本發(fā)明涉及免疫學(xué)領(lǐng)域，且特別是涉及針對花生過敏的主動免疫療法。本發(fā)明因此涉及用于過敏原特異性主動免疫療法的組合物、包含該組合物的藥學(xué)上可接受的制劑、制備該組合物和制劑的方法、包含該組合物或制劑的藥盒，以及使用該組合物和藥學(xué)上可接受的產(chǎn)品的治療中的用途/方法。

背景技術(shù)：

1、花生過敏是ige介導(dǎo)的免疫障礙和潛在危及生命的疾病，對患者及其家庭的生活質(zhì)量存在實質(zhì)影響。臨床表現(xiàn)包括自口腔瘙癢至急性蕁麻疹或血管性水腫的一系列癥狀，其可進展成更嚴重癥狀及過敏性反應(yīng)(anaphylaxis)的病征，諸如過敏性休克和多器官功能障礙綜合征。全世界眾多人類個體受花生過敏影響，據(jù)報導(dǎo)，美國、加拿大、英國和澳大利亞的患病率最高(pandey等人,2019)。

2、花生植物落花生(arachis?hypogaea)的生核仁含有可誘導(dǎo)易感個體產(chǎn)生特定ige抗體的一系列過敏原。迄今為止，18種蛋白質(zhì)已顯示可結(jié)合至獲自人類血清的ige抗體(iqbal等人,2016)且已被國際免疫學(xué)會聯(lián)合會過敏原命名法小組委員會(the?allergennomenclature?sub-committee?of?the?international?union?of?immunologicalsocieties)定義(http://www.allergen.org/)。然而，四種主要花生過敏原，即ara?h?1、ara?h?2、ara?h?3和ara?h?6，被視為關(guān)鍵的ige結(jié)合過敏原。這些過敏原為花生仁中的最豐富的花生過敏原，且若干研究已顯示，這四種過敏原在臨床上與引發(fā)過敏反應(yīng)有關(guān)(krause等人,2021)且已被指定為主要過敏原，即，花生過敏人群中超過50％針對其而產(chǎn)生ige抗體的過敏原。

3、palladino和breitender(2018)以及becker等人(2018)的綜述論文透徹深刻地公開了花生過敏原的特征。過敏原ara?h?2被視為誘導(dǎo)危及生命的過敏反應(yīng)的最重要來源(kukkonen等人,2015)且相較于其他花生過敏原，ara?h?2特異性ige和ara?h?6特異性ige就花生過敏而言顯示最大的診斷準確度(hemmings等人,2020)。

4、在世界的不同地區(qū)，花生過敏的臨床及免疫模式不同。在美國，針對重組產(chǎn)生的ara?h?1、ara?h?2和ara?h?3產(chǎn)生特異性ige抗體的花生過敏患者百分比被發(fā)現(xiàn)分別為約80％、90％和60％。相反，在西班牙(spain)及瑞典(sweden)發(fā)現(xiàn)對此等花生過敏原敏感的花生過敏患者顯著減少(vereda等人,2011)。值得注意的是，更小部分的患者僅對四種花生主要過敏原之一敏感。舉例而言，有報導(dǎo)稱，有些兒童僅對ara?h?6敏感而對ara?h?1、2和3中的任一種都不敏感(van?der?valk等人,2016)，且有些兒童僅對ara?h?3敏感而對ara?h1、2和6都不敏感(restani等人,2005)。

5、盡管呼吸道過敏的皮下及舌下過敏原特異性免疫療法(asit)已證實在asit結(jié)束之后對侵入的過敏原成功地產(chǎn)生耐受性/持久無反應(yīng)，但這些治療選項不能在臨床上用于治療食物過敏。采用水性花生提取物的皮下過敏原特異性免疫療法(scit)已被發(fā)現(xiàn)在誘導(dǎo)重度過敏反應(yīng)(包括過敏性反應(yīng))方面太危險，但已測試諸如舌下(slit)、表皮(epit)和口服免疫療法(oit)的替代方案并發(fā)現(xiàn)其在治療時提供不同程度的退敏感作用。治療中止之后的持久無反應(yīng)或耐受性尚待證明，但采用4000mg花生蛋白質(zhì)的高維持劑量或300mg花生蛋白質(zhì)的長期低劑量維持治療的oit似乎增加了一小組患者在短期中斷治療之后可保持無反應(yīng)的可能性(chinthrajah等人,2019)。

