本發(fā)明涉及納米生物醫(yī)藥，具體涉及一種肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基plga納米載藥粒子及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、在癌癥治療的不斷探索與實(shí)踐中，傳統(tǒng)化療方法雖然在一定程度上能夠抑制腫瘤生長，但其全身性分布導(dǎo)致的嚴(yán)重毒副作用及耐藥性問題一直是亟待解決的難題。

2、納米載藥技術(shù)通過構(gòu)建具有特定功能的納米粒子，實(shí)現(xiàn)藥物的靶向遞送與控釋，從而顯著提高藥物的療效并降低副作用。然而，單一的治療手段往往難以完全滿足復(fù)雜多變的腫瘤治療需求。光熱治療作為一種非侵入性的物理治療方法，利用腫瘤組織與正常組織對溫度敏感性及耐受力的差異，通過激光照射將腫瘤部位加熱至一定溫度并維持一段時間，實(shí)現(xiàn)殺死腫瘤細(xì)胞而不損傷正常組織的目的。將納米載藥技術(shù)與光熱治療相結(jié)合，不僅能夠?qū)崿F(xiàn)藥物的精準(zhǔn)靶向遞送，還能通過光熱效應(yīng)進(jìn)一步增強(qiáng)治療效果，形成協(xié)同作用。

3、然而，現(xiàn)有的納米載藥協(xié)同光熱治療體系仍存在一些不足。比如，納米載藥粒子(nps)在體內(nèi)滯留時間較長，可能導(dǎo)致其在體內(nèi)積累并產(chǎn)生潛在的毒性；缺乏對腫瘤部位的特異性，可能導(dǎo)致對腫瘤周圍正常組織的熱損傷等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于以上說明，本發(fā)明提供了一種肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基plga納米載藥粒子及其制備方法與應(yīng)用。

2、第一方面，本發(fā)明提供了一種肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基plga納米載藥粒子，所述納米載藥粒子包括載藥內(nèi)核和包覆于內(nèi)核外部的肺癌細(xì)胞膜。

3、優(yōu)選地，所述載藥內(nèi)核結(jié)構(gòu)依次包括核內(nèi)層和核中間層；所述核內(nèi)層為化療藥物順鉑，核中間層為具有良好生物相容性的plga，所述plga外表面修飾有貴金屬，其中貴金屬為金、釕、鉑中的一種或兩種。

4、第二方面，本發(fā)明提供了一種肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基plga納米載藥粒子的制備方法，所述制備方法包括：

5、(一)利用乳液溶劑蒸發(fā)法制備負(fù)載cis的plga的plga?nps(cis@plga?nps)。

6、(二)貴金屬(pm)表面修飾hs-peg-nh2(pm-peg)。

7、(三)酰胺反應(yīng)偶聯(lián)cis@plga?nps與pm-peg，制備cis@plga-peg-pm?nps。

8、(四)肺癌細(xì)胞膜包覆貴金屬修飾的cis@plga?nps納米載藥粒子(lcm@cis@plga-peg-pm?nps)。

9、進(jìn)一步的，步驟(一)中所述利用乳液溶劑蒸發(fā)法制備負(fù)載cis的plga?nps(cis@plga?nps)的制備方法具體包括：將藥物順鉑cis和plga以質(zhì)量比50：50的比例溶解在10ml氯仿中，形成均勻的有機(jī)相溶液；然后加入20ml的2％聚乙烯醇，作為穩(wěn)定劑的水相溶液；在有機(jī)相和水相相互飽和后，使用250w的超聲波將混合物乳化10分鐘，蒸發(fā)有機(jī)溶劑，在20000rpm轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，最終純化出負(fù)載cis的plga?nps(cis@plga?nps)。

10、進(jìn)一步的，步驟(一)中所述plga為羧基功能化修飾的plga，其分子量為80000。

11、進(jìn)一步的，步驟(二)中所述貴金屬表面修飾hs-peg-nh2(pm-peg)方法具體包括：配制100mm的貴金屬鹽溶液和100mm的hs-peg-nh2溶液，調(diào)節(jié)反應(yīng)溶液的ph為弱堿性條件；然后在攪拌狀態(tài)下，向貴金屬鹽溶液中緩慢加入還原劑硼氫化鈉(nabh4，10mm)，在4℃條件下以16000g的速度離心10min，并洗滌2次，制得pm-peg。

