專利名稱：適于患有球蟲病動物服用的組合物的制作方法
本申請為1993年四月二十九日申請的美國申請No.08/053，138的部分后續(xù)申請，其內(nèi)容通過參考并入本文。
本發(fā)明涉及養(yǎng)殖肉食動物(domestic food animals)的工業(yè)化食品，食品填加劑及處理感染有球蟲動物的方法。
球蟲病是養(yǎng)殖肉食動物的一種一般性疾病，它是由艾美球蟲屬的病原蟲引起的。球蟲病在世界范圍內(nèi)普遍存在，它對經(jīng)濟(jì)的影響，尤其對于家禽家殖業(yè)，是非常巨大的。僅在美國的家禽養(yǎng)殖場，球蟲病每年造成2億至2億5千萬美元的損失。世界范圍內(nèi)，球蟲病估計造成家禽養(yǎng)殖場所有疾病和死亡率損失的三分之一(Trends in Veterinary Research and Development，part 6，Anti-coccidials，Lloyd-Evans，L.P.M.(ed.)，PJB PublicationsLed.，1991)。
從二十世紀(jì)五十年代起，已開發(fā)了幾種食物藥物(抑球蟲劑)以治療球蟲病，但僅取得了不很重大的成功。使用抑球蟲劑最嚴(yán)重的缺陷為1)寄生蟲快速產(chǎn)生的耐藥性；2)對宿主動物的有害作用；和3)有在所生產(chǎn)出的消費品中殘留或影響其質(zhì)量的危險。在廣泛使用抑球蟲劑降低了動物大量死亡發(fā)生的同時，球蟲病對動物的無臨床癥狀的作用顯著地降低了其產(chǎn)量。(Jeng & Edgar，Highlights of Agricultural Research-Alabama，AgriculturalExperiment Station，V.28，P.6(1981))。
雞的球蟲病典型臨床癥狀包括體弱，體重迅速降低，腹瀉和痢疾。球蟲病最嚴(yán)重的影響發(fā)生在腸，在那里，球蟲侵襲腸粘膜并造成上皮細(xì)胞損傷，損害灶及出血。生理方面，球蟲病導(dǎo)致內(nèi)臟酸堿平衡，離子和滲透平衡的嚴(yán)重紊亂，并降低了營養(yǎng)物質(zhì)的吸收(Ruff，Georgia Coccidiosis Conference，Nov.19-21(1986)pp.169-183；Gwyther等人，Coccidia and IntestinalCoccidiomorphs，Vth International Conf.，October 17-20(1989)pp.279-284)。
通常使用的多種抑球蟲劑通過破壞球蟲的離子和滲透平衡來殺死球蟲。然而，這些藥物并不只對球蟲產(chǎn)生作用，它們同樣影響宿主的離子和滲透平衡，因此，會降低內(nèi)臟對營養(yǎng)成分的吸收(Speight，bth European Symposium on Poultry Nutrition，World’s Poultry Science Assoc.，Oct.11-15(1987)，abstract7A)。因此，從營養(yǎng)利用率，生長和喂食效率方面看，抑球蟲劑降低死亡率的作用會被其有害的負(fù)作用所抵銷。
甜菜堿是一種滲透保護(hù)劑。它提高了細(xì)胞的滲透能力而并不損害酶的活性，并且它可使酶免受離子或溫度去活(Nash等人，Aust.J.plant Physiol.947-57(1982)；Yancey等人，Science2241064-1069(1982)；Rudolph等人，Archives Biochem.Biophys.245134-143(1986)；McCue & Hanson，Trends inBiotechnology 8358-362(1990)；Papageorgion等人，Curr.Res.In Photosyntheis 1957-960(1990))。一些器官(和組織)在滲透壓下可通過滲透介導(dǎo)的甜菜堿的合成來積聚大量的甜菜堿，多數(shù)動物沒有這種能力，因此依賴于外源性甜菜堿的攝入。例如，當(dāng)分離的鮭魚肝臟線粒體置于滲透壓作用下時，它們表面出甜菜堿攝入量的填加，組設(shè)有甜菜堿的合成(Biorkoy，G.，Synthesisand Accumulation of glycine betaine in Salmon(Salmo salar)and a Mussel，MSc thesis，Norwegian College of Fisheries，University of Tromso，pp.94)。
