專利名稱：龜粉和蛇粉的組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種龜粉和蛇粉的組合物及其制備方法。
現(xiàn)有技術(shù)中，PCT/CN 95/00001公開了一種含龜和鱉的組合物及其制備方法和應(yīng)用，實際生產(chǎn)時，由于鱉的價格極其昂貴，故所制成的混合后的粉末價格很高，盡管它有很高的營養(yǎng)價值，但仍使許多消費者無力購買。
本發(fā)明的目的在于提供一種價格低廉且具有較高營養(yǎng)價值的龜粉和蛇粉的組合物及其制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是一種龜粉和蛇粉的組合物，它包括重量比為10％～40％的龜粉和60％～90％的蛇粉。龜蛇組合物的制備方法是將龜及蛇去除內(nèi)臟，用清水漂洗干凈，再用100℃的蒸氣滅菌2小時，然后在80～100℃的溫度下干燥24小時，再將所述的干燥后的龜蛇原料粉碎成80目以下的粉末，按配比混合均勻，填充于膠囊中。
本發(fā)明經(jīng)實驗表明具有下列優(yōu)點一.龜蛇粉對免疫功能的調(diào)節(jié)作用(本實驗由南京醫(yī)科大學(xué)營養(yǎng)與食品科學(xué)技術(shù)研究所進行)1.材料與方法1.1 受試樣品龜蛇粉由中外合資蘇州朗力福保健品有限公司提供，該制劑為膠囊，每粒為0.4g，成份的重量比為龜20％，蛇80％(其中烏梢蛇50％，蝮蛇30％)。
1.2 試驗動物昆明種小鼠體重20～25g，由江蘇省實驗動物中心提供。合格證號蘇動(環(huán))95100號和蘇動(質(zhì))95035號。
1.3 劑量分組
根據(jù)龜蛇粉人體攝入量(0.4g×2粒×3次/日/人，相當(dāng)于40mg/kg體重)，分別按其10倍、20倍、40倍設(shè)計三個劑量組及陰性對照組，即400mg/kg、800mg/kg、1600mg/kg及蒸餾水對照組，每日灌胃一次，連續(xù)30日。
1.4 試驗方法按《保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法》進行。
1.4.1 二硝基氟苯(DNFB)誘導(dǎo)小鼠DTH(耳腫脹法)1.4.1.1 分組及給樣取體重20～25g的雄性昆明種小鼠，隨機分為四組，每組10只以上，分別灌服龜蛇粉低、中、高劑量即400mg/kg、800/kg、1600mg/kg及陰性對照(蒸餾水)，每日一次，連續(xù)30日。
1.4.1.2 致敏每鼠腹部皮膚用硫化鋇脫毛，范圍約3cm×3cm，用1％DNFB溶液50ul均勻涂抹致敏。
1.4.1.3 攻擊5日后用1％DNFB溶液10ul均勻抹于小鼠右耳(兩面)進行攻擊。
1.4.1.4 測定攻擊后24小時頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下直徑8mm的耳片，稱重。
1.4.1.5 數(shù)據(jù)處理以左右耳重量之差表示DTH的程度，采用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
1.4.2 血清溶血素測定1.4.2.1 分組及給樣取體重20～25g的雌性昆明種小鼠，隨機分為四組，每組10只以上，分組及給樣方法同前。
1.4.2.2 SRBC及補體制備按檢驗方法進行。
1.4.2.3 免疫動物及血清分離每鼠腹腔注射2％SRBC懸液0.2ml，4日后摘眼球取血，分離血清。
1.4.2.4 溶血反應(yīng)血清250倍稀釋后，按檢驗方法測定樣品管及SRBC半數(shù)溶血時的光密度值。
1.4.2.5 數(shù)據(jù)處理溶血素的量以半數(shù)溶血值(HC50)表示，用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
1.4.3 小鼠碳廓清試驗1.4.3.1 分組及給樣取體重20～25g雄性昆明種小鼠，隨機分為四組，每組10只以上，分組及給樣方法同前。
