粉酶和葡聚糖酶和/或齒斑葡聚糖酶(mutanase)，支鏈淀粉酶無助于祛除齒斑。
因此，含有芽孢桿菌支鏈淀粉酶和葡聚糖酶組合的組合物和產(chǎn)品較之同類組合物有許多優(yōu)點。
可以減少達到預期效果所需的酶量，并且/或者達到預期效果所需的時間更少。
酶的用量減少能給口腔保健產(chǎn)品制造商帶來經(jīng)濟效益，因為根據(jù)本發(fā)明可以使生產(chǎn)這類產(chǎn)品的成本降低。
另外，如果向產(chǎn)品中加入原來用量的酶，該產(chǎn)品常常在更短的時間內(nèi)就可達到預期效果，因此得到的是一種改進的產(chǎn)品。
由本發(fā)明所述口腔保健組合物制備的本發(fā)明口腔保健產(chǎn)品，其使用者也可從本發(fā)明獲益(下面將更詳細描述)，因為該產(chǎn)品能比同類包含支鏈淀粉酶和葡聚糖酶的已有產(chǎn)品更安全和更有效地防止直接和間接的缺點(分別是例如牙齒上的黃色沉積物和防止牙洞和齒齦炎)。
應當理解，所述口腔保健產(chǎn)品同時也可以直接或間接地具有其他口腔保健功能，例如預防牙洞或牙齦炎。組合物本發(fā)明的第一個方面涉及包含芽孢桿菌支鏈淀粉酶(即來源于芽孢桿菌屬細菌的支鏈淀粉酶)和葡聚糖酶的組合物。本發(fā)明口腔保健組合物還包含用于口腔保健組合物的成分。這類成分是本領域技術人員所熟知的。
具體涵蓋的芽孢桿菌支鏈淀粉酶包括來源于一株Bacillusacidopullulyticus或一株B.deramificans的支鏈淀粉酶。但是，也可以使用其他芽孢桿菌支鏈淀粉酶。
可以有利地將芽孢桿菌支鏈淀粉酶與來源于擬青霉菌(尤其是薄擬青霉(Paecilomyces lilacinus))或青霉菌(比如薄青霉(Penicillium lilacinus)或微黃青霉(Penicilliumminioluteum))的葡聚糖酶或者其他如“發(fā)明背景”部分所提到的葡聚糖酶組合起來使用。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述酶(即尤其是支鏈淀粉酶和葡聚糖酶)是重組酶。
本發(fā)明所述酶在人類或動物的口腔常規(guī)溫度和pH(即在20-40℃，尤其是37℃左右以及pH5-9，尤其是pH6-8.5)的條件下應當有相當?shù)幕钚?，或者在使用所述特定口腔保健產(chǎn)品時的口腔常見溫度和pH條件下有相當?shù)幕钚浴?br> 在本發(fā)明范圍內(nèi)，“相當?shù)幕钚浴币馕吨谑褂盟隹谇槐＝〗M合物時的口腔常見pH條件下，與其最佳pH時的相對活性相比，酶的相對活性在50％以上，特別是在60％以上，更特別是在70％以上，比如90％。
本發(fā)明的口腔保健產(chǎn)品中還可以含有一或多種選自以下的酶類齒斑葡聚糖酶、氧化酶(比如葡萄糖氧化酶、L-氨基酸氧化酶)、過氧化物酶(比如Novo Nordisk A/S提出的WO95/10602中描述的鬼傘過氧化物酶)、乳過氧化物酶、鹵鹽過氧化物酶(haloperoxidase)、漆酶、蛋白酶(比如木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶(例如WO95/02044(NovoNordisk A/S)中描述的酸性蛋白酶))、內(nèi)切葡糖苷酶、脂酶、淀粉酶(包括淀粉葡糖苷酶，比如AMG(Novo Nordisk A/S))、抗微生物酶以及它們的混合物。
本發(fā)明的口腔保健組合物可以適當?shù)負饺胍欢康难挎邨U菌支鏈淀粉酶，該用量等同于如下范圍的酶活(計算為在最終的口腔保健產(chǎn)品中的酶活單位)0.001 PUN到1000 PUN/ml，優(yōu)選0.01 PUN/ml到500 PUN/ml，尤其是0.1 PUN/ml到100 PUN/ml。
