本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，本技術(shù)要求2023年06月30日提交的第cn202310794503.x號(hào)中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)，所述申請(qǐng)以引用的方式整體并入本文。具體涉及一種聯(lián)合用藥的抗腫瘤組合物、抗腫瘤組合產(chǎn)品及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、原發(fā)性肝癌(primary?liver?cancer，plc)在我國(guó)目前常見(jiàn)的惡性腫瘤中，發(fā)病率排第四位，死亡率排第二位，其治療方案有限、藥物有效反應(yīng)率低，患者死亡率高。雖然靶向藥物在肝癌中表現(xiàn)出良好的藥效，但是通常僅對(duì)部分患者有效，缺乏肝癌的精準(zhǔn)診療方案已成為瓶頸難題。

2、侖伐替尼(lenvatinib)是原發(fā)性肝癌臨床中常用的一線藥物，侖伐替尼是一種酪氨酸激酶(rtk)受體抑制劑，可抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vegf)受體vegfr1(flt1)、vegfr2(kdr)和vegfr3(flt4)等的激酶活性。還能夠抑制其他腫瘤病理性血管生成，抑制腫瘤生長(zhǎng)和病情進(jìn)展。適用于不可切除的中國(guó)肝癌分期方案(china?liver?cancer?staging，cnlc)中iib、iiia、iiib期及肝功能child-pugh?a級(jí)的肝癌病人。2018年美國(guó)國(guó)家癌癥綜合網(wǎng)絡(luò)(nccn)、歐洲腫瘤內(nèi)科學(xué)會(huì)(esmo)、歐洲肝臟研究學(xué)會(huì)(easl)、中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)(csco)等指南推薦侖伐替尼作為晚期肝細(xì)胞癌一線標(biāo)準(zhǔn)治療藥物。侖伐替尼治療原發(fā)性肝癌的臨床有效率為24.1％，在大部分患者中并不適用，因此，亟需形成侖伐替尼有效的聯(lián)合用藥方案，來(lái)增強(qiáng)侖伐替尼的腫瘤殺傷效果。

3、藜蘆胺(veratramine)是從百合科植物如黎蘆屬植物中分離出來(lái)的一種已知的天然甾體生物堿，具有降低血壓、拮抗na+通道活性和5-ht激動(dòng)劑的功效。藜蘆胺也是轉(zhuǎn)錄因子ap-1的抑制劑，可以特異地結(jié)合在序列(tre?5′-tgactca-3′)上，抑制ap-1對(duì)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄。在正常生理?xiàng)l件下，ap-1通過(guò)調(diào)控下游一系列的靶基因，調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化和凋亡。而ap-1的過(guò)度激活，可以導(dǎo)致腫瘤形成、炎癥和感染。c-jun蛋白是屬于活化蛋白-1(ap-1)轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中的一種,是ap-1復(fù)合物中最具有轉(zhuǎn)錄活性的轉(zhuǎn)錄因子。藜蘆胺對(duì)c-jun的活性起到很好的抑制作用，可以抑制其下游靶基因的轉(zhuǎn)錄。

4、黎蘆胺目前的抗腫瘤研究現(xiàn)狀：黎蘆胺阻斷ap-1的轉(zhuǎn)錄作用后，可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，阻斷細(xì)胞周期g0/g1期抑制細(xì)胞增殖，在肝癌細(xì)胞系中起到一定的腫瘤抑制作用。然而，藜蘆胺作為一種中藥，其聯(lián)合用藥方案有限，藜蘆胺也未應(yīng)用到腫瘤的臨床治療中。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、因此，本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供一種聯(lián)合用藥的抗腫瘤組合物、抗腫瘤組合產(chǎn)品及其應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)侖伐替尼和藜蘆胺的聯(lián)合用藥，可顯著在肝癌類(lèi)器官及小鼠中增強(qiáng)侖伐替尼的藥物敏感度，起到更好的腫瘤治療效果。因此，該聯(lián)合用藥方案具有較好的應(yīng)用前景。

2、在闡述本
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
之前，定義本文中所使用的術(shù)語(yǔ)如下：

3、術(shù)語(yǔ)“jun”是指：1號(hào)染色體的基因，hgnc編號(hào)為6204，該基因是禽肉瘤病毒17的轉(zhuǎn)化基因，編碼一種與病毒蛋白高度相似的蛋白，與特定的靶dna序列直接相互作用，調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。

