本發(fā)明涉及軟組織填充、醫(yī)學(xué)美容填充物，具體涉及一種注射填充物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、皮膚主要由表皮層和真皮層構(gòu)成，其中膠原蛋白存在真皮層中。隨著人生理性衰老以及外界的各種刺激，真皮層中的膠原蛋白等流失速度開(kāi)始加快，供給不及消耗，使得皮膚開(kāi)始變得松弛出現(xiàn)皺紋。注射美容是利用注射的方式將填充物注射入真皮層或皮下以改善皮膚狀況。

2、可生物降解的聚合微粒具有在體內(nèi)分解的特性，利用該特性，其廣泛用于整形用填充物等體內(nèi)植入物。目前，這些注射材料主要有兩大類(lèi)，一類(lèi)是以交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠、膠原蛋白凝膠為代表的填充產(chǎn)品，主要作用機(jī)理為皮下填充，注射后使皮下缺陷處得到膨脹填充，撫平皺紋；另一類(lèi)是以聚左旋乳酸(plla)和聚己內(nèi)酯微球等聚酯類(lèi)為代表的膠原刺激產(chǎn)品，聚酯類(lèi)材料具有良好的生物相容性、抗凝血性、無(wú)毒和低免疫性等優(yōu)點(diǎn)，在生理環(huán)境中可水解降解成低分子量碎片，而低分子量碎片可被巨噬細(xì)胞內(nèi)吞并在細(xì)胞內(nèi)降解，在降解過(guò)程中通過(guò)刺激宿主的免疫反應(yīng)，吸引皮下大量的巨噬細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞，導(dǎo)致成纖維細(xì)胞的增殖及其肌成纖維細(xì)胞的分化，合成大量的膠原蛋白，從而恢復(fù)皮下容量、修復(fù)皺紋。

3、目前已經(jīng)有含有聚乳酸和/或聚己內(nèi)酯的多個(gè)產(chǎn)品應(yīng)用于皮膚皺紋和凹陷的填充，其主要的形態(tài)為聚乳酸微粒、聚乳酸微球和聚己內(nèi)酯微球等。但是現(xiàn)有的醫(yī)用聚酯材料親水性普遍較差，不利于機(jī)體蛋白質(zhì)在其表面的附著，進(jìn)而影響細(xì)胞黏附性能，并且醫(yī)用聚酯材料在以水為基質(zhì)的溶液中易于發(fā)生沉降，對(duì)使用者操作技巧要求高。而且微粒粒徑的不均一性會(huì)會(huì)導(dǎo)致被巨噬細(xì)胞吞噬，在生成膠原蛋白之前分解或者發(fā)生注射針堵塞的現(xiàn)象。

4、cn104001209和cn101842084公開(kāi)了pcl的微粒及其用途，制備微球方法中采用甲基纖維素作為表面活性劑，微球流動(dòng)性能較好，但是微球的粒徑分布范圍廣，不能很好地控制聚合物的尺寸，在使用過(guò)程中粒度不均勻會(huì)影響細(xì)胞吞噬效率，并降低顆粒靶向性，且容易引起堵針以及鼓包等不良反應(yīng)。而且由于聚己內(nèi)酯微球表面光滑，對(duì)細(xì)胞的黏附能力差，注入皮下層后起效慢，使用者體驗(yàn)感不佳。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種注射填充物及其制備方法和應(yīng)用，填充物對(duì)細(xì)胞的黏附能力好，粒度均一，分散穩(wěn)定性更好，不易堵針，同時(shí)具有良好的生物相容性及降解性。

2、本發(fā)明的目的之一是提供一種注射填充物，所述的填充物為聚己內(nèi)酯微粒，所述聚己內(nèi)酯微粒為球形顆粒，所述聚己內(nèi)酯的分子量為5000-30000，所述球形顆粒的粒徑為20-100μm，所述聚己內(nèi)酯微粒具有粗糙的表面或不光滑的表面。

3、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述聚己內(nèi)酯微粒粗糙的表面或不光滑的表面具有不規(guī)則孔徑。

4、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述球形顆粒的粒徑優(yōu)選20-70μm，更優(yōu)選為25-50μm。

5、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述聚己內(nèi)酯的分子量為10000-25000。

6、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述聚己內(nèi)酯的分子量為15000-22000。

