專利名稱：具有改進(jìn)的染色性能的漆酶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種包含微生物漆酶的染色組合物，該染色組合物在進(jìn)行角蛋白纖維染色，特別是頭發(fā)、皮毛、獸皮和羊毛染色中的應(yīng)用，以及進(jìn)行角蛋白纖維染色的方法。
用染發(fā)的方法來(lái)遮蓋變灰的頭發(fā)已經(jīng)有很多年了。需要這樣做的原因在于灰發(fā)是青年時(shí)代已然過(guò)去的第一征兆的事實(shí)，許多人不愿接受這種事實(shí)。
例如，在亞洲的特定地區(qū)，男人和女人都廣泛使用染料來(lái)染發(fā)，這種染料被幽默的人們稱為“黑色鞋油”。
在過(guò)去的幾十年中，染發(fā)在西方越來(lái)越流行。最初，“朋克”青年和其他社會(huì)批判分子將他們的頭發(fā)染成極端的顏色做為他們反對(duì)主流社會(huì)的一部分，但是今天尤其是青年人也使用染發(fā)劑(較“朋克”柔和的色調(diào))做為一種“化妝品”來(lái)改變或更新他們的形象。染發(fā)劑總的來(lái)說(shuō)，目前市場(chǎng)上的染發(fā)組合物主要可分為三種——暫時(shí)性染發(fā)劑——半永久性染發(fā)劑，以及——永久性的氧化型染發(fā)劑。
暫時(shí)性染發(fā)劑只是用于短期內(nèi)改變頭發(fā)的自然顏色，通常是將染料涂于頭發(fā)表面。這種染發(fā)劑用普通的洗發(fā)水就很容易除去。
應(yīng)用半永久性染發(fā)劑時(shí)，經(jīng)過(guò)五次或更多次的洗發(fā)水洗發(fā)仍能保留染過(guò)的顏色。這是通過(guò)應(yīng)用對(duì)頭發(fā)角蛋白具有高度親合力的染料來(lái)達(dá)到的，它能滲透到毛干的內(nèi)部。
永久性染發(fā)劑可耐受日曬、洗發(fā)水洗發(fā)和其他的頭發(fā)處理，只需在新頭發(fā)長(zhǎng)出時(shí)每月使用一次。這種染發(fā)體系的染料直接在頭發(fā)里或頭發(fā)上產(chǎn)生。小分子的芳香族無(wú)色染料前體(例如對(duì)苯二胺和鄰氨基苯酚)深入到頭發(fā)中，在那里其被氧化劑氧化為有色的聚合化合物。這些有色化合物比染料前體大，不能從頭發(fā)中洗脫。
在染發(fā)組合物中加入被稱為改性劑(或偶聯(lián)劑)的化合物能獲得許多種頭發(fā)色澤。這樣的改性劑有例如鄰苯二酚(Cathecol)和間苯二酚(Resorcinol)。
通常用過(guò)氧化氫作氧化劑(助色劑)，它也用作漂白劑。含有過(guò)氧化氫的染色組合物常被稱為“增淺染料”，由于過(guò)氧化氫有使顏色變淺的作用。
因?yàn)檫^(guò)氧化氫損傷頭發(fā)，所以在染發(fā)組合物中應(yīng)用過(guò)氧化氫有一些弊病。而且，氧化型的染料通常要求高pH值(一般大約pH9-10)，這也會(huì)在頭發(fā)和皮膚上造成損傷。因此，如果應(yīng)用含有過(guò)氧化氫的染料組合物，通常不可用于染頭發(fā)。
為了克服使用過(guò)氧化氫的弊端，建議用氧化酶來(lái)代替過(guò)氧化氫。
US專利號(hào)3,251,742(Revlon)描述了一種通過(guò)原位(例如，在頭發(fā)上)形成染料來(lái)染人頭發(fā)的方法。應(yīng)用氧化酶在一個(gè)基本上中性的pH(7-8.5)條件下發(fā)生顏色形成反應(yīng)。提到的合適的氧化酶有漆酶、酪氨酸酶、多酚酶(polyphenolase)和鄰苯二酚酶(cataco-lase)，唯一的作為范例的氧化酶是酪氨酸酶。
EP專利號(hào)504,005(Perma S.A.)提到的角蛋白纖維特別是頭發(fā)的染色組合物也不需要H2O2(過(guò)氧化氫)。該組合物包含一種能催化聚合染料形成的酶和染料前體，例如堿和偶聯(lián)劑，該組合物存在于pH6.5-8的緩沖溶液中，而該酶在pH6.5-8的范圍內(nèi)有最佳活性。
在這個(gè)專利中漆酶的范例是Rhizoctonia praticola漆酶和漆樹(shù)(Rhus vernicifera)漆酶。
美國(guó)化學(xué)協(xié)會(huì)vol.209，no.1-2，1995的文章摘要公開(kāi)了從嗜熱小柱孢菌(Scytalidium thermophilum)和嗜熱毀絲霉(Mycelioph-thora thermophila)克隆漆酶的過(guò)程。該摘要沒(méi)有提及用所說(shuō)的漆酶進(jìn)行染色。
本發(fā)明的目的是提供用于角蛋白纖維，例如頭發(fā)、皮毛、獸皮和羊毛的改進(jìn)的染色組合物，該組合物包含作為氧化劑的氧化酶。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)用于角蛋白纖維染色的“改進(jìn)的”組合物指一種能較快地使角蛋白纖維染上顏色的組合物或者使用較少量的氧化酶就能獲得最佳的染色效果的組合物，該效果通過(guò)與相應(yīng)的現(xiàn)有技術(shù)染色組合物相比較的ΔE*來(lái)確定。
此外，也可使用較少量的染料前體。因?yàn)橐恍┨囟ǖ娜玖锨绑w是非常有害健康和致癌的，所以這一點(diǎn)很有好處。
出于使用者方便考慮，那些能更快地對(duì)角蛋白纖維，特別是頭發(fā)、皮毛、獸皮和羊毛進(jìn)行染色的組合物是所希望。
再者，希望能在染色組合物中使用較少量的酶。這可使染色方法更經(jīng)濟(jì)。而且產(chǎn)生空氣傳播蛋白氣溶膠的風(fēng)險(xiǎn)也減小了。
目前令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使用微生物漆酶氧化染料前體可以提供這種改進(jìn)的角蛋白纖維染色組合物。
漆酶(苯二酚氧氧化還原酶)(E.C.分類1.10.3.2，根據(jù)En-zyme Nomenclature(1992)Academic Press，Inc.)是催化酚氧化的含銅多酶。漆酶介導(dǎo)的氧化反應(yīng)導(dǎo)致從合適的酚類底物產(chǎn)生芳氧基自由基中間體；所產(chǎn)生的這些中間體最終偶聯(lián)產(chǎn)生二聚的、寡聚的和聚合的反應(yīng)產(chǎn)物的組合。特定的反應(yīng)產(chǎn)物可以用于形成適于角蛋白纖維，例如頭發(fā)和羊毛染色的染料(見(jiàn)下)。
首先，本發(fā)明的目的是提供一種染色組合物，它包括a)每毫升微生物漆酶的染色組合物中0以上-1毫克酶蛋白，b)一種或多種染料前體，c)任選的一種或多種改性劑。
特別關(guān)注的是微生物來(lái)源的漆酶，源于毀絲霉屬(Mycelio ph-thora)的一個(gè)菌株。
本發(fā)明的另一方面涉及本發(fā)明的染色組合物在對(duì)角蛋白纖維，諸如頭發(fā)、皮毛、獸皮和羊毛進(jìn)行染色中的應(yīng)用。
本發(fā)明也涉及一種角蛋白纖維染色方法，它包括在適當(dāng)?shù)臈l件下使本發(fā)明的染色組合物接觸上述角蛋白纖維一段時(shí)間，這段時(shí)間足以允許染料前體氧化成一種有色化合物。
本發(fā)明還涉及漆酶在對(duì)角蛋白纖維進(jìn)行永久性染色中的應(yīng)用，這里所說(shuō)的漆酶是一種在相同染色條件下能使ΔE*值比源于漆樹(shù)(Rhus)的漆酶的ΔE*值高的漆酶。
這意味著，當(dāng)用本發(fā)明的一種染色組合物染角蛋白纖維時(shí)，測(cè)定的ΔE*值比用含有源于漆樹(shù)的一種漆酶的染色組合物在相同條件下染相同的角蛋白纖維測(cè)定的ΔE*值高。
術(shù)語(yǔ)“相同的染色條件”指的條件是，例如酶濃度或酶活力、染色保溫時(shí)間、染色保溫溫度、pH情況、角蛋白纖維類型(比如頭發(fā)類型)是一樣的，還有用同樣的染料前體和改性劑。換句話說(shuō)，它限定的條件平行于所選擇的特定染色條件?？梢赃x擇在下面的實(shí)施例中所描述的染色條件。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，“較高的”ΔE*值規(guī)定總的定量顏色變化超過(guò)一個(gè)ΔE*單位。
