本發(fā)明涉及生物材料領(lǐng)域，具體涉及一種具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法。

背景技術(shù)：

1、嚴(yán)重創(chuàng)傷引發(fā)的神經(jīng)斷裂可能導(dǎo)致神經(jīng)束完全斷開，甚至整個神經(jīng)干分離，這種情況極易導(dǎo)致周圍神經(jīng)功能的永久性損害，嚴(yán)重影響到患者的日常生活，并可能增加國家的醫(yī)療保健負(fù)擔(dān)。為了恢復(fù)功能上的連接，必須對斷離的神經(jīng)末梢進(jìn)行重新排列，以保障軸突能夠重新延伸至遠(yuǎn)端。然而，實(shí)際操作中，由于張力的限制，端對端的縫合技術(shù)僅適用于神經(jīng)間隙不超過幾毫米的情況。對于間隙超過1至2厘米的斷裂，則必須采用橋接技術(shù)進(jìn)行修復(fù)。盡管自體神經(jīng)移植物被視為這類手術(shù)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但由于供體組織的限制以及潛在的致病風(fēng)險(xiǎn)，其實(shí)際帶來的功能效益往往不足預(yù)期的一半。

2、作為一種用于治療嚴(yán)重周圍神經(jīng)損傷的植入物，導(dǎo)電水凝膠不僅能夠在隔離受傷神經(jīng)與周圍組織的同時，促進(jìn)體內(nèi)生物電信號的傳導(dǎo)，而且還能夠用于修復(fù)廣泛的神經(jīng)缺損。通過負(fù)載多種細(xì)胞和生物活性因子，導(dǎo)電水凝膠能夠?yàn)樯窠?jīng)再生提供一個優(yōu)化的微環(huán)境，為施旺細(xì)胞的遷移和軸突的延伸提供導(dǎo)向，從而實(shí)現(xiàn)神經(jīng)損傷的修復(fù)。然而，由于裝載細(xì)胞和生物活性因子的過程較為復(fù)雜，限制了這類導(dǎo)管的制備便利性。脫細(xì)胞組織可以保留細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)和生長因子的成分，為受損神經(jīng)提供良好的再生微環(huán)境，是一種很有前途的神經(jīng)修復(fù)組織工程材料，有望為臨床治療中提供一種有前景的制備簡單組織工程神經(jīng)移植物支架，用于橋接長距離周圍神經(jīng)損傷，促進(jìn)神經(jīng)和功能恢復(fù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提出了一種具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法。

2、本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

3、本發(fā)明的第一方面，涉及一種具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法，包括以下步驟：

4、分離胚胎期臍帶組織，并去除細(xì)胞和脂質(zhì)，隨后進(jìn)行冷凍干燥；

5、采用化學(xué)蝕刻法制備碳化鈦單層納米片溶液，

6、采用光引發(fā)劑的磷酸緩沖鹽溶液配制gelma溶液，與所述碳化鈦單層納米片溶液混合配置，獲得導(dǎo)電水凝膠；

7、使用所述導(dǎo)電水凝膠包裹所述胚胎期臍帶組織，并通過紫外光固化，獲得所述的具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架。

8、可選地，所述去除細(xì)胞和脂質(zhì)的方法包括冷凍凍融法，使用液氮和37℃超純水反復(fù)凍融若干次。

9、可選地，所述去除細(xì)胞和脂質(zhì)的方法包括化學(xué)萃取法，所采用溶劑為2wt％的脫氧膽酸鈉溶液。

10、可選地，所述去除細(xì)胞和脂質(zhì)的方法包括，使用脫氧核糖核酸酶和核糖核酸酶的磷酸鹽緩沖液處理。

11、可選地，所述碳化鈦單層納米片的制備方法包括：使用質(zhì)量體積比為1：10的氟化鋰和鹽酸原位合成的氟化氫作為蝕刻劑對ti3alc2進(jìn)行化學(xué)蝕刻。