7、本發(fā)明的另一目的在于提供一種注射填充物的制備方法，包括下述步驟：

8、(1)水相制備：將表面活性劑加入到純化水中，攪拌，溶解；

9、(2)有機(jī)相制備：將可注射填充物加入到有機(jī)溶劑中，攪拌至完全溶解；

10、(3)乳化制粒：將有機(jī)相和水相混合均勻，攪拌，使用膜乳化器進(jìn)行乳化，制備微球；

11、(4)攪拌揮發(fā)：攪拌使有機(jī)溶劑揮發(fā)；

12、(5)微球收集：收取混懸液，分離，清洗，干燥，得到可注射填充物微球。

13、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的表面活性劑為聚乙烯醇、甲基纖維素、聚氧乙烯、聚氧丙烯、聚乙烯亞胺、聚苯乙烯、聚氧硅烷、羥丙基纖維素中的任一種或其組合。

14、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的有機(jī)溶劑為丙酮、乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷中的任一種或其組合。

15、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的表面活性劑與純化水的比例為10-50g/l，優(yōu)選為15-40g/l，更優(yōu)選為20-30g/l。

16、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述水相溶液的粘度為2-10cp，優(yōu)選4-8cp。

17、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的水相溶液制備過(guò)程中，向反應(yīng)釜中加入純化水，開(kāi)啟機(jī)械攪拌，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)動(dòng)功率為10-50hz，優(yōu)選20-30hz；將表面活性劑緩慢加入純化水中，加熱至60-120℃，攪拌2～6小時(shí)，待表面活性劑完全溶解后降至室溫。

18、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述可注射填充物和有機(jī)溶劑的比例為100-300g/l，優(yōu)選150-250g/l。

19、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的有機(jī)相制備過(guò)程中，將可注射填充物加入到有機(jī)溶劑中，攪拌使其完全溶解。

20、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的乳化步驟中，調(diào)節(jié)機(jī)械攪拌功率為10～50hz，將有機(jī)相緩慢加入至水相中，攪拌3-10min后，使用膜乳化器調(diào)節(jié)壓力為0.5-1bar，使用10-50μm膜管進(jìn)行快速膜乳化。

21、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的攪拌揮發(fā)步驟中，將乳化后樣品轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜中，保持機(jī)械攪拌功率為10～50hz，使用氮?dú)?壓縮空氣置換釜內(nèi)氣體，維持1-20m/s流速，攪拌12～48小時(shí)使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)。

22、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的微球收集步驟中，采用離心、沉降、過(guò)濾的任一種或其組合分離方式收集微球。

23、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的微球收集步驟中，有機(jī)溶劑揮發(fā)后，收取反應(yīng)釜中混懸液，使用離心機(jī)分離固體微球，所述的離心機(jī)轉(zhuǎn)速為2000-5000rpm，離心時(shí)間2-8min，優(yōu)選離心機(jī)轉(zhuǎn)速為3000-4000rpm，離心時(shí)間3-6min。本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的微球收集步驟中，取收集到的微球，用純化水和乙醇進(jìn)行清洗，離心后收集，干燥，即得。

24、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的干燥是在30～60℃下干燥10～30小時(shí)，優(yōu)選30～40℃下干燥15～24小時(shí)。

25、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的干燥為鼓風(fēng)干燥。

26、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的清洗步驟中，純化水清洗2-5次，乙醇清洗1-2次。

27、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的注射填充物為聚己內(nèi)酯微球。

28、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述方法制備得到的聚己內(nèi)酯微球中，所述微球的粒徑為20-100μm，具有粗糙的表面或不光滑的表面。

29、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述聚己內(nèi)酯微粒粗糙的表面或不光滑的表面具有不規(guī)則孔徑。

30、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述球形顆粒的粒徑優(yōu)選20-70μm，更優(yōu)選為25-50μm。

31、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述聚己內(nèi)酯的分子量為5000-30000。

32、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述聚己內(nèi)酯的分子量為1000-25000。

33、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述聚己內(nèi)酯的分子量為15000-22000。

34、本發(fā)明的另一目的在于提供一種注射填充物的制劑，所述的填充物為聚己內(nèi)酯微粒，所述聚己內(nèi)酯微粒為球形顆粒，所述聚己內(nèi)酯的分子量為5000-30000，所述球形顆粒的粒徑為20-100μm，所述聚己內(nèi)酯微粒具有粗糙的表面或不光滑的表面。

35、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述制劑中還包含懸浮穩(wěn)定劑和緩沖液中的任一種或其組合。