根據(jù)本發(fā)明，可以任選在口腔保健組合物中摻入葡聚糖酶，其用量等同于如下范圍的酶活(計算為在最終的口腔保健產(chǎn)品中的酶活單位)0.001KDU到1000KDU/ml，優(yōu)選0.01KDU/ml到500KDU/ml，尤其是0.1KDU/ml到100KDU/ml。
本發(fā)明口腔保健組合物還可以適當?shù)匕欢康凝X斑葡聚糖酶，比如Tricoderma harzianum齒斑葡聚糖，該用量等同于如下范圍的酶活(計算為最終的口腔保健產(chǎn)品中的酶活單位)0.001MU到1000MU/ml，優(yōu)選0.01MU/ml到500MU/ml，如0.1MU/ml到100KU/ml，特別是0.05MU/ml到100MU/ml?？谇槐＝‘a(chǎn)品本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明口腔保健組合物的口腔保健產(chǎn)品。這些口腔保健產(chǎn)品可以采取任何適當?shù)奈锢硇螒B(tài)(即粉末、糊狀、膠狀、液體、膏狀、片劑等)。
“口腔保健產(chǎn)品”可以被定義為是一種可通過預防齒斑的形成、祛除齒斑、預防和/或治療牙齒疾病等來維持或改善人和動物口腔衛(wèi)生的產(chǎn)品。
至少在本發(fā)明范疇內(nèi)，口腔保健產(chǎn)品還涵蓋清潔牙齒、假牙等的產(chǎn)品。
這類口腔保健產(chǎn)品的例子包括牙膏、齒霜、牙膠或牙粉，牙齒和口腔洗液、刷牙前后的漱口制品、口香糖、止咳糖和糖。
牙膏和牙膠通常包括磨光劑、起泡劑、芳香劑、保溫劑、粘合劑、增稠劑、甜味劑、增白/漂白/去污劑、水和任選的酶。
口腔洗液(包括齒斑除去液)通常包含水/醇溶液、芳香劑、保濕劑、甜味劑、起泡劑、著色劑和任選的酶。磨光劑在本發(fā)明的潔齒產(chǎn)品中還可以加入磨光劑。根據(jù)本發(fā)明，所述磨光劑包括氧化鋁及其水合物、比如α氧化鋁三水合物、三硅酸鎂、碳酸鎂、高嶺土、硅鋁酸鹽、比如煅燒的硅酸鋁和硅酸鋁、碳酸鈣、硅酸鋯，以及粉末狀塑料，比如聚氯乙烯、聚酰胺、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、酚醛樹脂、三聚氰胺甲醛樹脂、脲醛樹脂、環(huán)氧樹脂、粉末狀的聚乙烯、二氧化硅干膠、水溶膠和氣凝膠等。焦磷酸鈣、水不溶的堿性偏磷酸鹽、磷酸二鈣和/或它的二水合物、正磷酸二鈣、磷酸三鈣、微粒狀羥磷灰石等都適合作為磨光劑。還可以采用這些物質(zhì)的混合物。
根據(jù)不同口腔保健產(chǎn)品，磨光劑的重量百分比可以在0到70％，優(yōu)選1到70％。對于牙膏，磨光劑的含量通常為牙膏終產(chǎn)品重量的10到70％。
采用保濕劑是為了防止例如牙膏失水。根據(jù)本發(fā)明，適用于口腔保健產(chǎn)品的保濕劑包括以下化合物及其混合物甘油、多羥基化合物、山梨醇、聚乙二醇(PEG)、丙二醇、1，3-丙二醇，1，4-丁二醇、氫化的部分水解多糖等。牙膏中的保溫劑通常在0到80％，優(yōu)選5到70％重量。
合適的增稠劑和粘合劑的例子可以舉出二氧化硅、淀粉、黃芪膠、黃原膠、愛爾蘭苔蘚提取物、海藻酸鹽、果膠、纖維素衍生物，比如羥乙基纖維素、羥基甲基纖維素鈉和羥基丙基纖維素、聚丙烯酸及其鹽、聚乙烯吡咯烷酮，這些物質(zhì)有助于潔齒產(chǎn)品的穩(wěn)定。增稠劑在牙膏和牙膠中的含量可以為終產(chǎn)品重量的0.1到20％重量份，粘合劑的含量可以為0.01到10％。起泡劑可以用肥皂、陰離子、陽離子、非離子、兩性和/或兩性離子表面活性劑作為起泡劑。這些物質(zhì)可以占終產(chǎn)品重量的0到15％，優(yōu)選0.1到13％，更優(yōu)選在0.25到10％。表面活性劑表面活性劑的適用限度是不對所含蛋白酶產(chǎn)生失活效果。表面活性劑包括脂肪族醇的硫酸酯、磺化單甘油酯的鹽或具有10到20個碳原子的脂肪酸的鹽，脂肪酸-白蛋白縮合物、脂肪酸酰胺和牛磺酸的鹽和/或羥乙磺酸脂肪酸酯鹽。甜味劑合適的甜味劑包括糖精。芳香劑芳香劑，比如薄荷，通常以低量存在，比如0.01到大約5％重量份，尤其是0.1到5％。增白/漂白劑增白/漂白劑包括H2O2，根據(jù)終產(chǎn)品的重量計算，可以添加少于5％、優(yōu)選0.25到4％的增白/漂白劑。