4、術(shù)語(yǔ)“c-jun”是指：jun編碼的蛋白。

5、術(shù)語(yǔ)“侖伐替尼”是指：4-[3-氯-4-(環(huán)丙基氨基羰基)氨基苯氧基]-7-甲氧基-6-喹啉甲酰胺，英文名稱(chēng)lenvatinib，別名樂(lè)伐替尼，倫瓦替尼，本文中作為活性成分包括其樂(lè)伐替尼游離堿；樂(lè)伐替尼甲磺酸鹽、樂(lè)伐替尼堿。

6、術(shù)語(yǔ)“藜蘆胺”是指：(2s,3r,5s)-5-甲基-2-[(1s)-1-[(3s,6ar,11as,11br)-2,3,4,6,6a,11,11a,11b-八氫-3-羥基-10,11b-二甲基-1h-苯并[a]芴-9-基]乙基]-3-哌啶醇，英文名稱(chēng)：veratramine，別名藜蘆銨；黎蘆胺(黎蘆堿)；藜蘆胺。

7、術(shù)語(yǔ)“control”是指：空白對(duì)照。

8、術(shù)語(yǔ)“hcc”是指：肝細(xì)胞肝癌。

9、術(shù)語(yǔ)“he”是指：蘇木素-伊紅染色。

10、術(shù)語(yǔ)“plc”是指：原發(fā)性肝癌。

11、術(shù)語(yǔ)“epcam”是指：上皮細(xì)胞粘附分子,是一種由ga-733-2基因編碼的分子量為40kda的跨膜糖蛋白，作為嗜同種的鈣非依賴(lài)性的上皮細(xì)胞間粘附分子在上皮癌變過(guò)程中發(fā)揮著作用,英文名稱(chēng)：epithelial?cell?adhesion?molecule。

12、術(shù)語(yǔ)“afp”是指：甲胎蛋白，它屬于白蛋白家族，主要由胎兒肝細(xì)胞及卵黃囊合成。

13、術(shù)語(yǔ)“hepatocyte”是指：肝細(xì)胞。

14、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的第一方面提供了一種聯(lián)合用藥的抗腫瘤組合物，所述抗腫瘤組合物包含：作為活性成分同時(shí)存在的侖伐替尼和藜蘆胺，以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。

15、本發(fā)明的第二方面提供了一種抗腫瘤組合產(chǎn)品，所述抗腫瘤組合產(chǎn)品包括以各自獨(dú)立制劑形式分別存在的活性成分侖伐替尼和藜蘆胺；以及包含在所述各自獨(dú)立制劑中的一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。

16、根據(jù)本發(fā)明第一方面的抗腫瘤組合物或第二方面的抗腫瘤組合產(chǎn)品，其中兩種活性成分侖伐替尼和所述藜蘆胺的濃度比為1:0.1～10，優(yōu)選為1:0.2～5，更優(yōu)選為1:0.5～2，最優(yōu)選為1:1。

17、根據(jù)本發(fā)明第一方面的抗腫瘤組合物或第二方面的抗腫瘤組合產(chǎn)品，其中，所述抗腫瘤組合物或抗腫瘤組合產(chǎn)品的的給藥方式選自以下一種或多種：注射給藥、口服給藥、舌下給藥、直腸滴入給藥。

18、根據(jù)本發(fā)明第一方面的抗腫瘤組合物或第二方面的抗腫瘤組合產(chǎn)品，其中，所述給藥方式為口服給藥時(shí)，所述抗腫瘤組合物或所述抗腫瘤組合產(chǎn)品中獨(dú)立制劑的劑型選自以下一種或多種：散劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、糖漿劑、滴丸、軟膠囊和口服液。

19、根據(jù)本發(fā)明第一方面的抗腫瘤組合物或第二方面的抗腫瘤組合產(chǎn)品，其中，所述給藥方式為注射給藥時(shí)：

20、所述抗腫瘤組合物或抗腫瘤組合產(chǎn)品的劑型所述劑型選自以下一種或多種：溶液型注射劑、乳劑型注射液、混懸液；和/或

21、所述注射給藥選自以下一種或多種：靜脈注射、肌肉注射、穴位注射。

22、根據(jù)本發(fā)明第一方面的抗腫瘤組合物或第二方面的抗腫瘤組合產(chǎn)品，其中，所述一種或多種藥學(xué)上可接受的載體選自：填充劑、潤(rùn)濕劑、黏合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、溶劑、增溶劑、防腐劑、矯味劑、著色劑、ph調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑。

23、根據(jù)本發(fā)明第一方面的抗腫瘤組合物或第二方面的抗腫瘤組合產(chǎn)品，其中，所述抗腫瘤組合物和所述抗腫瘤組合產(chǎn)品的劑型為溶液、懸浮劑或氣霧劑。

