專利名稱：20－芳烷基－5α－孕甾烷衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物或含有上述化合物的藥物組合物，本發(fā)明還涉及這些20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物在制備用于控制生育藥物的用途。
性繁殖包括二倍體和單倍體狀態(tài)的周期性交替二倍體細(xì)胞通過減數(shù)分裂過程形成單倍體細(xì)胞，單倍體細(xì)胞在生育過程中又結(jié)合組成新的二倍體細(xì)胞。減數(shù)分裂過程以兩次減數(shù)分裂(I和II)為特征，對(duì)于雄性和雌性胚細(xì)胞來說是唯一的。在兩次減數(shù)分裂過程中，發(fā)生一次DNA分裂，并從一個(gè)二倍體細(xì)胞產(chǎn)生四個(gè)單倍體細(xì)胞。在第一次減數(shù)分裂的前期，發(fā)生了父系和母系遺傳物質(zhì)交換的染色體交換事件。在第一次減數(shù)分裂的后期，構(gòu)成兩個(gè)姊妹染色單體的每個(gè)染色體對(duì)中的一個(gè)元素分別分配到每個(gè)子代細(xì)胞中。第二次減數(shù)分裂使每個(gè)姊妹染色單體分離到不同的單倍體細(xì)胞中。雄性和雌性胚細(xì)胞在減數(shù)分裂過程的行為是相似的，只是這些過程的調(diào)控有所不同。
在雄性動(dòng)物中，減數(shù)分裂過程是一個(gè)衍生自眾多未成熟胚細(xì)胞的胚細(xì)胞--干精原細(xì)胞的持續(xù)過程。在雄性動(dòng)物性成熟后，來自干細(xì)胞群體的精原細(xì)胞開始減數(shù)分裂。第一次和第二次減數(shù)分裂過程不間斷的進(jìn)行，最終導(dǎo)致了四個(gè)成熟精子的產(chǎn)生。
在雌性動(dòng)物中，初級(jí)卵母細(xì)胞在胚胎期就已經(jīng)開始第一次減數(shù)分裂，但在前期(dictyate階段)便停止了，直至雌性性成熟。減數(shù)分裂在排卵(卵成熟)時(shí)恢復(fù)，之后，第一次減數(shù)分裂便告完成，第二次減數(shù)分裂開始啟動(dòng)。在大多數(shù)脊椎動(dòng)物中，第二次減數(shù)分裂在中期停止，僅在生育時(shí)才告完成。在第一次減數(shù)分裂和第二次減數(shù)分裂后，胞漿對(duì)稱分配，產(chǎn)生兩個(gè)次級(jí)卵母細(xì)胞，每個(gè)均帶有單一染色體的一個(gè)單倍體，但體積有很大不同一個(gè)是較小的極性體，其最終變性，另一個(gè)是含有全部生長(zhǎng)潛力的較大細(xì)胞，最終發(fā)展成為一個(gè)成熟的卵子。
生長(zhǎng)中的卵細(xì)胞從卵巢中釋放并準(zhǔn)備生育的階段在不同的物種之間有所不同。無論是無脊椎動(dòng)物還是脊椎動(dòng)物，卵巢輔助細(xì)胞可以對(duì)在身體內(nèi)到處產(chǎn)生的聚肽(促性腺激素)有所反應(yīng)，從而控制卵母細(xì)胞的成熟并最終(在大多數(shù)動(dòng)物中)控制排卵。
在人類體內(nèi)，新生雌性的初級(jí)卵母細(xì)胞停止在減數(shù)分裂的I期，其大多數(shù)被一層卵泡細(xì)胞包圍，這些帶有包圍細(xì)胞的卵母細(xì)胞構(gòu)成了初級(jí)的卵泡。一小部分的初級(jí)卵泡隨后開始發(fā)育成為卵泡卵泡不斷擴(kuò)大和分化形成了一個(gè)包圍在初級(jí)卵母細(xì)胞周圍的多層外套；卵母細(xì)胞本身擴(kuò)大并發(fā)育成透明區(qū)、含有大量糖蛋白的細(xì)胞外基質(zhì)以及皮質(zhì)顆粒，尤其是外層區(qū)域中漿膜下的分泌載體和卵胞漿皮質(zhì)[當(dāng)卵被精子活化后，這些皮質(zhì)顆粒通過細(xì)胞排粒作用釋放其內(nèi)容物；這些顆粒內(nèi)容物可以改變卵的胞衣，從而防止其它精子與這個(gè)卵的結(jié)合]。
發(fā)育的卵泡不斷生長(zhǎng)，它們之中的一部分發(fā)育成為流質(zhì)填充的腔或竇，成為竇性卵泡。這類卵泡的發(fā)育依賴于垂體腺體分泌的促性腺激素(主要是卵泡刺激激素-FSH)以及卵泡細(xì)胞本身分泌的雌激素。從青春期開始，由垂體分泌的另一種促性腺激素糖類物質(zhì)--黃體化激素(LH)活化單一的竇性卵泡，由于被刺激的卵泡迅速地?cái)U(kuò)大并在卵巢表面破裂，釋放出其中的次級(jí)卵母細(xì)胞，從而了完成減數(shù)分裂的I期。對(duì)大多數(shù)哺乳動(dòng)物來說，僅僅在與精子結(jié)合后，次級(jí)卵母細(xì)胞才被觸發(fā)開始進(jìn)入減數(shù)分裂的II期。
有關(guān)雄性和雌性胚細(xì)胞減數(shù)分裂過程起始和控制的機(jī)制研究提出了環(huán)核苷酸在介導(dǎo)的減數(shù)分裂停止中所起的作用。那些可以保持較高cAMP水平的化合物可以防止卵母細(xì)胞的成熟[Eppig，J.和Downs，S.(1984)Biol.Reprod.301-11]。象腺苷或次黃嘌呤等嘌呤類物質(zhì)被認(rèn)為與cAMP介導(dǎo)的減數(shù)分裂停止?fàn)顟B(tài)的維持有關(guān)[Eppig，J.，Ward-Bailey，P.和Coleman，D.(1984)Biol.Reprod.301041-1049]。
Byskov，A.等人[(1976)Dev.Biol.52193-200]首先描述了在胎兒小鼠性腺的培養(yǎng)系統(tǒng)中有調(diào)控減數(shù)分裂的物質(zhì)存在。這一發(fā)現(xiàn)提示減數(shù)分裂活化物質(zhì)(MAS)和減數(shù)分裂阻止物質(zhì)(MPS)的濃度一起調(diào)控減數(shù)分裂過程[Byskov，A.等人(1994)，“生殖生理學(xué)”，Eds.Knobil，E.和Neill，J.，Raven Press，New York]。
最近，Byskov，A.等人對(duì)從人類卵泡流質(zhì)中分離出來的(3β，5α，20R)-4，4-二甲基膽甾-8，14，24-三烯-3-醇(FF-MAS)以及從公牛實(shí)驗(yàn)中分離出來的(3β，5α，20R)-4，4-二甲基膽甾-8，24-二烯-3-醇進(jìn)行了鑒定[(1995)Nature 374559-562]，它們分別是人類和牛體內(nèi)內(nèi)源性的減數(shù)分裂活化物質(zhì)。已經(jīng)證明這些甾醇可以刺激處于培養(yǎng)中的包圍和裸露卵丘減數(shù)分裂的恢復(fù)。這些具有飽和或不飽和膽甾烷側(cè)鏈的內(nèi)源性的甾醇衍生物作為減數(shù)分裂調(diào)控物質(zhì)，已在國(guó)際專利申請(qǐng)WO96/00235，WO/9700883以及WO/9700884(NOVO NORDISKA/S)中被公開。
這些膽甾烷的缺陷是在體內(nèi)很快容易失活[Hall，P.F.(1985)維生素和激素42315]。因此限制了它們作為生育控制劑的潛力。
因此存在開發(fā)一些具有改善的體內(nèi)活性的減數(shù)分裂調(diào)控劑的需求。
最終，本發(fā)明提出了具有通式(I)的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物或其制藥學(xué)上可接受的鹽類，
其中R1為(H，OR)，(H，OSO3H)或NOR；R為H，(C1-6)烷基或(C1-6)?；?；R2和R3為各自獨(dú)立地代表氫或(C1-6)烷基；X為直鏈二價(jià)C1-8烴類基團(tuán)，其任意地包含雙鍵或三鍵；或X為-(CH2)m-CR7R8-；m＝0-4；R7和R8中至少一個(gè)為(C1-4)烷基，羥基，(C1-4)烷氧基或鹵素；另一個(gè)如果存在為氫；或者R7和R8一起代表O或NOR’；R’為H，(C1-6)烷基或(C1-6)?；?；R4，R5和R6為各自獨(dú)立地代表氫，羥基，(C1-4)烷氧基；鹵素，NR9，R10，或(C1-4)烷基，它們可選擇性被羥基，烷氧基，鹵素或氧取代；R9和R10為各自獨(dú)立地代表氫或(C1-4)烷基；且虛線代表Δ7或Δ8雙鍵，或一對(duì)選自Δ7，14、Δ8，14、、和Δ6，8(14)的共軛雙鍵；條件是不包括(3β，4α，24E)-25-(4-羥苯基)-4-甲基-26，27-二降膽甾-7，24，-二烯-3-醇(gramisterol)。
放棄的權(quán)利要求涉及Hiroitho等人披露的通式I20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物[J.Am.Oil.Chem.Soc.50，300-302(1973)]，其中R1為(H，OR)；R2為H且R3為CH3；或R2為CH3且R3為H；X為-(CH2)2-CH＝CH-；R4和R5為H；R6為OH，其中的虛線代表Δ7雙鍵，即作為小麥胚芽植物油和其它植物組織中的4-甲基甾醇成分的(3β，4α，24E)-25-(4-羥苯基)-4-甲基-26，27-二降膽甾-7，24，-二烯-3-醇(gramisterol)。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，通式I的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物顯示出改進(jìn)的減數(shù)分裂活化活性。
本發(fā)明還涉及包括通式I的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物的藥物組合物。含(3β，4α，24E)-25-(4-羥苯基)-4-甲基-26，27-二降膽甾-7，24，-二烯-3-醇(gramisterol)的藥物組合物亦在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明的另一個(gè)方面在于這些通式I的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物在制備用于控制生育藥物中的用途。
式I中所用的術(shù)語(C1-6)烷基是指具有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基基團(tuán)，如己基，戊基，丁基，異丁基，叔丁基，丙基，異丙基，乙基和甲基。同樣，術(shù)語(C1-4)烷基是指具有1-4個(gè)碳原子的烷基基團(tuán)。
術(shù)語(C1-6)?；侵秆苌跃哂?-6個(gè)碳原子羧酸的?；鶊F(tuán)，如己酰基，戊酰基，新戊?；?，丁酰基，丙酰基，乙?；图柞；?。(C1-6)酰基還包括衍生自二羧酸的?；鶊F(tuán)，象半葡酰基，半琥珀酰基以及半蘋果?；?。優(yōu)選的(C1-6)酰基基團(tuán)為半琥珀?；?br> 術(shù)語(C1-4)烷氧基是指具有1-4個(gè)碳原子的烷氧基團(tuán)，如丁氧基，丙氧基，異丙氧基，乙氧基和優(yōu)選的甲氧基。
術(shù)語鹵素是指F，Cl，Br，I。當(dāng)鹵素在烷基上取代時(shí)，如R7和R8定義中所述的，Cl和F是優(yōu)選的，F(xiàn)是最優(yōu)選的。
人們會(huì)理解本發(fā)明20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物具有天然的構(gòu)型，9α，10β，13β，14α，17β。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的化合物是式I的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物，其中R1為(H，OR)，虛線代表一對(duì)選自Δ7，14、Δ8，14、、和Δ6，8(14)的共軛雙鍵。在這些優(yōu)選化合物中，那些帶有Δ8，14、雙鍵的化合物是尤其優(yōu)選的。本發(fā)明中最優(yōu)選的化合物是其中3-OR取代基構(gòu)型為β構(gòu)型。
本發(fā)明中高度優(yōu)選的最優(yōu)選的化合物是式I的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物，R1為(H，OR)，R為H或(C1-6)酰基；R2和R3為各自獨(dú)立地代表氫或(C1-6)烷基；X為-(CH2)-；R4，R5和R6定義同前；虛線代表一對(duì)Δ8，14、共軛雙鍵；并且其中3-OR取代基構(gòu)型為β構(gòu)型。
