本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及grp94蛋白作為遞藥靶點(diǎn)在帕金森病藥物載體構(gòu)建中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、帕金森病(parkinson’s?disease,pd)是世界上第二常見的神經(jīng)退行性疾病，其主要病理特征是黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元死亡，其主要臨床特征是運(yùn)動功能障礙。此外，帕金森病出現(xiàn)臨床癥狀時(shí)，黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元死亡至少在50％以上，紋狀體多巴胺含量減少在70～80％以上。

2、血腦屏障(blood-brain?barrier,bbb)是由致密連接的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和基底膜組成的血漿與腦細(xì)胞之間的屏障，其主要功能是選擇性地通透物質(zhì)，防止?jié)撛诘挠泻ξ镔|(zhì)進(jìn)入大腦，同時(shí)使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)和信號因子正常通過，從而維持腦部穩(wěn)態(tài)環(huán)境。目前，用于帕金森病治療的跨血腦屏障運(yùn)輸機(jī)制主要有：被動運(yùn)輸及擴(kuò)散、載體介導(dǎo)的運(yùn)輸和受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)。其中，被動運(yùn)輸及擴(kuò)散和載體介導(dǎo)的運(yùn)輸對藥物分子結(jié)構(gòu)要求高，而受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)效率高、特異性強(qiáng)，適用于大分子藥物，高效遞藥。

3、目前研究表明，用于帕金森病治療的可介導(dǎo)入腦的bbb受體包括：轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(tfr)、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(lrp1)和煙堿乙酰膽堿受體(α7-nachr)等。然而，通過這些受體介導(dǎo)入腦存在一定的風(fēng)險(xiǎn)，以上可介導(dǎo)穿透bbb受體在正常腦實(shí)質(zhì)區(qū)域也有表達(dá)，如正常神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞中都廣泛存在lrp1、α7-nachr的表達(dá)，這使其缺乏病灶神經(jīng)元靶向性，并導(dǎo)致不必要的顱內(nèi)正常區(qū)域的藥物積累和神經(jīng)毒性。因此，迫切需要發(fā)現(xiàn)僅在血腦屏障和病變細(xì)胞的細(xì)胞膜上表達(dá)的新型藥物遞送靶點(diǎn)，穿透血腦屏障后有效避開正常腦細(xì)胞并到達(dá)腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的病變區(qū)域。

4、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94(glucose-regulated?protein?94,grp94)在腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的膜上表達(dá)，細(xì)菌外膜囊泡包裹的納米粒表面的外膜蛋白a(outer?membrane?proteina，ompa)通過靶向grp94，可以高效地穿過血腦屏障到達(dá)腦實(shí)質(zhì)，進(jìn)行藥物遞送。帕金森病的常見特征之一是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，會造成多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞的grp94表達(dá)上調(diào)，同時(shí)grp94在細(xì)胞膜上表達(dá)增多，靶向grp94可以進(jìn)一步靶向多巴胺能神經(jīng)元，并且不被腦內(nèi)其他正常細(xì)胞，如星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞攝取。

5、然其存在一些不足之處，如，帕金森病作為神經(jīng)退行性疾病，需要長期用藥治療，細(xì)菌外膜囊泡用于長期藥物遞送可能存在安全性問題；同時(shí)，制備細(xì)菌外膜囊泡包裹的納米粒技術(shù)要求高，成本高；ompa作為蛋白質(zhì)大分子，分子量高，合成純化難，難以進(jìn)行轉(zhuǎn)化。因此選取ompa蛋白上的部分氨基酸序列構(gòu)成了grp94靶向多肽n修飾在載體表面，解決了安全性、技術(shù)要求和成本問題。因此，以grp94蛋白為帕金森病靶向遞送的靶點(diǎn)，開發(fā)一種全新的藥物遞送策略對抗帕金森病及其相關(guān)方面的研究具有極為重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供grp94蛋白作為遞藥靶點(diǎn)在帕金森病藥物載體構(gòu)建中的應(yīng)用，即將grp94蛋白作為靶向帕金森病黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的新型遞藥靶點(diǎn)，從而有助于基于靶向grp94的帕金森病黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元靶向遞送策略的設(shè)計(jì)、研發(fā)和應(yīng)用，以避免在顱內(nèi)正常區(qū)域的藥物積累和神經(jīng)毒性。

2、為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

3、本發(fā)明提供了grp94蛋白作為遞藥靶點(diǎn)在帕金森病藥物載體構(gòu)建中的應(yīng)用。

4、進(jìn)一步的，所述grp94蛋白，在帕金森病黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞膜上表達(dá)高度上調(diào)，而在正常腦細(xì)胞表面表達(dá)極低。

5、本發(fā)明提供了grp94蛋白作為遞藥靶點(diǎn)在制備抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)中的應(yīng)用。

6、進(jìn)一步的，所述靶向遞送系統(tǒng)通過靶向grp94蛋白，能將搭載的抗帕金森藥物高效地穿透血腦屏障到達(dá)腦實(shí)質(zhì)，并避開正常腦細(xì)胞，而特異性靶向帕金森病黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞，從而實(shí)現(xiàn)帕金森病靶向遞藥。

7、本發(fā)明提供了一種抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)，包括至少一種遞送載體，所述遞送載體表面修飾有g(shù)rp94蛋白的特異性配體。