6、過敏原特異性免疫療法的作用方式未被完全了解且考慮不同免疫反應(yīng)，其中b細胞同種型自產(chǎn)生ige向產(chǎn)生igg(包括亞類igg1和igg4)和iga轉(zhuǎn)換似乎很重要。asit之后，ige水平的降低會限制ige介導(dǎo)的肥大細胞和嗜堿性粒細胞活化和ige促進的抗原呈遞以及th2細胞應(yīng)答。增加的花生過敏原特異性igg4抗體以及可能還有iga抗體將與ige競爭結(jié)合過敏原且可抑制過敏原-ige復(fù)合物的形成，否則ige會結(jié)合至b細胞上的表面ige低親和力受體(fcεrii)，使得ige促進th2細胞發(fā)育(durham及shamji,2022)。已觀察到花生oit引起ige和igg4抗體水平發(fā)生變化(vickery等人,2013)。

7、最近，fda已批準一種用于口服施用的標準化花生粉末用于進行口服免疫療法(oit)以減輕可能因意外暴露于花生而發(fā)生的花生過敏，包括過敏性反應(yīng)。花生粉末是由輕度烘烤的脫脂花生粉制成且各劑量滿足ara?h?1、ara?h?2和ara?6的量的規(guī)范，如通過免疫測定或與高效液相色譜法組合所測量(的fda包裝說明書)。粉末必須在2℃至8℃下冷藏儲存且在攝入之前與食物混合。診斷有花生過敏的患者依劑量漸增方案將花生粉與食物混合攝入，該方案包括在健康照護背景下自0.5mg至6mg花生蛋白質(zhì)的初始日劑量遞增，隨后為由11種劑量水平組成的漸增期，各劑量水平歷時每日施用相同劑量的2周時段，從3mg花生蛋白質(zhì)開始直至300mg花生蛋白質(zhì)(劑量在五個月內(nèi)增加100倍)。最后，以每日300mg花生蛋白質(zhì)的維持期繼續(xù)治療。根據(jù)的fda包裝說明書，在治療期間存在出現(xiàn)過敏性反應(yīng)和胃腸不良事件的風(fēng)險。在iii期臨床試驗中，在oit治療50周之后，發(fā)現(xiàn)對花生的耐受性自基線時<100mg花生蛋白質(zhì)的閾值增加至約600至1000mg。然而，報導(dǎo)因不良事件(ae)而存在大量退出者(11.6％活性療法；2.4％安慰劑)。重要的是，據(jù)報導(dǎo)，活性療法組中14.0％個體使用腎上腺素減輕過敏性反應(yīng)，而安慰劑組中為6.5％個體(vickery等人,2018)。因此，oit引發(fā)過敏性休克的風(fēng)險似乎高于未治療的患者。

8、koppelman等人(2018)已發(fā)現(xiàn)，自輕度烘烤的花生粉中可提取的呈溶解形式的過敏原(ara?h?1、2、3和6)的濃度隨ph發(fā)生顯著變化。在6.5至8.5的唾液ph范圍內(nèi)，ara?h?3溶解度顯著提高，而其余過敏原受到的影響則低得多?？傮w而言，此ph范圍內(nèi)的提取動力學(xué)表明，ara?h?2和ara?h?6為個體在攝入花生后暴露的第一過敏原，且當在唾液ph范圍(6.5至8.5)內(nèi)測定時，與其他過敏原相比，ara?h?1的提取量(nmol/ml)相當?shù)汀?/p>