20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物20位的構(gòu)型既可以是R也可以是S，優(yōu)選的是R。本發(fā)明化合物(其中X為包含雙鍵的二價(jià)烴基基團(tuán))的雙鍵既可以是E也可以是Z構(gòu)型。兩種異構(gòu)體均在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
特別優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括-(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇，-(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-[4-(三氟甲基)苯基]孕甾-8，14-二烯-3-醇，-(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-(6，8)14-二烯-3-醇，-(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-22-炔-3-醇，-(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-24-(4-甲基苯基)膽甾-8，14-二烯-23-炔-3-醇，(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-[4-(三氟甲基)苯基]孕甾-8，14-二烯-3-醇丁二酸氫鹽。
本發(fā)明20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物的減數(shù)分裂活化活性可以其克服次黃嘌呤(其作用是維持減數(shù)分裂處于停止?fàn)顟B(tài))的能力，在體外卵母細(xì)胞的分析中進(jìn)行測(cè)定。
該化合物既可以刺激雄性也可以刺激雌性動(dòng)物，因此可用作生育調(diào)節(jié)劑。生育調(diào)節(jié)或生育控制包含避孕和生育能力治療。
對(duì)于雌性動(dòng)物的節(jié)育來說，本發(fā)明20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物可以用于在促性腺激素糖自然產(chǎn)生之前，誘導(dǎo)尚處于卵巢中的卵母細(xì)胞的早熟[通過誘導(dǎo)卵母細(xì)胞的早熟可以降低生育能力這一點(diǎn)已由Mattheij，J.等人[(1993)，Gynecol.Obstet.Invest.36129-135]在大鼠身上得到證實(shí)]。當(dāng)進(jìn)行體內(nèi)給藥時(shí)，本發(fā)明化合物特定地影響胚細(xì)胞，因此具有維持內(nèi)源性激素水平以及隨后的維持正常周期長(zhǎng)度的優(yōu)點(diǎn)。這種節(jié)育方法不引起有時(shí)由于使用甾體激素節(jié)育所引起的不需要的副作用(例如血栓，情緒變化，不定期出血，惡性乳腺疾病)。在這一點(diǎn)上，很重要的是應(yīng)該注意到，由于在孕酮受體，雄激素受體，雌激素受體以及糖蛋白受體上均未發(fā)現(xiàn)結(jié)合，因此本發(fā)明化合物不與甾體受體結(jié)合。進(jìn)一步地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物在體外可以誘導(dǎo)卵母細(xì)胞成熟的劑量下，不影響人類腎上腺細(xì)胞的甾體合成和代謝。
本發(fā)明20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物進(jìn)一步的優(yōu)點(diǎn)是其不能誘導(dǎo)機(jī)能不全的卵母細(xì)胞的成熟(從早熟的竇性卵泡中分離出來的)，這一結(jié)果表明該化合物不對(duì)保存在卵巢中的全部卵母細(xì)胞產(chǎn)生影響。本發(fā)明化合物僅對(duì)從竇性卵泡中分離出來的卵母細(xì)胞(機(jī)能完全的卵母細(xì)胞)具有誘導(dǎo)成熟作用。
對(duì)于治療女性由于缺乏成熟卵母細(xì)胞導(dǎo)致的不育，體內(nèi)給予本發(fā)明化合物可及時(shí)地刺激機(jī)能完全的卵母細(xì)胞成熟。
對(duì)于治療由于精子數(shù)量短缺導(dǎo)致的男性不育，體內(nèi)給予本發(fā)明化合物可刺激精原細(xì)胞的成熟。
本發(fā)明化合物還可以用來作為體外繁殖過程中培養(yǎng)介質(zhì)的補(bǔ)充物，以便改善卵母細(xì)胞的質(zhì)量。
本發(fā)明中的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物具有天然的構(gòu)型，9α，10β，13β，14α，17β，并且具有一或多個(gè)手性碳原子。因此可以得到化合物的純非對(duì)映異構(gòu)體，或非對(duì)映異構(gòu)體混合物。獲得這些純非對(duì)映異構(gòu)體的方法是本領(lǐng)域內(nèi)已知的，例如重結(jié)晶或色譜。
當(dāng)用于治療時(shí)，式I化合物的鹽是那些其中相反離子是制藥學(xué)上可接受的鹽。然而，也可以應(yīng)用式I酸的鹽[即其中的R1為(H，OSO3H)]以及式I堿的酸加成鹽[即其中的R4，R5和/或R6為Nr9R10]，例如在藥用化合物的制備或純化過過程中。無論是制藥學(xué)上可接受還是不可接受的所有鹽類均包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
本發(fā)明式I酸的鹽類的實(shí)施例為無機(jī)鹽，例如鈉鹽，鉀鹽以及衍生自有機(jī)堿的鹽，如氨，咪唑，乙二胺，三乙胺的鹽等。
酸加成鹽的實(shí)施例包括那些衍生自無機(jī)酸的鹽類，例如鹽酸，磷酸，硫酸，優(yōu)選鹽酸，及有機(jī)酸如蘋果酸，酒石酸，乙酸，乳酸，馬來酸，丙二酸，富馬酸，乙醇酸，琥珀酸等。
因此，式I化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽類(在這里又稱為活性成分)可以經(jīng)腸道或非腸道途徑給藥?；钚猿煞只蛩幬锝M合物的準(zhǔn)確劑量或給藥方案取決于所要達(dá)到的治療效果(治療生育或節(jié)育)，并可以根據(jù)具體使用的化合物，給藥途徑，接受者的年齡和身體狀況而變化。
通常，非腸道給藥需要的劑量要比其它給藥方法需要的劑量低，因?yàn)槟c道給藥更依賴于吸收。然而，用于人類的劑量?jī)?yōu)選地為0.0001-25mg/kg體重。所需的劑量可以一次性給藥，也可在一天內(nèi)，以適當(dāng)?shù)拈g隔進(jìn)行小的劑量分多次給藥，或者，對(duì)于女性接受者來說，在整個(gè)月經(jīng)周期中，以適當(dāng)?shù)奶鞌?shù)間隔進(jìn)行給藥。劑量和給藥方案在男性和女性之間可以有所不同。
在體外或體內(nèi)(例如在IVF)應(yīng)用中，本發(fā)明化合物以大約0.01-5μg/ml的濃度用于培養(yǎng)介質(zhì)中。
因此，本發(fā)明還涉及含式I的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物的藥物組合物，即包括含有(3β，4α，24E)-25-(4-羥苯基)-4-甲基-26，27-二降膽甾-7，24，-二烯-3-醇(gramisterol)與藥學(xué)上可接受的輔助劑以及其它任意的治療劑相混合的藥物組合物。“可接受的”輔助劑含義是指可與其它成分相容并對(duì)接受者無害。
藥物組合物包括那些適合口服、直腸、鼻腔、局部(包括皮透，頰和舌下)、陰道或非腸道(包括皮下，肌內(nèi)，靜脈和皮內(nèi))給藥的藥物組合物。這些組合物可用制藥領(lǐng)域內(nèi)已知的任意方法進(jìn)行制備，例如采用Gennaro等人在Remington’s Pharmaceutical Sciences(18 thed.，Mack Publishing company，1990)所描述的方法，特別參見第8部分Pharmaceutical Preparation and Their Manufacture(藥物制備和它們的生產(chǎn))。
這類方法包括將活性成分與任意的輔助劑進(jìn)行混合的步驟。輔助劑(又稱為附加成分)包括那些用于本領(lǐng)域內(nèi)的常規(guī)物質(zhì)(Gennaro，supra)，例如填充劑，粘合劑，稀釋劑，崩解劑，潤(rùn)滑劑，著色劑，調(diào)味劑以及潤(rùn)濕劑。
適合口服的藥物組合物可以制成分散的劑量單位，例如藥丸，片劑或膠囊，或者為粉劑或顆粒，或者為溶液或懸浮液?；钚猿煞忠部梢詧F(tuán)狀或膏狀形式給藥。組合物進(jìn)一步可以加工成用于直腸給藥的栓劑或灌腸劑。
對(duì)于非腸道給藥來說，合適的組合物包括水或非水性無菌注射液。組合物可以單位劑量或多劑量包裝來提供，例如封于小瓶或安瓿中，并可儲(chǔ)存于冷凍干燥條件，在使用前，僅需要加入無菌液體載體(例如水)。
適合于鼻腔吸入給藥的組合物或配方包括可用計(jì)量劑量的壓縮氣溶膠、噴霧器或吹入器發(fā)生的細(xì)粉或霧狀物質(zhì)。
本發(fā)明20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物還可借助埋植藥物裝置的形式進(jìn)行給藥，其包括一個(gè)活性物質(zhì)的核，該核被一層釋放速率控制膜所包圍。這類埋植器可在皮下或局部應(yīng)用，并可在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)以基本恒定的速率釋放出活性成分，例如數(shù)周到幾年?？捎帽绢I(lǐng)域內(nèi)已知的方法來制備埋植藥物裝置，例如采用歐洲專利0,303,306(AKZON.V.)。
可用普通有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域中，尤其是甾體化學(xué)中已知的方法來制備本發(fā)明化合物[參見實(shí)例Fried，J.和Edwards，J.A.“甾體化學(xué)中的有機(jī)反應(yīng)”，I和II冊(cè)，Van Nostrand Reinhold Company，New York，1972]。
可從式II的不飽和20-甲基孕甾-3，21，-二醇衍生物制備式I的本發(fā)明20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物，
其中R2和R3為各自獨(dú)立地代表氫或(C1-6)烷基；R11為?；Ｗo(hù)基團(tuán)，例如苯甲酰基，乙?；?，新戊?；龋黄渲械奶摼€代表Δ7或Δ8雙鍵，或一對(duì)選自Δ6，8(14)、Δ7，14和Δ8，14的共軛雙鍵。
用于制備中間體式II的起始原料的實(shí)例有(20S)-3-氧代孕甾-4-烯-20-羧醛，該醛可以通過使δ-4，22，-二烯-3-酮進(jìn)行臭氧分解獲得[參見Veysoglu等人，Synthesis 807(1980)]，它也可以通過采購得到(Sigma，USA)。該醛選擇性的還原為(20S)-21-羥基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮[B.M.Trost等人，J.Amer.Chem.Soc.105，5075(1983)]。于是，生成的羥基功能基以醚的形式被保護(hù)起來，例如乙氧乙基醚，四氫吡喃基(THP)醚或甲硅烷基醚，如三異丙基甲硅烷基醚，叔丁基二甲基甲硅烷基醚或叔丁基二苯基甲硅烷基醚等。
合適的保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域內(nèi)已知的，例如選自Greene，T.W.和Wuts P.G.M.有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)，第二版，Wiley，New York，1991。