ΔE*從測(cè)定的參數(shù)a*、b*和L*的值計(jì)算出，所述參數(shù)例如在一個(gè)Minolta CR200 Chroma Meter上測(cè)定，使用公式ΔE*＝√(ΔL*2+Δa*2+Δb*2)。a*、b*和L*的意義在下面的“材料與方法”部分進(jìn)行解釋。


圖1顯示了六種不同漆酶的染色效果。這六種漆酶是Poly-porus pinsitus漆酶(rPp-漆酶)、嗜熱毀絲霉漆酶(Mt-漆酶wt.)、嗜熱毀絲霉T1變種漆酶(Mt-漆酶(var))、漆樹(shù)漆酶(Rvl-FXu-1)，嗜熱小柱孢菌漆酶(rStL-FXu-1)和立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)漆酶(rRsL-3-FXu-1)。鄰氨基苯酚被用作染料前體，而間苯二胺被用作改性劑。
圖2顯示了嗜熱毀絲霉T1變種漆酶(Mt-漆酶(var)和Poly-porus pinsitus漆酶(rPp-漆酶)作為氧化劑的洗滌穩(wěn)定性。
圖3顯示了用嗜熱毀絲霉T1變種漆酶(Mt-漆酶(var)和Poly-porus pinsitus漆酶(rPp-漆酶)作為氧化劑的快速程度(速度)。
圖4顯示了嗜熱毀絲霉漆酶染色效果的劑量—響應(yīng)，所用的量從每毫升染色組合物中0.0001到0.5毫克酶蛋白。
本發(fā)明的目的是提供含有一種氧化酶的用于角蛋白纖維，諸如頭發(fā)、皮毛、獸皮和羊毛永久性染色的改進(jìn)的染色組合物。
目前令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使用微生物漆酶氧化染料前體可以提供這種改進(jìn)的染色組合物。染色組合物本發(fā)明的第一個(gè)方面涉及一種染色組合物，其包括a)每毫升微生物漆酶的染色組合物中0以上-1毫克酶蛋白，b)一種或多種染料前體，以及c)任選一種或多種染料改性劑。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，漆酶在染色組合物中存在的濃度范圍可以為0.0001-1mg/ml，優(yōu)選0.001-0.8mg/ml，更優(yōu)選0.002-0.5，甚至更優(yōu)選0.003-0.2，特別是0.004-0.1mg酶蛋白/ml染色組合物。
當(dāng)用本發(fā)明的一種組合物進(jìn)行永久性染色時(shí)，所得到的ΔE*值高于在相同染色條件下用含有源于漆樹(shù)的一種漆酶的染色組合物所得到的ΔE*值。
漆樹(shù)漆酶的一個(gè)例子是來(lái)源于日本漆樹(shù)Rhus vernicifera的漆酶(Yoshida，(1883)，J.Chem.Soc，472)。在下面的實(shí)施例1中應(yīng)用了這種漆樹(shù)漆酶。
根據(jù)本發(fā)明，所用的微生物漆酶是真菌或細(xì)菌來(lái)源的，特別是絲狀真菌來(lái)源的。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，微生物漆酶源于毀絲霉屬的一個(gè)菌株，諸如嗜熱毀絲霉種的一個(gè)菌株，例如在Novo Nordisk的WO95/33836(PCT/US95/06815)中描述的純化的漆酶，該文獻(xiàn)引入本文作參考。下面的SEQ ID NO1顯示了編碼源于嗜熱毀絲霉的一種合適的漆酶的DNA序列。
含有包括SEQ ID NO1的表達(dá)載體pRaMB5的大腸桿菌JM101已經(jīng)按照布達(dá)佩斯條約保藏在The Agricultural ResearchService Patent Culture Collection，Northern Regional Research Center，1815 University Street，Peoria，Illinois，61604。該載體已經(jīng)獲取了保藏號(hào)NRRLB-21261。
根據(jù)本發(fā)明，來(lái)源于其他微生物的、與來(lái)源于嗜熱毀絲霉的SEQ ID NO1相比有超過(guò)80％同源性的漆酶也加以了考慮。
另外，毀絲霉屬漆酶也包括能在嗜熱毀絲霉中找到的漆酶的其它形式，以及能在其他真菌中找到的漆酶的其它形式，這些真菌是屬于Apinis所描述的嗜熱毀絲霉的定義范圍的同物異名體(NovaHedwigia 5，57-78，1963)，被命名為嗜熱側(cè)孢(Sporotrichum ther-mophile)。后來(lái)的分類版本將其歸入金孢子菌屬(Chysosporium)(Von klopotek，A.Arche.，(1974)Microbiol，98，365-369)，再后來(lái)歸入毀絲霉屬(Myceliophthora)(Van Oorshot，Persoonia，(1977)，9，401-408)。許多其他命名的微生物也屬于這個(gè)種。它們包括嗜纖維側(cè)孢(Sporotrichum cellulophilum)(US專利號(hào)4,106,989)、嗜熱梭孢殼(Thielavia thermophila)(Fergus and Sinden(1968)，Can.J.Botany，47，1635-1637)、Chrysosporium fergussi和Corynascusthermophilus(Von Klopotek，同上)。
根據(jù)本發(fā)明也考慮了漆酶變體的應(yīng)用。
一個(gè)漆酶變體的例子是在PCT/US96/14087(Novo Nordisk)中描述的嗜熱毀絲霉T1變體。
T1變體(或類型I變體)是修飾過(guò)的銅藍(lán)氧化酶，包括漆酶。T1變體能夠通過(guò)例如定點(diǎn)誘變來(lái)構(gòu)建，與相關(guān)的野生型銅藍(lán)氧化酶的差別在于類型I(T1)銅位點(diǎn)中的至少一個(gè)氨基酸殘基。這些修飾通常導(dǎo)致相對(duì)于野生型酶的pH范圍和/或特異活性的改變。當(dāng)把這種酶用于染色組合物時(shí)這可能是有利的。
更特殊的嗜熱毀絲霉T1漆酶變體可含有509VSGGL511序列或者可被修飾以增加T1銅位點(diǎn)的至少一個(gè)片段的負(fù)電荷。
上述的微生物漆酶可有利地用于角蛋白纖維永久性染色組合物。這樣的組合物比包含例如實(shí)施例1所示的漆樹(shù)漆酶的相應(yīng)組合物具有更好的染色效果。
嗜熱毀絲霉T1變體漆酶比Polyporus pinsitus漆酶洗滌穩(wěn)定性更強(qiáng)，染色更快，這分別在實(shí)施例2和3中得到證明。
實(shí)施例4顯示與Polyporus pinsitus漆酶相比，為得到合適的染色效果所需的毀絲霉漆酶活力(即LACU/ml)更少。
實(shí)施例5顯示對(duì)于嗜熱毀絲霉漆酶，每毫升染色組合物大約0.005毫克酶蛋白將獲得最佳染色效果。
在毀絲霉漆酶用于永久性染色組合物的情況中，漆酶濃度在0以上-1mg/ml是有利的，優(yōu)選0.0001-0.1mg/ml，更優(yōu)選0.0005-0.05mg/ml，特別是0.001-0.01mg酶蛋白/ml染色組合物。
可以理解漆酶可在宿主細(xì)胞，諸如絲狀真菌、酵母或細(xì)菌中同源性地或異源性地產(chǎn)生。
