本發(fā)明涉及納米載藥系統(tǒng)領(lǐng)域，特別是涉及一種雙面神結(jié)構(gòu)fd/uscza納米粒子的制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、光動(dòng)力療法(pdt)是一種利用特定波長的光激活光敏劑，使其從基態(tài)過渡到激發(fā)態(tài)并釋放活性氧或其他自由基，誘導(dǎo)dna雙鏈斷裂并啟動(dòng)細(xì)胞凋亡的方法。pdt因其選擇性高、侵襲性低、見效快、副作用少、無明顯耐藥、易與其他治療方法聯(lián)合等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于臨床惡性腫瘤的治療。然而，大多數(shù)現(xiàn)有光敏劑的激發(fā)波長在630-690nm范圍內(nèi)，這限制了它們?cè)谏畈拷M織中的應(yīng)用。為了促進(jìn)光敏劑在深層組織中的應(yīng)用，可以引入合適的換能器，將穿透能力強(qiáng)的近紅外光轉(zhuǎn)換為可見光。近年研究發(fā)現(xiàn)，dna修復(fù)機(jī)制可能影響其效率。例如：溴域蛋白4(bromodomain?protein?4,brd4)通過調(diào)控dna損傷修復(fù)、端粒穩(wěn)態(tài)等非轉(zhuǎn)錄途徑，維持基因組穩(wěn)定，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。因此，將brd4抑制與光動(dòng)力療法(pdt)相結(jié)合可能是一種很有前景的增強(qiáng)氧化治療的策略。這種組合可能提供一種有效的策略來提高pdt的療效。其中，蛋白質(zhì)降解靶向嵌合體(protein?degradation?targeting?chimeras,protacs)因其能夠調(diào)控傳統(tǒng)小分子難以靶向的蛋白質(zhì)而備受關(guān)注。盡管protacs具有上述優(yōu)點(diǎn)，但仍存在一些阻礙其臨床轉(zhuǎn)化的障礙。例如，protacs由于其不理想的藥代動(dòng)力學(xué)和靶蛋白降解引起的全身副作用而表現(xiàn)出低效的腫瘤積累。因此，開發(fā)新的前藥遞送策略仍然至關(guān)重要，以實(shí)現(xiàn)protacs在腫瘤部位的高效積累和體內(nèi)激活，以消除protacs潛在的非特異性毒性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種雙面神結(jié)構(gòu)fd/uscza納米粒子的制備方法及應(yīng)用，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，該納米粒子可用于提高光動(dòng)力治療的效率和腫瘤治療的精度。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

3、本發(fā)明提供一種雙面神結(jié)構(gòu)fd/uscza納米粒子的制備方法，包括以下步驟：

4、在改性的d/ucnrs溶液中加入二氫卟吩e6硅烷前驅(qū)體，調(diào)節(jié)ph為堿性后再加入正硅酸四乙酯，得到二氫卟吩e6修飾的d/usc核殼納米顆粒；

5、將氧化鋅溶于水，加入聚丙烯酸水溶液，超聲，得到聚丙烯酸-鋅溶液；將所述聚丙烯酸-鋅溶液滴加到所述二氫卟吩e6修飾的d/usc核殼納米顆粒中，超聲，再將異丙醇緩慢滴入混合溶液中反應(yīng)，得到d/uscpz納米粒子；

6、向所述d/uscpz納米粒子中加入arv-771和2-甲基咪唑，攪拌反應(yīng)，得到d/uscza納米材料；

7、將葉酸活化后，將葉酸與d/uscza納米材料，震蕩反應(yīng)，得到雙面神結(jié)構(gòu)fd/uscza納米粒子。

8、優(yōu)選的是，所述改性的d/ucnrs的制備方法包括以下步驟：

9、將氫氧化鈉溶液、油酸以及乙醇混合攪拌后，再向混合溶液中滴加稀土氯化物混合液，最后加入氟化銨溶液，在210℃反應(yīng)8小時(shí)，自然冷卻后進(jìn)行離心，并用無水乙醇和水交替洗滌1-3次，分散在氯仿中，得到d/ucnrs納米顆粒；

10、所述d/ucnrs納米顆粒與ctab在32℃攪拌30分鐘，然后升高溫度至65℃揮發(fā)溶液中的氯仿，得到ctab保護(hù)的d/ucnrs納米顆粒，即為改性的d/ucnrs。

11、優(yōu)選的是，所述氫氧化鈉溶液、油酸、乙醇、稀土氯化物混合液和氯化銨溶液的體積比為1.5:5:5:2:1，所述氫氧化鈉溶液的濃度為0.2g/ml，所述氯化銨溶液的濃度為2mol/l；

12、所述稀土氯化物混合液是六水合氯化釔、六水合氯化鐿、六水合氯化釓、六水合氯化鉺和水按照質(zhì)量體積比為243g:279g:892g:31g:2ml混合而成；

13、所述d/ucnrs納米顆粒與ctab的體積比為1:20，所述d/ucnrs納米顆粒的濃度為10mg/ml，所述ctab的濃度為2m。

14、優(yōu)選的是，所述二氫卟吩e6硅烷前驅(qū)體是將二氫卟吩e6溶解在dmso中，再加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽以及n-羥基琥珀酰亞胺室溫避光反應(yīng)12小時(shí)得到；所述二氫卟吩e6、dmso、3-氨基丙基三乙氧基硅烷、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽以及n-羥基琥珀酰亞胺的配比為2.2mg:0.5ml:12μl:6mg:4mg。