9、針對花生過敏的oit已提出多種組合物和給藥方案：專利申請wo2014159609和wo2014159607涉及包含烘烤花生粉的花生蛋白質(zhì)組合物，且wo2014159609進一步涉及oit給藥方案，其中初始1天遞增劑量，隨后為每兩周一次的九個劑量增加步驟，自12mg花生蛋白質(zhì)的劑量增至300mg花生蛋白質(zhì)。專利申請wo2016020336涉及適合用于口服施用的花生蛋白質(zhì)組合物，其中花生過敏原在胃中釋放。專利申請us2020038466涉及來源于烘烤花生的花生蛋白質(zhì)組合物，其用于針對花生過敏的口服免疫療法，其中提議使用的組合物包含含量在總蛋白質(zhì)的10至15重量％之間的ara?h?1、含量在總蛋白質(zhì)的2至10重量％之間的ara?h?2和總蛋白質(zhì)的10至20重量％之間的ara?h?3。

10、已在較小規(guī)模的人類試驗中通過在包含漫長劑量增加期(updosing?phase)的給藥方案中施用花生過敏原提取物液滴來研究slit。在kim等人(2011)報導(dǎo)的試驗中，每日用花生過敏原液體提取物(獲自greer實驗室)的等分試樣治療兒童，該提取物含有溶解于0.2％苯酚及50％甘油化鹽水中的5000μg/ml花生蛋白質(zhì)(估計含有300μg/ml的ara?h?2，相當于6重量％的花生蛋白質(zhì))。過敏原提取物以遞增的體積(滴劑)舌下施用約六個月的時段，隨后為六個月維持期，每日一次2000μg花生蛋白質(zhì)劑量(百分之六為ara?h?2，相當于120μg?ara?h?2)。劑量增加期包含每兩周一次的14個劑量遞增步驟，自0.25μg花生蛋白質(zhì)(0.0015μg?ara?h?2)增至2000μg花生蛋白質(zhì)(約120μg?ara?h?2)。因此，在劑量增加期期間，劑量在六個月內(nèi)增加8000倍。已發(fā)現(xiàn)，隨機接受活性療法花生slit的兒童可在經(jīng)口激發(fā)測試中攝入1,710mg花生蛋白質(zhì)(等效于6至7粒花生)的中值累積劑量，相比的下，接受安慰劑的七名兒童攝入85mg花生蛋白質(zhì)的中值累積劑量。burk等人(2015)隨后根據(jù)試驗的延續(xù)部分報導(dǎo)，33名兒童中的十名(30％)完成累積2500mg花生蛋白質(zhì)隨食物口服激發(fā)而無癥狀，然而其余兒童耐受僅460mg花生蛋白質(zhì)的中值劑量(10至1710mg)。sampson等人(2012)描述了執(zhí)行口服食物激發(fā)的方法。在fleischer等人(2013)報導(dǎo)的另一項slit試驗中，在36周劑量增加期中施用獲自greer實驗室的過敏原液體提取物(ph為6.8至8.4、含有0.5％氯化鈉和0.54％碳酸氫鈉的來自未經(jīng)烘烤花生的過敏原提取物，其為存在于50％甘油中的水性提取物)，其中初始劑量為0.000165μg花生蛋白質(zhì)(0.00001μg?ara?h?2)且最終劑量為1386μg花生蛋白質(zhì)(約83μg?ara?h?2)，該最終劑量用于后續(xù)維持期中。一些患者在給藥1386μg花生蛋白質(zhì)的8至28周維持期之后，進一步增加劑量至3696μg花生蛋白質(zhì)(約222μgara?h?2)且以3696μg花生蛋白質(zhì)劑量繼續(xù)進行維持期。zhang等人(2018)已公布slit與oit的總體對比。

11、已提出將slit與tlr4激動劑(例如吡喃葡萄糖基脂質(zhì)(glucopluranosyl?lipid)佐劑)及花生過敏原共施用可調(diào)節(jié)過敏原特異性免疫應(yīng)答(專利申請案wo2016/172511)，且已報導(dǎo)以吡喃葡萄糖基脂質(zhì)a(glucopyranosyl?lipid?a,gla)作為佐劑的花生提取物(pe)在花生過敏成年及青少年患者中每日舌下(sl)重復(fù)施用之后評估該花生提取物的耐受性及安全的臨床試驗(clinicaltrials.gov?identifier:nct03463135)。

