本發(fā)明涉及膝關(guān)節(jié)軟骨退變抑制，具體為一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、膝關(guān)節(jié)軟骨退變是一種年齡相關(guān)性疾病，目前尚無(wú)有效的徹底治療方案，只能通過(guò)藥物緩解臨床癥狀。其發(fā)病機(jī)制與多種因素相關(guān)，如關(guān)節(jié)負(fù)荷、創(chuàng)傷等。在退變的關(guān)節(jié)軟骨組織中，可以觀察到軟骨細(xì)胞活性下降或死亡，以及細(xì)胞外基質(zhì)中膠原蛋白的含量下降。

2、鐵死亡是一種新型的細(xì)胞死亡方式，參與推動(dòng)多種疾病。其機(jī)制主要是在二價(jià)鐵和酯氧合酶的作用下，細(xì)胞內(nèi)的ros催化氧化細(xì)胞膜上高表達(dá)的不飽和脂肪酸，使其發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化并以脂質(zhì)ros的形式蓄積，從而誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。此外，還表現(xiàn)為抗氧化體系(谷胱甘肽系統(tǒng))的調(diào)控核心酶gpx4的表達(dá)降低。對(duì)以上靶點(diǎn)的調(diào)控可以促進(jìn)或抑制鐵死亡的發(fā)生，但是既往的基礎(chǔ)研究往往僅關(guān)注其中某一靶點(diǎn)，而缺少整體性的視角。通過(guò)同時(shí)調(diào)控多靶點(diǎn)抑制鐵死亡，能通過(guò)協(xié)同作用更好地實(shí)現(xiàn)療效并降低耐藥性。

3、現(xiàn)在有研究證據(jù)表明，軟骨細(xì)胞鐵死亡是膝關(guān)節(jié)軟骨退變中的重要表型，在軟骨退變時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的ros發(fā)生病理性上調(diào)，軟骨細(xì)胞的鐵死亡敏感性會(huì)顯著上升，此外，為了能夠選擇性地在退變細(xì)胞中釋放，特定環(huán)境下的響應(yīng)釋放應(yīng)當(dāng)被考慮。目前臨床上暫時(shí)未有通過(guò)抑制鐵死亡治療膝關(guān)節(jié)軟骨病變的藥物，因此提出了一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法，解決了上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

2、為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子，所述納米粒子為ce@dtp?nps，通過(guò)組裝地拉羅司、氯化鈰和紫檀芪得到。

3、一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子的制備方法，包括以下步驟：

4、步驟一：紫檀芪與ros響應(yīng)鍵的連接：將40μmol(10mg)紫檀芪溶解在1ml二氯甲烷(dcm)中，在溶液中加入過(guò)量氯甲酸酯和二異丙基乙胺(dipea)，將2,2'-(丙烷-2,2-二基雙(硫二基))二乙醇加入dcm混合溶液中，在室溫下攪拌一定時(shí)間，然后加入三乙胺(tea)，進(jìn)行反應(yīng)，形成連接產(chǎn)物；

5、步驟二：地拉羅司的引入：將40umol(15mg)地拉羅司溶解在dcm中，加入氨基保護(hù)劑n-boc-乙二胺、edci、n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)和tea，在室溫下反應(yīng)一段時(shí)間，使用三氟乙酸(tfa)進(jìn)行脫保護(hù)，得到地拉羅司的活性形式；

6、步驟三：再使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)掉dcm，留下納米顆粒懸浮液，將懸浮液在離心機(jī)中離心以收集納米顆粒，重復(fù)洗滌工序3次，以去除多余的pva；

7、步驟四：收集洗滌后的納米顆粒，進(jìn)行凍干或室溫干燥，準(zhǔn)備10mm氯化鈰(cecl3)溶液，使用超純水溶解，將干燥后的納米顆粒重新懸浮在氯化鈰溶液中，在室溫下攪拌一段時(shí)間；

8、步驟五：將孵育后的懸浮液在離心機(jī)中離心，移除上清液，用超純水洗滌納米顆粒3次，以去除未結(jié)合的鈰離子，再次收集洗滌后的納米顆粒，進(jìn)行干燥。

9、可選的，所述步驟二：地拉羅司的引入：將40umol(15mg)地拉羅司溶解在dcm中，加入氨基保護(hù)劑n-boc-乙二胺、edci、n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)和tea，在室溫下反應(yīng)一段時(shí)間，使用三氟乙酸(tfa)進(jìn)行脫保護(hù)，得到地拉羅司的活性形式的流程中混合液在室溫下反應(yīng)12—16小時(shí)。

10、可選的，所述步驟一：紫檀芪與ros響應(yīng)鍵的連接：將40μmol(10mg)紫檀芪溶解在1ml二氯甲烷(dcm)中，在溶液中加入過(guò)量氯甲酸酯和二異丙基乙胺(dipea)，將2,2'-(丙烷-2,2-二基雙(硫二基))二乙醇加入dcm混合溶液中，在室溫下攪拌一定時(shí)間，然后加入三乙胺(tea)，進(jìn)行反應(yīng)，形成連接產(chǎn)物的流程中室溫下攪拌反應(yīng)的時(shí)間為4—6小時(shí)。