絲狀真菌宿主細(xì)胞的例子包括木霉屬(Trichoderma)種的菌株，優(yōu)選Trichoderma harzianum或Trichoderma reesei的一個(gè)菌株；或者是鐮孢屬(Fusarium)的一個(gè)種；或者是曲霉屬(Aspergillus)的一個(gè)種，最優(yōu)選米曲霉(Aspergillus oryzae)或黑曲霉(Aspergillusniger)；或者是酵母細(xì)胞，例如酵母屬(Saccharomyces)的一個(gè)菌株，特別是酵酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、克魯維酵母(Saccha-romyces kluyveri)或葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)；裂殖酵母(Schizosaccharomyces sp.)的一個(gè)菌株，比如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)；漢遜酵母(Hansenula sp.)、畢赤酵母(Pichia sp.)、Yarrowia sp.比如Yarrowia lipolytica或克魯維酵母(Kluyveromyces sp.)比如乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)的一個(gè)菌株；或者細(xì)菌，例如革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌如芽孢桿菌屬(Bacil-lus)菌株、諸如枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、地衣芽孢桿菌(B.Licheniformis)、遲緩芽孢桿菌(B.lentus)、短芽孢桿菌(B.brevis)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(B.Stearothermophilus)、嗜堿芽孢桿菌(B.alka-lophilus)、解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)、凝結(jié)芽孢桿菌(B.coagulans)、環(huán)狀芽孢桿菌(B.circulans)、燦爛芽孢桿菌(B.lautus)、巨大芽孢桿菌(B.megaterium)或蘇云金芽孢桿菌(B.thuringiensis)的菌株，或者是鏈霉菌屬(streptomyces)菌株諸如淺青紫鏈霉菌(S.lividans)或鼠灰鏈霉菌(S.murinus)的菌株；或者革蘭氏陰性細(xì)菌諸如大腸埃希氏桿菌(Escherichia coli)。
為了給角蛋白纖維染色，本發(fā)明的染色組合物中包含一種或多種染料前體，它們可被氧化劑轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩衔?，根?jù)本發(fā)明，這種氧化劑是一種微生物漆酶。
此外，染料前體可以是但不限于芳香族化合物，屬于三個(gè)主要化學(xué)物質(zhì)家族之一二胺類、氨基苯酚(或氨基萘酚)類和苯酚類。靛紅衍生染料前體的例子可以在DE 4,314,317-A1中找到。另外，許多吲哚或二氫吲哚衍生的染料前體在WO94/00100中公開(kāi)。在這些文件中提到的染料前體收入本文供參考。
合適的染料前體的例子包括下組化合物對(duì)苯二胺(PPD)、對(duì)甲代苯二胺(PTD)、氯對(duì)苯二胺、對(duì)氨基苯酚、鄰氨基苯酚、3，4-二氨基甲苯、2-甲基-1，4-二氨基苯、4-甲基-鄰苯二胺、2-甲氧基-對(duì)苯二胺、2-氯-1，4-二氨基苯，4-氨基二苯胺、1-氨基-4-β-甲氧基乙基氨基苯、1-氨基-4-雙-(β-羥乙基)-氨基苯、1，3-二氨基苯、2-甲基-1，3-二氨基苯、2，4-二氨基甲苯、2，6-二氨基吡啶、1-羥基-2-氨基苯、1-羥基-3-氨基苯、1-甲基-2-羥基-4-氨基苯、1-甲基-2-羥基-4-β-羥乙基氨基苯、1-羥基-4-氨基苯、1-羥基-4-甲基氨基苯、1-甲氧基-2，4-二氨基苯、1-乙氧基-2，3-二氨基苯、1-β-羥基乙氧基-2，4-二氨基苯、吩嗪、諸如4，7-吩嗪二羧酸、2，7-吩嗪二羧酸、2-吩嗪羧酸、2，7-二氨基吩嗪、2，8-二氨基吩嗪、2，7-二氨基-3，8-二甲氧基吩嗪、2，7-二氨基-3-甲氧基吩嗪、2，7-二氨基-3-甲氧基吩嗪、3-二甲基-2，8-吩嗪二胺、2，2′-[(8-氨基-7-甲基-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2，2′-[(8-氨基-7-甲氧基-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2，2′-[(8-氨基-7-氯-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2-[(8-氨基-7-甲基-2-吩嗪基)氨基]-乙醇、2，2′-[(8-氨基-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、3-氨基-7-(二甲基氨基)-2，8-二甲基-5-苯基氯、9-(二乙基氨基)-苯并[a]吩嗪-1，5-二醇、N-[8-(二乙基氨基)-2-吩嗪基]-甲烷磺酰胺、N-(8-甲氧基-2-吩嗪基)-甲烷磺酰胺、N，N，N′，N′-四甲基-2，7-吩嗪二胺，3，7-二甲基-2-吩嗪胺，對(duì)氨基苯甲酸類，諸如對(duì)氨基苯甲酸乙酯、對(duì)氨基苯甲酸甘油酯、對(duì)氨基苯甲酸異丁酯、對(duì)二甲基氨基苯甲酸戊酯(p-dimethylamino benzoic acidamil)、對(duì)二甲基氨基苯甲酸辛酯、對(duì)二乙氧基氨基苯甲酸戊酯、對(duì)二丙氧基氨基苯甲酸乙酯、乙酰水楊酸，靛紅衍生物，諸如2，3-二氨基苯甲酸。
一個(gè)實(shí)施方案中，將漆酶與染料前體一起使用，直接將其氧化成有色化合物。染料前體可以單獨(dú)或與其他染料前體組合使用。
據(jù)信，當(dāng)把二胺或氨基苯酚用作染料前體時(shí)，至少共聚合反應(yīng)中的一種中間體一定是鄰或?qū)Χ坊虬被椒?。這樣的例子可在下文找到，在US專利號(hào)3,251,742(Revlon)中也有描述，該專利的內(nèi)容收入本文供參考。
本發(fā)明染色組合物(特別是染發(fā)組合物)也任選地包括一種改性劑(偶聯(lián)劑)，通過(guò)它可獲得各種色澤。
通常改性劑用于染發(fā)組合物中，因?yàn)闆](méi)有改性劑的染發(fā)組合物得到的頭發(fā)顏色常常不被大多數(shù)人所接受。
改性劑通常是間二胺、間氨基苯酚、或多酚。一旦任選添加改性劑(偶聯(lián)劑)，它就在例如漆酶的存在下與染料前體反應(yīng)，將染料前體轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩衔铩?br> 改性劑(偶聯(lián)劑)的例子包括間苯二胺、2，4-二氨基苯甲醚、1-羥基萘(α-萘酚)、1，4-二羥基苯(氫醌)、1，5-二羥基萘，1，2-二羥基苯(鄰苯二酚)、1，3-二羥基苯(間苯二酚)，1，3-二羥基-2-甲基苯，1，3-二羥基-4-氯苯(4-氯間苯二酚)、1，2，3-三羥基苯、1，2，4-三羥基苯、1，2，4-三羥基-5-甲基苯、1，2，4-三羥基甲苯。
當(dāng)使用本發(fā)明的染色組合物時(shí)需要用較少量的酶(例如毫克酶蛋白/毫升染色組合物)就可獲得最大染色效果(見(jiàn)圖1和圖4)，與現(xiàn)有技術(shù)染色組合物如含有源于漆樹(shù)的漆酶的染色組合物相比，其被確定為最佳ΔE*值。
用于本發(fā)明組合物的染料前體和其他成份的量與通常的商業(yè)用量一致。
根據(jù)本發(fā)明，含有染色組合物的產(chǎn)品可以是一區(qū)室產(chǎn)品或二區(qū)室產(chǎn)品。在一區(qū)室產(chǎn)品中漆酶、染料前體和其他成分放在一起，在一種穩(wěn)定的溶液中或保存在穩(wěn)定的條件下(例如，染料前體不被漆酶氧化)。在二區(qū)室產(chǎn)品中漆酶、染料前體和其他成分保存在兩個(gè)分開(kāi)的容器中。容器中的內(nèi)含物在臨用前混和。應(yīng)用本發(fā)明的第二方面涉及本發(fā)明的染色組合物應(yīng)用于角蛋白纖維，特別是頭發(fā)、皮毛、獸皮和羊毛的永久性染色。
用本發(fā)明的染色組合物得到的ΔE*值高于在相同條件下使用含有源于漆樹(shù)屬的漆酶的染色組合物(見(jiàn)圖1)所得到的值。方法本發(fā)明的第三方面涉及角蛋白纖維永久性染色的方法，包括將本發(fā)明的染色組合物與上述角蛋白纖維在合適的條件下接觸一段時(shí)間，這一段時(shí)間足以使染料前體氧化為有色化合物。