8、進(jìn)一步的，采用化學(xué)連接、靜電吸附、膜包裹等技術(shù)，對所述遞送載體表面進(jìn)行g(shù)rp94蛋白的特異性配體修飾。

9、進(jìn)一步的，所述grp94蛋白的特異性配體包括：

10、序列為ngpthe的grp94靶向多肽；

11、序列為gsven的grp94靶向多肽；

12、包含grp94靶向多肽序列或者grp94靶向多肽序列的其它多肽；

13、在grp94靶向多肽(n)序列或者grp94靶向多肽(g)序列基礎(chǔ)上增加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸，或減少一個(gè)或幾個(gè)氨基酸，或替換其中任意一個(gè)或幾個(gè)氨基酸后得到的多肽；

14、grp94抗體；

15、靶向肽ompa；

16、或納米粒表面包裹grp94靶向性的大腸桿菌k1和大腸桿菌dh5ɑ外膜。

17、進(jìn)一步的，所述遞送載體為包括脂質(zhì)體載體、高分子聚合物載體、納米顆粒載體、外泌體等納米載體。

18、本發(fā)明提供了上述抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)在帕金森病靶向遞藥中的應(yīng)用。

19、本發(fā)明提供了grp94蛋白作為遞藥靶點(diǎn)在制備抗帕金森病藥物中的應(yīng)用。

20、相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：

21、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)帕金森病細(xì)胞和小鼠模型中黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞表面grp94表達(dá)上調(diào)，而腦內(nèi)正常腦細(xì)胞表面grp94表達(dá)極低，證明了grp94蛋白可作為帕金森病的新型遞藥靶點(diǎn)，可特異性靶向黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞，從而有望將grp94蛋白作為新靶點(diǎn)，用于帕金森病靶向藥物遞送策略的設(shè)計(jì)、研發(fā)和應(yīng)用。

22、本發(fā)明將grp94蛋白作為遞藥靶點(diǎn)，應(yīng)用于帕金森病藥物載體構(gòu)建及制備抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)中，相較于其他跨越血腦屏障用于腦靶向遞送的靶點(diǎn)受體，靶向grp94更加特異性地靶向黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元。由于grp94蛋白僅在血腦屏障和患病的黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞表面表達(dá)，使得本發(fā)明的遞送系統(tǒng)通過靶向grp94可穿透血腦屏障、蓄積在帕金森病變區(qū)域，因此避免在顱內(nèi)正常區(qū)域的藥物積累和神經(jīng)毒性。

23、上述說明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解發(fā)明的技術(shù)手段，并可依照說明書的內(nèi)容予以實(shí)施，以下以本發(fā)明的較佳實(shí)施例并配合附圖詳細(xì)說明如后。本發(fā)明的具體實(shí)施方式由以下實(shí)施例及其附圖詳細(xì)給出。

技術(shù)特征：

1.grp94蛋白作為遞藥靶點(diǎn)在帕金森病藥物載體構(gòu)建中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述grp94蛋白，在帕金森病黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞膜上表達(dá)高度上調(diào)，而在正常腦細(xì)胞表面表達(dá)極低。

3.grp94蛋白作為遞藥靶點(diǎn)在制備抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述靶向遞送系統(tǒng)通過靶向grp94蛋白，能將搭載的抗帕金森藥物高效地穿透血腦屏障到達(dá)腦實(shí)質(zhì)，并避開正常腦細(xì)胞，而特異性靶向帕金森病黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞，從而實(shí)現(xiàn)帕金森病靶向遞藥。

5.一種抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)，其特征在于，包括至少一種遞送載體，所述遞送載體表面修飾有g(shù)rp94蛋白的特異性配體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)，其特征在于，采用包括化學(xué)連接、靜電吸附、膜包裹在內(nèi)的技術(shù)，對所述遞送載體表面進(jìn)行g(shù)rp94蛋白的特異性配體修飾。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述grp94蛋白的特異性配體包括：

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述遞送載體為包括脂質(zhì)體載體、高分子聚合物載體、納米顆粒載體、外泌體在內(nèi)的納米載體。

9.如權(quán)利要求5-8中任意一項(xiàng)所述的抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)在帕金森病靶向遞藥中的應(yīng)用。

10.grp94蛋白作為遞藥靶點(diǎn)在制備抗帕金森病藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了GRP94蛋白作為遞藥靶點(diǎn)在帕金森病藥物載體構(gòu)建中的應(yīng)用，GRP94在帕金森病黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞膜上表達(dá)高度上調(diào)，而在正常腦細(xì)胞表面表達(dá)極低。GRP94作為靶點(diǎn)在制備抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)中的應(yīng)用。通過靶向GRP94，能將搭載的抗帕金森藥物高效穿透血腦屏障到達(dá)腦實(shí)質(zhì)，避開正常腦細(xì)胞，特異性靶向帕金森病黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)帕金森病靶向遞藥。本發(fā)明將GRP94作為靶點(diǎn)應(yīng)用于帕金森病藥物載體構(gòu)建及制備抗帕金森病藥物的靶向遞送系統(tǒng)中，相較于其他跨越血腦屏障用于腦靶向遞送的靶點(diǎn)受體，靶向GRP94更加特異性地靶向黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元，避免在顱內(nèi)正常區(qū)域的藥物積累和神經(jīng)毒性。

技術(shù)研發(fā)人員：韓亮,曾宇騰,呂紫巖
受保護(hù)的技術(shù)使用者：蘇州大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6