生成的羥基保護(hù)的(20S)-21-羥基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮選擇性地在其C-4位上單或二烷基化，例如二甲基化。烷基化可以采用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行，例如叔丁醇鉀-碘甲烷方法[R.E.Dolle等人J.Org.Chem.51，4047(1986)]，二異丙基氨化鋰(LDA)-碘甲烷(Mel)方法以及其它本領(lǐng)域內(nèi)相似的方法。
通過與堿反應(yīng)，再用水終止反應(yīng)，可將Δ4化合物選擇性地轉(zhuǎn)變?yōu)棣?化合物[J.B.Jones等人，Can.J.Chem.46，1459(1968)]。
隨后，使用還原劑，例如氫化鋁鋰，硼氫化鈉或其它本領(lǐng)域內(nèi)已知的氫化物還原劑，可將C-3羰基基團(tuán)還原為羥基。生成的3-羥基化合物可以酯的形式保護(hù)起來，例如乙酸酯，苯甲酸酯或新戊酸酯等。按照以下順序，將Δ5系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為Δ5，7系統(tǒng)C-7溴化，接著進(jìn)行脫溴化氫反應(yīng)。溴化反應(yīng)可用熱反應(yīng)方法進(jìn)行[Schroepfer，G.J.Jr.，等人，Chem.Phys.Lipids 47，187(1988)]或光化學(xué)反應(yīng)方法進(jìn)行[Prelle，A.等人，Heterocycles 28，333(1989)]。在上述兩種情況下，可以使用的溴化劑為N-溴代琥珀酰亞胺，1，3-二溴-5，5-二甲基乙內(nèi)酰脲等。脫溴化氫劑包括N，N-二異丙基乙胺，2，4，6-三甲基吡啶，三甲基亞磷酸鹽，四丁基氟化銨等。
Δ5，7二烯系統(tǒng)可以轉(zhuǎn)化為Δ6，8(14)二烯系統(tǒng)Δ7，14二烯系統(tǒng)或Δ8，14二烯系統(tǒng)，所用的方法是本領(lǐng)域內(nèi)已知的。對(duì)于轉(zhuǎn)化為Δ6，8(14)衍生物的，參見Kaneko，C.等人，Chem.Pharm.Bull.26，3582(1978)。對(duì)于轉(zhuǎn)化為Δ7，14衍生物的，參見Wilson，W.K.等人，J.Org.Chem.53，1713(1988)。對(duì)于轉(zhuǎn)化為Δ8，14衍生物的，參見Schroepfer，G.J.Jr.，等人，Chem.Phys.Lipids 47，187(1988)或Dolle，R.E.等人J.Org.Chem.53，1563(1988)。將Δ5，7二烯系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為Δ6，8(14)二烯系統(tǒng)，Δ7，14二烯系統(tǒng)或Δ8，14二烯系統(tǒng)，可以生成這些異構(gòu)體的混合物。獲得純化合物的方法是本領(lǐng)域內(nèi)已知的，例如重結(jié)晶或使用填充有銀鹽的硅膠柱層析。用溶于液氨中的鋰對(duì)Δ5，7二烯系統(tǒng)進(jìn)行還原[Lederer，F(xiàn).等人，Bull.Soc.Chim.Fr.1295(1965)]或通過氫化反應(yīng)可以得到Δ7化合物?？梢允褂玫臍浠呋瘎┌≧aney鎳[Gautschi F.等人，J.Biol.Chem.233，1343(1958)]，Wilkinson’s催化劑[Canonica，L.等人，Steroids 11，287(1968)]及其它試劑。按照以下順序，可以從Δ8，14二烯系統(tǒng)制備Δ8衍生物Δ14雙鍵的選擇性氫化，生成的15-羥基化合物脫氧化反應(yīng)[Dolle，R.E.等人J.Amer.Chem.Soc.111，278(1989)]。通過使21-羥基功能基去保護(hù)，可以制備式II的不飽的3位保護(hù)的20-甲基孕甾-3，21，-二醇衍生物。
Δ5，7二烯系統(tǒng)的操作可以伴隨著C-21位羥基基團(tuán)的去保護(hù)，如果不是這樣的話，羥基基團(tuán)需要隨后再去保護(hù)。
可按照下法制備本發(fā)明21-芳基-20-甲基孕甾-3-醇衍生物(X＝-CH2-)，將具式II的化合物氧化成相應(yīng)的孕甾-20-羧醛，接著使這些羧醛與未取代或帶有合適取代的苯基金屬化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，使生成的3-位保護(hù)的21-芳基-20-甲基孕甾-3，21-二醇衍生物的C-21位進(jìn)行脫氧反應(yīng)，最后，使C-3位上的羥基基團(tuán)進(jìn)行去保護(hù)反應(yīng)。
21-羥基基團(tuán)的氧化可以使用Oppenauer氧化，Swern氧化，Moffatt氧化，Dess-Martin氧化，或者使用鉻(VI)試劑，例如Jones試劑，吡啶鎓二鉻酸鹽，吡啶鎓氯代鉻酸鹽，以及本領(lǐng)域內(nèi)已知的相似試劑。
與孕甾-20-羧醛的縮合反應(yīng)中可以使用的未取代或帶有取代的苯基金屬化合物包括芳基鋰，芳基鎂，芳基鋅或芳基鈰化合物。通過氫化(脫氧作用)生成的3位保護(hù)的21-芳基-20-甲基孕甾-3，21-二醇衍生物上的21-羥基基團(tuán)的取代可以通過用甲基草酰氯進(jìn)行酯化反應(yīng)，然后與三丁基錫氫化物/2，2’-氮雜雙(異丁腈)反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)。脫氧作用可以通過Barton脫氧反應(yīng)或本領(lǐng)域內(nèi)已知的相似反應(yīng)來完成[M.或Ramaiah，Tetrahedron 43，3541(1987)]，或通過21-羥基基團(tuán)轉(zhuǎn)化為如鹵素(例如氯，溴或碘)，特別是甲苯磺酰氧基或甲磺?；坏碾x去基團(tuán)，然后用氫化物還原劑進(jìn)行還原，或使用Raney鎳，或使用三乙基硅烷與Lewis酸的結(jié)合物進(jìn)行還原來進(jìn)行。最后，使用標(biāo)準(zhǔn)方法完成3-羥基功能基的脫保護(hù)。
本發(fā)明中不飽和的23-芳基-24-降膽-3-醇化合物(X＝-CH2-CH2-)可以按照下法，從式II的不飽和的3-位保護(hù)的20-甲基孕甾-3，21-二醇衍生物開始進(jìn)行制備。C-21-羥基基團(tuán)可以轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)，例如鹵素(如氯，溴或碘)，或特別是甲苯磺酰氧基或甲磺?；?，由此得到的產(chǎn)品可以通過與氰化鉀或氰化鈉進(jìn)行反應(yīng)，轉(zhuǎn)化為20-甲基孕甾-21-腈衍生物。后者用還原劑(例如二異丁基鋁氫化物)或其它能將腈基基團(tuán)轉(zhuǎn)化為羧醛基團(tuán)的還原劑轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的21-羧醛。由于還原也導(dǎo)致了C-3羥基功能基的去保護(hù)，所以3位羥基需要再以醚的形式進(jìn)行保護(hù)，例如乙氧乙醚或THP醚，甲硅烷基醚，例如三乙基甲硅烷基醚，或如上所述的?；Ｗo(hù)基團(tuán)。最后轉(zhuǎn)化到本發(fā)明23-芳基-24-降膽-3-醇化合物可以按照以下順序進(jìn)行(vide Supra)與未取代或帶有合適取代的苯基金屬化合物進(jìn)行反應(yīng)，通過氫化脫氧反應(yīng)進(jìn)行23-羥基基團(tuán)的取代，最終進(jìn)行3-羥基基團(tuán)的脫保護(hù)。
可以按照上述用于23-芳基-24-降膽-3-醇化合物相似的方法來制備本發(fā)明化合物(其中X為直鏈二價(jià)C3-8烴基基團(tuán))。首先將式II化合物轉(zhuǎn)化為側(cè)鏈上帶有需要數(shù)目亞甲基基團(tuán)的醛。然后加入未取代或帶有合適取代的苯基金屬化合物，使形成的羥基化合物進(jìn)行脫氧反應(yīng)，最后，按照上述方法使3-羥基基團(tuán)脫保護(hù)。同系化作用所采用的技術(shù)是本領(lǐng)域內(nèi)已知的，可以參見Mathieu，J.等人C-C鍵的形成，Vol.I-III，Georg Thieme Publishers，Stuttgart，1973。
可以按照與上述相似的方法來制備本發(fā)明化合物(其中X為-(CH2)m-CR7R8-，其中的m＝0-4，并且其中的R7和R8為氫)。在這種情況下，通過與芳基金屬化合物反應(yīng)生成的羥基基團(tuán)被保留，即可以省去脫氧作用。采用普通化學(xué)領(lǐng)域中已知的方法，可將生成的芳基甲醇任意地轉(zhuǎn)化為其它式I化合物，稱為本發(fā)明化合物，其中X為-(CH2)m-CR7R8-，其中的m＝0-4，并且其中的R7和R8各自獨(dú)立的為(C1-4)烷基，(C1-4)烷氧基或鹵素，或其中的R7和R8一起代表O或NOR’，其中的R’為H，(C1-6)烷基或(C1-6)酰基。
通過將21-羥基基團(tuán)按照所述方法轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)，然后與合適的取代苯基金屬化合物或合適的取代ω-苯基烷基金屬化合物進(jìn)行過渡金屬(例如銅(I)-催化的)介導(dǎo)的反應(yīng)，也可以從式II中間體制備得到本發(fā)明化合物(其中X為直鏈二價(jià)C1-8烴基基團(tuán))[Li，Mg，Zn；參見Moroisaki M.等人Chem.Pharm.Bull.28，606(1980)；和Lipshutz，B.H.等人，Org.Reactions，41，p.135，Wiley，New York，1992]。
通過使孕甾-20-羧醛或20-甲基孕甾-21-羧醛(其合成如上所述)，或降膽-24-醇衍生物等與未取代或帶有合適取代的芐基三苯基磷鎓鹵化物或未取代或帶有合適取代的ω-苯基烷基三苯基磷鎓鹵化物進(jìn)行Wittig反應(yīng)，可以制備得到本發(fā)明化合物(其中X為含有雙鍵的直鏈二價(jià)C1-8烴基基團(tuán))。Wittig烯化反應(yīng)所采用的方法，可以參見Maercker，A.Org.Reactions，14，p.270，Wiley，New York，1965。或者也可以采用Peterson反應(yīng)，參見Ager，D.J.Org.Reactions，38，p.1，Wiley，New York，1990。
通過金屬介導(dǎo)的24-降膽-22-烯，膽-23-烯或26，27-二降膽-24-烯等(它們相應(yīng)地在C-23，C-24，C-25位上被取代)與鹵素(Cl，Br，I)或三氟甲磺酸鹽基團(tuán)，并與未取代或帶有合適取代的苯基金屬化合物或ω-苯基烷基金屬化合物(例如Al，Li，Mg，Zn，B，Sn，Cu，Zr)進(jìn)行偶連，可以制備得到本發(fā)明化合物(其中X為含有雙鍵的直鏈二價(jià)C1-8烴基基團(tuán))。也可以通過24-降膽-22-烯，膽-23-烯或26，27-二降膽-24-烯等(它們相應(yīng)地在C-23，C-24，C-25位上被取代)與金屬(例如Al，Li，Mg，Zn，B，Sn，Cu，Zr)，并與帶有合適取代的苯基鹵化物或ω-苯基烷基鹵化物(Cl，Br，I)或磺酸酯進(jìn)行相似的反應(yīng)來制備它們。所用的方法是本領(lǐng)域內(nèi)已知的，可以參見Knight，D.W.的Comprehensive Organic Synthesis，3，p.241和481，PergamonPress，Oxford，1991；或K Tamao，ibid 3，p.435。