染色過(guò)程可以在室溫下進(jìn)行，最好在酶的最適溫度附近，通常為10-60℃；pH范圍為3-10，最好是5-9，特別是6-8；時(shí)間為10-60分鐘，最好是15-50分鐘，特別是20-40分鐘。
當(dāng)使用本發(fā)明的方法時(shí)，獲得的ΔE*值高于在同樣染色條件下使用源于漆樹(shù)屬的品系的漆酶的相應(yīng)方法得到的ΔE*值，具有或缺乏至少一種改性劑，至少一種染料前體，一定的時(shí)間，以及條件足夠允許用于氧化染料的染料前體氧化。
該方法能用一種或多種染料前體，單獨(dú)或與一種或多種改性劑組合實(shí)施。材料與方法材料頭發(fā)6″De Meo Virgin Natural White Hair(De Meo Brothers Inc.USA)酶WO 95/33836(PCT/US95/06815)中描述的嗜熱毀絲霉漆酶，來(lái)自Novo Nordisk Biotech，Inc.US專利申請(qǐng)60/003,142中描述的嗜熱毀絲霉T1變體漆酶，來(lái)自Novo Nordisk Biotech，Inc.WO 96/00290(PCT/US95/07536)中描述的Polyporus pinsitus漆酶，來(lái)自Novo Nordisk Biotech，Inc.漆樹(shù)漆酶(Yoshida，J.Chem.Soc.，472(1883)WO 95/07988中描述的立枯絲核菌漆酶，來(lái)自Novo NordiskBiotech，Inc.WO 95/33837(PCT/US95/06816)中描述的嗜熱小柱孢菌漆酶，來(lái)自Novo Nordisk Biotech，Inc.生物材料的保藏下列生物材料已經(jīng)于1994年5月25日按布達(dá)佩斯條約的條款保藏在the Agricultural Research Service Patent Culture Collection，Northern Regional Research Center，1815 University Street，Peoria，Illinois，61604并獲取如下保藏號(hào)。保藏物 保藏號(hào)含pRaMB5的大腸桿菌JM101 NRRL B-21261染料前體0.1％w/w對(duì)苯二胺于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.0(pPD)0.1％w/w對(duì)甲代苯二胺于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.00.1％w/w氯對(duì)苯二胺于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.00.1％w/w對(duì)氨基苯酚于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.00.1％w/w鄰氨基苯酚于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.00.1％w/w 3，4-二氨基甲苯于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.0改性劑0.1％w/w間苯二胺于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.00.1％w/w 2，4-二氨基苯甲醚于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.00.1％w/w α-萘酚于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.00.1％w/w氫醌于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.00.1％w/w鄰苯二酚于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.00.1％w/w間苯二酚于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.00.1％w/w 4-氯間苯二酚于0.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.0染料前體與上述改性劑之一組合起來(lái)，在染色溶液中的終濃度就前體而言是0.1％w/w，就改性劑而言是0.1％w/w。其他溶液商品洗發(fā)水裝置Minolta CR200 Chroma Meter漆酶活性(LACU)的確定漆酶活性是在有氧條件下從丁香醛連氮氧化而確定的。產(chǎn)生的紫色于530nm下光測(cè)量。分析條件是19mM的丁香醛連氮，23.2mM的乙酸鹽緩沖液，pH5.5，30℃，1分鐘反應(yīng)時(shí)間。
1個(gè)漆酶單位(LACU)指在這些條件下每分鐘催化1.0微摩爾丁香醛連氮轉(zhuǎn)化的酶量。頭發(fā)顏色的評(píng)價(jià)發(fā)束的顏色在Minolta CR200 Chroma Meter上通過(guò)應(yīng)用參數(shù)L*(“0”＝黑色和“100”＝白色)、a*(“-”＝綠色和“+”＝紅色)與b*(“-”＝藍(lán)色和“+”＝黃色)定量。
ΔL*、Δa*和Δb*分別是與未處理頭發(fā)的L*、a*和b*相比的L*、a*和b*的Δ值(例ΔL*＝L樣品*-L未處理頭發(fā)*)ΔE*根據(jù) ΔE*＝√(ΔL*2+Δa*2+Δb*2)計(jì)算出，表示顏色變化的總量。實(shí)施例實(shí)施例1染色效果不同漆酶的染色效果在相同的條件下用0.1％w/w鄰氨基苯酚(染料前體)和0.1％w/w間苯二胺(改性劑)檢測(cè)并進(jìn)行比較。
被檢測(cè)的漆酶是一種Polyporus pinsitus 漆酶一種嗜熱毀絲霉漆酶一種嗜熱毀絲霉T1漆酶變體一種漆樹(shù)漆酶一種立枯絲核菌漆酶一種嗜熱小柱孢菌漆酶染發(fā)使用了一克白色De Meo發(fā)束。
4毫升染料前體溶液(含有改性劑)與1毫升漆酶在一個(gè)Whirley混合器上混勻，涂于該發(fā)束上，在30℃保溫60分鐘。
然后用流水沖洗發(fā)束，用洗發(fā)水洗，用水沖洗、梳、并空氣干燥。
a*、b*和L*在Chroma Meter上確定，然后計(jì)算出ΔE*。
未用酶處理的發(fā)束樣品作為參照。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示于圖1。實(shí)施例2洗滌穩(wěn)定性用白色De Meo發(fā)束(1克)檢驗(yàn)用嗜熱毀絲霉T變體漆酶和Polyporus pinsitus漆酶染色的頭發(fā)的洗滌穩(wěn)定性。
根據(jù)實(shí)施例1進(jìn)行氧化型染發(fā)，所不同的是對(duì)苯二胺(pPD)用作染料前體而未用改性劑。洗發(fā)把染過(guò)的發(fā)束弄濕，用50ml商品洗發(fā)水洗15秒，用水沖洗1分鐘，空氣干燥。該發(fā)束被洗了多達(dá)18次。
然后在Chroma Meter上測(cè)定a*、b*和L*，再計(jì)算出ΔE*值。
未用酶處理的發(fā)束樣品用作參照。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示于圖2。實(shí)施例3染發(fā)速度用白色De Meo發(fā)束(1克)檢測(cè)應(yīng)用嗜熱毀絲霉T1變體漆酶和Polyporus pinsitus漆酶染發(fā)的速度。
對(duì)苯二胺用作染料前體而未使用改性劑。
4毫升染料前體溶液與1毫升漆酶在Whirley混合器上混合，涂到發(fā)束上，在30℃分別保溫10、20、30、40、50和60分鐘。
然后用流水沖洗發(fā)束，用洗發(fā)水洗，用流水沖洗，梳，并空氣干燥。
在Chroma Meter上測(cè)定每個(gè)保溫時(shí)間的a*、b*和L*，然后計(jì)算出ΔE*值。