24、本發(fā)明的第三方面提供了第一方面的抗腫瘤組合物或第二方面的抗腫瘤組合產(chǎn)品在制備用于治療癌癥的藥物中的應(yīng)用；

25、優(yōu)選地，所述癌癥為肝癌或膽管癌，最優(yōu)選為肝癌。

26、根據(jù)本發(fā)明第三方面的應(yīng)用，其中，所述肝癌選自以下一種或多種：原發(fā)性肝癌、肝細(xì)胞肝癌、肝內(nèi)膽管癌。

27、根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體的實(shí)施方式，為了克服現(xiàn)有的肝癌靶向藥物有效率低的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種侖伐替尼新的聯(lián)合用藥方案。該聯(lián)合用藥方案能填補(bǔ)肝癌精準(zhǔn)診療領(lǐng)域的空白，提升肝癌的治療效果。

28、本發(fā)明的第一方面：發(fā)現(xiàn)jun的高表達(dá)與侖伐替尼耐藥相關(guān)

29、具體篩選過(guò)程為：

30、發(fā)明人收集了多例原發(fā)性肝癌患者的手術(shù)標(biāo)本，多點(diǎn)取樣，通過(guò)三維培養(yǎng)的方法，成功建立了涵蓋數(shù)百個(gè)位點(diǎn)的肝癌類(lèi)器官生物庫(kù)。本發(fā)明人團(tuán)隊(duì)通過(guò)蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，he)染色，證實(shí)類(lèi)器官保留了患者的病理學(xué)特征。通過(guò)對(duì)類(lèi)器官和對(duì)應(yīng)的患者標(biāo)本的免疫熒光、免疫組化染色，發(fā)現(xiàn)肝癌類(lèi)器官與臨床上肝癌患者的分子標(biāo)記物也是一致的。

31、選取近百個(gè)位點(diǎn)，進(jìn)行組織和對(duì)應(yīng)類(lèi)器官的外顯子、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，分析了組織與對(duì)應(yīng)類(lèi)器官的基因組特征。從體細(xì)胞突變、拷貝數(shù)變異和轉(zhuǎn)錄組相似性等多維度驗(yàn)證了類(lèi)器官生物庫(kù)高度保留組織樣本的分子特征。此外，團(tuán)隊(duì)建立的大規(guī)模肝癌組織和類(lèi)器官隊(duì)列與以往肝癌研究一致，具有肝癌的高發(fā)突變。另外，發(fā)明人的肝癌數(shù)據(jù)反映了不同程度的腫瘤間(inter-tumor)和腫瘤內(nèi)異質(zhì)性(intra-tumor?heterogeneity)，為研究肝癌藥敏異質(zhì)性提供了依據(jù)。

32、本發(fā)明選取臨床上常用的肝癌藥物侖伐替尼，對(duì)類(lèi)器官生物庫(kù)進(jìn)行大規(guī)模藥物篩選。發(fā)明人將類(lèi)器官藥敏與臨床治療效果相比對(duì)，發(fā)現(xiàn)其藥敏效果是高度一致的。

33、為了研究肝癌一線靶向藥物侖伐替尼的關(guān)鍵耐藥基因，對(duì)多個(gè)類(lèi)器官位點(diǎn)進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，通過(guò)生信分析，解析出jun為侖伐替尼的關(guān)鍵耐藥基因。

34、本發(fā)明適用于肝癌侖伐替尼耐藥的患者，有望在侖伐替尼耐藥的患者中，形成新的聯(lián)合用藥方案，達(dá)到更好的治療效果。

35、本發(fā)明直接提供了c-jun抑制劑藜蘆胺和侖伐替尼的聯(lián)合用藥方案，并給出細(xì)胞和小鼠水平的驗(yàn)證，能更直接的指導(dǎo)臨床肝癌用藥。

36、本發(fā)明的聯(lián)合用藥方式的抗腫瘤組合物和組合產(chǎn)品可以具有但不限于以下有益效果：

37、1、確定了侖伐替尼的關(guān)鍵耐藥基因jun，確定了侖伐替尼和c-jun抑制劑藜蘆胺的聯(lián)合用藥方案?？梢蕴嵘齺龇ヌ婺岬闹委熜Ч蔀閬龇ヌ婺岬挠盟幣c肝癌的精準(zhǔn)治療提供線索。

38、2、本發(fā)明在肝癌一線靶向藥侖伐替尼的基礎(chǔ)上，加入藜蘆胺聯(lián)合用藥，在體外類(lèi)器官水平，及體內(nèi)小鼠成瘤實(shí)驗(yàn)中，增強(qiáng)了藥物的腫瘤的殺傷效果。