雖然甜菜堿的滲透保護(hù)作用先于本發(fā)明已為公眾所知，但主要研究它作為甲基轉(zhuǎn)移反應(yīng)中甲基供體的作用(Stekol等人，J.Biol.chem.203763.773(1953))及其將甲基轉(zhuǎn)移到半胱氨酸以生成蛋氨酸的作用(Harper，in Review of Physiol.Chem.，120和351(1973))。甜菜堿在降低使用抑球蟲劑所引起的不良副反應(yīng)方面可能的作用，或甜菜堿和抑球蟲劑可協(xié)同作用以提高患球蟲病的養(yǎng)殖肉食動物的經(jīng)濟(jì)效能方面并沒有受到重視。
本發(fā)明關(guān)于同時含有甜菜堿和抑球蟲劑的養(yǎng)殖肉食動物的飼料。這兩種物質(zhì)的接合經(jīng)發(fā)現(xiàn)對于降低感染有球蟲小雞的死亡率及提高其總體經(jīng)濟(jì)效能特別有效。抑球蟲劑可以以化學(xué)形式或離子載體形式使用。優(yōu)選的離子載體抑球蟲劑為鹽霉素(商品名“Bio-Cox”)和拉沙里菌素(商品名Avatec)。優(yōu)選的化學(xué)抑球蟲劑為halofuginone氫溴酸鹽(商品名“Stenerol”)。在所有情況下，甜菜堿存在于飼料中的濃度為每噸干飼料0.5至20公斤。最優(yōu)選的飼料為雞飼料。本發(fā)明同時涉及預(yù)先混合有甜菜堿和抑球蟲劑的飼料添加劑。這些添加劑可加入喂給動物的飼料中或單獨喂給動物。
另外，本發(fā)明涉及一種方法，該方法通過給感染有球蟲的動物服用甜菜堿以降低這些動物，尤其是雞的死亡率。甜菜堿可單獨服用，或者，更優(yōu)選的方式為與抑球蟲劑結(jié)合服用。本方法中所使用的優(yōu)選的離子載體抑球蟲劑為鹽霉素和拉沙里菌素。優(yōu)選的化學(xué)抑球蟲劑為halofuginone氫溴酸鹽。


圖1圖1給出了以沒有填加劑的飼料，填加有44ppm Bio-CoxTM(鹽霉素)的飼料和填加66ppm Bio-Cox的飼料喂養(yǎng)45天的雞的死亡率。每種飼料的作用均檢驗其填加和未填加甜菜堿兩種情況下的效果，可以看到，甜菜堿的填加降低了以每一種所研究的飼料喂養(yǎng)的雞的死亡率。
圖2將以無填加劑的飼料或填加44ppm抑球蟲劑的飼料及填加66ppm抑球劑的飼料喂養(yǎng)45天的雞解剖，在一標(biāo)尺上將內(nèi)臟損害的嚴(yán)重程度分為0至4級?？梢钥吹?，在所有情況下，在飼料中填加甜菜堿可使內(nèi)臟損害的嚴(yán)重程度減低。
圖3圖3給出了以上述三種不同飼料喂養(yǎng)45天的雞的最終重量。每一種情況下，甜菜堿的填加均可使雞的最終重量有所增加。
圖4我們測定了以上述三種不同飼料喂養(yǎng)的雞的飼料轉(zhuǎn)化率，結(jié)果在圖4中給出。每一種情況中，甜菜堿均使雞的飼料轉(zhuǎn)化率提高。
圖5此處檢驗了以合適量蛋氨酸或含低量蛋氨酸飼料喂養(yǎng)的感染有球蟲的雞，所有雞均服用66ppm的鹽霉素。此圖表明，無論蛋氨酸的量如何，甜菜堿的加入會降低內(nèi)臟的損害程度。
圖6圖6表明了甜菜堿的添加對感染球蟲的雞的死亡率的影響。以0.75公斤/噸的劑量，甜菜堿可以降低以含低量或適量蛋氨酸飼料喂養(yǎng)的雞的死亡率。
圖7圖7表明了甜菜堿可增加以含低量或適量蛋氨酸飼料喂養(yǎng)的感染球蟲的雞的最終重量。
圖8圖8表明了無論以含低量或適量蛋氨酸的飼料喂養(yǎng)，甜菜堿均可提高感染有球蟲的雞的飼料轉(zhuǎn)化率。A.定義1.起始飼料“起始飼料”為喂給出成后21天內(nèi)的雞的飼料。
2.成長飼料“成長飼料”這個術(shù)語指喂給21天至40天大的雞的飼料。
3.最終飼料“最終飼料”這個指喂給40天至49天大的雞的飼料。
4.甜菜堿也稱作“甘氨酸甜菜堿”，化學(xué)命名為氫氧化1-羧基-N，N，N-三甲基銨內(nèi)鹽。Finnsugar Bioproducts以商品名“Betafin”出售甜菜堿。
5.飼料轉(zhuǎn)化率“飼料轉(zhuǎn)化率為一只動物增加的重量除以該動物消耗飼料的量所得的比率。例如，以轉(zhuǎn)化率1.0喂養(yǎng)意味每消耗一千克飼料，該動物增加1.0千克的體重。
6.飼料轉(zhuǎn)化比“飼料轉(zhuǎn)化比”為一只動物消耗的飼料除以該動物增加的體重所得的比率。
7.谷物-大豆飼料“谷物大豆飼料”為主要包括黃色谷物，大豆和大豆油的飼料。
8.顯著性本文所用術(shù)語“顯著性”指統(tǒng)計學(xué)的顯著性。因此，所述“經(jīng)處置的雞相對于未經(jīng)處置的雞可明顯降低死亡率”指以標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計分析法處理時P＜0.05。