不加酶處理60分鐘的發(fā)束樣品作為參照。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示于圖3。實(shí)施例4嗜熱毀絲霉T1變體漆酶的染色效果分別用下列物質(zhì)作為染料前體，將嗜熱毀絲霉T1變體漆酶的染色效果與Polyporus pinsitus漆酶作比較0.1％w/w對(duì)苯二胺、0.1％w/w對(duì)甲代苯二胺、0.1％w/w氯對(duì)苯二胺、0.1％w/w對(duì)氨基苯酚、0.1％鄰氨基苯酚和0.1％w/w 3，4-二氨基甲苯。
Polyporus pinsitus漆酶的使用濃度為10 LACU/ml，而嗜熱毀絲霉T1變體漆酶的使用濃度僅1 LACU/ml。
使用了1克白色De Meo發(fā)束。
4毫升染料前體溶液與1毫升漆酶在Whirley混合器上混合，涂到發(fā)束上，在30℃保溫60分鐘。
然后用流水沖洗發(fā)束，用洗發(fā)水洗，用流水沖洗，梳，并空氣干燥。
在Chroma Meter上測(cè)定a*、b*和L*，然后計(jì)算出ΔE*值。
不加酶處理的發(fā)束樣品作為參照。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表1表1
從表1可以看出，盡管Polyporus pinsitus漆酶的濃度高出十倍，含有嗜熱毀絲霉T1漆酶變體的組合物染發(fā)的效果與Polyporus pin-situs漆酶一樣好。實(shí)施例5嗜熱毀絲霉漆酶染色效果的劑量響應(yīng)嗜熱毀絲霉漆酶的染色效果在0.0001-0.5毫克酶蛋白/毫升漆酶染色組合物的濃度范圍內(nèi)進(jìn)行了檢測(cè)。0.1％w/w對(duì)甲代苯二胺(PTD)用作染料前體。
應(yīng)用了實(shí)施例1中所描述的同樣的染色方法。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示于圖4。
序列表(1)一般信息(i)申請(qǐng)人(A)名稱Novo Nordisk A/S(B)街道Novo Alle(C)城市Bagsvaerd(D)國(guó)家Denmark(E)郵政編碼(ZIP)DK-2880(F)電話+45 4444 8888(G)傳真+45 4449 3256(ii)發(fā)明名稱具有改進(jìn)的染色性能的漆酶(iii)序列數(shù)目2(v)計(jì)算機(jī)可讀形式(A)介質(zhì)類型軟盤(B)計(jì)算機(jī)IBM PC相容機(jī)(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatentIn Release #1.0，Version #1.30(2)SEQ ID NO1的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度3192堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型DNA(基因組的)(ix)特征(A)名稱/鍵CDS(B)位點(diǎn)連接(586..831，917..994，1079..1090，1193..1264，1337..2308，2456..2524，2618..3028)(xi)序列描述SEQ ID NO1TCTAGCTTCT TTGGTCACCG TCGTTTTCGC CCGCCCCCTC CCTCCTTCAA CCCCCTGAGT60AGTCGGCTAA GCGATCCTCA ATCTGGTCTT GTGAGGTCAC GTCCTCCAGC AGATGACAGT 120TCATCGAGCG AGTGATCTCC ACCACCCAGA AGGGAGGGGG GATGCGCGCA TGCTCCAACA 180TCCCTGGTGT CGCTAGAGAC GTCGCGGCAT CAGCCTTTTC ATCACACCGA GCACGTCCAC 240GGACCGGCTC CTTTCACCCC CGCGTCCTCC GGAGGATTGA GTCACGATAT TTCGGGATGT 300GGGAAGGGGG AGAGAAAGGA GGGGGGAGGG GCGGAAACAT GTTGGATACG AGCTGCGCCC 360CTTTTTCAAC ATCGAGAACA GGAAGTCGTT GGTGTCGGCC GTAATGTCTA TAAAACGAGG 420CTCCTTCTCG TCGTCGACTT GTCTCAGGTT CTCTCTCTCG TCCACACCAA GCCAGTCTTG 480CCTGAGCCAC CTGAGCCACC TTCAACTCAT CATCTTCAGT CAAGTCGTTC ATTGACATTG 540TGTCTCTCTT TCTATCGAGT CGGCTTCCCG GCCCTTCACC ACAAC ATG AAG TCC 594Met Lys Ser1TTC ATC AGC GCC GCG ACG CTT TTG GTG GGC ATT CTC ACC CCT AGC GTT 642Phe Ile Ser Ala Ala Thr Leu Leu Val Gly Ile Leu Thr Pro Ser Val5 10 15GCT GCT GCC CCT CCA TCC ACC CCT GAG CAG CGC GAC CTG CTC GTC CCG 690Ala Ala Ala Pro Pro Ser Thr Pro Glu Gln Arg Asp Leu Leu Val Pro20 25 30 35ATC ACG GAG AGG GAG GAG GCA GCC GTG AAG GCT CGC CAG CAG AGC TGC 738Ile Thr Glu Arg Glu Glu Ala Ala Val Lys Ala Arg Gln Gln Ser Cys40 45 50AAC ACC CCC AGC AAC CGG GCG TGC TGG ACT GAC GGA TAC GAC ATC AAC 786Asn Thr Pro Ser Asn Arg Ala Cys Trp Thr Asp Gly Tyr Asp Ile Asn55 60 65ACC GAC TAC GAA GTG GAC AGC CCG GAC ACG GGT GTT GTT CGG CCG 831Thr Asp Tyr Glu Val Asp Ser Pro Asp Thr Gly Val Val Arg Pro70 75 80GTGAGTGCTC TCGTTAATTA CGCTTCGGCG AGTTGCGCAG ATATATTAAA TACTGCAAAC 891CTAAGCAGGA GCTGACATGC GACAG TAC ACT CTG ACT CTC ACC GAA GTC GAC 943Tyr Thr Leu Thr Leu Thr Glu Val Asp85 90AAC TGG ACC GGA CCT GAT GGC GTC GTC AAG GAG AAG GTC ATG CTG GTT 991Asn Trp Thr Gly Pro Asp Gly Val Val Lys Glu Lys Val Met Leu Val95 100 105AAC GTACGGCACC CCTTTTCTTG TCCTAGGATC TGGGTGATGT GCGTCGTTGC 1044AsnCCCTGAGAGA GACTGACCGA GCCTTTGGCT GCAG AAT AGT ATA ATC GTAATTAATT 1100Asn Ser Ile Ile110ATACCGCCCT GCCTCCAGCA GCCCCAGCAG CTCGAGAAGG GTATCTGAAG TTAGTCAGGC 1160CTGCTGACCT GACCGGGGCC AACCCACCAT AG GGA CCA ACA ATC TTT GCG GAC1213Gly Pro Thr Ile Phe Ala Asp115TGG GGC GAC ACG ATC CAG GTA ACG GTC ATC AAC AAC CTC GAG ACC AAC1261Trp Gly Asp Thr Ile Gln Val Thr Val Ile Asn Asn Leu Glu Thr Asn120 125 130 135GGC GTATGTCTGC TGCTTGCTCT