本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及利用大環(huán)類化合物制備抗體-藥物偶聯(lián)物的方法。

背景技術(shù)：

1、抗體-藥物偶聯(lián)物(antibody?drug?conjugate，adc)由與在靶細(xì)胞表面表達(dá)、且能向細(xì)胞內(nèi)化的抗原結(jié)合的抗體上連接具有細(xì)胞毒性的藥物得到，包含抗體、連接子和細(xì)胞毒性藥物。其中，抗體部分將抗體-藥物偶聯(lián)物精準(zhǔn)遞送至靶細(xì)胞表面，連接子部分負(fù)責(zé)在靶細(xì)胞內(nèi)或表面釋放細(xì)胞毒性藥物，且在血液循環(huán)系統(tǒng)中保持穩(wěn)定，從而促進(jìn)釋放的細(xì)胞毒性藥物在靶細(xì)胞內(nèi)蓄積，并殺死靶細(xì)胞。因其在多個適應(yīng)癥上展現(xiàn)出卓越的臨床特性，當(dāng)前adc已成為腫瘤學(xué)領(lǐng)域的關(guān)鍵治療方式，未來市場規(guī)模預(yù)計將持續(xù)增長。

2、在現(xiàn)有用于制備抗體偶聯(lián)藥物的方法中，通常需采用大量有機(jī)溶劑(含量可高達(dá)20vol％)以使連接子-藥物在反應(yīng)體系中更好地溶解。而大量的有機(jī)溶劑的引入會使后續(xù)的純化變得困難，例如：溶解半透膜，使蛋白質(zhì)在填料表面的吸附變得困難等。生產(chǎn)上可以稀釋反應(yīng)液以使有機(jī)溶劑水平回歸至純化設(shè)備可以耐受的范圍之內(nèi)，但這意味著純化設(shè)備需要處理的液體量大幅增加，對應(yīng)的廢液量將以同樣的幅度增加以滿足純化效果。此外，使用部分連接子-藥物進(jìn)行偶聯(lián)時，高含量有機(jī)溶劑通常會導(dǎo)致所得混合物中的d6比例較高，對產(chǎn)品質(zhì)量有較大影響。

3、因此，希望能提供一種改進(jìn)的抗體-藥物偶聯(lián)物的制備方法，在降低有機(jī)溶劑用量而提高生產(chǎn)效率的同時，改善生產(chǎn)所需抗體-藥物偶聯(lián)物的同質(zhì)性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明人通過長期探索實(shí)踐，提出了一種制備抗體-藥物偶聯(lián)物的方法，其能夠大幅降低生產(chǎn)過程中的有機(jī)溶劑用量，改善生產(chǎn)所需抗體-藥物偶聯(lián)物的同質(zhì)性，生產(chǎn)過程經(jīng)濟(jì)高效、環(huán)境友好。

2、本文在一個方面中提供一種抗體-藥物偶聯(lián)物的制備方法，包括：

3、(a)在過渡金屬離子存在的情況下，用還原劑處理抗體；和

4、(b)在大環(huán)類化合物存在的情況下，使連接子-藥物中間體與步驟(a)中獲得的經(jīng)還原的抗體偶聯(lián)。

5、本文在另一個方面中提供大環(huán)類化合物用于改善生產(chǎn)的抗體-藥物偶聯(lián)物的同質(zhì)性的用途。

6、本文在另一個方面中提供大環(huán)類化合物用于通過降低抗體-藥物偶聯(lián)物的生產(chǎn)過程中的有機(jī)溶劑用量以提高生產(chǎn)效率的用途。

技術(shù)特征：

1.一種抗體-藥物偶聯(lián)物的制備方法，包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在步驟(b)之后，所述方法進(jìn)一步包括：(c)添加有效量的氧化劑，以使步驟(b)中未反應(yīng)的巰基再氧化；更具體地，所述氧化劑選自下組：5,5'-二硫代雙-2-硝基苯甲酸、4,4'-二硫代二吡啶、2,2'-二硫代二吡啶、連四硫酸鈉、脫氫抗壞血酸(dhaa)，及其組合；具體地，氧化劑選自dhaa。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體選自單克隆抗體、多克隆抗體，及其組合。

4.根據(jù)權(quán)利要3所述的方法，其中所述抗體是igg1或igg4亞型；具體地，所述抗體選自：曲妥珠單抗、利妥昔單抗、達(dá)雷妥尤單抗、西妥昔單抗，及其組合。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述過渡金屬離子選自下組：zn2+、cd2+、hg2+、mn2+、ni2+、fe2+、fe3+、cu2+，及其組合；更具體地，選自zn2+。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中步驟(a)在緩沖體系中進(jìn)行；具體地，所述緩沖體系選自下組：n-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸緩沖體系(taps)、n,n-雙(2-羥乙基)甘氨酸緩沖體系(bicine)、三羥甲基氨基甲烷緩沖體系(tris)、n-三(羥甲基)甲基甘氨酸緩沖體系(tricine)、n-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸緩沖體系(tes)、3-(n-嗎啉基)丙磺酸緩沖體系(mops)、哌嗪-1,4-二乙磺酸緩沖體系(pipes)、組氨酸緩沖體系、磷酸鹽緩沖體系(pbs)、硼酸鹽緩沖體系(bbs)、乙酸鹽緩沖體系(tae)、(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸)緩沖體系(hepes)，及其組合；更具體地，磷酸鹽緩沖體系(pbs)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述還原劑選自下組：三(2-羧乙基)膦(tcep)或其鹽、二硫蘇糖醇(dtt)、2-巰基乙醇(2-me)、三(3-羥丙基)膦(thpp)、2-二苯基膦基苯磺酸(dippbs)、二硫赤蘚醇(dte)、lialh4、na2s2o3、kbh4、肼，及其組合；具體地，選自三(2-羧乙基)膦或其鹽。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述大環(huán)類化合物包括：卟啉、冠醚、柱芳烴、環(huán)糊精、杯芳烴及其組合；具體地，所述大環(huán)類化合物是環(huán)糊精類化合物；更具體地，所述環(huán)糊精類化合物選自α-環(huán)糊精、羥丙基-α-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、羥丙基-γ-環(huán)糊精，及其組合。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述環(huán)糊精類化合物與抗體的摩爾比為約10:1-1000:1，具體地為約20:1-1000:2，更具體地為約30:1-1000:3。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(a)在-10℃至37℃的溫度范圍和ph5至9進(jìn)行；進(jìn)一步地，步驟(b)在-10℃至37℃的溫度范圍進(jìn)行，持續(xù)0.5-2小時。

技術(shù)總結(jié)
本文提供一種抗體?藥物偶聯(lián)物的制備方法，包括：(a)在過渡金屬離子存在的情況下，用還原劑處理抗體；和(b)在大環(huán)類化合物存在的情況下，使連接子?藥物中間體與步驟(a)中獲得的經(jīng)還原的抗體偶聯(lián)。

技術(shù)研發(fā)人員：王澤坤,毛威芃,李雨鑫,原玉潔,范啟睿
受保護(hù)的技術(shù)使用者：上海藥明合聯(lián)生物技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2