9.死亡率死亡率定義為一個處置組中在實驗過程中死亡的雞的數(shù)目。通常死亡率表示為百分率，由下述方法確定將死亡的雞的數(shù)目除以實驗開始時雞的總數(shù)然后乘以100。
10.飼料添料“飼料添料”定義為那些經(jīng)常使用的飼料組分，例如將其加入以制成雞飼料的黃色谷物或大豆粉。
11.基本飼料“基本飼料”定義為未添加蛋氨酸或甜菜堿的喂給雞的飼料。
12.養(yǎng)殖肉食動物本發(fā)明中，術(shù)語“養(yǎng)殖肉食動物”定義為在人或其它動物的食物中作為蛋白蛋來源而消費的任何養(yǎng)殖動物。典型的養(yǎng)殖動物包括牛類動物(例如牛)；羊類動物(例如綿羊)；豬類(例如豬)；家禽(例如雞和火雞)；兔及類似的動物。
13.經(jīng)濟(jì)效能本文中，“經(jīng)濟(jì)效能”這個術(shù)語指在一系列特定條件下養(yǎng)殖的動物作為肉食動物時經(jīng)濟(jì)方面可行性的程度。本發(fā)明中，有4個指標(biāo)確定經(jīng)濟(jì)效能死亡率，最終重量，飼料轉(zhuǎn)化率及內(nèi)臟損傷程度。假設(shè)其它指標(biāo)不變或者同時有所提高，那么提高這些指標(biāo)中的任何一個均可提高經(jīng)濟(jì)效能。
14.預(yù)混合物作為名詞使用時，“預(yù)混合物”指混合后供一特殊目的使用的兩種或多種組分的組合物。例如，甜菜堿和抑球蟲劑的預(yù)混合物可加入雞飼料中以制成具有期望得到的最終濃度的混合物而不必進(jìn)一步調(diào)整甜菜堿或抑球蟲劑的濃度。
15.離子載體抑球蟲劑離子載體抑球蟲劑是一些抗球蟲試劑，由于它們特定的分子形狀和結(jié)構(gòu)，可以作為穿過生物膜時的離子載體。
B.甜菜堿和抑球蟲劑的協(xié)同作用本文給出的數(shù)據(jù)第一次證實了，抑球蟲劑和甜菜堿共同作用可抵消球蟲類寄生蟲所產(chǎn)生的對養(yǎng)殖動物的有損其經(jīng)濟(jì)性的影響。無論抑球蟲劑為化學(xué)型或離子載體型，協(xié)同作用均可發(fā)生。實施例1所描述的實驗為將雞接種球蟲，然后喂給添加有甜菜堿，抑球蟲劑(鹽霉素)或同時含有甜菜堿和抑球蟲劑的飼料。將有添加劑的飼料喂養(yǎng)的雞與沒有添加劑的飼料喂養(yǎng)的經(jīng)接種的雞及未接球種蟲的雞相對比。如表5中所見，以含有甜菜堿和鹽霉素的飼料喂養(yǎng)21天的雞比以單獨含有同等濃度甜菜堿或鹽霉素的飼料喂養(yǎng)的雞顯著地具有較高的體重和較少的內(nèi)臟損害。雖然單獨使用甜菜堿或抑球蟲劑均不能完全抵消因感染球蟲對飼率轉(zhuǎn)化率造成的影響，但是，當(dāng)同時使用時，它們可以產(chǎn)生與未接種球蟲的對照組相當(dāng)?shù)寞熜А?1天大的以含44ppm鹽霉素的飼料喂養(yǎng)的雞的死亡率與以無添加劑的飼料或只添加甜菜堿的飼料喂養(yǎng)的染有球蟲的雞的死亡率相比，前者顯著地減小了。當(dāng)甜菜堿和44ppm鹽霉素同時使用時，死亡率可減至不明顯高于未接種球蟲雞的水平。
從表5中還可以看到，45天時，進(jìn)食含有甜菜堿和抑球蟲劑的飼料的雞的死亡率顯著的低于進(jìn)食只含有上述一種試劑的飼料的雞的死亡率，同時，給以上述兩種試劑的雞的死亡率降到了不顯著高于未接種球蟲的對照組的水平。同樣，以含有甜菜堿和66ppm抑球蟲劑的飼料喂養(yǎng)的雞的體重和飼料轉(zhuǎn)化率與對照組相比也沒有顯著性差異，而僅服用一種試劑的雞的體重顯著的較低，并且其飼料轉(zhuǎn)化率顯著地較高。
實施例2中給出的結(jié)果表明甜菜堿和抑球蟲劑對于感染有球蟲的雞的經(jīng)濟(jì)效能的正性影響并不依賴于飼料中的蛋氨酸。因此，甜菜堿的抗球蟲作用不依賴于它可以代替蛋氨酸的作用。結(jié)果表明，甜菜堿的保護(hù)作用可能與它能夠抵銷球蟲對營養(yǎng)吸收的有害作用有關(guān)。支持這一假說的是這樣一個發(fā)現(xiàn)，即以含甜菜堿飼料喂養(yǎng)的染球蟲雞比以無添加劑飼料或僅添加抑球蟲劑飼料喂養(yǎng)的雞具有較輕的內(nèi)臟損害(表5)。
實施例3證明了聯(lián)合使用甜菜堿和鹽霉素，所具有的協(xié)同作用對于經(jīng)濟(jì)效能的改善作用在使用其它型的離子載體抑球蟲劑(拉沙里菌素)或化學(xué)抑球蟲劑(halofuginone氫溴酸鹽)時仍可保持。如表13所示，聯(lián)合使用拉沙里菌素和甜菜堿與喂給單獨添加甜菜堿或拉沙里菌素飼料相比，前者便雞具有顯著較高的體重和顯著較低的飼粒轉(zhuǎn)化率。聯(lián)合服用halofuginone氫溴酸鹽和甜菜堿的雞顯示出顯著降低了的食物轉(zhuǎn)化率。另外，表13給出的結(jié)果確證了鹽霉素和甜菜堿的聯(lián)合使用可改善經(jīng)濟(jì)效益這一結(jié)論。同時服用了鹽霉素和甜菜堿的雞與單獨服用鹽霉素或甜菜堿的雞相比，表現(xiàn)出具有顯著增加了的體重和較好的飼料轉(zhuǎn)化率。其它適于與甜菜堿聯(lián)合使用的抑球蟲劑在表1中給出。在所有情況下，給動物服用的抑球蟲劑的合適劑量為美國食品與藥物管理局推薦的劑量(參見FDA Feed Additive Comppendium，美國食品與藥品管理局，1994)，甜菜堿使用的濃度為每噸干飼料0.5至2.0公斤。