通過金屬介導(dǎo)的24-降膽-22-炔，膽-23-炔或26，27-二降膽-24-炔等與帶有合適取代的苯基鹵化物[Cl，Br，I；參見Takahashi，S等人Synthesis 627(1980)])進(jìn)行偶連，可以制備得到本發(fā)明化合物(其中X為含有三鍵的直鏈二價(jià)C1-8烴基基團(tuán))。這類化合物中的其它化合物可以通過使所述的乙炔衍生物進(jìn)行金屬化反應(yīng)(例如Li，Mg，Na，K，Al)，然后與帶有合適取代的ω-苯基烷基鹵化物或磺酸酯進(jìn)行反應(yīng)[Garratt，P.J.的Comprehensive Organic Synthesis，3，p.271，Pergamon Press，Oxford，1991]來制備。此外也可以通過20-甲基孕甾-21-醇衍生物，24-降膽-23-醇衍生物或膽-24-醇衍生物等(其中的羥基基團(tuán)被轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)(vide supra))與未取代或帶有合適取代的ω-苯基烷基-1-炔金屬化合物進(jìn)行反應(yīng)來制備它們。
采用本領(lǐng)域內(nèi)已知的方法，可用式I化合物(其中R1為(H，OR))作為合成的起始物質(zhì)，來制備式I化合物(其中R1為(H，OR)，(H，OSO3H)或NOR，且R為H，(C1-6)烷基或(C1-6)?；?br> 下列實(shí)施例將進(jìn)一步說明本發(fā)明。
路線1
實(shí)施例1(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇(1)(路線1)i)-將(20S)-3-氧代孕甾-4-烯-20-羧醛(2)(125g)的無水乙醇溶液(1250ml)冷卻至-10℃，在30分鐘內(nèi)將硼氫化鈉(4.4g)的無水乙醇溶液(80ml)加入其中。混合物在-10℃下攪拌2小時(shí)后，加入50％的乙酸終止反應(yīng)。減壓濃縮反應(yīng)混合物至原體積的25％，然后將其傾入冰水(5L)中。生成的懸浮液攪拌過夜并過濾。殘余物用水洗滌，干燥，得到(20S)-21-羥基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮(3)(124g)，其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。ii)-將前述步驟中得到的醇3(124g)和咪唑(176g)的無水N，N-二甲基甲酰胺(1730ml)溶液冷卻至10℃。一次性地向其中加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(112g)，混合物于室溫下攪拌2小時(shí)。將其傾入冰水(10L)和飽和碳酸氫鈉(75ml)組成的混合物中。過濾生成的懸浮液，殘余物用水洗滌。干燥殘余物，得到(20S)-21-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮(4)(169.3g)，其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。iii)-將叔丁醇鉀(169.5g)和無水叔丁醇(3750ml)一起加熱到45℃。10分鐘內(nèi)將酮4(169.3g)的無水四氫呋喃(375ml)溶液加入其中，反應(yīng)混合物繼續(xù)攪拌3小時(shí)。減壓濃縮混合物至體積1.5L，然后將其傾入冰水(10L)中?；旌衔飻嚢?小時(shí)后過濾懸浮液。殘余物用水洗滌，干燥并用丙酮重結(jié)晶純化，得到(20S)-21-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4，20-三甲基孕甾-5-烯-3-酮(5)(136.9g)。iv)-在30分鐘內(nèi)將前述步驟中得到的酮5(140g)的無水四氫呋喃(375ml)溶液加到冰冷的氫化鋁鋰(35g)的四氫呋喃(1750ml)懸浮液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時(shí)后，加入飽和硫酸鈉水溶液(152ml)及隨后加水(39ml)終止反應(yīng)。加入乙酸乙酯(1750ml)，混合物經(jīng)硅藻土過濾，減壓濃縮濾液，得到(3β，20S)-21-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4，20-三甲基孕甾-5-烯-3-醇(6)(136.3g)，其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。v)-將前述步驟中得到的醇6(132.5g)的無水吡啶(1310ml)溶液冷卻到0℃。在5分鐘內(nèi)加入苯甲酰氯(65.7ml)，混合物于室溫下攪拌1小時(shí)。將其傾入冰水(6650ml)中，生成的懸浮液攪拌過夜。濾集沉淀，用水(40-50℃)洗滌。殘余物干燥并用丙酮重結(jié)晶純化，得到(3β，20S)-21-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4，20-三甲基孕甾-5-烯-3-醇苯甲酸酯(7)(113.6g)。vi)-將前述步驟中得到的苯甲酸酯7(94.0g)，無水甲苯(810ml)，無水環(huán)己烷(810ml)以及N-溴代琥珀酰亞胺(36.1g)組成的混合物加熱回流10分鐘。冷卻反應(yīng)混合物，加入另一部分N-溴代琥珀酰亞胺(36.1g)，繼續(xù)回流10min。冷卻混合物，加入飽和硫代硫酸鈉溶液(1620ml)，生成的混合物攪拌30分鐘。分出有機(jī)相和水相，后者用甲苯提取兩次。合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥，減壓濃縮。將得到的粗品的無水甲苯溶液(2835ml)與N，N，-二異丙基乙基胺(284ml)一起加熱回流1小時(shí)。冷卻，用飽和碳酸氫鈉水溶液，飽和氯化銨水溶液以及鹽水進(jìn)行洗滌，水相每次用乙酸乙酯提取。將甲苯和乙酸乙酯溶液合并，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到(3β，20S)-21-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4，20-三甲基孕甾-5，7-二烯-3-醇苯甲酸酯(8)(134g)，其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。vii)將化合物8(32.3g)，甲苯(84ml)，乙醇(96％；588ml)以及濃鹽酸(84ml)組成的混合物一起加熱回流3小時(shí)。冷卻混合物，將其傾入飽和碳酸氫鈉水溶液(1L)中。產(chǎn)品用乙酸乙酯提??；合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。柱層析純化得到3∶1的(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基孕甾-8，14-二烯-3，21-二醇-3-苯甲酸酯(9)以及(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基孕甾-6，8(14)-二烯-3，21-二醇-3-苯甲酸酯混合物(17.4g)，混合物可以直接用于下一步反應(yīng)。viii)-將二甲基亞砜(1.97ml)的無水二氯甲烷(76ml)溶液冷卻到-78℃，在30分鐘內(nèi)，將草酰氯(1.53ml)的無水二氯甲烷(38ml)溶液加入其中。繼續(xù)攪拌5分鐘。20分鐘內(nèi)將vii中得到的混合物(5.0g)的無水四氫呋喃(36ml)溶液加入其中。于-78℃下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，之后加入三乙胺(7.3ml)，使混合物升溫至室溫。加水，用二氯甲烷提取產(chǎn)品。合并的有機(jī)相用水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到(3β，5α，20S)-3-(苯甲酰氧基)-4，4-二甲基孕甾-8，14-二烯-20-羧醛(10)(6.14g)，其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。ix)-將前述步驟中得到的醛10(2.0g)的無水四氫呋喃(17ml)溶液滴加到1M苯基溴化鎂(13ml)的四氫呋喃溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時(shí)，加入飽和氯化銨溶液，用乙酸乙酯提取產(chǎn)品。合并的有機(jī)相用水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯(11)(3.0g)，其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。x)-將醇11(3.0g)的無水四氫呋喃(26.7ml)溶液和無水吡啶(5.2ml)溶液滴加到冰冷的草酰氯(1.95ml)的無水二氯甲烷(9.7ml)溶液中。混合物于室溫下攪拌1小時(shí)，加入水，用乙酸乙酯提取產(chǎn)品。合并的有機(jī)相用4M鹽酸水溶液和水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯21-(乙二酸甲酯)(12)(3.58g)，其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。xi)-將前述步驟中得到的乙二酸甲酯12的無水甲苯(150ml)加熱回流。加入三丁基錫氫化物(2.5ml)后再加2，2’-氮雜雙(異丁腈)(35mg)。每隔15分鐘重復(fù)加入一份(35mg)后一種化合物，直至反應(yīng)完成(5小時(shí))。冷卻反應(yīng)混合物。合并的有機(jī)相用水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，經(jīng)柱層析得到(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇苯甲酸酯(13)(0.84g)。xii)-將氫氧化鉀(0.45g)加入到化合物13(0.84g)的四氫呋喃(8.4ml)，甲醇(8.4ml)和水(0.45ml)的混合溶液中?；旌衔镌诨亓飨聰嚢柽^夜。冷卻后加水，濾集生成的沉淀。殘余物用水洗滌并干燥。經(jīng)柱層析和二氯甲烷/丙酮重結(jié)晶，得到(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇(1)(0.29g)。M.p.179-186℃。本產(chǎn)品含有30％(w/w)(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-6，8(14)-二烯-3-醇。實(shí)施例2類似于實(shí)施例1中ix-xii所描述的步驟，按實(shí)施例1中viii步驟所述由(3β，5α，20R)-(苯甲酰氧基)-4，4-二甲基孕甾-8，14-二烯-20-羧醛10開始，可以制得下列化合物A)-(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-(3-甲基苯基)孕甾-8，14-二烯-3-醇。M.p.140.5-143.5℃。B)-(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-[4-(三氟甲基)苯基]孕甾-8，14-二烯-3-醇。M.p.169-171℃。實(shí)施例3(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-6，8(14)-二烯-3-醇。i)將氯化氫氣通入(3β，20S)-21-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4，20-三甲基孕甾-5，7-二烯-3-醇苯甲酸酯(化合物8；實(shí)施例1，步驟vi；25.0g)和乙酸酐(40ml)的氯仿(250ml)溶液中，時(shí)間為30分鐘?；旌衔锛訜峄亓?0分鐘；再繼續(xù)通入氯化氫氣20分鐘。冷卻至0℃后，加入氫氧化銨(5％)水溶液，混合物攪拌1.5小時(shí)。用二氯甲烷提取產(chǎn)品，合并的有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到(3β，5α，20S)-21-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4，20-三甲基孕甾-6，8(14)-二烯-3-醇苯甲酸酯(24.6g)，產(chǎn)品可以直接用于下一步反應(yīng)。