本發(fā)明屬于化妝品,特別涉及一種外泌體組合物、配制方法及應(yīng)用。
背景技術(shù):
1、干細(xì)胞外泌體是干細(xì)胞培養(yǎng)在過(guò)程中通過(guò)旁分泌機(jī)制分泌出的直徑為30-100nm的微小囊泡,其內(nèi)載有蛋白質(zhì),rna,mirna,dna,dsdna等多種生物學(xué)信息,除此之外,還富含egf,vegf,bfgf,hgf,igf等多種活性因子。干細(xì)胞外泌體作為細(xì)胞與細(xì)胞間傳遞信息的載體,在人體健康方面扮演著重要的角色,有研究表明,干細(xì)胞外泌體可參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié),促進(jìn)細(xì)胞增殖,抑制細(xì)胞凋亡,修復(fù)組織損傷等作用;而在醫(yī)美領(lǐng)域,干細(xì)胞外泌體可促進(jìn)燒,燙傷的創(chuàng)面愈合,促進(jìn)膠原的合成,延緩肌膚衰老,修復(fù)炎癥,紅血絲等問(wèn)題肌膚,因此,在醫(yī)美領(lǐng)域有很好的應(yīng)用前景。
2、目前關(guān)于外泌體在醫(yī)美領(lǐng)域的應(yīng)用,報(bào)道得比較多的是肌膚痘印修復(fù)、肌膚疤痕修復(fù)、促進(jìn)創(chuàng)面愈合、肌膚抗衰方面,而關(guān)于外泌體具有肌膚美白功效方面的報(bào)道相對(duì)較少,即使有少量的文章/專(zhuān)利報(bào)道外泌體在肌膚美白方面有較為理想的效果,但在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中,真實(shí)的美白效果其實(shí)并不盡人意。從理論上來(lái)講,外泌體內(nèi)不含有能直接抑制黑色素生成/淡化黑色素的相關(guān)物質(zhì),但外泌體內(nèi)含有的egf,vegf,bfgf等生長(zhǎng)因子能夠加速細(xì)胞的代謝及增殖分化,其內(nèi)含的rna,mirna等多種生物信息,能加速細(xì)胞與細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo),活躍細(xì)胞功能。而實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中,真實(shí)的美白效果其實(shí)并不盡人意的原因包括外泌體活性不夠,以及運(yùn)輸、儲(chǔ)存過(guò)程中外泌體失效,如表面抗原呈陽(yáng)性,導(dǎo)致效用大大衰減。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為解決上述問(wèn)題,本發(fā)明提供了一種外泌體組合物、配制方法及應(yīng)用,將外泌體與其他具有美白功效的物質(zhì)聯(lián)用起到協(xié)同增效的作用,達(dá)到更好的美白效果,且其他成分具有維持外泌體外觀形態(tài)和活性的作用,避免外泌體失活或形態(tài)發(fā)生變化導(dǎo)致與其他物質(zhì)之間協(xié)同美白效果變劣。
2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下:
3、一方面,本發(fā)明提供一種外泌體組合物,按質(zhì)量百分比計(jì),包括:外泌體:5-20%,氨甲環(huán)酸:2-4%,透明質(zhì)酸鈉:0.1-0.3%,檸檬酸:0.05-0.15%,煙酰胺:2-4%,vc乙基醚:1-3%,九肽-1:0.004-0.006%,添加無(wú)菌注射用水至100%。
4、進(jìn)一步地,氨甲環(huán)酸:3%,透明質(zhì)酸鈉:0.2%,檸檬酸:0.1%,煙酰胺:3%,vc乙基醚:2%,九肽-1:0.005%。
5、進(jìn)一步地,所述外泌體為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體。
6、另一方面,本發(fā)明提供了上述外泌體組合物的配制方法,包括:將透明質(zhì)酸鈉溶解于無(wú)菌注射用水中,得到溶液a;稱(chēng)取煙酰胺、vc乙基醚、九肽-1,檸檬酸加入a中溶解,得到溶液b;在溶液b中加入氨甲環(huán)酸和外泌體,并加入無(wú)菌注射用水,混合均勻后得到溶液c;采用檸檬酸對(duì)溶液調(diào)整ph值至6.0-7.4,即可。