在歐洲已批準(zhǔn)使用的抑球蟲劑包括下述(產(chǎn)品許可證號在括號內(nèi)給出)amprolmix(PL0025/4008)；avatec預(yù)混合物(PL0031/4011)；carbigran預(yù)混合物(PL0006/4075)；clepidol(PL 3405/4017)；clopidol 250(PL 3405/4025)；coyden 25(PL0621/4001)；cycostat 66(PL 0095/4000)；cygro預(yù)混合物(PL0095/4042)；純deccox(PL 8327/4038)；deceox家禽預(yù)混合物(PL0012/4052)；deccox綿羊預(yù)混合物(PL 8327/4066)；dinitolide(PL 10101/4000)；dinormin SR25(PL 0109/4000)；DOTdinitolmide(PL 0109/4002)；elancoban G200(PL 0006/4047)；monension 200(PL 3045/4006)；lerbek(PL 327/4049)；maxibanG160(PL 0006/4078)；monensin-100家禽用(PL 3405/4021)；monensin-100反芻動物用(PL 3405/4022)；monensin-200(PL 3405/4006)；monensin 100“ABCHEM”預(yù)混合物(PL10104/4004)；monteban G100(PL 0006/4061)；nicarbazin-50(PL 3405/4050)；nicarbazin-250(PL 3405/4044)；nicarazin預(yù)混合物(PL 0025/4019)；Sacox 120(PL 0086/4135)；salcostat(PL 1598/4036)；salcostat(DOT)預(yù)混合物25％(PL 1598/4033)；salgain-60(PL 3405/4053)；stenerol(PL 0086/4117)；野雞用stenerol(PL 0086/4153)；及純ubicox(PL 4188/4004)。歐洲批準(zhǔn)的各種抑球蟲劑也可用于實施要求保護(hù)的本發(fā)明。每種情況下，所使用的抑球蟲劑的濃度應(yīng)等于制造商推薦的濃度，甜菜堿使用的濃度為每噸干飼料2.0公斤。
C.設(shè)計含有抑球蟲劑和甜菜堿的動物飼料1.雞飼料本發(fā)明涉及設(shè)計含有抑球蟲劑和甜菜堿的雞飼料。為了制備這一飼料，首先在大量的常規(guī)飼料成分中任選一些制成雞的基礎(chǔ)飼料，例如使用谷物，大豆，小麥和大麥(參見AFMA FeedIngredient Guide，美國Feed Manufacturer’s Association(飼料制造商聯(lián)合會)出版，Arlington，VA.，U.S.A.，H.patrich等，PourltryFeeds & Nutritian，第二版AVI出版公司，Wastport，Conn.，37章，(1980))。所有的混合及飼料的其它制備步驟均采用工藝上周知的常規(guī)方法(參見例如H.Patrich等.，PourltryFeed & Nutritian，第二版，AVI出版公司，Westport，Conn.，36-38章(1980)；Feed Manufacturing Technology，H.Pfost andC.Swiwineharteds.，American Feed Manufacturer’sAssociation Inc.，Chicago，Ill.，(1970)。