1.4.3.2 測定每鼠尾靜脈注入四倍稀釋的印度墨汁(0.1ml/10g體重)，注入后2分鐘及10分鐘分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20ul，并將其加到2ml的Na2CO3溶液中，用分光光度計在600nm波長處測光密度值。同時將小鼠處死，取肝臟和脾臟稱重。
1.4.3.3 數(shù)據(jù)處理用校正的吞噬指數(shù)a表示小鼠碳廓清能力，用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
1.4.4 臟器/體重比值1.4.4.1 分組及給樣同小鼠碳廊清試驗。
1.4.4.2 測定末次給樣后24小時處死小鼠，稱體重，取胸腺、脾臟并稱重。1.4.4.3 數(shù)據(jù)處理用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。2. 結(jié)果2.1 龜蛇粉對DNFB誘導(dǎo)小鼠DTH的影響表1結(jié)果表明，龜蛇粉對DNFB誘導(dǎo)小鼠DTH未產(chǎn)生明顯影響。
表1龜蛇粉對DNFB誘導(dǎo)小鼠DTH的影響組別劑量(mg/kg.BW)動物數(shù)(只)耳殼增重(mg)對照組0 10 7.8±2.8低劑量組 400 10 10.6±4.9中劑量組 800 10 7.7±3.4高劑量組 1600 10 6.6±4.12.2 龜蛇粉對小鼠血清溶血素形成的影響由表2結(jié)果可見，龜蛇粉對小鼠血清溶血素的形成未產(chǎn)生明顯影響表2 龜蛇粉對小鼠血清溶血素形成的影響組別劑量(mg/kg.BW)動物數(shù)(只) HC50對照組0 10 32.1±20.4低劑量組 40011 38.6±36.9中劑量組 80010 44.2±24.6高劑量組16001034.7±22.22.3 龜蛇粉對小鼠碳廊清作用的影響表3結(jié)果顯示龜蛇粉中，高劑量組吞噬指數(shù)均高于對照組(P＜0.05)，表明龜蛇粉具有提高小鼠碳廊清的作用。
表3龜蛇粉對小鼠碳廊清作用的影響組別劑量(mg/kg.BW)動物數(shù)(只)吞噬指數(shù)a對照組0 10 4.8564±0.6304低劑量組 40010 5.8114±2.4411中劑量組 80010 5.9013±1.2447*高劑量組 160010 5.7907±0.9939注"*"與對照組比較，P＜0.05。2.4 龜蛇粉對免疫器官的影響由表4可以看出，龜蛇粉中、高劑量組胸腺/體重比值均高于對照組(P＜0.05)，表明龜蛇粉具有促進胸腺發(fā)育的作用。龜蛇粉對脾/體比值無明顯影響。
表4龜蛇粉對免疫器官的影響組別 劑量(mg/kg.BW) 動物數(shù)(只) 胸腺/體重(mg/g)脾臟/體重(mg/g)對照組 010 1.51±0.555.64±1.26低劑量組 400 101.62±0.87 4.53±2.35中齊量組 800 102.85±1.87*4.99±1.86高劑量組 1600102.34±1.01*5.02±2.06注"*"與對照組比較，P＜0.05。
二.龜蛇粉的搞疲勞作用(本實驗由南京醫(yī)科大學(xué)營養(yǎng)與食品科學(xué)技術(shù)研究所進行)3.材料與方法3.1 受試樣品龜蛇粉由中外合資蘇州朗力福保健品有限公司提供，該制劑為膠囊，每粒為0.4g，成份的重量比為龜20％，蛇80％(其中烏梢蛇50％，蝮蛇30％)。
3.2 試驗動物昆明種小鼠體重20～25g，由江蘇省實驗動物中心提供。合格證號蘇動(環(huán))95100號和蘇動(質(zhì))95035號。
3.3 劑量分組根據(jù)龜蛇粉人體攝入量(0.4g×2?！?次/日/人，相當(dāng)于40mg/kg體重)，分別按其10倍、20倍、40倍設(shè)計三個劑量組及陰性對照組，即400mg/kg、800mg/kg、1600mg/kg及蒸餾水對照組，每日灌胃一次，連續(xù)30日。