增白/漂白劑可以是一種酶，比如氧化還原酶。在WO97/06775(NovoNordisk)中描述了合適的牙齒漂白酶的例子。水通常水的加入量能使例如牙膏具有一種流動狀態(tài)。其他試劑產(chǎn)品中還可以包含其他水溶性抗細菌試劑，比如二葡萄糖酸洗必太、氨己嘧啶、雙胍啶、季胺抗細菌化合物以及某些金屬離子，比如鋅、銅、銀和錫的水溶性物質(zhì)(例如氯化鋅、銅和錫以及硝酸銀)。
本發(fā)明還包括添加可以用做氟化物來源、染料/著色劑、防腐劑、維生素、pH調(diào)節(jié)劑、抗齲齒劑、脫敏劑等的化合物。酶用于本發(fā)明所述口腔保健組合物和口腔保健產(chǎn)品另外的必要成分是酶。酶是生命體系中化學反應的生物催化劑。酶與其作用底物結(jié)合在一起形成中間狀態(tài)的酶-底物復合物。該復合物隨后轉(zhuǎn)變?yōu)榉磻a(chǎn)物和釋放的酶，后者繼續(xù)行使其特異酶促功能。
當用酶來清潔口腔時，它能提供幾種有益效果。蛋白酶能降解吸附在牙齒表面并形成薄膜(齒斑的第一層)的唾液蛋白質(zhì)。蛋白酶與脂酶一起通過使構(gòu)成細菌細胞壁和細胞膜結(jié)構(gòu)成分的蛋白質(zhì)和脂類發(fā)生水解來破壞細菌。葡聚糖酶能降解由細菌產(chǎn)生的、形成細菌吸附基質(zhì)的有機骨架結(jié)構(gòu)。蛋白酶和淀粉酶不僅能防止形成齒斑，還能通過降解結(jié)合鈣的糖-蛋白復合物、防止礦化來防止牙垢的擴展。牙膏由本發(fā)明所述口腔保健組合物生產(chǎn)的牙膏(以最終的牙膏組合物的重量百分比表示)通常含有以下成分磨光劑10-70％保溫劑0-80％增稠劑0.1-20％粘合劑0.01-10％甜味劑0.1-5％起泡劑0-15％增白劑0-5％酶0.0001-20％在本發(fā)明的一個具體實施方案中，口腔保健產(chǎn)品是包含以下成分的牙膏a)10-70％磨光劑b)0-80％保溫劑c)0.1-20％增稠劑d)0.01-10％粘合劑e)0.1-5％甜味劑f)0-15％起泡劑g)0-5％增白劑i)0.0001-20％酶i)所指的酶包括支鏈淀粉酶、葡聚糖酶以及已知用于牙膏等產(chǎn)品的上述其它酶?？谇幌匆河杀景l(fā)明所述口腔保健組合物生產(chǎn)的口腔洗液(以最終的口腔洗液組合物的重量百分比表示)通常含有以下成分0-20％保溫劑0-2％表面活性劑0-5％酶0-20％乙醇0-2％其他成分(例如芳香劑、甜味劑、氟化物等活性成分)0-70％水可以用適當?shù)木彌_液(例如pH6-7.5的檸檬酸鈉或磷酸鈉)來緩沖口腔洗液組合物。
口腔洗液可以是未稀釋形式(即使用前必須稀釋)。制備方法可以采用口腔產(chǎn)品領域的常規(guī)方法來制備本發(fā)明所述口腔保健組合物及產(chǎn)品。用途根據(jù)本發(fā)明，用芽孢桿菌支鏈淀粉酶來水解齒斑葡聚糖并進一步用于防止和/或祛除齒斑。優(yōu)選將芽孢桿菌支鏈淀粉酶與葡聚糖酶結(jié)合使用，有時還可以與齒斑葡聚糖酶一起使用。
本發(fā)明的組合物和產(chǎn)品可以用于祛除和/或防止齒斑的形成。