基礎(chǔ)飼料的營養(yǎng)成分可以用標(biāo)準(zhǔn)飼料成分分析表來測定(參見例如.H.Patrich等，PoultryFeeds & Nutrition，出版公司，Westport.Conn.，pp438-449(1980)；H.Titus等，TheScientific Feeding of Chickens.第五版，The interstatePublishers.Daville，Ill.，第13章(1971))。維生素，礦物質(zhì)和其它的營養(yǎng)成分可加入濃縮物中，該濃縮物的確定可參照多種可利用的文獻(xiàn)(參加例如Nutrient Requirements of Poultry，國家研究協(xié)會，國家科學(xué)研究院，Washington，D.C.(1984))。這些文獻(xiàn)為公眾熟知，而且它們所提供的數(shù)據(jù)為熟悉該工藝的人所接受。
基礎(chǔ)飼料制成后，加入甜菜堿和抑球蟲劑這些試劑可單獨加入，也可以以預(yù)混合物的方式一同加入。甜菜堿在飼料中的最終濃度應(yīng)為每噸干飼料0.5至2.0公斤。抑球蟲劑的最終濃度依據(jù)所使用抑球蟲劑種類的不同而定。在所有的例子中均應(yīng)符合美國食品和藥品管理局所推薦的濃度。代表性的雞飼料中成分含有量為monensin100-120ppm；鹽霉素60ppm；naracin70ppm；lasalocid90ppm。當(dāng)使用鹽霉素時，經(jīng)發(fā)現(xiàn)最終濃度在44ppm和66ppm之間時就足夠了，(見實施例1)。
飼料可以以任何常用的方式喂給雞。例如，可將其制成小球或以粉末的方式喂雞。可將該飼料喂給所有的雞作為一種預(yù)防性措施或只喂給那些已確診為感染了球蟲的雞。
2.喂給其它養(yǎng)殖肉食動物的飼料球蟲病會在除了雞以外的許多種養(yǎng)殖肉食動物中發(fā)生。表1包含了食品與藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)的用于不同動物的抑球蟲劑FDA 1994 Feed Additive Compendium，美國食品與藥品管理局，1994)。眾所周知，牛，綿羊，豬和火雞這些動物易于感染球蟲病。這些動物都以與雞相同的抑球蟲劑進(jìn)行治療并且都有相同的副作用。本發(fā)明還制成了適于這些動物服用的含有抑球蟲劑和甜菜堿的飼料。
適于所養(yǎng)殖的特定動物的飼料使用標(biāo)準(zhǔn)飼料表配制。例如，牛的標(biāo)準(zhǔn)飼料可使用Merck Veterinary Manual(默克獸醫(yī)手冊)第六版，1104-1132頁(1986)所提供的信息來制備。使用同一資料，可以制備兔子(1210-1211頁)；綿羊(1211-1221頁)；豬(1221-1230頁)；和家禽(1188-1210頁)的標(biāo)準(zhǔn)飼料。制成基礎(chǔ)飼料后，加入抑球蟲劑和甜菜堿。抑球蟲劑的濃度應(yīng)為食品與藥品管理局所推薦的濃度(FDA 1994 Additive Compendium，美國食品與藥品管理局，1994)。已發(fā)現(xiàn)的對于用于雞的抑球蟲劑具有增效作用的甜菜堿的濃度(即每噸干重0.5-2.0公斤)可以不變地用于制備其它動物的飼料或根據(jù)實驗所示調(diào)高或調(diào)低。由于甜菜堿的協(xié)同作用，可以降低給動物服用的抑球蟲劑的濃度而依然保持商業(yè)上可接受的治療結(jié)果。這樣，與抑球蟲劑一同使用甜菜堿可以降低制成可行飼料的成本。
D.含有甜菜堿和抑球蟲劑的飼料填加劑除了涉及含有甜菜堿和抑球蟲劑的飼料之外，本發(fā)明還制成了含有這兩種試劑的其它組合物，將這些組合物給動物服用的目的是防止球蟲病的不良作用。甜菜堿和抑球蟲劑的預(yù)混合物可以以片劑，膠囊或溶液劑的方式服用。在所有情況下，甜菜堿和抑球蟲劑的濃度應(yīng)為制成飼料中這兩種物質(zhì)的含量與設(shè)計含有的濃度相當(dāng)。制成的甜菜堿/抑球蟲劑組合物可以添加添加劑以改善口感或添加動物需要的其它填加劑或治療劑。
適于非腸道服用的含有甜菜堿和抑球蟲劑的復(fù)合物可依據(jù)制備藥用組合物的已知方法制備，這些方法中，上述試劑以在藥用載體上承載的形式混合于混合物中，合適的載體及其配方已有所述，例如，在Remington’s Pharmacentical Sciences中(第16版，A.Oslow.ed.，Mack.Easton，PA 1980)。所需劑量依治療動物的種類和服用的抑球蟲劑的種類而定(FDA 1994 Feed AdditiveCompendium，美國食品與藥品管理局，1994)。
其它的藥學(xué)方法可用于控制作用的時間。為了達(dá)到控釋的效果，可選擇合適的大分子如聚酯，聚氨基酸，聚合吡咯烷酮，乙烯乙酸乙烯酯，甲基纖維素，羧甲基纖維素或魚精蛋白硫酸鹽，按照已有實驗步驟與上述試劑結(jié)合起來以控制藥物釋放。抑球蟲劑和甜菜堿作用的時間也可通過將其結(jié)合于聚合材料的顆粒中的方法來控制，聚合材料如聚酯，聚合氨基酸，水凝膠，聚合(乳酸)或乙烯乙酸乙烯酯共聚物。還有一種方法是將甜菜堿和抑球蟲劑裝入膠囊中，制備及使用微膠囊的多種材料和方法已在Remington’sPharmaceutical Sciences，中公開(第16版，A.Oslow，Ed.，Easton.PA 1980)。