36、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的懸浮穩(wěn)定劑選自聚乙烯醇(pva)、明膠、阿拉伯膠、瓜爾膠、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸(ha)、交聯(lián)透明質(zhì)酸、羧甲基纖維素鈉(cmc)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、甲基纖維素(mc)、羥丙基甲基纖維素(hpmc)、淀粉、果膠酸、肝素、葡萄糖、β-環(huán)糊精、殼聚糖、海藻酸鈉的任一種或其組合。優(yōu)選地，懸浮穩(wěn)定劑為透明質(zhì)酸、交聯(lián)透明質(zhì)酸和/或羧甲基纖維素鈉。

37、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、檸檬酸緩沖液、氯化鈉緩沖液的任一種或其組合。優(yōu)選地，該緩沖液為氯化鈉或磷酸鹽緩沖液。

38、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述制劑還包含多元醇、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核酸、維生素、多糖、局部類(lèi)麻醉劑中的任一種或其組合。

39、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述制劑選自液體針劑或粉針劑的任一種。

40、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述液體針劑選自水凝膠、混懸液、溶液中的任一種或其組合。

41、本發(fā)明的另一目的在于提供一種注射填充物制劑的聯(lián)用方式，將所述射填充物制劑與其他類(lèi)型注射填充物、麻醉劑、消炎劑、抗過(guò)敏劑的任一種或其組合聯(lián)合使用；所述的填充物為聚己內(nèi)酯微粒，所述聚己內(nèi)酯微粒為球形顆粒，所述聚己內(nèi)酯的分子量為5000-30000，所述球形顆粒的粒徑為20-100μm，所述聚己內(nèi)酯微粒具有粗糙的表面或不光滑的表面。

42、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的其他類(lèi)型注射填充物選自膠原蛋白、透明質(zhì)酸、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酰胺、硅膠、自體脂肪的任一種或其組合。

43、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的麻醉劑選自利多卡因、普魯卡因、丁卡因、布比卡因、羅哌卡因、雙氯芬酸、嗎啡、氫可酮、氧可酮、可待因、芬太尼、戊巴比妥鈉、苯巴比妥鈉、硫噴妥鈉、氯醛糖、氨基甲酸乙酯、水合氯醛的任一種或其組合。

44、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的消炎劑選自類(lèi)固醇類(lèi)消炎劑、非類(lèi)固醇類(lèi)消炎劑的任一種或其組合。

45、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的類(lèi)固醇類(lèi)消炎劑選自氟輕松、氫化可的松、倍他米松的任一種或其組合。

46、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的非類(lèi)固醇類(lèi)消炎劑選自阿司匹林、水楊酸鎂、水楊酸鈉、水楊酸膽堿鎂、二氟尼柳、雙水楊酸酯、布洛芬、吲哚美辛、氟比洛芬、苯氧基布洛芬、萘普生、萘丁美酮、吡羅昔康、保泰松、雙氯滅痛、芬洛芬、酮基布洛芬、酮咯酸、四氯芬那酸、舒林酸、托美丁的任一種或其組合。

47、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的抗過(guò)敏劑選自苯海拉明、異丙嗪、氯苯那敏、色甘酸鈉、酮替芬、倍他司汀、孟魯斯特、扎魯斯特、沙丁胺醇、葡萄糖酸鈣、腎上腺糖皮質(zhì)激素的任一種或其組合。

48、本發(fā)明的另一目的在于提供一種注射填充物在制備注射填充劑中的應(yīng)用，所述的填充物為聚己內(nèi)酯微粒，所述聚己內(nèi)酯微粒為球形顆粒，所述球形顆粒的粒徑為20-100μm，所述聚己內(nèi)酯微粒具有粗糙的表面或不光滑的表面。

49、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述注射填充部位選自面部、頸部、腹部、胸部、臀部、大腿、小腿、上臂、下臂的任一種或其組合。

50、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述注射填充劑用于改善患者面部消瘦、脂肪萎縮、面頰下陷、眼窩下陷、皮膚皺紋的任一種或其組合。

51、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述注射填充劑用于制備注射填充面部皺紋的組合物中的應(yīng)用。

52、本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述面部皺紋選自淺至深層鼻唇溝、眉間、前額、眼角的任一種或其組合。

