專利名稱：使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的使存在于已被感染了的、但通過常規(guī)免疫方法對此病毒不發(fā)生抗體的輸血者的血漿中的被膜病毒，如存在于供血血漿中的HIV(人體免疫缺乏性病毒)和HCV(肝C病毒)失活的組合物，特別地，本發(fā)明提供了在沒有去污劑存在的條件下有機(jī)溶劑破壞這些病毒的保護(hù)性膜的新的用途和方法。
Horowitz公開了一種用溶劑和去污劑相結(jié)合使病毒失活的方法Mrogenthaler J-J(ed)Virus Inactivation in Plasma Products，CurrStud Hematol Blood Transfus Basel Karger，1989，NO.56，PP83-96.此文揭示了在37℃以下僅用磷酸三正丁酯(TNBP)，殺病毒的能力會被減弱，在此條件下沒有任何一種去污劑(膽酸鈉或Tween-80)是殺病毒的。然而，在37℃時，當(dāng)TNBP和去污劑共存時卻能獲得優(yōu)異的殺病毒能力。
本發(fā)明公開了一種新的組合物，即對Horowitz的溶劑和去污劑混合物有引進(jìn)能力的某些添加劑，這些添加劑的加入會導(dǎo)致在28℃以下更快或更完全地殺死病毒。
本發(fā)明所公開的組合物其配比為組分配比(體積比)低分子醇1-3TNBP100其中所述的低分子醇可以是乙醇、丙醇或丁醇。
根據(jù)本發(fā)明，已發(fā)現(xiàn)在TNBP中加入1-3％。(V/V)的乙醇、丙醇或丁醇，將使在處理后，其在10分鐘內(nèi)殺標(biāo)記病毒的有效性與前述的TNBP相比，至少提高了10倍，這樣將大大降低實際中所有病毒失活所需要的時間。
根據(jù)本發(fā)明，已發(fā)現(xiàn)將此組合物接種兔子，會導(dǎo)致形成抗此病毒的抗體。
優(yōu)選實施方案的詳細(xì)述為雖然下面描述的實施方案使用乙醇和丁醇，但預(yù)期任何數(shù)量的部分增水小分子都是有效的，并且這些實施例應(yīng)被認(rèn)為僅是用于說明的。
化學(xué)試劑可從商業(yè)供應(yīng)商處買到，盡可能使用不需要進(jìn)一步純化的最高級別的化學(xué)試劑。這里使用的標(biāo)記病毒，Sindbis病毒的滴定度，是通過使用原發(fā)性雞胚胎細(xì)胞的終點滴定和細(xì)胞學(xué)測定。
新鮮冷凍的血漿(FFP)和低溫沉淀物(CYO)由無既往或最近病毒感染的健康個人提供。
實施例1在TNBP中加入低分子量醇對病毒失活的效率。
將FFP或CYO樣品用Sindbis病毒人為污染，然后將TNBP本身或?qū)⒓佑械谝环N添加劑(按每100體積份TNBP計的0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0份乙醇)的TNBP(每100份的血漿蛋白溶液中加入一份此TNBP)，在28℃時，加入到蛋白質(zhì)組分中。一次一次地(在每10分鐘間隔內(nèi))等份數(shù)地移取溶液使反應(yīng)通過用5％的小牛血清稀釋至100倍過量的很小Essential Medium Eagle并冷凍而終止，直至量后測定病毒滴定度，發(fā)現(xiàn)通過加入乙醇(在TNBP中加入2-3％)，在第一個10分鐘內(nèi)，病毒失活的程度比僅用TNBP大10倍，其在低溫沉淀中的效果比FFP溶液更為顯著。
用第二種添加劑(丁醇、將0.5、1.0、1.5和2.0體積份的丁醇加入到100體積份的TNBP中)。已發(fā)現(xiàn)最有效的濃度為1.0至1.5％的丁醇。同樣使用添加劑的TNBP在28℃時的靈活的效果比不使用醇的TNBP增加約10倍。
將一部分具有失活病毒的FFP通過皮下、靜脈和肌肉注射，使兔子免疫，經(jīng)過給藥三周后，在處理的兔子的血清中，檢測到抗病毒的抗體。
本發(fā)明提供的使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活的組合物，可以快速完全地使被膜病毒失活，提供了一種新的使病毒失活的方法，同時擴(kuò)展了有機(jī)溶劑的新用途。
權(quán)利要求
1.一種使逃逸免疫檢測病毒失活的組合物，其中，其組成為組成配比(體積比)低分子醇1-3TNBP100
2.權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述的低分子醇是乙醇、丙醇或丁醇。
3.一種使逃逸免疫檢測病毒失活的方法，其中在血漿蛋白溶液中加入低分子醇和有機(jī)溶劑能夠使一萬只病毒在十分鐘內(nèi)失活。
4.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述的低分子醇是乙醇、丙醇或丁醇。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述的低分子醇的濃度約為1-3體積低分子醇100體積有機(jī)溶劑。
6.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述的有機(jī)溶劑是磷酸三正丁酯。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述的有機(jī)溶劑的濃度約為0.3-1.5體積有機(jī)溶劑100體積血漿蛋白溶液。
8.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述的失活步驟的溫度為1-28度。
9.一種人體血漿蛋白組合物，含有通過溶濟(jì)殺死的失活病毒顆粒，此溶劑為磷酸三正丁酯和低分子醇。
10.權(quán)利要求9所述的人體血漿蛋白組合物，其中所述的低分子醇是乙醇、丙醇或丁醇。
全文摘要
本發(fā)明公開了使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活的組合物，包括低分子醇和TNBP其中所述的低分子醇可以是乙醇、丙醇或丁醇，其中低分子醇和TNBP的配比是1-3∶100。本發(fā)明提供的使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活的組合物，可以快速完全地使被膜病毒失活，提供了一種新的使病毒失活的方法，同時擴(kuò)展了有機(jī)溶劑的新用途。
文檔編號A61L2/16GK1151523SQ9511839
公開日1997年6月11日 申請日期1995年11月30日 優(yōu)先權(quán)日1995年11月30日
發(fā)明者徐家祥 申請人:徐家祥