ii)-將i中描述的化合物(17.6g)的丙酮(352ml)溶液用6M鹽酸水溶液(3.52ml)進(jìn)行處理。50℃下攪拌3小時(shí)后，減壓濃縮。將殘余物傾入水中，產(chǎn)品用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相用水洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。經(jīng)柱層析后得到(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基孕甾-6，8(14)-二烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯(7.69g)。iii)類似于實(shí)施例1中viii-xii所描述的步驟，將前述步驟中的產(chǎn)品轉(zhuǎn)化為(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基孕甾-6.8(14)-二烯-3-醇。M.p.218-220℃。實(shí)施例4(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基-21-(3-甲基苯基)孕甾-8.14-二烯-3，21-二醇i)-按照實(shí)施例1中ix步驟所描述的方法，將(3β，5α，20S)-3-(苯甲酰氧基)-4，4-二甲基孕甾-8，14-二烯-20-羧醛(化合物10；實(shí)施例1，步驟viii；0.5g)轉(zhuǎn)化為(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基-21-(3-甲基苯基)孕甾-8，14-二烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯(0.31g)。ii)-按照實(shí)施例1中xii步驟所描述的方法，將前述步驟中得到的產(chǎn)品(0.31g)轉(zhuǎn)化為(3β，5α，20S)-4.4.20-三甲基-21-(3-甲基苯基)孕甾-8，14-二烯-3，21-二醇(51mg)。M.p.169-173℃。實(shí)施例5(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-(2-甲基苯基)-24-降膽-8.14-二烯-3-醇i)-將對(duì)甲苯磺酸酐(20g)加到冰冷的(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯(化合物9；按照實(shí)施例1中vii步驟制備；10g)的無水吡啶(40ml)溶液中。反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜，然后傾入水(400ml)中。攪拌1小時(shí)后，濾集生成的沉淀，用水洗滌。50℃下減壓干燥，得到(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基-21-[[(4-甲基苯基)磺?；鵠氧]-孕甾-8，14-二烯-3-醇苯甲酸酯(14.1g)，其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。ii)-將i中描述的甲苯磺酸酯(9.12g)的無水二甲亞砜(31ml)懸浮液在50℃下加熱。向其中加入氰化鉀(3.86g)并攪拌6小時(shí)。加入無水二甲亞砜(31ml)，繼續(xù)攪拌10小時(shí)。冷卻后，將混合物傾入冰水(600ml)中。濾集生成的沉淀，用水洗滌。50℃下減壓干燥，得到(3β，5α，20R)-3-(苯甲酰氧基)-4，4，20-三甲基苯基孕甾-8，14-二烯-21-腈(6.45g)，其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。iii)-將二異丁基氫化鋁(64ml，20％的甲苯溶液)加到ii中描述的腈(6.40g)的無水甲苯(64ml)溶液中?；旌衔锸覝?cái)嚢柽^夜，然后用4M鹽酸水溶液(71ml)終止反應(yīng)。過濾后，產(chǎn)品用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相用水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到(3β，5α，20R)-3-羥基-4，4，20-三甲基苯基孕甾-8，14-二烯-21-羧醛(4.59g)，其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。iv)-將對(duì)甲苯磺酸吡啶鎓(0.29g)加到iii中描述的醛(4.59g)的無水二氯甲烷(28ml)和乙基乙烯基醚(9.1ml)溶液中?；旌衔飻嚢?小時(shí)后，加入吡啶(1ml)。混合物用水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到(3β，5α，20R)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4，20-三甲基孕甾-8，14-二烯-21-羧醛(5.64g)，其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。v)-按照實(shí)施例1中ix步驟所描述的方法，將前述步驟中得到的羧醛(1.0g)轉(zhuǎn)化為(3β，5α，20R)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4-二甲基-23-(2-甲基苯基)-24-降膽-8，14-二烯-23-醇(1.63g)。vi)-按照實(shí)施例1中x步驟所描述的方法，將前述步驟中得到的醇(1.60g)轉(zhuǎn)化為(3β，5α，20R)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4-二甲基-23-(2-甲基苯基)-24-降膽-8，14-二烯-23-醇乙二酸甲酯(2.11g)。vii)-按照實(shí)施例1中xi步驟所描述的方法，將前述步驟中得到的乙二酸甲酯(2.11g)轉(zhuǎn)化為(3β，5α，20R)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4-二甲基-23-(2-甲基苯基)-24-降膽-8，14-二烯(3.64g)。viii)-將vii中描述的化合物(3.64g)的丙酮(20ml)溶液用4M鹽酸水溶液(2ml)進(jìn)行處理。混合物攪拌1小時(shí)后，將其傾入水中，用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相用水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。用二氯甲烷/丙酮重結(jié)晶后得到(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-(2-甲基苯基)-24-降膽-8，14-二烯-3-醇(0.40g)，M.p.184-186℃。實(shí)施例6
按照實(shí)施例5中v-viii步驟所描述的類似反應(yīng)步驟，從實(shí)施5中iv步驟所描述的(3β，5α，20R)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4，20-三甲基孕甾-8，14-二烯-21-羧醛起始，可以制得下列化合物A)-(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-(3-甲基苯基)-24-降膽-8，14-二烯-3-醇。M.p.159-161℃。B)-(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-[2-(三氟甲基)苯基]-24-降膽-8，14-二烯-3-醇。M.p.130-147℃。該產(chǎn)品含45％的(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-[2-(三氟甲基)苯基]-24-降膽-6，8(14)-二烯-3-醇。實(shí)施例7(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3-醇和(3β，5α，20R)-3-羥基-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-23-酮i)-將(3β，20S)-21-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4，20-三甲基孕甾-5，7-二烯-3-醇苯甲酸酯(化合物8；實(shí)施例1，步驟vi；46.5g)，氯仿(400ml)以及HCl的乙酸溶液(1M，400ml)組成的混合物于室溫下攪拌45分鐘，再加熱回流45分鐘。用同樣的方法對(duì)另一份二烯(46.5g)進(jìn)行處理。將兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)混合物冷卻，合并在一起，減壓濃縮除去氯仿。將殘余物傾入氫氧化鈉(150g)水(2.51)溶液中。濾集生成的沉淀，水洗滌并干燥。粗品用丙酮重結(jié)晶得到6∶1(51.4g)的(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基孕甾-8，14-二烯-3，21-二醇21乙酸酯3-苯甲酸酯和(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基孕甾-6，8(14)-二烯-3，21-二醇21乙酸酯3-苯甲酸酯，其可以直接用于下一步反應(yīng)。ii)向前述步驟中得到產(chǎn)品(62g)的四氫呋喃(400ml)，甲醇(250ml)和水(100ml)溶液中加入氫氧化鉀(13.5g)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時(shí)，傾入水(10L)中。濾集生成的沉淀，水洗滌并干燥，得到(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基孕甾-8，14-二烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯(58g)。其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。iii)-按照實(shí)施例5中i-iii步驟所描述的方法，將前述步驟中得到的醇轉(zhuǎn)化得到(3β，5α.20R)-3-羥基-4，4，20-三甲基孕甾-8，14-二烯-21-羧醛。iv)-將上述醛(12.3g)的無水吡啶(150ml)溶液冷卻至4℃。在5分鐘內(nèi)加入苯甲酰氯?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?.5小時(shí)。將其傾入水(2L)中。生成的混合物攪拌過夜?；旌衔镉枚燃淄樘崛。喜⒌挠袡C(jī)相在減壓下濃縮，得到(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基孕甾-8，14-二烯-21-羧醛(16.1g)。其無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。v)-按照實(shí)施例1中ix步驟所描述的方法，將前述步驟中得到醛(15.0g)轉(zhuǎn)化為23R和23S苯基甲醇的混合物，其可用柱層析分離，得到(3β，5α，20R，23R)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇3-苯甲酸酯(2.15g)和(3β，5α，20R，23S)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇3-苯甲酸酯(2.95g)。vi)將Raney鎳(100g)的水懸液加到(3β，5α，20R，23R)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇3-苯甲酸酯(1.95g)的乙醇(150ml)溶液中，混合物于室溫下攪拌96小時(shí)。濾除Raney鎳。