CTTGCTCTCC TCGTCCGCGA CTAATAATAA 1314GlyTATCAACTCG TGTGGAAAAC AG ACG TCG ATC CAC TGG CAC GGA CTG CAC CAG1366Thr Ser Ile His Trp His Gly Leu His Gln140 145AAG GGC ACC AAC CTG CAC GAC GGC GCC AAC GGT ATC ACC GAG TGC CCG 1414Lys Gly Thr Asn Leu His Asp Gly Ala Asn Gly Ile Thr Glu Cys Pro150 155 160ATC CCG CCC AAG GGA GGG AGG AAG GTG TAC CGG TTC AAG GCT CAG CAG 1462Ile Pro Pro Lys Gly Gly Arg Lys Val Tyr Arg Phe Lys Ala Gln Gln165 170 175TAC GGG ACG AGC TGG TAC CAC TCG CAC TTC TCG GCC CAG TAC GGC AAC 1510Tyr Gly Thr Ser Trp Tyr His Ser His Phe Ser Ala Gln Tyr Gly Asn180 185 190GGC GTG GTC GGG GCC ATT CAG ATC AAC GGG CCG GCC TCG CTG CCG TAC 1558Gly Val Val Gly Ala Ile Gln Ile Asn Gly Pro Ala Ser Leu Pro Tyr195 200 205 210GAC ACC GAC CTG GGC GTG TTC CCC ATC AGC GAC TAC TAC TAC AGC TCG 1606Asp Thr Asp Leu Gly Val Phe Pro Ile Ser Asp Tyr Tyr Tyr Ser Ser215 220 225GCC GAC GAG CTG GTG GAA CTC ACC AAG AAC TCG GGC GCG CCC TTC AGC 1654Ala Asp Glu Leu Val Glu Leu Thr Lys Asn Ser Gly Ala Pro Phe Ser230 235 240GAC AAC GTC CTG TTC AAC GGC ACG GCC AAG CAC CCG GAG ACG GGC GAG 1702Asp Asn Val Leu Phe Asn Gly Thr Ala Lys His Pro Glu Thr Gly Glu245 250 255GGC GAG TAC GCC AAC GTG ACG CTC ACC CCG GGC CGG CGG CAC CGC CTG 1750Gly Glu Tyr Ala Asn Val Thr Leu Thr Pro Gly Arg Arg His Arg Leu260 265 270CGC CTG ATC AAC ACG TCG GTC GAG AAC CAC TTC CAG GTC TCG CTC GTC 1798Arg Leu Ile Asn Thr Ser Val Glu Asn His Phe Gln Val Ser Leu Val275 280 285 290AAC CAC ACC ATG ACC ATC ATC GCC GCC GAC ATG GTG CCC GTC AAC GCC 1846Asn His Thr Met Thr Ile Ile Ala Ala Asp Met Val Pro Val Asn Ala295 300 305ATG ACG GTC GAC AGC CTC TTC CTC GGC GTC GGC CAG CGC TAC GAT GTC 1894Met Thr Val Asp Ser Leu Phe Leu Gly Val Gly Gln Arg Tyr Asp Val310 315 320GTC ATC GAA GCC AGC CGA ACG CCC GGG AAC TAC TGG TTT AAC GTC ACA 1942Val Ile Glu Ala Ser Arg Thr Pro Gly Asn Tyr Trp Phe Asn Val Thr325 330 335TTT GGC GGC GGC CTG CTC TGC GGC GGC TCC AGG AAT CCC TAC CCG GCC 1990Phe Gly Gly Gly Leu Leu Cys Gly Gly Ser Arg Asn Pro Tyr Pro Ala340 345 350GCC ATC TTC CAC TAC GCC GGC GCC CCC GGC GGC CCG CCC ACG GAC GAG 2038Ala Ile Phe His Tyr Ala Gly Ala Pro Gly Gly Pro Pro Thr Asp Glu355 360 365 370GGC AAG GCC CCG GTC GAC CAC AAC TGC CTG GAC CTC CCC AAC CTC AAG 2086Gly Lys Ala Pro Val Asp His Asn Cys Leu Asp Leu Pro Asn Leu Lys375 380 385CCC GTC GTG GCC CGC GAC GTG CCC CTG AGC GGC TTC GCC AAG CGG CCC 2134Pro Val Val Ala Arg Asp Val Pro Leu Ser Gly Phe Ala Lys Arg Pro390 395 400GAC AAC ACG CTC GAC GTC ACC CTC GAC ACC ACG GGC ACG CCC CTG TTC 2182Asp Asn Thr Leu Asp Val Thr Leu Asp Thr Thr Gly Thr Pro Leu Phe405 410 415GTC TGG AAG GTC AAC GGC AGC GCC ATC AAC ATC GAC TGG GGC AGG CCC 2230Val Trp Lys Val Asn Gly Ser Ala Ile Asn Ile Asp Trp Gly Arg Pro420 425 430GTC GTC GAC TAC GTC CTC ACG CAG AAC ACC AGC TTC CCA CCC GGG TAC 2278Val Val Asp Tyr Val Leu Thr Gln Asn Thr Ser Phe Pro Pro Gly Tyr435 440 445 450AAC ATT GTC GAG GTG AAC GGA GCT GAT CAG GTAAGAAAAA GGGGACCGCA 2328Asn Ile Val Glu Val Asn Gly Ala Asp Gln455 460GGGGTGCTGC TGCAAGTACA CCTTGCTCGC CCTCCTGTTC TTCCTTAATA ACTACCTCCC 2388AACCCTCCCC CCTAATTAAT TCACTTTAAA GGCCGATCAA GACTGACCGA GCCCCCTCTC 2448TTTGCAG TGG TCG TAC TGG TTG ATC GAG AAC GAT CCC GGC GCA CCT TTC 2497Trp Ser Tyr Trp Leu Ile Glu Asn Asp Pro Gly Ala Pro Phe465 470ACC CTA CCG CAT CCG ATG CAC CTG CAC GTAAGTTGGA TACATATATA 2544Thr Leu Pro His Pro Met His Leu His475 480TATATATATA TACATTGCTT TCCTGGCTCG CTCCCTTAAA TAAAATTAAA TAACCAAAAA 2604TAACAAAAAA AAG GGC CAC GAC TTT TAC GTG CTG GGC CGC TCG CCC GAC2653Gly His Asp Phe Tyr Val Leu Gly Arg Ser Pro Asp485 490 495GAG TCG CCG GCA TCC AAC GAG CGG CAC GTG