15、優(yōu)選的是，將改性的d/ucnrs中補(bǔ)加水，超聲分散，形成改性的d/ucnrs溶液；之后再向所述改性的d/ucnrs溶液中加入二氫卟吩e6硅烷前驅(qū)體，再將ph調(diào)整為8后，分4-6次加入正硅酸四乙酯的乙醇溶液，每次間隔時(shí)間為30min；所述改性的d/ucnrs溶液、二氫卟吩e6硅烷前驅(qū)體和正硅酸四乙酯的乙醇溶液的配比為20:0.03:0.25。

16、優(yōu)選的是，所述氧化鋅的水溶液和聚丙烯酸水溶液的體積比為100:1，所述氧化鋅的水溶液的濃度為1mg/ml，所述聚丙烯酸水溶液的濃度為0.2g/ml；

17、所述聚丙烯酸-鋅溶液、二氫卟吩e6修飾的d/usc核殼納米顆粒和異丙醇的體積比為1:5:42；所述超聲的時(shí)間為20-30min，所述反應(yīng)的條件為32℃反應(yīng)12小時(shí)。

18、優(yōu)選的是，將所述d/usc-paa-zn納米粒子分散在甲醇后，加入2-甲基咪唑的甲醇溶液和arv-771，在70℃下攪拌反應(yīng)30分鐘，得到所述d/uscza納米材料；所述甲醇、2-甲基咪唑的甲醇溶液和arv-771的體積比為100:31:1，所述2-甲基咪唑的甲醇溶液的濃度為0.97mg/ml。

19、優(yōu)選的是，所述葉酸活化的方法包括以下步驟：將葉酸溶液在dmso中，超聲，之后加入n-羥基琥珀酰亞胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，活化12小時(shí)；其中，所述葉酸、dmso、n-羥基琥珀酰亞胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽的配比為10mg:8ml:9mg:5mg；

20、所述震蕩反應(yīng)的時(shí)間為48小時(shí)。

21、本發(fā)明還提供一種雙面神結(jié)構(gòu)fd/uscza納米粒子，其由所述的制備方法制得。

22、本發(fā)明還提供所述的雙面神結(jié)構(gòu)fd/uscza納米粒子在如下任一項(xiàng)中的應(yīng)用：

23、(1)在制備治療乳腺癌的藥物中的應(yīng)用；

24、(2)在制備提高乳腺癌細(xì)胞對(duì)光動(dòng)力治療敏感性的藥物中的應(yīng)用；

25、(3)在制備提高光動(dòng)力治療乳腺癌的療效的藥物中的應(yīng)用。

26、本發(fā)明公開了以下技術(shù)效果：

27、(1)本發(fā)明借助上/下轉(zhuǎn)換納米粒子(d/ucnrs)，利用聚丙烯酸的導(dǎo)向作用，結(jié)合選擇性生長及修飾的方法開發(fā)一種簡單制備單分散雙面神結(jié)構(gòu)fd/uscza納米粒子，所得產(chǎn)品分散性好，粒徑均勻，生物相容性好，在藥物輸送等領(lǐng)域具有非常廣闊的應(yīng)用前景。使用沸石咪唑酯骨架材料(zif-8)包裹arv-771有機(jī)分子，通過降解腫瘤細(xì)胞中dna自修復(fù)相關(guān)蛋白以增強(qiáng)光動(dòng)力學(xué)治療，并實(shí)施治療效果評(píng)價(jià)；fd/usczas通過靜脈注射后被動(dòng)靶向小鼠乳腺癌細(xì)胞，并在腫瘤細(xì)胞內(nèi)釋放arv-771。arv-771能抑制brd4蛋白的表達(dá)，brd4蛋白表達(dá)下調(diào)抑制了rad51蛋白的表達(dá)，這兩種蛋白的下調(diào)可阻礙同源重組介導(dǎo)的dna修復(fù)，從而引起dna損傷。本發(fā)明將brd4抑制與光動(dòng)力療法(pdt)相結(jié)合增強(qiáng)氧化治療，旨在提供一種有效的策略來提高pdt的療效。

28、(2)本發(fā)明制備的雙面神結(jié)構(gòu)fd/uscza納米粒子具有如下特點(diǎn)和優(yōu)勢：

29、血液循環(huán)與靶向性：雙面神結(jié)構(gòu)減少納米藥物在肝臟的吸附，提高納米藥物血液循環(huán)時(shí)間并延長納米粒子在血液中的循環(huán)時(shí)間；

30、藥物輸送與釋放：沸石咪唑酯骨架-8可以保護(hù)藥物分子，防止其在環(huán)境中降解，從而保持藥物的活性，提高藥物的穩(wěn)定性。葉酸可以靶向癌細(xì)胞膜上高表達(dá)的葉酸受體，提高納米藥物其靶向性；

31、提高pdt治療的敏感性：引入protac藥物arv-771，降解brd4蛋白，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)pdt治療的敏感性；

32、組織穿透性：上轉(zhuǎn)換納米材料能夠響應(yīng)穿透深度更深、毒副作用更小的980nm激光，并激活光敏劑達(dá)到治療癌癥的效果。