53、除非另有說(shuō)明，本發(fā)明涉及液體與液體之間的百分比時(shí)，所述的百分比為體積/體積百分比；本發(fā)明涉及液體與固體之間的百分比時(shí)，所述百分比為體積/重量百分比；本發(fā)明涉及固體與液體之間的百分比時(shí)，所述百分比為重量/體積百分比；其余為重量/重量百分比。

54、本發(fā)明采用凝膠滲透色譜(gpc)法(中國(guó)藥典2020年版四部通則0514)檢測(cè)聚己內(nèi)酯分子量，如下所示：

55、供試品溶液取本品適量，精密稱(chēng)定，加三氯甲烷溶解并稀釋制成每1ml中約含10mg的溶液，用0.22μm的有機(jī)濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液。

56、對(duì)照品溶液分別取5-6個(gè)不同分子量的聚苯乙烯對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加三氯甲烷溶解并稀釋制成每1ml中各約含對(duì)照品2mg的溶液，溶解，混勻。

57、色譜條件采用凝膠色譜柱(styragel?hr?4e?thf，7.8×300mm或效能相當(dāng)?shù)纳V柱)；流動(dòng)相為三氯甲烷；流速為每分鐘0.7ml；檢測(cè)器為示差折光檢測(cè)器；柱溫為35℃；進(jìn)樣體積10μl。

58、測(cè)定法精密量取供試品溶液及對(duì)照品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。由gpc軟件分別計(jì)算出對(duì)照品溶液的回歸方程與供試品的重均分子量(mw)、數(shù)均分子量(mn)及分子量分布(mw/mn)。

59、本發(fā)明采用電子拉力試驗(yàn)機(jī)測(cè)定推擠力：使用速度30mm/min，停機(jī)力值：250.00n，停機(jī)位移15.0mm。

60、本發(fā)明采用kinexus?pro+流變儀剪切粘度和流變性能。

61、剪切粘度測(cè)試：選擇轉(zhuǎn)子型號(hào)：pu20?l1917?ss，設(shè)置間隙：0.3mm；裝載樣品后，選擇剪切速率掃描程序，設(shè)置溫度為25℃，起始剪切速率為0.01s-1，結(jié)束剪切速率為100.00s-1，掃描時(shí)間為3min，每一個(gè)數(shù)量級(jí)采點(diǎn)數(shù)為20個(gè)。得到剪切速率為1.00s-1時(shí)的剪切粘度。

62、選擇轉(zhuǎn)子型號(hào)：pu20?l1917?ss，設(shè)置間隙：0.3mm。裝載樣品后，選擇頻率表(應(yīng)變控制)，設(shè)置溫度為25℃，起始頻率為10hz，結(jié)束頻率為0.1hz，剪切應(yīng)變0.5％，每一個(gè)數(shù)量級(jí)采點(diǎn)數(shù)為10個(gè)，得到頻率為1hz下的g’和g”。

63、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有下述有益技術(shù)效果：

64、1、本發(fā)明中的聚己內(nèi)酯微球具有粗糙的表面或不光滑的表面，這與揮發(fā)效率等因素相關(guān)，相比光滑的表面，表面粗糙、多孔結(jié)構(gòu)的聚己內(nèi)酯微球具有更高的比表面積，因此增加了與細(xì)胞的接觸面積，提高了細(xì)胞的黏附能力和滯留時(shí)間，改善了聚己內(nèi)酯微球的親和力，可刺激并加快膠原蛋白的生長(zhǎng)，并且降低對(duì)局部皮膚的刺激性。

65、2、本發(fā)明在制備過(guò)程中科學(xué)篩選了各組分的用量，在控制水相溶液粘度的基礎(chǔ)上，配合快速膜乳化法，獲得了規(guī)則的、表面粗糙、粒徑均一的球形聚己內(nèi)酯微粒。

66、3、采用本發(fā)明的制備方法獲得的聚己內(nèi)酯微球粒徑分布范圍窄且粒徑均一，提高了可注射的聚己內(nèi)酯微球的收率。

67、4、本發(fā)明中得到制劑的聚己內(nèi)酯微球粒徑分布均勻、在注射用水中能夠迅速分散均勻，避免了注射時(shí)聚集、堵塞針孔和形成結(jié)節(jié)等缺陷，同時(shí)降低了皮膚出血水腫等刺激性反應(yīng)。

68、5、該制備方法工藝簡(jiǎn)便、易于操作，條件溫和，耗時(shí)短，易實(shí)現(xiàn)放大生產(chǎn)。