TTC GAT CCG GCG CGG GAC 2701Glu Ser Pro Ala Ser Asn Glu Arg His Val Phe Asp Pro Ala Arg Asp500 505 510GCG GGC CTG CTG AGC GGG GCC AAC CCT GTG CGG CGG GAC GTG ACG ATG 2749Ala Gly Leu Leu Ser Gly Ala Asn Pro Val Arg Arg Asp Val Thr Met515 520 525CTG CCG GCG TTC GGG TGG GTG GTG CTG GCC TTC CGG GCC GAC AAC CCG 2797Leu Pro Ala Phe Gly Trp Val Val Leu Ala Phe Arg Ala Asp Asn Pro530 535 540GGC GCC TGG CTG TTC CAC TGC CAC ATC GCC TGG CAC GTC TCG GGC GGC 2845Gly Ala Trp Leu Phe His Cys His Ile Ala Trp His Val Ser Gly Gly545 550 555CTG GGC GTC GTC TAC CTC GAG CGC GCC GAC GAC CTG CGC GGG GCC GTC 2893Leu Gly Val Val Tyr Leu Glu Arg Ala Asp Asp Leu Arg Gly Ala Val560 565 570 575TCG GAC GCC GAC GCC GAC GAC CTC GAC CGC CTC TGC GCC GAC TGG CGC 2941Ser Asp Ala Asp Ala Asp Asp Leu Asp Arg Leu Cys Ala Asp Trp Arg580 885 590CGC TAC TGG CCT ACC AAC CCC TAC CCC AAG TCC GAC TCG GGC CTC AAG 2989Arg Tyr Trp Pro Thr Asn Pro Tyr Pro Lys Ser Asp Ser Gly Leu Lys595 600 605CAC CGC TGG GTC GAG GAG GGC GAG TGG CTG GTC AAG GCG TGAGCGAAGG3038His Arg Trp Val Glu Glu Gly Glu Trp Leu Val Lys Ala610 615 620AGGAAAAAGG AAACAAAGAG GGGGGGGGGG GCTAGTTCCT ATTTTTGCTT TTTTTTTTTG 3098TTCTTGTCCT TGTGCTGGCG GTTACCCTGG TAAAGGAGAA GGGGGCCCCA AGTTCGAGTG 3158GGTGTGTGAT CGGGTAAATA TTATCAAGAG ATCT 3192(2)SEQ ID NO2的信息(i)序列性質(zhì)(A)長(zhǎng)度620個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)序列描述SEQ ID NO2Met Lys Ser Phe Ile Ser Ala Ala Thr Leu Leu Val Gly Ile Leu Thr1 5 10 15Pro Ser Val Ala Ala Ala Pro Pro Ser Thr Pro Glu Gln Arg Asp Leu20 25 30Leu Val Pro Ile Thr Glu Arg Glu Glu Ala Ala Val Lys Ala Arg Gln35 40 45Gln Ser Cys Asn Thr Pro Ser Asn Arg Ala Cys Trp Thr Asp Gly Tyr50 55 60Asp Ile Asn Thr Asp Tyr Glu Val Asp Ser Pro Asp Thr Gly Val Val65 70 75 80Arg Pro Tyr Thr Leu Thr Leu Thr Glu Val Asp Asn Trp Thr Gly Pro85 90 95Asp Gly Val Val Lys Glu Lys Val Met Leu Val Asn Asn Ser Ile Ile100 105 110Gly Pro Thr Ile Phe Ala Asp Trp Gly Asp Thr Ile Gln Val Thr Val115 120 125Ile Asn Asn Leu Glu Thr Asn Gly Thr Ser Ile His Trp His Gly Leu130 135 140His Gln Lys Gly Thr Asn Leu His Asp Gly Ala Asn Gly Ile Thr Glu145 150 155 160Cys Pro Ile Pro Pro Lys Gly Gly Arg Lys Val Tyr Arg Phe Lys Ala165 170 175Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Trp Tyr His Ser His Phe Ser Ala Gin Tyr180 185 190Gly Asn Gly Val Val Gly Ala Ile Gln Ile Asn Gly Pro Ala Ser Leu195 200 205Pro Tyr Asp Thr Asp Leu Gly Val Phe Pro Ile Ser Asp Tyr Tyr Tyr210 215 220Ser Ser Ala Asp Glu Leu Val Glu Leu Thr Lys Asn Ser Gly Ala Pro225 230 235 240Phe Ser Asp Asn Val Leu Phe Asn Gly Thr Ala Lys His Pro Glu Thr245 250 255Gly Glu Gly Glu Tyr Ala Asn Val Thr Leu Thr Pro Gly Arg Arg His260 265 270Arg Leu Arg Leu Ile Asn Thr Ser Val Glu Asn His Phe Gln Val Ser275 280 285Leu Val Asn His Thr Met Thr Ile Ile Ala Ala Asp Met Val Pro Val290 295 300Asn Ala Met Thr Val Asp Ser Leu Phe Leu Gly Val Gly Gln Arg Tyr305 310 315 320Asp Val Val Ile Glu Ala Ser Arg Thr Pro Gly Asn Tyr Trp Phe Asn325 330 335Val Thr Phe Gly Gly Gly Leu Leu Cys Gly Gly Ser Arg Asn Pro Tyr340 345 350Pro Ala Ala Ile Phe His Tyr Ala Gly Ala Pro Gly Gly Pro Pro Thr355 360 365Asp Glu Gly Lys Ala Pro Val Asp His Asn Cys Leu Asp Leu Pro Asn370 375 380Leu Lys Pro Val Val Ala Arg Asp Val Pro Leu Ser Gly Phe Ala Lys385 390 395 400Arg Pro Asp Asn Thr Leu Asp Val Thr Leu Asp Thr Thr Gly Thr Pro405 410 415Leu Phe Val Trp Lys Val Asn Gly Ser Ala Ile Asn Ile Asp Trp Gly420 425 430Arg Pro Val Val Asp Tyr Val Leu Thr Gln Asn Thr Ser Phe Pro Pro435 440 445Gly Tyr Asn Ile Val Glu Val Asn Gly Ala Asp Gln Trp Ser Tyr Trp450 455 460Leu Ile Glu Asn Asp Pro Gly Ala