12、slit依賴于將可溶性過敏原以確保高效進入口腔黏膜被并抗原呈遞細胞吸收的構(gòu)象形式遞送至舌下黏膜。在通過施用固體劑型(諸如凍干劑型)來執(zhí)行slit的情況下，過敏原必須自固體劑型中釋放并溶解于唾液中以變得可溶和生物可及(bio-accessible)。

13、通常，用于asit的過敏原產(chǎn)物是基于含有多種過敏原的過敏原提取物，所述過敏原呈原生構(gòu)象，包括多種異形體及翻譯后修飾(例如糖基化)。使用過敏原的天然形式可確保用包含所有潛在ige抗體結(jié)合表位的過敏原治療過敏患者，從而使患者或患者群體在天然暴露于過敏原源材料后可能會產(chǎn)生針對其的ige。因此，基于重組產(chǎn)生的過敏原的過敏原產(chǎn)物可以不覆蓋所有原生ige表位結(jié)合位且重組過敏原可不以“天然”翻譯后構(gòu)象存在。

14、過敏原為通過其氨基酸序列而已知的蛋白質(zhì)分子。過敏原以多種異形體存在且可在表達之后通過翻譯后方法修飾。值得注意的是，花生過敏原ara?h?1和ara?h?3似乎以寡聚形式存在于生花生中，而ara?h?2和6似乎僅以單體形式存在(boldt等人,2005)。據(jù)報導(dǎo)，當自生花生純化時，ara?h?1可以由63kda?n-糖基化亞單元組成的210kda穩(wěn)定三聚體蛋白質(zhì)形式獲得，視提取條件而定，所述亞單元可形成高達600-700kda的多聚體(blanc等人,2011)。然而，ara?h?1以寡聚形式存在而非以單體形式存在可取決于用于純化的方法，如van?boxtel等人(2006)的著作所指出。過敏原ara?h?3為由約60kda單鏈多肽(單體形式)組成的復(fù)雜過敏原，且對酶(例如胃蛋白酶)作用的穩(wěn)定性小于ara?h?2和ara?h?6過敏原。對于基于氨基酸序列的單體形式其具有約60kda的分子質(zhì)量，但ara?h?3似乎以360kda的六聚雜聚復(fù)合物(hexameric?heteromeric?complex)形式存在于花生中，其在翻譯后裂解為43kda酸性亞單元及28kda堿性亞單元，所述亞單元通過二硫鍵共價連接。即使在抑制蛋白酶活性的提取條件下，也可觀察到ara?h?3的若干片段(14、25、42和45kda)(palladino和breitender,2018)。如果經(jīng)過蛋白水解處理，則ara?h?3將通過二硫橋鍵結(jié)合并呈現(xiàn)三聚體和六聚體結(jié)構(gòu)。還已知在烘烤期間，ara?h?3容易聚集成復(fù)雜聚合物，且與來自生花生的arah?3截然相反的來自烘烤花生的ara?h?3已顯示可引起caco-2細胞中對ara?h?3的吸收增加，原因可能在于以聚集形式吸收于細胞中的ara?h?3量更高(wang?s等人,2021)。分子大小為35.9kda且pi為5.5的過敏原被發(fā)現(xiàn)與ara?h?3具有91％一致的氨基酸序列，且被視為ara?h?3的同種異形過敏原(isoalleren)，但有時被稱為ara?h?4。

15、由于蛋白質(zhì)層面的結(jié)構(gòu)變化可引起新的ige結(jié)合表位消失和/或出現(xiàn)，因此可通過蛋白質(zhì)聚集來改變過敏原的內(nèi)在過敏原性，例如經(jīng)由二硫鍵或其他鏈間共價鍵來改變。另外，蛋白質(zhì)聚集所誘導(dǎo)的構(gòu)象變化可引起具有減小的溶解度的蛋白質(zhì)聚集體或寡聚物的形成(de?angelis等人,2018)。