在另一實(shí)驗(yàn)中，用同樣的方法處理(3β，5α，20R，23S)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇3-苯甲酸酯(1.30g)。將兩個(gè)實(shí)驗(yàn)得到的濾液合并，減壓濃縮。粗品用層析純化，得到(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3-醇3-苯甲酸酯(1.00g)以及(3β，5α，20R)-3-(苯甲酰氧基)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-23-酮(0.40g)。ViiA)按類似于實(shí)施例1的IV所述步驟，將(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3-醇苯甲酸酯(1.20g)轉(zhuǎn)化為3-羥基化合物，乙醇重結(jié)晶后，得到(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3-醇(0.65g)。M.P.164.3-165.7℃。viiB)將氫氧化鈉(0.4g)加到(3β，5α，20R)-3-(苯甲酰氧基)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-23-酮(0.70g)的四氫呋喃(10ml)溶液、甲醇(10ml)、二氯甲烷(1ml)和水(1ml)的混合溶液中，混合物于回流下攪拌6小時(shí)。冷卻，用乙酸(1ml)中和。產(chǎn)品用二氯甲烷提取，合并的有機(jī)相在減壓下濃縮。粗品用乙醇重結(jié)晶，得到(3β，5α，20R)-3-羥基-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-23-酮(0.30g)。M.p.196.4-197.2℃。實(shí)施例8(3β，5α，20R，23R)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇按照實(shí)施例1中iv步驟所描述的方法，將(3β，5α，20R，23R)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇3-苯甲酸酯(實(shí)施例7，步驟v；0.75g)轉(zhuǎn)化為3-羥基化合物，乙醇重結(jié)晶后得到(3β，5α，20R，23R)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇(0.28g)。M.p.199.2-200.7℃。實(shí)施例9(3β，5α，20R，23S)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇按照實(shí)施例1中iv步驟所描述的方法，將(3β，5α，20R，23S)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇3-苯甲酸酯(實(shí)施例7，步驟v；0.75g) 轉(zhuǎn)化為3-羥基化合物，乙醇重結(jié)晶后得到(3β，5α，20R，23S)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇(0.13g)。M.p.208.0-209.3℃。實(shí)施例10(3β，5α，20R，22E)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14，22-三烯-3-醇i)-將叔丁醇鉀(1.12g)加到芐基三苯基磷鎓氯(4.22g)的無水甲苯(30ml)溶液中。混合物在70℃下加熱45分鐘。加入(3β，5α，20S)-3-(苯甲酰氧基)-4，4-二甲基孕甾-8，14-二烯-20-羧醛(化合物10；實(shí)施例1，步驟viii；1.0g)，繼續(xù)加熱1小時(shí)。冷卻后，將混合物傾入水中，用乙酸乙酯提取產(chǎn)品。合并的有機(jī)相用水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。柱層析后得到(3β，5α，20R，22E)--4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14，22-三烯-3-醇(0.23g)，M.p.131-144℃。所得產(chǎn)品含有30％(3β，5α，20R，22E)--4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-6，8(14)，22-三烯-3-醇。實(shí)施例11(3β，5α，20R，23E)-4，4-二甲基-24-苯基膽甾-8，14，23-三烯-3-醇i)-按照實(shí)施例10中i步驟所描述的方法，將(3β，5α，20R)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4，20-三甲基孕甾-8，14-二烯-21-羧醛(實(shí)施例5，步驟iv；0.500g)轉(zhuǎn)化為(3β，5α，20R，23E)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4-二甲基-24-苯基膽甾-8，14，23-三烯(0.86g)。ii)-按照實(shí)施例5中viii步驟所描述的方法，將前述步驟中得到產(chǎn)品(0.24g)轉(zhuǎn)化為3-羥基化合物。柱層析后得到(3β，5α，20R，23E)-4，4-二甲基-24-苯基膽甾-8，14，23-三烯(0.139g)。M.p.126.8-127.4℃。所得產(chǎn)品含有30％(3β，5α，20R，23Z)-4，4-二甲基-24-苯基膽甾-8，14，23-三烯-3-醇。實(shí)施例12(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-22-炔-3-醇i)-將氯代鉻酸吡啶鎓鹽(8.79g)加到(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基孕甾-8，14-二烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯(實(shí)施例7，步驟ii；12.6g)的無水二氯甲烷溶液(130ml)中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?.5小時(shí)。加入另一份氯代鉻酸吡啶鎓鹽(1.50g)，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)。過濾，將濾液傾入飽和碳酸氫鈉水溶液中。產(chǎn)品用二氯甲烷提取，合并的有機(jī)相用水洗滌，硫酸鎂干燥，減壓濃縮。柱層析后得到(3β，5α，20S)-4，4-二甲基孕甾-8，14-二烯-20-羧醛(10.3g)，產(chǎn)品無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。ii)-將(氯代甲基)三苯基磷鎓氯(17.5g)的無水四氫呋喃(140ml)溶液冷卻到0℃。加入叔丁醇鈉(4.64g)，混合物攪拌20分鐘。將前述步驟中得到的醛(10.3g)的無水四氫呋喃(80ml)溶液加入其中，混合物在0℃下攪拌30分鐘，再于室溫下攪拌2小時(shí)。加入乙酸乙酯，濃縮混合物除去四氫呋喃。依次用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，減壓濃縮。柱層析后得到(3β，5α，20S)-23-氯-4，4-二甲基-24-降膽-8，14，22-三烯-3-醇苯甲酸酯(7.01g)。iii)-按照實(shí)施例1中iv步驟所描述的方法，將前述步驟中得到的產(chǎn)品(7.01g)轉(zhuǎn)化為(3β，5α，20S)-23-氯-4，4-二甲基-24-降膽-8，14，22-三烯-3-醇(6.28g)。iv)-按照實(shí)施例5中iv步驟所描述的方法，將前述步驟中得到的產(chǎn)品(6.28g)轉(zhuǎn)化為(3β，5α，20S)-23-氯-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4-二甲基-24-降膽-8，14，22-三烯(6.98g)。v)將前述步驟中得到的產(chǎn)品(6.98g)的無水四氫呋喃(75ml)溶液冷卻到-20℃。在20分鐘內(nèi)加入正丁基鋰的己烷溶液(1.6M，28.5ml)，混合物在-20℃下攪拌15分鐘，再于0℃下攪拌3.5小時(shí)。加水，產(chǎn)品用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，減壓濃縮。柱層析后得到(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4-二甲基-24-降膽-8，14-二烯-22-炔(4.34g)。vi)將前述步驟中得到的產(chǎn)品(0.50g)，碘苯(0.16ml)，乙酸鈀(II)(16mg)，三苯基膦(62mg)以及碘化銅(I)(18mg)的吡咯烷(7ml)溶液組成的混合物進(jìn)行脫氣，然后加熱回流3小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾入飽和的氯化銨中，用乙酸乙酯提取產(chǎn)品。合并的有機(jī)相用飽和的氯化銨溶液和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥。柱層析后得到(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4-二甲基-23-苯基-24--降膽-8，14-二烯-22-炔(0.62g)。v)-按照實(shí)施例5中viii步驟所描述的方法，將前述步驟中得到的產(chǎn)品(0.61g)轉(zhuǎn)化為3-羥基化合物。柱層析得到(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-22-炔-3-醇(0.25g)。M.p.136℃?；衔锖?0％(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-6，8(14)-二烯-22-炔-3-醇。實(shí)施例13按照實(shí)施例12中vi和vii步驟所描述的方法，從實(shí)施例12中v步驟所描述的(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4-二甲基-24-降膽-8，14-二烯-22-炔開始，可以制得下列化合物A)-(3β，5α，20S)-23-(4-甲氧基苯基)-4，4-二甲基-24-降膽-8，14-二烯-22-炔-3-醇。M.p.165.5℃。該產(chǎn)品含有30％(3β，5α，20S)-23-(4-甲氧基苯基)-4，4-二甲基-24-降膽-6，8(14)-二烯-22-炔-3-醇。B)-(3β，5α，20S)-23-(4-氯苯基)-4，4-二甲基-24-降膽-8，14-二烯-22-炔-3-醇。該產(chǎn)品含有25％(3β，5α，20S)-23-(4-氯苯基)-4，4-二甲基-24-降膽-6，8(14)-二烯-22-炔-3-醇。實(shí)施例14(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-24-苯基膽甾-8，14-二烯-23-炔-3-醇i)-按照實(shí)施例12中ii-v步驟所描述的方法，將(3β，5α，20R)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4，20-三甲基孕甾-8，14-二烯-21-羧醛(實(shí)施例5，步驟iv)轉(zhuǎn)化為(3β，5α，20R)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4二甲基膽甾-8，14-二烯-23-炔。ii)-按照實(shí)施例12中vi和vii步驟所描述的方法，將上述炔轉(zhuǎn)化為(3β，5α，20R)-4，4二甲基-24-苯基膽甾-8，14-二烯-23-炔-3-醇。M.p.84.5-85.7℃。該產(chǎn)品含有15％(3β，5α，20R)-4，4二甲基-24-苯基膽甾-6，8(14)-二烯-23-炔-3-醇。