11、可選的，所述步驟四：收集洗滌后的納米顆粒，進(jìn)行凍干或室溫干燥，準(zhǔn)備10mm氯化鈰(cecl3)溶液，使用超純水溶解，將干燥后的納米顆粒重新懸浮在氯化鈰溶液中，在室溫下攪拌一段時(shí)間的流程中在室溫下輕微攪拌2—4小時(shí)。

12、可選的，所述步驟五：將孵育后的懸浮液在離心機(jī)中離心，移除上清液，用超純水洗滌納米顆粒3次，以去除未結(jié)合的鈰離子，再次收集洗滌后的納米顆粒，進(jìn)行干燥的流程中孵育后的懸浮液在離心機(jī)中在10000rpm參數(shù)下離心10分鐘。

13、可選的，所述步驟五：將孵育后的懸浮液在離心機(jī)中離心，移除上清液，用超純水洗滌納米顆粒3次，以去除未結(jié)合的鈰離子，再次收集洗滌后的納米顆粒，進(jìn)行干燥的流程中對(duì)洗滌后的納米顆粒干燥有兩種方式，兩種方式為凍干和室溫干燥。

14、本發(fā)明提供了一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法，具備以下有益效果：

15、該治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法，將納米粒子應(yīng)用在治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變中減低了藥物毒性和單一性，減少耐藥可能性，納米粒子可以在特定組織內(nèi)實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞鐵死亡的抑制，使用納米粒子可以促進(jìn)軟骨細(xì)胞的和修復(fù)，糾正細(xì)胞外基質(zhì)的代謝失衡，納米粒子具備ros響應(yīng)功能，能夠在特定環(huán)境下實(shí)現(xiàn)條件釋放，在納米粒子經(jīng)反復(fù)凍融后仍能保持其功能，在儲(chǔ)存、運(yùn)輸和使用方面具有優(yōu)勢(shì)。

技術(shù)特征：

1.一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子，其特征在于：所述納米粒子為ce@dtp?nps，通過(guò)組裝地拉羅司、氯化鈰和紫檀芪得到。

2.一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法，其特征在于：所述步驟二：地拉羅司的引入：將40umol(15mg)地拉羅司溶解在dcm中，加入氨基保護(hù)劑n-boc-乙二胺、edci、n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)和tea，在室溫下反應(yīng)一段時(shí)間，使用三氟乙酸(tfa)進(jìn)行脫保護(hù)，得到地拉羅司的活性形式的流程中混合液在室溫下反應(yīng)12—16小時(shí)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法，其特征在于：所述步驟一：紫檀芪與ros響應(yīng)鍵的連接：將40μmol(10mg)紫檀芪溶解在1ml二氯甲烷(dcm)中，在溶液中加入過(guò)量氯甲酸酯和二異丙基乙胺(dipea)，將2,2'-(丙烷-2,2-二基雙(硫二基))二乙醇加入dcm混合溶液中，在室溫下攪拌一定時(shí)間，然后加入三乙胺(tea)，進(jìn)行反應(yīng)，形成連接產(chǎn)物的流程中室溫下攪拌反應(yīng)的時(shí)間為4—6小時(shí)。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法，其特征在于：所述步驟四：收集洗滌后的納米顆粒，進(jìn)行凍干或室溫干燥，準(zhǔn)備10mm氯化鈰(cecl3)溶液，使用超純水溶解，將干燥后的納米顆粒重新懸浮在氯化鈰溶液中，在室溫下攪拌一段時(shí)間的流程中在室溫下輕微攪拌2—4小時(shí)。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法，其特征在于：所述步驟五：將孵育后的懸浮液在離心機(jī)中離心，移除上清液，用超純水洗滌納米顆粒3次，以去除未結(jié)合的鈰離子，再次收集洗滌后的納米顆粒，進(jìn)行干燥的流程中孵育后的懸浮液在離心機(jī)中在10000rpm參數(shù)下離心10分鐘。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法，其特征在于：所述步驟五：將孵育后的懸浮液在離心機(jī)中離心，移除上清液，用超純水洗滌納米顆粒3次，以去除未結(jié)合的鈰離子，再次收集洗滌后的納米顆粒，進(jìn)行干燥的流程中對(duì)洗滌后的納米顆粒干燥有兩種方式，兩種方式為凍干和室溫干燥。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法，涉及膝關(guān)節(jié)軟骨退變抑制技術(shù)領(lǐng)域，所述納米粒子為Ce@DTP?NPs，通過(guò)組裝地拉羅司、氯化鈰和紫檀芪得到，該治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變的納米粒子及其制備方法，將納米粒子應(yīng)用在治療膝關(guān)節(jié)軟骨退變中減低了藥物毒性和單一性，減少耐藥可能性，納米粒子可以在特定組織內(nèi)實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞鐵死亡的抑制，使用納米粒子可以促進(jìn)軟骨細(xì)胞的和修復(fù)，糾正細(xì)胞外基質(zhì)的代謝失衡，納米粒子具備ROS響應(yīng)功能，能夠在特定環(huán)境下實(shí)現(xiàn)條件釋放，在納米粒子經(jīng)反復(fù)凍融后仍能保持其功能，在儲(chǔ)存、運(yùn)輸和使用方面具有優(yōu)勢(shì)。

技術(shù)研發(fā)人員：王棟,潘浩,戚維輝,金紅婷
受保護(hù)的技術(shù)使用者：杭州市中醫(yī)院（浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬杭州市中醫(yī)院）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30