16、患者在花生水性提取物施用后可能暴露的過敏原概況也可取決于花生以多種栽培品種變體存在的花生源。盡管koppelman等人(2016)在提取最主要花生栽培品種(runner、virginia、spanish和valencia)的生花生而獲得的過敏原概況中未找到巨大差異，但相反，pandey等人(2019)發(fā)現(xiàn)當在ph?7.4水性緩沖液中提取時，四種過敏原ara?h?1、2、3和6中的每一種的含量在264種不同花生栽培品種變體之間存在巨大差異，諸如1000倍差異。通過夾心elisa測量過敏原含量。根據(jù)koppelman等人(2016)通過rp-hlpc對四種過敏原的定量分析，以總花生蛋白質(zhì)的重量計，估計ara?h?1的含量范圍為11.7至23.7％，平均值為17.1％±3.4％；ara?h?2的含量范圍為3.5至8.0％，平均值為6.2％(±1.3％)，ara?h3的含量范圍為57.7至83.5％，平均值為70.6±8.6％，且ara?h?6的含量范圍為2.5至9.7％，平均值為5.8±1.8％。由于各花生栽培品種變體的基因型不同，因此過敏原概況存在進一步的差異。通過用于測定過敏原的定量含量的分析方法可解釋如pandey等人(2019)和koppelman等人(2016)所測定的生花生的過敏原概況的差異。

17、根據(jù)maleki等人,2010，可在商業(yè)花生液體提取物(alk-abelló,hollister-stier和greer提取物)以及烘烤花生和煮花生的水性提取物中發(fā)現(xiàn)不同含量的高分子量蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。此類結(jié)構(gòu)可通過sds-page頂部的涂片標本來識別，或可通過利用與患者的血清ige的結(jié)合的蛋白質(zhì)印跡分析來識別。盡管主要花生過敏原(ara?h?1、ara?h?2、ara?h?3和ara?h6)存在于所有提取物中，但個別花生過敏患者的血清ige僅識別一些提取物中的這些過敏原。因此，盡管過敏原存在于各提取物中，但同一患者的血清ige不識別各提取物中的過敏原。另外，一些人類血清的ige僅識別高分子量蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。

18、根據(jù)poms等人,2004，影響從花生中提取花生蛋白質(zhì)的效率的最顯著因素似乎為所用提取緩沖液的ph。使用ph?8至11范圍內(nèi)的緩沖液獲得的總蛋白質(zhì)收率最佳。然而，用相同緩沖液從烘烤花生提取蛋白質(zhì)的收率大大低于生花生。因此，提供向花生asit遞送可重復(fù)的且臨床上相關(guān)的劑量的過敏原的花生過敏原提取物的組合物具有挑戰(zhàn)性之處在于，在其他參數(shù)中，需要花生過敏原組合物含有呈天然構(gòu)象的主要過敏原，所述過敏原被大部分過敏患者的花生過敏原特異性ige識別。

19、總之，需要提供基于過敏原提取物的產(chǎn)物以用于花生特異性asit，所述產(chǎn)物含有以天然構(gòu)象存在的易溶過敏原，以確保過敏原當以固體劑型施用至舌下黏膜時高度溶解，且另外確保呈天然構(gòu)象的過敏原被花生過敏患者識別。

20、有利的是，含有所有四種主要花生過敏原的花生過敏原組合物具有治療全世界花生過敏個體群體的潛力，不論其致敏模式如何。另外，通過將花生過敏原ara?h?1、2、3和6中的每一種的摩爾含量調(diào)節(jié)至相同窄摩爾范圍內(nèi)，對ara?h?1、2、3或6敏感的任何患者就該患者在治療期間暴露于所討論的四種花生過敏原中的每一種的相同數(shù)目的分子而言均具有同等的治療潛力。

21、因此，重要的是提供用于asit的含有花生過敏原的產(chǎn)物，其中花生過敏原ara?h1、2、3和6的含量受控制，且下文提供用于制造花生過敏原提取物的方法，所述花生過敏原提取物含有相同且可重現(xiàn)的摩爾范圍內(nèi)的主要過敏原。