E.一種治療感染球蟲動物的方法本發(fā)明還涉及一種方法，該方法為服用甜菜堿和抑球蟲劑以治療感染了球蟲的養(yǎng)殖肉食動物。表5和11所示的結(jié)果證明給感染有球蟲的雞服用甜菜堿和抑球蟲劑因下述方面的作用可明顯改善其經(jīng)濟(jì)性能；減小內(nèi)臟損害的程度，降低死亡率，提高最終體重及改善飼料轉(zhuǎn)化率。
甜菜堿和抑球蟲劑可以以口服或上述非口服方式給動物服用。優(yōu)選將甜菜堿和抑球蟲劑結(jié)合于動物的飼料中，例如雞，甜菜堿的用量為每噸干飼料0.5至2.0公斤。如果使用鹽霉素作為抑球蟲劑來治療雞，它的含量應(yīng)為44ppm至66ppm。其它可供使用的抑球蟲劑包括monensin(100-200ppm)；naracin(70ppm)和lasalocid(90ppm)，以及表1所列出的其它抑球蟲劑。
甜菜堿可從供應(yīng)商處買到，例如從Finnsugar Bioproducts公司(以商品名“Betafin”出售。合適的抑球蟲劑和它們的供應(yīng)商包括下列monensinElance Products公司。(商品名“Elanceoban”或“Romensin”)；鹽霉素Hoechst(英國)公司(商品名“Sacox”)；narasinElanco Products公司(商品名“Monteban)；及LasalocidRoche公司(商品名“Avatec”)。FDA已推準(zhǔn)的其它抑球蟲劑在表1中給出。在除雞以外其它的動物中，所用抑球蟲劑的濃度應(yīng)為美國食品與藥物管理局所推薦的濃度(FDA 1994 FeedAdditive Copendium，美國食品與藥品管理局，1994)。甜菜堿在飼料中的初始濃度應(yīng)為每噸干飼料0.5至2.0公斤。這一濃度可按實驗所示調(diào)高或調(diào)低。其它給動物服用甜菜堿和抑球蟲劑的方法在上文中已述。
本文中所有的引用均符合所引文獻(xiàn)整體的意義。至此，已從總體上描述了本發(fā)明，下面參照本文所給出的具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，此說明的目的僅為解釋，除非另有說明，不視作對本發(fā)明的限制。
實施例1動物2464只一天大雄性和2464只一天大雌性商業(yè)品種(Peterson×Arbor Acres)的適于烤焙的小雞隨機(jī)分配到置于干草上的56層雞舍中，將小雞養(yǎng)至45天大。將其分為7個實驗組，每組進(jìn)行8個相同的實驗。實驗設(shè)計在表4中給出。
接種1至6實驗組的小雞在14天大時通過飲用水接種E.ccerxulina，E.maxima和E.tenella 21天大時，每一雞舍中取出兩只雄性和兩只雌性小雞進(jìn)行解剖記錄球蟲病程度(0-4，4最嚴(yán)重)。7實驗組為未經(jīng)接種的對照組，但是小雞經(jīng)干草受到自然污染。
飼料制備谷物-大豆飼料(起始飼料和成長飼料)以滿足或超過下文中所給出的雞的營養(yǎng)需要Natrient Reuirements ofPoultry，國家研究委員會，國家科學(xué)院，Washintm D.C(1984)。飼料成分在表2中給出，并在表3中給出計算分析結(jié)果。按照實驗設(shè)計(表4)在飼料中填加甜菜堿和一種商品抑球蟲劑Bio-Cox。以碎屑或小球的形式隨意將飼料喂給小雞。保持飼料消耗的全部記錄。
結(jié)果在下列表和圖中公開。在數(shù)據(jù)后面的字母表示不同實驗組間差異的統(tǒng)計學(xué)顯著性，它是通過分析偏差得到的。標(biāo)有相同字母的實驗組就所計算的參數(shù)來講無顯著性差異。
結(jié)論實驗數(shù)據(jù)表明在商業(yè)型飼料混合物中添加甜菜堿可以降低內(nèi)臟損害的程度和死亡率，并改善適于烘焙的小雞的生長狀況和喂食效率。由于甜菜堿和抑球蟲劑(Bio-Cox)均可對這些參數(shù)產(chǎn)生顯著的影響，甜菜堿和抑球蟲劑之間沒有統(tǒng)計學(xué)顯著的相互作用。因此，甜菜堿的添加對于經(jīng)抑球蟲劑處理的適于烤焙的小雞可進(jìn)一步改善這些生產(chǎn)參數(shù)。