7、進(jìn)一步地,在加入氨甲環(huán)酸和外泌體前,將溶液b采用孔徑為0.22um濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾。
8、進(jìn)一步地,所制備的外泌體組合物的蛋白濃度為3-5mg/ml,外泌體濃度不小于2.5×1011particles/ml。
9、進(jìn)一步地,所述外泌體的制備方法為:篩選病毒及傳染病檢測(cè)合格的臍帶組織,將其破碎,提取原代細(xì)胞;篩選生長(zhǎng)情況良好的原代細(xì)胞,對(duì)其進(jìn)行傳代、擴(kuò)增;收集p3、p4代的干細(xì)胞培養(yǎng)上清于無(wú)菌容器中,對(duì)外泌體進(jìn)行富集收集,除菌后保存在-80℃冰箱。
10、進(jìn)一步地,所得到的外泌體中蛋白濃度為20-40mg/ml,外泌體濃度為(0.8-1.5)×1012particles/ml。
11、進(jìn)一步地,所述外泌體組合物在25℃最多可保存3個(gè)月;所述外泌體組合物在2-8℃最多可保存6個(gè)月;所述外泌體組合物在-20℃以下至少可以保存12個(gè)月。
12、另一方面,本發(fā)明實(shí)施例還提供上述外泌體組合物在制備化妝品方面的應(yīng)用。
13、本發(fā)明實(shí)施例提供的技術(shù)方案帶來(lái)的有益效果包括:
14、本發(fā)明對(duì)組分以及含量進(jìn)行限定,在保證不影響外泌體活性的前提下,添加其他類(lèi)型的組分,可以實(shí)現(xiàn)所述外泌體組合物在25℃最多可保存3個(gè)月;在2-8℃最多可保存6個(gè)月;在-20℃以下至少可以保存12個(gè)月,具體的,煙酰胺、氨甲環(huán)酸和九肽-1作為一種常用的美白功效組分,vc乙基醚作為一種常用的抗氧化組分將其與外泌體混合,需要考慮各組分對(duì)外泌體活性的影響,通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),當(dāng)僅添加氨甲環(huán)酸,外泌體的活性降低,主要原因在于氨甲環(huán)酸會(huì)影響外泌體的形貌,限制生長(zhǎng)因子的釋放,為了解決上述問(wèn)題,降低氨甲環(huán)酸的加入量,但氨甲環(huán)酸加入量少影響滿足美白效果,為了改善美白效果,加入煙酰胺,但煙酰胺的加入僅降低了對(duì)外泌體活性的影響,通過(guò)加入九肽-1,激活外泌體活性以抵消氨甲環(huán)酸以及煙酰胺加入所帶來(lái)的影響,加入vc乙基醚,提高組合物的穩(wěn)定性,本申請(qǐng)所制備的外泌體組合物活性高,術(shù)后七天平均色斑淡化率為19.7%,遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)。
1.一種外泌體組合物,其特征在于,按質(zhì)量百分比計(jì),包括:外泌體:5-20%,氨甲環(huán)酸:2-4%,透明質(zhì)酸鈉:0.1-0.3%,檸檬酸:0.05-0.15%,煙酰胺:2-4%,vc乙基醚:1-3%,九肽-1:0.004-0.006%,添加無(wú)菌注射用水至100%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的外泌體組合物,其特征在于,氨甲環(huán)酸:3%,透明質(zhì)酸鈉:0.2%,檸檬酸:0.1%,煙酰胺:3%,vc乙基醚:2%,九肽-1:0.005%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的外泌體組合物,其特征在于,
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的外泌體組合物的配制方法,其特征在于,
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的配制方法,其特征在于,
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的配制方法,其特征在于,
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的配制方法,其特征在于,
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的配制方法,其特征在于,
9.權(quán)利要求1-3任一所述的外泌體組合物在制備化妝品方面的應(yīng)用。