22、使用公司特有的內(nèi)部參考過敏原組合物(通過皮膚測試反應(yīng)性(活體內(nèi)標準)定量)或使用固相參照過敏原提取物(fda)，通過測定總過敏原效能來控制當前的過敏原產(chǎn)物。另外，通過競爭性體外ige測試(諸如rast、immunocap或elisa抑制分析)來控制單一過敏原，但這些方法測量的生物學(xué)效能可能既不與蛋白質(zhì)含量相關(guān)，也不與以重量計的單一過敏原的量相關(guān)。生物學(xué)效能依賴于用于測定生物學(xué)效能的人類血清或單克隆抗體的ige表位覆蓋范圍且不能反映過敏原產(chǎn)物中的單一過敏原的絕對量。spiric等人(2017)推薦使用過敏原的絕對定量來證實連續(xù)批次的過敏原提取物或過敏原源材料之間的一致性，該絕對定量是通過用于限定和表征過敏原提取物的質(zhì)譜法(ms)來實現(xiàn)。然而，基于對蛋白質(zhì)的獨特肽進行定量的定量ms測定可能無法檢測由于蛋白質(zhì)變性或蛋白質(zhì)部分消化而引起的效能損失。專利申請wo2017115139涉及基于花生過敏原的獨特肽的定量對包括各花生過敏原的多種異形體在內(nèi)的花生過敏原的ms分析。

23、因此，需要用于控制基于過敏原提取物的產(chǎn)物中的主要過敏原的其他方法，以確保單一過敏原的含量在各批次間的高度一致性，另外重要的是，降低過敏原效能在各批次間的差異。

24、專利申請wo2022147173a1涉及用于治療花生過敏的花生蛋白質(zhì)組合物，該花生組合物被配制為以低濃度施用花生過敏原的納米乳液。

25、專利申請ep3244212a1涉及重組產(chǎn)生的花生過敏原的組合物，其應(yīng)用于診斷測試條帶。

26、專利申請us2018/044384a1涉及含有重組細菌孢子的組合物，所述細菌孢子/細胞的表面上表達霍亂毒素b(ctb)以及一種或多種花生過敏原；以及使用此類組合物誘導(dǎo)針對花生過敏原或花生過敏的耐受性或減少針對其的敏感性的方法。

27、專利申請us2005/063994涉及包含含有重組版花生過敏原的微生物的組合物。

28、marsh等人(2008)涉及用于純化單個花生過敏原的方法。該方法包含若干色譜法步驟，其中將陰離子交換色譜法與其他色譜親和步驟組合使用以便純化一些花生過敏原。

29、wunschmann?s等人(2019)涉及通過elisa對花生過敏原進行定量測定，其中從烘烤且脫脂的花生粉中提取花生過敏原。

30、本發(fā)明的目的

31、本發(fā)明的實施方案的目的為提供適用于針對花生過敏的過敏原特異性免疫療法的組合物，以及提供適合用于制備此類組合物的方法以及實施所述組合物的方法和藥盒。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，照慣例用于獲得適合用于asit的過敏原組合物的水提取方法無法提供適用于花生過敏原免疫療法的過敏原提取物。首先，用高劑量的所有四種主要花生過敏原誘導(dǎo)臨床上相關(guān)的針對所有四種過敏原的耐受性被視為治療的關(guān)鍵。換句話說，針對所有四種主要花生過敏原，關(guān)鍵是降低花生過敏原特異性ige抗體的水平和增加花生過敏原特異性igg4抗體的水平。

2、遺憾的是，在相同提取條件下不能獲得四種主要花生過敏原的最佳提取效率。arah?3的提取效率對ph和鹽濃度極其敏感且ara?h?3的高提取效率似乎與ara?h?1的高提取效率相矛盾。另外，已發(fā)現(xiàn)通過對花生仁進行簡單的水提取而獲得的花生過敏原組合物含有高分子質(zhì)量蛋白質(zhì)，其似乎為包含nara?h?1和/或nara?h?3多肽的聚集體。聚集體乍一看似乎可溶解于水溶液中，但在儲存后可沉淀析出或可引起膠凝。就測定組合物中的呈單一多肽形式(單體形式)的過敏原(最終呈水溶性寡聚形式)的準確水平或過敏原效能而言，聚集體也會引起問題。用于測定過敏原效能的免疫化學(xué)方法(例如elisa)需要特異性針對過敏原的抗體且也會錯誤地結(jié)合到聚集的過敏原。