本發(fā)明還包括將芽孢桿菌支鏈淀粉酶用于食物、飼料和/或?qū)櫸锸称分校瑑?yōu)選與葡聚糖酶結(jié)合使用，有時還可以與齒斑葡聚糖酶一起使用。制備方法可以采用口腔產(chǎn)品領域的常規(guī)方法來制備本發(fā)明所述口腔保健組合物及產(chǎn)品。材料和方法材料支鏈淀粉酶Promozyme來源于B.acidopullulyticus(EP63909描述過的)的支鏈淀粉酶(Novo Nordisk有售)Optimax來源于B.deramificans(EP605040(Solvay SA)描述過的)的支鏈淀粉酶。
產(chǎn)氣腸桿菌支鏈淀粉酶(購自Amano，JP)。其他酶類來源于薄擬青霉的葡聚糖酶(Novo Nordisk有售)來源于T.harzianum CBS243.71的齒斑葡聚糖酶(Novo Nordisk有售)微生物變異鏈球菌CBS350.71(或OMZ176)粘放線菌DSM43329具核梭桿菌多形亞種DSM 20482溶液Britton-Robinson緩沖液赤蘚紅B(Sigma)儀器震蕩器(Eppendorf Thermomixer，5436型)比色計CR-200(Minolta)制備羥磷灰石盤將250mg羥磷灰石以5900kg(13000lbs)的壓力在盤模中壓5分鐘來制備羥磷灰石盤。然后將盤于600℃燒結(jié)4小時，最后用無菌去離子水水化。羥磷灰石盤滅菌將羥磷灰石盤于180℃滅菌2小時，用無菌去離子水水化，并放置在Nunc管(10ml容積)的蓋子中。制備齒斑葡聚糖于pH6.5，37℃(保持恒定)，通氣率為75rpm的條件下，在包含以下成分的培養(yǎng)基中培養(yǎng)變異鏈球菌CBS350.71來制備齒斑葡聚糖NZ-Case 6.5g/l酵母提取物6g/l(NH4)2SO420g/lK2PO43g/l葡萄糖50g/lPluronic PE6100 0.1％35小時后，加入蔗糖至終濃度為60g/l來誘導葡糖基轉(zhuǎn)移酶?？偟陌l(fā)酵時間為75小時。將發(fā)酵上清液離心并過濾(無菌)。然后向上清液中加入蔗糖至終濃度為5％(用醋酸將pH調(diào)至7.0)，并于37℃將溶液攪拌過夜。過濾溶液，將不溶的齒斑葡聚糖收集在propex上，用含有1％苯甲酸鈉的去離子水(用醋酸調(diào)至pH5)徹底清洗。最后，將不溶的齒斑葡聚糖凍干并研磨。方法測活一個支鏈淀粉酶單位Novo(Pullulanase Unit Novo，PUN)定義為這樣的酶量，該用量的酶在如下標準條件下每分鐘水解支鏈淀粉釋放出還原力相當于1微摩爾葡萄糖的還原糖底物…………………………0.2％支鏈淀粉溫度…………………………40℃pH……………………………5.0反應時間……………………30分鐘可來函索取該分析方法的詳細說明書(AF190)。確定葡聚糖酶活性(KDU)一千Novo葡聚糖酶單位(1 Kilo Novo Dextranase Unit，1KDU)是在Novo Nordisk用于葡聚糖酶測活的方法中，基于如下標準條件，每小時降解葡聚糖形成相當于1g麥芽糖的還原糖所需酶量底物…………………………Dextran500(Pharmacia)反應時間……………………20分鐘溫度…………………………40℃pH……………………………5.4可來函索取Novo Nordisk分析方法的詳細說明書(AF120)。祛除齒斑效果的評價用于評價祛除齒斑效果的方法是基于Kao在JP2250816中描述的方法。根據(jù)該方法，用含有三株口腔微生物(變異鏈球菌、粘放線菌和具核梭桿菌)的生物膜包被羥磷灰石盤。
為了檢測齒斑祛除效果，用于PBS中的0.1％赤蘚紅B將羥磷灰石盤上的齒斑染成紅色。在比色計CR-200上測量紅色的強度(即a*)。a*最大值為60。低于該值表明紅色強度低(即齒斑減少)。如果所測a*值為零，就沒有紅色(即沒有齒斑)。
實施例實施例1齒斑葡聚糖水解測試了兩種芽孢桿菌支鏈淀粉酶和一種來源于產(chǎn)氣腸桿菌的普通細菌支鏈淀粉酶單獨以及與薄擬青霉葡聚糖酶組合起來水解齒斑葡聚糖的情況。