而且，數(shù)據(jù)還表明，適于烤焙的小雞經(jīng)比實際養(yǎng)殖中所用的抑蟲球濃度低一些的濃度(44ppm)處置，同時飼料中添加甜菜堿1.5千克/噸，與經(jīng)實際養(yǎng)殖中所用抑球蟲劑濃度(66ppm)處置的小雞相比，具有相似的作用。
實施例2動物1200只一天大雄性和1200只雌性商品品種(Peterson×Arbor Acres)的適于烤焙的小雞隨分配到置于干草上的40層的雞舍中。以含有鹽霉素和添加了蛋氨酸或甜菜堿或二者均添加的基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)至47天大。實驗設(shè)計在表8中給出，5個實驗組中的每一組均進(jìn)行8組相同的實驗。
接種小雞在15天大時通過飲用水接種E.ccervulina，E.maxima和E.tenella的混合物，在2l天大時，每一雞舍中取出6只小雞進(jìn)行解剖并在腸道中四點記錄球蟲病的程度，以四級表示(上端，中端，下端，肓端；級0-4，4為最嚴(yán)重)。
飼料制備谷物—大豆飼料(起始飼料和成長飼料)以滿足或超過NRC 1984年所公布的營養(yǎng)需求，其中不包括蛋氨酸，蛋氨酸在飼料1，3，和4中是缺乏的。飼料組成在表6中給出并在表7中進(jìn)行計算分析。按照實驗設(shè)計(表8)在飼料中添加甜菜堿和一種商品抑球蟲劑，鹽霉素。飼料以碎屑或小球的形式隨意喂食。保持飼料消耗的全部記錄。
實驗結(jié)果在表9和圖5-8中公開。在數(shù)據(jù)后面的字母表示不同實驗組間差異的統(tǒng)計學(xué)顯著性，它是通過分析偏差得到的。標(biāo)有相同字母的實驗組就所計算的參數(shù)來講無顯著性差異。
結(jié)論在飼料中添加0.075-0.15％的甜菜堿可顯著改善適于烤焙的小雞的生長狀況和喂食效率。0.15％的甜菜堿可顯著降低球蟲感染所引起的腸道損傷。此效果不依賴于飼料中的蛋氨酸成分。
實施例3動物1200只一天大雄性商業(yè)品種(Peterson×Arbor Acres)適用烤焙的小雞隨機(jī)分配在120只18”×24”大小的雞籠內(nèi)。小雞長至21天大。分為十個實驗組，每組進(jìn)行12個相同的實驗。實驗設(shè)計在表10中給出。
接種實驗組l，2和5-10的雞在14天大時通過飲用水接種E.acervulina，E.manima和E.tenella的混合物。21天大時，每只雞籠中取出4只雞解剖并記錄球蟲病的程度(0-4，4最嚴(yán)重)。實驗組3和4為未接種的對照組。
飼料制備谷物-大豆飼料以滿足或超過下文中所給出的雞的營養(yǎng)需要Natrient Requiements of Poultry，國家研究委員會，國家科學(xué)研究院，shington，D.C(1984)。飼料構(gòu)成在表11中給出，計算分析結(jié)果在表12中給出。按照實驗設(shè)計(表10)在飼料中添加甜菜堿和三種商品抑球蟲劑。保持飼料消耗的全部記錄。
實驗結(jié)果在下列表和圖中公開。數(shù)據(jù)后面的字母表示不同實驗組間差異的統(tǒng)計學(xué)顯著性，它是通過分析偏差得到的。標(biāo)有相同字母的實驗組就所計算的參數(shù)而言無顯著性差異。
權(quán)利要求
1.一種養(yǎng)殖肉食動物的飼料，其特征在于含有抑球蟲劑和甜菜堿。
2.權(quán)利要求1所述飼料，其特征在于所述抑球蟲劑為離子載體抑球蟲劑。
3.權(quán)利要求2所述飼料，其特征在于所述離子載體型抑球蟲劑選自下述monensin；naracin；lasalocid；和鹽霉素。
4.權(quán)利要求3所述飼料，其特征在于所述離子載體型抑球蟲劑為鹽霉素。
5.權(quán)利要求3所述飼料，其特征在于所述離子載體型抑球蟲劑為lasalocid。
6.權(quán)利要求2所述飼料，其特征在于所述甜菜堿的含量為每噸干飼料0.5至2.0千克。
7.權(quán)利要求2所述飼料，其特征在于所述養(yǎng)殖肉食動物為雞。
8.權(quán)利要求2所述飼料，其特征在于所述抑球蟲劑為鹽霉素及所述甜菜堿的濃度為每噸0.5至2.0千克。
9.權(quán)利要求8所述飼料，其特征在于所述飼料的構(gòu)成如表2所示。
10.權(quán)利要求1所述飼料，其特征在于所述抑球蟲劑為化學(xué)型抑球蟲劑。
11.權(quán)利要求10所述飼料，其特征在于所述化學(xué)型抑球蟲劑選自下述amprolium；clopidol；decoquinate；halofuginone氫溴酸鹽；maduramicin銨鹽；nicarbazin；3-硝基-4-羥基苯胂酸；robenide鹽酸鹽；和zoalene。
12.權(quán)利要求11所述飼料，其特征在于所述化學(xué)型抑球蟲劑為halofuginone氫溴酸鹽。