12、進(jìn)一步的，步驟(二)中所述貴金屬鹽離子為au3+、ru3+、pt4+中的一種或兩種；所述貴金屬鹽、hs-peg-nh2和nabh4反應(yīng)摩爾比為1：(3-4)：(3-4)。

13、進(jìn)一步的，步驟(三)中所述酰胺反應(yīng)偶聯(lián)方法具體包括：將cis@plga?nps分散在30％乙醇溶液中，加入edc-nhs?；呋瘎?5mm，edc和nhs以摩爾比1:1.2的比例混合使用)，攪拌反應(yīng)30分鐘，使cis@plga?nps表面的羧基活化。隨后，按摩爾比1:1的比例加入步驟(二)制備的pm-peg，攪拌20分鐘，使plga?nps表面的活化羧基與pm-peg上的氨基發(fā)生酰胺化反應(yīng)，形成酰胺鍵，制得cis@plga-peg-pm?nps。

14、進(jìn)一步的，步驟(四)所述肺癌細(xì)胞膜包覆貴金屬修飾的cis@plga?nps納米載藥粒子方法具體包括：取對數(shù)期生長的a549肺癌細(xì)胞，采用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下，500g離心收集細(xì)胞，用等滲預(yù)冷的pbs洗滌，離心后，棄上清，加入低滲溶液冰浴20分鐘，將冰浴后的細(xì)胞溶液在室溫與液氮中反復(fù)凍融，直到細(xì)胞完全破碎，隨后，500g離心得到上清液，15000g離心得到沉淀即為細(xì)胞膜碎片，隨后經(jīng)超聲細(xì)胞破碎儀冰浴超聲處理得到分散均勻的納米級細(xì)胞膜碎片。然后將貴金屬修飾的cis@plga?nps納米載藥粒子與肺癌細(xì)胞膜碎片按照質(zhì)量比1：3的比例渦旋混合均勻，靜置30分鐘，隨后按照孔徑由大到小經(jīng)過0.75μm，0.45μm和0.22μm濾膜分別過濾3～5次，得到肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基plga納米載藥粒子。

15、第三方面，本發(fā)明提供了一種如第一方面所述的肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基plga納米載藥粒子在肺癌治療中的應(yīng)用。

16、本發(fā)明納米載藥粒子作用機(jī)制：藥物順鉑被封裝在具有生物相容性和可生物降解的plga中形成納米粒子(nps)，并在這些nps上修飾了貴金屬原子。由于這些nps是近紅外共振的，而plga是生物可降解的，因此在近紅外輻照時會產(chǎn)生熱量，加速plga?nps水解，使得負(fù)載在plga?nps中的藥物順鉑從內(nèi)部暴露并釋放出來，化學(xué)-光熱治療表現(xiàn)出明顯的協(xié)同效應(yīng)。

17、本發(fā)明的有益效果：

18、首先，用癌細(xì)胞膜偽裝納米粒子，可以主動感知并靶向腫瘤細(xì)胞，減輕免疫系統(tǒng)的清除效應(yīng)。其次，通過將藥物封裝在生物相容性良好的plga內(nèi)，減少了藥物在血液循環(huán)中的提前釋放，降低了對正常組織的非特異性毒性。另外，由于貴金屬材料(金、釕、鉑)具有優(yōu)越的光熱轉(zhuǎn)換性能，能夠高效地將光能轉(zhuǎn)化為熱能，局部升溫不僅促進(jìn)了plga基質(zhì)的降解，還加速了順鉑藥物的釋放。結(jié)合化學(xué)治療(順鉑的細(xì)胞毒性作用)與光熱治療(nir誘導(dǎo)的局部高溫殺傷癌細(xì)胞)的雙重機(jī)制，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同效應(yīng)。

技術(shù)特征：

1.一種肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基plga納米載藥粒子，其特征在于：包括載藥內(nèi)核和包覆于內(nèi)核外部的肺癌細(xì)胞膜；其中，所述載藥內(nèi)核結(jié)構(gòu)依次包括核內(nèi)層和核中間層；所述核內(nèi)層為化療藥物順鉑，核中間層為plga，所述plga外表面修飾有貴金屬，其中貴金屬為金、釕、鉑中的一種或兩種。