實(shí)施例15按照實(shí)施例12中vi和vii步驟所描述的方法，從實(shí)施例14步驟i中所述的(3β，5α，20R)-3-[(1-乙氧基乙基)氧]-4，4二甲基膽甾-8，14-二烯-23-炔開始，可以制備下列化合物A)-(3β，5α，20R)-24-(4-甲氧基苯基)-4，4二甲基膽甾-8，14-二烯-23-炔-3-醇。M.p.91.3-92.6℃。該產(chǎn)品含有15％(3β，5α，20R)-24-(4-甲氧基苯基)-4，4二甲基膽甾-6，8(14)-二烯-23-炔-3-醇。B)-(3β，5α，20R)-24-(4-氯苯基)-4，4二甲基膽甾-8，14-二烯-23-炔-3-醇。M.p.128.2-129.4℃。該產(chǎn)物含有15％(3β，5α，20R)-24-(4-氯苯基)-4，4二甲基膽甾-6，8(14)-二烯-23-炔-3-醇。C)-(3β，5α，20R)-4，4二甲基-24-(2-甲基苯基)膽甾-8，14-二烯-23-炔-3-醇。M.p.136.5-137.8℃。D)-(3β，5α，20R)-4，4二甲基-24-(4-甲基苯基)膽甾-8，14-二烯-23-炔-3-醇。M.p.111.2-112.1℃。實(shí)施例16(3β，5α，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇以及(3β，5α，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-6，8(14)-二烯-3-醇i)-按照實(shí)施例1中步驟v所描述的方法，將(3β，17Z)-孕甾-5，17-二烯-3-醇(82.7g；參見Drefahl，G.et al，Chem.Ber.604(1965)]轉(zhuǎn)化為(3β，17Z)-孕甾-5，17-二烯-3-醇苯甲酸酯(104.7g)。ii)-將前述步驟中得到產(chǎn)品(25.3g)的無水二氯甲烷溶液(500ml)冷卻至15℃。加入多聚甲醛(11.3g)，再加入三氟化硼乙醚醚溶液(0.78ml)。混合物攪拌45分鐘，過濾去除過量的多聚甲醛。加入硫酸(6M，31.3ml)和甲醇(250ml)，混合物于室溫下攪拌5小時(shí)。用氫氧化鈉(2M)水溶液中和，然后傾入水中。產(chǎn)品用二氯甲烷提取；合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到(3β，20S)-20-甲基孕甾-5，16-二烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯(26.5g)。產(chǎn)品無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。iii)-將含有Pd/C(10％，4.18g)的前述步驟中所得醇(13.3g)的二氯甲烷(135ml)和乙醇(135ml)溶液在室溫和常壓下進(jìn)行氫化。過濾并減壓濃縮。用二氯甲烷/丙酮重結(jié)晶后得到(3β，20S)-20-甲基孕甾-5-烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯(10.6g)。iv)-將前述步驟中得到醇(22.2g)的無水二氯甲烷(444ml)溶液加到相同溶劑(443ml)的氯代鉻酸吡啶鎓(44.3g)中?；旌衔锸覝?cái)嚢?.5小時(shí)后，冷卻至5℃。加入亞硫酸氫鈉(90g)的水(511ml)溶液，繼續(xù)攪拌1小時(shí)。將混合物傾入水(3L)中，經(jīng)硅膠和硅藻土過濾。產(chǎn)品用二氯甲烷提取，合并的有機(jī)相減壓濃縮。將殘余物溶于乙酸乙酯和四氫呋喃的混合物中，水洗。有機(jī)相用硫酸鈉干燥并用活性碳處理，過濾，濃縮，得到(3β，20S)-3-(苯甲酰氧基)-孕甾-5-烯-20-羧醛(19.0g)。產(chǎn)品無需純化即可以直接用于下一步反應(yīng)。v)-按照實(shí)施例1中步驟ix所描述的方法，將前述步驟中得到的醛(19.0g)轉(zhuǎn)化為(3β，20S，21R)-20-甲基-21-苯基孕甾-5-烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯和(3β，20S，21S)-20-甲基-21-苯基孕甾-5-烯-3，21-二醇3苯甲酸酯的混合物(共17.7g)。vi)-將前述步驟中得到的醇(15.3g)和三乙基硅烷(5.26ml)的無水二氯甲烷溶液(306ml)冷卻至0℃。加入三氟化硼乙醚醚溶液(4.2ml)，混合物攪拌1.5小時(shí)。將其傾入飽和碳酸氫鈉水溶液中，產(chǎn)品用二氯甲烷提取。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。粗品用乙醚重結(jié)晶后得到(3β，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-5-烯-3-醇苯甲酸酯(10.7g)。vii)-將含有1，3-二溴-5，5-二甲基乙內(nèi)酰脲(3.78g)的前述步驟中得到的苯甲酸酯(8.88g)的無水環(huán)己烷溶液(450ml)加熱回流1小時(shí)。混合物冷卻后，將其傾入水中。粗品用乙酸乙酯提取，合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。將殘余物(11.3g)溶于無水四氫呋喃(180ml)中，用四丁基氟化銨的四氫呋喃(1M，528ml)溶液處理?；旌衔飻嚢柽^夜。其傾入水中。粗品用乙酸乙酯提取，合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。粗品進(jìn)行重結(jié)晶和柱層析后得到(3β，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-5，7-二烯-3-醇苯甲酸酯(4.48g)。viii)-按照實(shí)施例1中步驟vii所描述的方法，將前述步驟中得到的二烯(3.2g)進(jìn)行異構(gòu)化。用丙酮/乙醚反復(fù)地對(duì)粗品(3.3g)進(jìn)行重結(jié)晶，柱層析后得到(3β，5α，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇苯甲酸酯(1.51g)以及(3β，5α，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-6，8(14)-二烯-3-醇苯甲酸酯(0.75g)。ixA)-按照實(shí)施例1中步驟iv所描述的方法，將(3β，5α，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇苯甲酸酯(0.90g)轉(zhuǎn)化為3-羥基化合物。用乙醚/庚烷反復(fù)地重結(jié)晶得到(3β，5α，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇(0.39g)。M.p.156-157℃。ixB)-按照實(shí)施例1中步驟iv所描述的方法，將(3β，5α，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-6，8(14)-二烯-3-醇苯甲酸酯(0.75g)轉(zhuǎn)化為3-羥基化合物。層析和冷凍干燥后得到(3β，5α，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-6，8(14)-二烯-3-醇(0.21g)。實(shí)施例17(3β，5α，20R)--4，4二甲基-23-(2-甲基苯基)-24-降膽-8，14-二烯-3-醇丁二酸氫鹽將實(shí)施例5中所描述的(3β，5α，20R)-4，4二甲基-23-(2-甲基苯基)-24-降膽-8，14-二烯-3-醇(0.15g)，無水吡啶(2.2ml)，琥珀酸酐(0.82g)以及4-二甲基氨基吡啶(5mg)的混合物在60℃下加熱過夜。冷卻混合物，之后將其傾入水中。產(chǎn)品用乙酸乙酯提取，合并的有機(jī)相用2M鹽酸和水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。粗品用丙酮進(jìn)行重結(jié)晶得到(3β，5α，20R)-4，4二甲基-23-(2-甲基苯基)-24-降膽-8，14-二烯-3-醇丁二酸氫鹽(0.106g)。M.p.144-147℃。實(shí)施例17按照實(shí)施例17中所描述的方法，可以制備下列化合物A)-從(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇(化合物1，實(shí)施例1中所述)，制備(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇丁二酸氫鹽。該產(chǎn)品含有30％(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-6，8(14)-二烯-3-醇丁二酸氫鹽。B)-從(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-[4-(三氟甲基)苯基]孕甾-8，14-二烯-3-醇(實(shí)施例2B中所述)，制備(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-[4-(三氟甲基)苯基]孕甾-8，14-二烯-3-醇丁二酸氫鹽。M.p.147-151℃。C)-從(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-[2-(三氟甲基)苯基]-24-降膽-8，14-二烯-3-醇(實(shí)施例6B中所述)，制備(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-[2-(三氟甲基)苯基]-24-降膽-8，14-二烯-3-醇丁二酸氫鹽。該產(chǎn)品含有30％(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-[2-(三氟甲基)苯基]-24-降膽-6，8(14)-二烯-3-醇丁二酸氫鹽。D)-從(3β，5α，20R，22E)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14，22-三烯-3-醇(實(shí)施例10中所述)，制備(3β，5α，20R，22E)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14，22-三烯-3-醇丁二酸氫鹽。該產(chǎn)品含有40％(3β，5α，20R，22E)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-6，8(14)，22-三烯-3-醇丁二酸氫鹽。實(shí)例19卵母細(xì)胞分析通法停止在減數(shù)分裂期的卵母細(xì)胞含有分散的染色體，其被完整的稱為胚氣囊(GV)核包裹物所包圍。當(dāng)通過中間循環(huán)促性腺激素波動(dòng)進(jìn)行減數(shù)分裂的再啟動(dòng)時(shí)，染色體進(jìn)行再縮合并且GV破裂(GVBD)。在體內(nèi)，卵母細(xì)胞暴露于次黃嘌呤(HX)，其使卵母細(xì)胞停留在減數(shù)分裂前期。此減數(shù)分裂停止的情況在體外可以通過向培養(yǎng)基中加入次黃嘌呤來模擬。以在裸露的卵母細(xì)胞(DO)中克服次黃嘌呤保持減數(shù)分裂處于停止?fàn)顟B(tài)(即體外引導(dǎo)減數(shù)分裂恢復(fù))的能力作為指標(biāo)，來測(cè)定本發(fā)明化合物的活性。丘包裹的卵母細(xì)胞的分離卵巢是從未成熟的雌性小鼠(B6D2-F1，C57BL×DBA系)上獲得的。在小鼠19，20，21天時(shí)，經(jīng)皮下注射單一劑量20IU的促卵泡激素(Organon，The Netherlands)鹽水溶液。