3、令人驚訝的是，本發(fā)明人已提供包含四種過敏原nara?h?1、nara?h?2、nara?h?3和nara?h?6中的每一種的組合物，其具有有限含量的高分子質(zhì)量聚集體。此類組合物可通過簡單的少步驟制備方法獲得，該制備方法基本上包含對花生仁進行水提取以獲得溶解的花生過敏原nara?h?1、nara?h?2、nara?h?3和nara?h?6，所述花生過敏原可吸附至陰離子交換色譜法材料上且在以不同鹽濃度洗脫陰離子交換材料之后，收集到針對過敏原nara?h?1、nara?h?2、nara?h?3和nara?h?6中的任一種富集的各個級分中?？蓪⑺患募壏只旌希垣@得預(yù)選定的濃度的四種主要過敏原中的兩種或更多種。

4、有利的是，此制備方法允許產(chǎn)生具有類似高劑量的所有四種主要過敏原(包括arah?3和ara?h?1)的組合物。

5、本發(fā)明人也已發(fā)現(xiàn)，由于不存在高質(zhì)量聚集體，因此可通過反相色譜法準確地控制所富集的級分或其混合組合物中的四種過敏原(包括nara?h?3和nara?h?1)中的每一種的濃度。nara?h?1和nara?h?3的濃度測定因其以寡聚形式存在而特別具挑戰(zhàn)性，但本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，盡管所富集的級分或其混合組合物含有三聚體形式的nara?h?1和單體、三聚體以及六聚體形式的nara?h?3，但反相色譜法方法能夠測定以單體構(gòu)象表現(xiàn)的四種過敏原中的每一種的濃度。有利的是，此允許根據(jù)過敏原的單一多肽形式(單體)的摩爾濃度來測定所述過敏原中的每一種的摩爾濃度。

6、因此，已有可能提供包含預(yù)選定的濃度的過敏原nara?h?1、nara?h?2、nara?h?3和nara?h?6中的每一種的組合物，通過選擇，其包含含量均衡的四種主要過敏原，在一些界限內(nèi)，其意欲包括包含摩爾量類似的四種主要過敏原的組合物。

7、當以用于減輕花生過敏的過敏原特異性免疫療法施用其中主要花生過敏原的摩爾濃度類似的此類組合物時，由于任何患者將暴露于主要花生過敏原nara?h?1、2、3和6中的每一種的相同數(shù)目個分子(盡管在一些界限內(nèi))，因此所述組合物將具有治療較大部分的花生過敏個體的潛力，不論其敏感模式(不論大部分針對nara?h?2和/或其他主要過敏原中的一種或多種)。因此，使用此類組合物減輕花生過敏可能適合于許多過敏患者，不論其個別的花生過敏原敏感模式。此外，若此類組合物以劑量遞增治療方案(劑量增加)使用，則在各遞增步驟，主要過敏原中的每一種的劑量增加將引起主要過敏原中的每一種出現(xiàn)相同的窄劑量范圍。這可能會增加患者以有效劑量的主要過敏原中的每一種治療的機會，且有利地在相同時段內(nèi)達成。另外，被認為同等重要的是，使用本文所述的組合物減輕花生過敏將引起對保護性花生過敏原特異性igg4抗體的誘導(dǎo)，且優(yōu)選地，所有四種主要花生過敏原的花生過敏原特異性igg4抗體均實現(xiàn)增加。有利的是，花生過敏原特異性igg4的增幅可能在分別識別ara?h?1、2、3和6的特異性igg4抗體的相同多倍增幅內(nèi)?？梢栽谌祟愒囼炛醒芯吭黾觟gg4抗體含量的能力且可以定量血液樣品或其他生物分泌物(如唾液、鼻或肺灌洗液)中的igg4抗體。就小鼠應(yīng)答于過敏原暴露不產(chǎn)生igg4抗體而是產(chǎn)生igg2抗體而言，也可利用小鼠模型研究在過敏原暴露之后誘導(dǎo)igg抗體的能力。

8、根據(jù)本發(fā)明的第1方面，提供一種包含花生蛋白質(zhì)nara?h?1、nara?h?2、nara?h?3和nara?h?6中的每一種的組合物，其中nara?h?1:nara?h?2、nara?h?3:nara?h?2和nara?h6:nara?h?2中的每一對的摩爾比在0.5至2.0的范圍內(nèi)，優(yōu)選在0.5至1.5范圍內(nèi)。