Pro Phe Thr Leu Pro His Pro Met465 470 475 480His Leu His Gly His Asp Phe Tyr Val Leu Gly Arg Ser Pro Asp Glu485 490 495Ser Pro Ala Ser Asn Glu Arg His Val Phe Asp Pro Ala Arg Asp Ala500 505 510Gly Leu Leu Ser Gly Ala Asn Pro Val Arg Arg Asp Val Thr Met Leu515 520 525Pro Ala Phe Gly Trp Val Val Leu Ala Phe Arg Ala Asp Asn Pro Gly530 535 540Ala Trp Leu Phe His Cys His Ile Ala Trp His Val Ser Gly Gly Leu545 550 555 560Gly Val Val Tyr Leu Glu Arg Ala Asp Asp Leu Arg Gly Ala Val Ser565 570 575Asp Ala Asp Ala Asp Asp Leu Asp Arg Leu Cys Ala Asp Trp Arg Arg580 585 590Tyr Trp Pro Thr Asn Pro Tyr Pro Lys Ser Asp Ser Gly Leu Lys His595 600 605Arg Trp Val Glu Glu Gly Glu Trp Leu Val Lys Ala610 615 620INDICATIONS RELATING TO A DEPOSITED MICROORGANISM(PCT Rule 13 bis
Form PCT/RO/134(july 1992)
權(quán)利要求
1.一種染色組合物，它包含a)每毫升微生物漆酶的染色組合物中0以上-1毫克酶蛋白，b)一種或多種染料前體，以及c)任選的一種或多種染料改性劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的染色組合物，其中漆酶存在的濃度為0.0001-1mg/ml，優(yōu)選0.001-0.8mg/ml，更優(yōu)選0.002-0.5mg/ml，甚至更優(yōu)選0.003-0.2mg/ml，特別是0.004-0.1mg酶蛋白/毫升染色組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2的染色組合物，其中所說(shuō)的微生物漆酶是絲狀真菌來(lái)源的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1和2的染色組合物，其中的漆酶來(lái)源于毀絲霉屬的一個(gè)菌株，特別是嗜熱毀絲霉種的一個(gè)菌株，諸如嗜熱毀絲霉NRRL B 21261或其變種如T1變種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的染色組合物，其中漆酶由SEQ ID NO1所示的序列編碼。
6.根據(jù)權(quán)利要求4和5的染色組合物，其中漆酶存在的濃度為0以上-1mg/ml，優(yōu)選0.0001-0.1mg/ml，更優(yōu)選0.0005-0.05mg/ml，特別是0.001-0.01mg酶蛋白/毫升染色組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1到6中任一項(xiàng)的染色組合物，包含選自下組的一種染料前體對(duì)苯二胺(pPD)、對(duì)甲代苯二胺(pTD)、氯對(duì)苯二胺、對(duì)氨基苯酚、鄰氨基苯酚、3，4-二氨基甲苯、2-甲基-1，4-二氨基苯、4-甲基-鄰苯二胺、2-甲氧基-對(duì)苯二胺、2-氯-1，4-二氨基苯，4-氨基二苯胺、1-氨基-4-β-甲氧基乙基氨基苯、1-氨基-4-雙-(β-羥乙基)-氨基苯、1，3-二氨基苯、2-甲基-1，3-二氨基苯、2，4-二氨基甲苯、2，6-二氨基吡啶、1-羥基-2-氨基苯、1-羥基-3-氨基苯、1-甲基-2-羥基-4-氨基苯、1-甲基-2-羥基-4-β-羥乙基氨基苯、1-羥基-4-氨基苯、1-羥基-4-甲基氨基苯、1-甲氧基-2，4-二氨基苯、1-乙氧基-2，3-二氨基苯、1-β-羥基乙氧基-2，4-二氨基苯、吩嗪、諸如4，7-吩嗪二羧酸、2，7-吩嗪二羧酸、2-吩嗪羧酸、2，7-二氨基吩嗪、2，8-二氨基吩嗪、2，7-二氨基-3，8-二甲氧基吩嗪、2，7-二氨基-3-甲氧基吩嗪、2，7-二氨基-3-甲氧基吩嗪、3-二甲基2，8-吩嗪二胺、2，2′-[(8-氨基-7-甲基-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2，2′-[(8-氨基-7-甲氧基-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2，2′-[(8-氨基-7-氯-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2-[(8-氨基-7-甲基-2-吩嗪基)氨基]-乙醇、2，2′-[(8-氨基-2-吩嗪基)亞氨基]-雙-乙醇、3-氨基-7-(二甲基氨基)-2，8-二甲基-5-苯基氯、9-(二乙基氨基)-苯并[a]吩嗪-1，5-二醇、N-[8-(二乙基氨基)-2-吩嗪基]-甲烷磺酰胺、N-(8-甲氧基-2-吩嗪基)-甲烷磺酰胺、N，N，N′，N′-四甲基-2，7-吩嗪二胺，3，7-二甲基-2-吩嗪胺，對(duì)氨基苯甲酸類，諸如對(duì)氨基苯甲酸乙酯、對(duì)氨基苯甲酸甘油酯、對(duì)氨基苯甲酸異丁酯、對(duì)二甲基氨基苯甲酸戊酯、對(duì)二甲基氨基苯甲酸辛酯、對(duì)二乙氧基氨基苯甲酸戊酯、對(duì)二丙氧基氨基苯甲酸乙酯、乙酰水楊酸，靛紅衍生物，諸如2，3-二氨基苯甲酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求1到7中任一項(xiàng)的染色組合物，包括選自下組的一種染料改性劑間苯二胺、2，4-二氨基苯甲醚、1-羥基萘(α-萘酚)、1，4-二羥基苯(氫醌)、1，5-二羥基萘、1，2-二羥基苯(鄰苯二酚)、1，3-二羥基苯(間苯二酚)、1，3-二羥基-2-甲基苯，1，3-二羥基-4-氯苯(4-氯間苯二酚)、1，2，3-三羥基苯、1，2，4-三羥基苯、1，2，4-三羥基-5-甲基苯、1，2，4-三羥基甲苯。
9.根據(jù)權(quán)利要求1到8的組合物在對(duì)角蛋白纖維，例如頭發(fā)、皮毛、獸皮或羊毛進(jìn)行永久性染色中的應(yīng)用。
10.對(duì)角蛋白纖維進(jìn)行染色的一種方法，包括將根據(jù)權(quán)利要求1到8的一種染色組合物在合適的條件下與角蛋白纖維接觸一段時(shí)間，這段時(shí)間足以允許染料前體氧化為有色化合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中染色過(guò)程在pH3-10，優(yōu)選5-9，特別是6-8的范圍內(nèi)進(jìn)行。
12.根據(jù)權(quán)利要求10和11的方法，其中該過(guò)程進(jìn)行的時(shí)間為10-60分鐘，優(yōu)選15-50分鐘，特別是20-40分鐘。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種永久性的染色組合物,其包括:a)每毫升微生物漆酶的染色組合物中0以上－1毫克酶蛋白,b)一種或多種染料前體,以及c)任選的一種或多種染料分子改性劑,應(yīng)用該染色組合物進(jìn)行角蛋白纖維,例如頭發(fā)、皮毛、獸皮和羊毛染色,及對(duì)角蛋白纖維進(jìn)行永久性染色的一種方法。
文檔編號(hào)A61K8/66GK1203615SQ96198697
公開(kāi)日1998年12月30日 申請(qǐng)日期1996年11月29日 優(yōu)先權(quán)日1995年11月30日
發(fā)明者D·阿斯林格, N·H·所蘭森, K·羅巴克 申請(qǐng)人:諾沃挪第克公司