13.權(quán)利要求10所述飼料，其特征在于所述甜菜堿的濃度為每噸干飼料0.5至2.0千克。
14.權(quán)利要求10所述飼料，其特征在于所述養(yǎng)殖肉食動物為雞。
15.權(quán)利要求10所述飼料，其特征在于所述抑球蟲劑為halofuginone氫溴酸鹽并且所述甜菜堿的濃度為每噸0.5至2.0千克。
16.權(quán)利要求15所述飼料，其特征在于所述飼料的構(gòu)成如表2所述。
17.一種飼料填加劑，其特征在于含有預(yù)先混合的組分甜菜堿和抑球蟲劑。
18.權(quán)利要求17所述的飼料添加劑，其特征在于所述抑球蟲劑為離子載體抑球蟲劑。
19.權(quán)利要求18所述的飼料添加劑，其特征在于所述抑球蟲劑選自下述monensin；naracin；lasalocid；及鹽霉素。
20.權(quán)利要求19所述飼料添加劑，其特征在于所述抑球蟲劑為鹽霉素。
21.權(quán)利要求20所述飼料添加劑，其特征在于所述抑球蟲劑為lasalocid。
22.權(quán)利要求17所述飼料添加劑，其特征在于所述抑球蟲劑為化學(xué)型抑球蟲劑。
23.權(quán)利要求22所述飼料添加劑，其特征在于所述化學(xué)型抑球蟲劑選自下述amprolium；clopidil；decoquinate；halofuginone氫溴酸鹽；maduramicin銨鹽；nicarbazin；3-硝基-4-羥苯胂酸；robenide鹽酸鹽；和zoalene。
24.權(quán)利要求23所述飼料添加劑，其特征在于所述抑球蟲劑為halofuginone氫溴酸鹽。
25.一種改善感染有球蟲的養(yǎng)殖肉食動物的經(jīng)濟(jì)效能的方法，其特征在于給所述養(yǎng)殖肉食動物服用甜菜堿和抑球蟲劑。
26.權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于所述抑球蟲劑為離子載體抑球蟲劑。
27.權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于所述離子載體抑球蟲劑選自下述monensin；narasin；lasalocid；和鹽霉素。
28.權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于所述離子載體抑球蟲劑為鹽霉素。
29.權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于所述養(yǎng)殖肉食動物為雞。
30.權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于所述抑球蟲劑為化學(xué)型抑球蟲劑。
31.權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于所述化學(xué)型抑球蟲劑選自下述amprolium；clopidol；decoquinate；halofuginone氫溴酸鹽；maduramicin銨鹽；nicarbazin；3-硝基-4-羥苯胂酸；robenide鹽酸鹽；及zoalene。
32.權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于所述化學(xué)型抑球蟲劑為halofuginone氫溴酸鹽。
33.權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于所述養(yǎng)殖肉食動物為雞。
34.一種治療感染有球蟲的養(yǎng)殖肉食動物的方法，其特征在于給所述養(yǎng)殖肉食動物服用甜菜堿。
35.權(quán)利要求34所述的方法，其特征在于所述養(yǎng)殖肉食動物為雞。
36.權(quán)利要求34所述的方法，其特征在于甜菜堿混合入所述養(yǎng)殖肉食動物的飼料中。
37.權(quán)利要求36所述的方法，其特征在于所述甜菜堿的使用濃度為每噸干飼料0.5至2.0千克。
全文摘要
本發(fā)明關(guān)于設(shè)計用于感染了球蟲的動物服用的組合物。這些組合物的主要特點為它們同時含有抑球蟲劑和甜菜堿。另外，本發(fā)明涉及一種方法，該方法用于減少患有急性或無臨床癥狀球蟲病動物或患有球蟲病動物的死亡率，及/或改善這些動物的生長狀況和喂食效率。
文檔編號A61K31/53GK1141581SQ94192314
公開日1997年1月29日 申請日期1994年4月28日 優(yōu)先權(quán)日1993年4月29日
發(fā)明者E·弗坦恩, M·科伊維斯托恩, J·L·麥克諾頓 申請人:卡爾特有限公司