9、在第2方面中，本發(fā)明涉及藥學(xué)上可接受的制劑，諸如藥物組合物，其中該制劑包含本發(fā)明的第一方面的組合物，或本文所公開的其任何實施方案，其溶解或分散于選自由以下組成的組的載體物質(zhì)中：液體、半固體和固體載體物質(zhì)。

10、在第3方面中，本發(fā)明涉及本發(fā)明的第1方面的組合物或(本文所公開的其任何實施方案)或本發(fā)明的第2方面的藥學(xué)上可接受的制劑(或本文所公開的其任何實施方案)，其用作藥物，且尤其用于治療人類以防花生過敏的方法中，諸如通過進行花生過敏原特異性免疫療法。下文所述的本發(fā)明的第6方面的方法中使用的組合物也在此方面內(nèi)。

11、在第4方面中，本發(fā)明涉及一種用于制備包含nara?h?1、nara?h?2、nara?h?3和nara?h?6中的兩種或更多種的組合物的方法，該方法包含提供1)如下獲得的花生蛋白質(zhì)的提取物：用水性溶劑(aqueous?solvent)提取生花生仁以獲得包含nara?h?1、nara?h?2、nara?h?3和nara?h?6中的每一種的水性提取物；和2)在7至9范圍內(nèi)的ph下，使用逐步或連續(xù)的水性鹽梯度洗脫對所述水性提取物進行陰離子交換色譜法，由此將nara?h?1、nara?h2、nara?h?3和nara?h?6中的每一種洗脫并收集到針對nara?h?1、nara?h?2、nara?h?3或nara?h?6各自富集的級分中；和3)任選地收集來自陰離子交換色譜法的流過物級分；和4)將步驟2或組合的步驟2與步驟3所得的兩個或更多個級分或其等分試樣合并，以獲得包含nara?h?1、nara?h?2、nara?h?3和nara?h?6中的至少兩種的該花生蛋白質(zhì)組合物。優(yōu)選地，含有分子質(zhì)量高的花生蛋白質(zhì)的級分已被丟棄。

12、在第5方面中，本發(fā)明涉及一種藥盒，其包含含有多個分隔隔室的密封包裝，各隔室包含本發(fā)明的第2方面的藥學(xué)上可接受的制劑(或本文所公開的其任何實施方案)的單位劑型，其中至少一種單位劑型包含的總花生過敏原的量與藥盒中的另一種單位劑型中的量不相同。

13、在第6方面中，本發(fā)明涉及一種治療人類花生過敏的方法，諸如通過進行花生過敏原特異性免疫療法，該方法包含在延長的時段內(nèi)施用本發(fā)明的第1方面的組合物(或本文所公開的其任何實施方案)或本發(fā)明的第2方面的藥學(xué)上可接受的制劑(或本文所公開的其任何實施方案)的一個日劑量。

14、通過過敏原特異性免疫療法治療人類花生過敏的方法也在第6方面的范圍內(nèi)，該方法包含劑量增加期及任選地存在的維持期，其中劑量增加期包含將花生蛋白質(zhì)組合物的日劑量連續(xù)多系列施用至口腔黏膜，其中各系列內(nèi)的日劑量相同且其中任何在前的系列中的劑量均低于后續(xù)系列且其中各系列的持續(xù)時間長度在6至30天范圍內(nèi)；且其中第一系列施用的日劑量含有總量在0.1μg至200μg范圍內(nèi)的花生蛋白質(zhì)；最后一個系列的日劑量含有總量在300μg至5000μg范圍內(nèi)的花生蛋白質(zhì)；且其中系列的數(shù)目在2至9范圍內(nèi)，諸如在3至7范圍內(nèi)，尤其諸如3、4、5、6、7、8或9，優(yōu)選為3、4或5。用ph在7至9范圍內(nèi)的水性溶劑從生花生仁中提取或可提取出花生蛋白質(zhì)，且所得經(jīng)提取的花生蛋白質(zhì)至少包含nara?h?1、nara?h2、nara?h?3和nara?h?6中的每一種。