小鼠注射促卵泡激素48小時(shí)后，由頸部殺死小鼠。移出卵巢，除去外部組織，并將其置于37℃的含有1ml制備介質(zhì)的多碟中。將補(bǔ)有小牛血清白蛋白(3mg.ml-1)，L-谷氨酰胺(0.23mM)，丙酮酸鈉(2mM)和次黃嘌呤(4mM)的L-15 Leibovitz培養(yǎng)基(Gibco，pH7.3±0.1)作為制備培養(yǎng)基。在解剖顯微鏡下，用兩個(gè)附有兩個(gè)1ml注射器的27-計(jì)量針，對(duì)卵巢的竇性氣囊進(jìn)行穿刺。用嘴控制的移液管選出大小一致的丘包圍的卵母細(xì)胞(CEO)，用0.5ml新鮮制備介質(zhì)進(jìn)行沖洗。從每個(gè)卵巢中大約得到20個(gè)CEO。裸露的卵母細(xì)胞的分離通過細(xì)孔嘴控制的移液管對(duì)CEO進(jìn)行溫和沖洗，得到從丘細(xì)胞中分出游離卵母細(xì)胞，即裸露的卵母細(xì)胞(DO)。DO用新鮮的培養(yǎng)介質(zhì)沖洗兩次，然后儲(chǔ)存于37℃的培養(yǎng)介質(zhì)中，其中的濕度為100％，并含有5％CO2的空氣。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)卵母細(xì)胞的分析分三批進(jìn)行，每批代表一只小鼠的卵巢(隨機(jī)的批設(shè)計(jì))。在t＝0時(shí)，將第一只小鼠的第一個(gè)卵巢中的DO分布到含有0.5ml制備培養(yǎng)基的4池多碟的1和3池上，第二個(gè)卵巢中的DO分布到2和4池上，上述培養(yǎng)基中加有本發(fā)明20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物(第一批)。將培養(yǎng)基作為對(duì)照。對(duì)第二和第三只小鼠重復(fù)同樣的操作過程(第二批和第三批)。所用的培養(yǎng)基為用CO2飽和的，并補(bǔ)有小牛血清白蛋白(3mg.ml-1)，L-谷氨酰胺(0.23mM)，丙酮酸鈉鹽(2mM)和次黃嘌呤(4mM)的MEMα培養(yǎng)基(Gibco，pH7.3±0.1)。總的來說，每個(gè)對(duì)照或受試化合物用30個(gè)卵母細(xì)胞(10個(gè)卵母細(xì)胞為一批)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在t＝0時(shí)，在帶有分辨干擾對(duì)比設(shè)備的轉(zhuǎn)換顯微鏡下，對(duì)帶有完整胚氣囊(GV)或破裂胚氣囊(GVBD)的DO的數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)。在實(shí)驗(yàn)中僅采用帶有完整GV的卵母細(xì)胞。將卵母細(xì)胞在37℃的培養(yǎng)基(其中的濕度為100％，并含有5％CO2)中培養(yǎng)22小時(shí)。在培養(yǎng)期結(jié)束時(shí)，對(duì)每組GV或GVBD的卵母細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。為了進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算一批中每組破裂胚氣囊的百分比。這些百分比經(jīng)過反正弦轉(zhuǎn)換，通過ANOVA實(shí)驗(yàn)對(duì)隨機(jī)的批設(shè)計(jì)進(jìn)行分析，觀察對(duì)照和受試化合物之間的差異。結(jié)果列于表I。表1、在受試化合物存在下經(jīng)過培養(yǎng)后卵母細(xì)胞中胚氣囊破裂(GVBD)的百分比(DO分析)*化合物(實(shí)施例) GVBD(％)實(shí)驗(yàn)(對(duì)照)(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇(1) 100(0)(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-(3-甲基苯基)孕甾-8，14-二烯-3-醇(2A) 97(8)(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-[4-(三氟甲基)苯基]孕甾-8，14-二烯-3-醇(2B) 97(8)(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-(6，8)14-二烯-3-醇(3) 100(0)(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基-21-(3-甲基苯基)孕甾-8，14-二烯-3，21-二醇(4)19(4)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-(2-甲基苯基)-24-降膽-8，14-二烯-3-醇(5) 28(0)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-(3-甲基苯基)-24-降膽-8，14-二烯-3-醇(6A) 60(8)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-[2-(三氟乙基)苯基]-24-降膽-8，14-二烯-3-醇(6B) 0(0)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3-醇(7A)(3β，5α，20R)-3-羥基-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-23-酮(7B)(3β，5α，23R)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇(8)(3β，5α，23S)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-3，23-二醇(9)(3β，5α，20R，22E)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14，22-三烯-3-醇(10)0(0)(3β，5α，20R，23E)-4，4-二甲基-24-苯基降膽-8，14，23-三烯-3-醇(11)67(0)(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14-二烯-22-炔-3-醇(12) 100(3)(3β，5α，20S)-23-(4-甲氧基苯基)-4，4-二甲基-24-降膽-8，14-二烯-22-炔-3-醇(13A)5(0)(3β，5α，20S)-23-(4-氯苯基)-4，4-二甲基-24-降膽-8，14-二烯-22-炔-3-醇(13B)60(0)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-24-苯基降膽-8，14-二烯-23-炔-3-醇(14) 28(3)(3β，5α，20R)-24-(4-甲氧苯基)-4，4-二甲基降膽-8，14-二-烯-23-炔-3-醇(15A) 51(6)(3β，5α，20R)-24-(4-氯苯基)-4，4-二甲基降膽-8，14-二烯-23-炔-3-醇(15B)39(6)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-24-(2-甲基苯基)降膽-8，14-二烯-22-炔-3-醇(15C) 4(0)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-24-(4-甲基苯基)降膽-8，14-二烯-23-炔-3-醇(15D) 100(0)(3β，5α，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇(16A)(3β，5α，20R)-20-甲基-21-苯基孕甾-6，8(14)-二烯-3-醇(16B)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-(2-甲基苯基)-24-降膽-8，14-二烯-3-醇丁二酸氫鹽(17) 81(0)(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-苯基孕甾-8，14-二烯-3-醇丁二酸氫鹽(18A) 38(6)(3β，5α，20R)-4，4，20-三甲基-21-[4-(三氟甲基)苯基]孕甾-8，14-二烯-3-醇丁二酸氫鹽(18B) 100(0)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-23-[2-(三氟甲基)苯基]-24-降膽-8，14-二烯-3-醇丁二酸氫鹽(18C) 98(6)(3β，5α，20R，22E)-4，4-二甲基-23-苯基-24-降膽-8，14，22-三烯-3-醇丁二酸氫鹽(18D)100(6)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基膽甾-8，14，22-三烯-3-醇(FF-Mas)84(4)*每個(gè)化合物在10μm的濃度下進(jìn)行測(cè)定。
權(quán)利要求
1.具有通式I的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物或其制藥學(xué)上可接受的鹽類，
其中R1為(H，OR)，(H，OSO3H)或NOR；R為H，(C1-6)烷基或(C1-6)?；籖2和R3為各自獨(dú)立地代表氫或(C1-6)烷基；X為直鏈二價(jià)C1-8烴類基團(tuán)，其選擇性地包括雙鍵或三鍵；或X為-(CH2)m-CR7R8-；m＝0-4；R7和R8中至少一個(gè)為(C1-4)烷基，羥基，(C1-4)烷氧基或鹵素；另一個(gè)如果存在為氫；或者R7和R8一起代表O或NOR’；R’為H，(C1-6)烷基或(C1-6)?；籖4，R5和R6為各自獨(dú)立地代表氫，羥基，(C1-4)烷氧基；鹵素，NR9，R10，或(C1-4)烷基，其可被羥基，烷氧基，鹵素或氧選擇性取代；R9和R10為各自獨(dú)立地代表氫或(C1-4)烷基；且虛線代表Δ7或Δ8雙鍵，或一對(duì)選自Δ7，14、Δ8，14、、和Δ6，8(14)的共軛雙鍵；條件是不包括(3β，5α，24E)-25-(4-羥苯基)-4-甲基-26，27-二降膽甾-7，24，-二烯-3-醇。
2.權(quán)利要求1中的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物，其中的R1為(H，OR)，且虛線代表一對(duì)選自Δ7，14、Δ8，14、、和Δ6，8(14)的共軛雙鍵。
3.權(quán)利要求2中的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物，其中雙鍵為Δ8，14、。
4.權(quán)利要求2或3中的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物，其中3-OR取代基的構(gòu)型為β構(gòu)型。
5.權(quán)利要求1-4任意一個(gè)之中的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物，其中R1為(H，OR)，R為H或(C1-6)?；籖2和R3為各自獨(dú)立地代表氫或(C1-6)烷基；X為-CH2-；R4，R5和R6的含義同前；虛線代表一對(duì)Δ8， 14、的共軛雙鍵；其中3-OR取代基的構(gòu)型為β構(gòu)型。
6.用于治療的具有通式I的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物。
7.包含具有通式I的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物或其制藥學(xué)上可接受的鹽類的藥物組合物，其中混合有制藥學(xué)上可接受的輔助劑。
8.具有通式I的20-芳烷基-5α-孕甾烷衍生物或其制藥學(xué)上可接受的鹽類在制備控制生育的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有通式(Ⅰ)的20－芳烷基－5α－孕甾烷衍生物或其制藥學(xué)上可接受的鹽類,其中R
文檔編號(hào)A61P43/00GK1260802SQ98806290
公開日2000年7月19日 申請(qǐng)日期1998年5月11日 優(yōu)先權(quán)日1997年5月16日
發(fā)明者J·A·J·利姆慧斯, J·范德爾勞, M·B·格羅恩 申請(qǐng)人:阿克佐諾貝爾公司