12、可選地，所述gelma的配制方法包括以下步驟：使用杜爾貝科磷酸鹽緩沖液配置明膠溶液，向明膠溶液中逐滴滴加甲基丙烯酸干；置入透析袋中并在超純水中透析并調(diào)整ph為7.2；經(jīng)離心、過濾和冷凍干燥獲得gelma。

13、可選地，所述光引發(fā)劑為2-羥基-2-甲基-1-苯基丙酮，濃度為1wt％。

14、可選地，所述gelma溶液的濃度為15wt％，所述碳化鈦單層納米片溶液的濃度為100μg/ml。

15、本發(fā)明的第二方面，涉及上述具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法制得的神經(jīng)移植物支架。

16、本發(fā)明的第三方面，涉及上述的神經(jīng)移植物支架在制備神經(jīng)損傷修復(fù)產(chǎn)品中的應(yīng)用。

17、本發(fā)明的有益效果：

18、本發(fā)明提供了一種具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法，其原料廉價(jià)易得，制備工藝簡單，可實(shí)現(xiàn)高通量制備；采用本發(fā)明的制備方法所得到的神經(jīng)移植物支架具有生物相容性優(yōu)異、可降解、減少炎癥反應(yīng)和促進(jìn)軸突生長的優(yōu)勢，從而用于長距離周圍神經(jīng)損傷的橋接，促進(jìn)神經(jīng)和功能恢復(fù)。

技術(shù)特征：

1.一種具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法，其特征在于，所述去除細(xì)胞和脂質(zhì)的方法包括冷凍凍融法，使用液氮和37℃超純水反復(fù)凍融若干次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法，其特征在于，所述去除細(xì)胞和脂質(zhì)的方法包括化學(xué)萃取法，所采用溶劑為2wt％的脫氧膽酸鈉溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法，其特征在于，所述去除細(xì)胞和脂質(zhì)的方法包括，使用脫氧核糖核酸酶和核糖核酸酶的磷酸鹽緩沖液處理。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法，其特征在于，所述碳化鈦單層納米片的制備方法包括：使用質(zhì)量體積比為1：10的氟化鋰和鹽酸原位合成的氟化氫作為蝕刻劑對ti3alc2進(jìn)行化學(xué)蝕刻。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法，其特征在于，所述gelma的配制方法包括以下步驟：使用杜爾貝科磷酸鹽緩沖液配置明膠溶液，向明膠溶液中逐滴滴加甲基丙烯酸干；置入透析袋中并在超純水中透析并調(diào)整ph為7.2；經(jīng)離心、過濾和冷凍干燥獲得gelma。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法，其特征在于，所述光引發(fā)劑為2-羥基-2-甲基-1-苯基丙酮，濃度為1wt％。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法，其特征在于，所述gelma溶液的濃度為15wt％，所述碳化鈦單層納米片溶液的濃度為100μg/ml。

9.通過權(quán)利要求1～8任一所述具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法制得的神經(jīng)移植物支架。

10.權(quán)利要求9所述的神經(jīng)移植物支架在制備神經(jīng)損傷修復(fù)產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架的制備方法，屬于生物材料領(lǐng)域。該方法包括以下步驟：分離胚胎期臍帶組織，并去除細(xì)胞和脂質(zhì)，隨后進(jìn)行冷凍干燥；采用化學(xué)蝕刻法制備碳化鈦單層納米片溶液，采用光引發(fā)劑的磷酸緩沖鹽溶液配制GelMA溶液，與所述碳化鈦單層納米片溶液混合配置，獲得導(dǎo)電水凝膠；使用所述導(dǎo)電水凝膠包裹所述胚胎期臍帶組織，并通過紫外光固化，獲得所述的具有導(dǎo)電能力的脫細(xì)胞組織神經(jīng)移植物支架。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請的神經(jīng)移植物支架具有良好的導(dǎo)電性能、力學(xué)性能以及可降解性。

技術(shù)研發(fā)人員：柴人杰,張彬,胡揚(yáng)楠,程紅
受保護(hù)的技術(shù)使用者：東南大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/28