3.4 試驗方法按《保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法》進行。
3.4.1 負(fù)重游泳試驗3.4.1.1 分組及給樣取體重20～25g的雄性昆明種小鼠，隨機分為四組，每組10只以上，分別灌服龜蛇粉低、中、高劑量即400mg/kg、800/kg、1600mg/kg及陰性對照(蒸餾水)，每日一次，連續(xù)30日。
3.4.1.2 測試末次給樣30min后，每鼠負(fù)重5％體重的鉛皮，置水溫25℃、水深30～40cm的水箱中游泳，記錄小鼠自游泳開始至死亡時間，作為小鼠游泳時間(min)。
3.4.1.3 數(shù)據(jù)處理用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
3.4.2 血乳酸測定3.4.2.1 分組及給樣同前。
3.4.2.2 測定末次給樣30min后負(fù)重2％在溫度25～30℃的水中游泳60min后停止，安靜15min后摘眼采血。取血20微升，按檢驗方法測定樣品管及標(biāo)準(zhǔn)管的光密度，測定波長為560nm。血乳酸含量(mmol/L)＝A測定管/A標(biāo)準(zhǔn)管×4.43.4.2.3 數(shù)據(jù)處理用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
3.4.3 血清尿素氮測定3.4.3.1 分組及給樣同前。
3.4.3.2 測定末次給樣30min后在溫度25～30℃的水中游泳90min，摘眼球采血，取10微升血清二乙酰-肟法尿素氮試劑盒說明書測定。試劑盒由上海榮盛生物技術(shù)有限公司提供。
3.4.3.3 數(shù)據(jù)處理
用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
3.4.4 肝糖原測定3.4.4.1 分組及給樣同前。
3.4.4.2 測定末次給樣30min后，在溫度25～30C的水中游泳90min，立即處死，取肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸干，精確稱取肝臟200mg，加入4ml三氯醋酸，勻漿、離心后取上清液按檢驗方法(蒽酮法)于620nm波長處測定樣品管及標(biāo)準(zhǔn)管的光密度，根據(jù)所稱取的肝臟重量及標(biāo)準(zhǔn)管光密度計算肝糖原含量。
3.4.4.3 數(shù)據(jù)處理用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
3.4.5 血清肌酐測定3.4.5.1 分組及給樣同前。
3.4.5.2 測定末次給樣30min后在溫度25～30C的水中游泳90min，摘眼球采血，取200微升血清按血清肌酐測定試劑盒說明書測定。試劑盒由上海榮盛生物技術(shù)有限公司提供。
3.4.5.3 數(shù)據(jù)處理用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
3.4.6 血紅蛋白測定3.4.6.1 分組及給樣同前。
3.4.6.2 測定末次給樣30min后在溫度25～30℃的水中游泳90min，摘眼球采血，按氰化高鐵血紅蛋白消化系數(shù)法測定血紅蛋白含量。
3.4.6.3 數(shù)據(jù)處理用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
結(jié)果4.1 龜蛇粉對小鼠運動耐力的影響表5結(jié)果表明，龜蛇粉中、高劑量組小鼠游泳時間均高于對照組，兩者差異有顯著性(P＜0.05)，表明龜蛇粉具有增強小鼠運動耐力的作用。