用超聲儀將如“材料與方法”部分所述制備的齒斑葡聚糖懸液分散在去離子水中形成2.5％(w/v)的底物懸液。
制備以下溶于10mM BR緩沖液中的酶溶液。
Optimax(芽孢桿菌支鏈淀粉酶)0，5及10PUN/mlPromozyme(芽孢桿菌支鏈淀粉酶)0，5及10PUN/ml產(chǎn)氣腸桿菌支鏈淀粉酶0，5及10PUN/ml還制備了混合有8.5DU/ml薄擬青霉葡聚糖酶的上述酶溶液。
另外，制備了10mM Britton-Robinson緩沖液(pH5.5)。
在一個微量離心管中將250μl上述各種酶溶液與250μl緩沖液(pH5.5)混合。立即向其中加入750μl齒斑葡聚糖懸液后，于37℃以最大速度震蕩溫育。
恰好15分鐘后，加入250μl 0.5N HCl終止酶促反應。通過在加入底物懸液前加入0.5N HCl來制備對照樣品。將所有反應體系離心。
根據(jù)蒽酮反應法(J.H.Roe(1955)，生物學化學雜志，212，335頁)確定所得上清液中的溶解糖。
結(jié)果示于圖1。從圖1可以看到兩種芽孢桿菌支鏈淀粉酶(Optimax和Promozyme)分別與擬青霉葡聚糖酶結(jié)合使用來水解齒斑葡聚糖時顯示出協(xié)同效果，而普通的產(chǎn)氣腸桿菌支鏈淀粉酶與同一葡聚糖酶結(jié)合使用時沒有這樣的效果。
文中引用了多篇文獻，這些文獻此處全文引做參考。
權利要求
1.一種包含芽孢桿菌支鏈淀粉酶和葡聚糖酶的組合物。
2.權利要求1所述組合物，其中還包含用于口腔保健組合物的成分。
3.權利要求1或2的組合物，其中所述支鏈淀粉酶來源于Bacillusacidopullulyticus或Bacillus deramificans菌株。
4.權利要求1到3任何一項的組合物，其中所述葡聚糖酶來源于擬青霉，特別是薄擬青霉。
5.權利要求1到4任何一項的組合物，其中所述酶在20℃到40℃，特別是37℃左右具有相當活性。
6.權利要求5的組合物，其中所述酶較之其最佳pH時的相對活性，在使用該組合物時的口腔常規(guī)pH下的相對酶活性在50％以上，特別是60％以上，更特別是70％以上，比如90％。
7.權利要求1到6任何一項的組合物，其中還含有1或多種選自齒斑葡聚糖酶、氧化酶、過氧化物酶、鹵鹽過氧化物酶、漆酶、蛋白酶、內(nèi)切葡糖苷酶、脂酶、淀粉酶、抗微生物酶的酶類或它們的混合物。
8.一種包含權利要求1到7任何一項所述組合物的口腔保健產(chǎn)品。
9.權利要求8的口腔保健產(chǎn)品，它是一種潔齒劑，比如牙膏、牙粉或口腔洗液。
10.權利要求10的口腔保健產(chǎn)品，其中還包含葡聚糖酶，比如來源于擬青霉，特別是薄擬青霉的葡聚糖酶。
11.芽孢桿菌支鏈淀粉酶用于水解含齒斑葡聚糖的材料的用途。
12.權利要求11的用途，其中所述芽孢桿菌支鏈淀粉酶是與葡聚糖酶和/或齒斑葡聚糖酶結(jié)合使用。
13.芽孢桿菌支鏈淀粉酶用于防止齒斑形成和/或祛除已形成齒斑的用途。
14.權利要求13的用途，其中所述芽孢桿菌支鏈淀粉酶是與葡聚糖酶和/或齒斑葡聚糖酶結(jié)合使用。
15.權利要求1到7任何一項所述組合物或者權利要求8到10任何一項所述產(chǎn)品用于防止齒斑形成和/或祛除已形成齒斑的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及口腔保健組合物和產(chǎn)品,這些組合物和產(chǎn)品中含有芽孢桿菌支鏈淀粉酶和葡聚糖酶,以及任選的其他酶類,比如齒斑葡聚糖酶。
文檔編號A61P1/00GK1264305SQ9880724
公開日2000年8月23日 申請日期1998年6月8日 優(yōu)先權日1997年6月17日
發(fā)明者R·蘇奇亞, P·H·尼爾森, D·阿斯菱 申請人:諾沃挪第克公司