2.一種肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基plga納米載藥粒子的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的納米載藥粒子制備方法，其特征在于，步驟s1所述所述plga為羧基功能化修飾的plga，其分子量為80000。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的納米載藥粒子制備方法，其特征在于，步驟s2所述反應(yīng)溶液ph為7.4。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的納米載藥粒子制備方法，其特征在于，步驟s2所述貴金屬鹽離子為au3+、ru3+、pt4+中的一種或兩種；所述貴金屬鹽、hs-peg-nh2和nabh4反應(yīng)摩爾比為1：(3-4)：(3-4)。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的納米載藥粒子制備方法，其特征在于，步驟s3所述酰胺反應(yīng)偶聯(lián)方法具體包括：將edc和nhs以摩爾比1:1.2的比例混合，配制成5mm的edc-nhs?；呋瘎缓髮is@plga?nps分散在30％乙醇溶液中，加入edc-nhs酰化催化劑，攪拌反應(yīng)30分鐘，使cis@plganps表面的羧基活化；隨后，按一定比例加入步驟s2制備的pm-peg，攪拌20分鐘，使plganps表面的活化羧基與pm-peg上的氨基發(fā)生酰胺化反應(yīng)，形成酰胺鍵，制得cis@plga-peg-pm?nps。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的納米載藥粒子制備方法，其特征在于，所述cis@plganps與pm-peg反應(yīng)摩爾比為1:1。

8.根據(jù)權(quán)利所述要求2所述的納米載藥粒子制備方法，其特征在于，步驟s4所述肺癌細(xì)胞膜包覆貴金屬修飾的cis@plga?nps納米載藥粒子方法具體包括：取對數(shù)期生長的a549肺癌細(xì)胞，采用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下，500g離心收集細(xì)胞，用等滲預(yù)冷的pbs洗滌，離心后，棄上清，加入低滲溶液冰浴20分鐘，將冰浴后的細(xì)胞溶液在室溫與液氮中反復(fù)凍融，直到細(xì)胞完全破碎，隨后，500g離心得到上清液，15000g離心得到沉淀即為細(xì)胞膜碎片，隨后經(jīng)超聲細(xì)胞破碎儀冰浴超聲處理得到分散均勻的納米級細(xì)胞膜碎片。然后將貴金屬修飾的cis@plga?nps納米載藥粒子與肺癌細(xì)胞膜碎片按照質(zhì)量比1：3的比例渦旋混合均勻，靜置30分鐘，隨后按照孔徑由大到小經(jīng)過0.75μm，0.45μm和0.22μm濾膜分別過濾3～5次，得到肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基plga納米載藥粒子。

9.一種如權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基plga納米載藥粒子在制備肺癌治療藥物方面的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述應(yīng)用，其特征在于，基于貴金屬基的近紅外的光熱療法與順鉑化療相結(jié)合，化學(xué)-光熱治療表現(xiàn)出明顯的協(xié)同效應(yīng)。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基PLGA納米載藥粒子，包括載藥內(nèi)核和包覆于內(nèi)核外部的肺癌細(xì)胞膜，其中載藥內(nèi)核結(jié)構(gòu)依次包括核內(nèi)層和核中間層，核內(nèi)層為化療藥物順鉑，核中間層為具有良好生物相容性的PLGA，所述PLGA外表面修飾有貴金屬，其中貴金屬為金、釕、鉑中的一種或兩種。本發(fā)明還公開了上述肺癌細(xì)胞膜仿生靶向貴金屬基PLGA納米載藥粒子的制備方法。該納米載藥粒子及其制備方法，能有效靶向腫瘤細(xì)胞并在近紅外輻照下產(chǎn)生熱量，負(fù)載在PLGA?NPs中的藥物順鉑會從內(nèi)部暴露并釋放出來，起到化療?光熱協(xié)同治療的效果。

技術(shù)研發(fā)人員：陳恩國,陳如如
受保護(hù)的技術(shù)使用者：洛兮基因科技（杭州）有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30