表5龜蛇粉對小鼠游泳時間的影響組別 劑量(mg/kg.BW)動物數(shù)(只)游泳時間(min)對照組 0 1015.5±23.0低劑量組400 1032.6±23.1中劑量組800 1036.9±18.8*高劑量組1600 1042.4±20.0*注"*"與對照組比較，P＜0.05。
4.2 龜蛇粉對運動生化指標(biāo)的影響由表6結(jié)果可以看出，龜蛇粉各劑量組血乳酸水平均低于對照組(P＜0.05)，中、高劑量組肝糖原含量均高于對照組(p＜0.05)，其余生化指標(biāo)與對照組相比尚無明顯變化。
表6 龜蛇粉對小鼠運動生化指標(biāo)的影響組別 劑量 血乳酸 血清尿素氮肝糖原 血清肌酐 血紅蛋白(mg/kg.BW)(mmol/L) (mmol/L) (mg％) (mmol/L) (g/dl)對照組 06.22±1.68 6.87±1.04 39.9±35.5 92.9±52.9 14.0±0.9低劑量組400 4.60±1.32*6.86±0.73 44.4±41.5 93.3±34.1 14.4±2.0中齊量組800 4.00±0.63*7.63±1.88 90.4±32.9* 78.3±33.7 13.9±1.5高齊量組1600 4.46±1.02*7.50±2.07 90.3±30.3* 108.2±26.4 14.3±0.6注"*"與對照組比較，P＜0.05。
三.《本草綱目》日"龜治腰膝酸痛"，入腎經(jīng)、心經(jīng)、肝經(jīng)，性味咸、甘、平，具有滋陰補陽、益腎健骨的功效實施例本實施例的龜粉和蛇粉的組合物，它包括重量比為10％～40％的龜粉和60％～90％的蛇粉。比較好的配方比例是所述的龜粉重量比含量是18％～23％，所述的蛇粉重比含量是77％～82％。所述的蛇粉是由烏梢蛇粉和腹蛇粉組成，所述烏梢蛇粉在蛇粉中所占的重量比為50％～80％，所述腹蛇粉在蛇粉中所占的重量比為20％～50％。所述龜為《本草綱目》中所稱的山龜。制備所述的龜蛇組合物的方法是將龜及蛇去除內(nèi)臟，用清水漂洗干凈，再用100℃的蒸氣滅菌2小時，然后在80～100℃的溫度下干燥24小時，再將所述的干燥后的龜蛇原料粉碎成80目以下的粉末，按配比混合均勻，填充于膠囊中。
權(quán)利要求
1.一種龜粉和蛇粉的組合物，它包括重量比為10％～40％的龜粉和60％～90％的蛇粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的龜粉和蛇粉的組合物，其特征在于所述的龜粉重量比含量是18％～23％，所述的蛇粉重比含量是77％～82％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的龜粉和蛇粉的組合物，其特征在于所述的蛇粉是由烏梢蛇粉和腹蛇粉組成，所述烏梢蛇粉在蛇粉中所占的重量比為50％～80％，所述腹蛇粉在蛇粉中所占的重量比為20％～50％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的龜粉和蛇粉的組合物，其特征在于所述龜為山龜。
5.一種制備如權(quán)利要求1所述的龜蛇組合物的方法，其特征在于將龜及蛇去除內(nèi)臟，用清水漂洗干凈，再用100℃的蒸氣滅菌2小時，然后在80～100℃的溫度下干燥24小時，再將所述的干燥后的龜蛇原料粉碎成80目以下的粉末，按配比混合均勻，填充于膠囊中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種龜粉和蛇粉的組合物，它包括重量比為10％～40％的龜粉和60％～90％的蛇粉。所述的蛇粉是由烏梢蛇粉和腹蛇粉組成，制備所述的龜蛇組合物的方法是將龜及蛇去除內(nèi)臟，用蒸汽滅菌，然后高溫干燥，再將所述的干燥后的龜蛇原料粉碎成80目以下的粉末。本發(fā)明具有能增強人的體質(zhì)，提高人體免疫能力。
文檔編號A61K35/58GK1165660SQ97106310
公開日1997年11月26日 申請日期1997年3月4日 優(yōu)先權(quán)日1997年3月4日
發(fā)明者楊洪根 申請人:蘇州朗力福保健品有限公司