發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防登革熱病毒感染的有利的治療組合物、其組合及其用途。

背景技術(shù)：

0、發(fā)明背景

1、登革熱是由四種相關(guān)病毒引起的，稱為登革熱病毒血清型1-4。登革熱病毒(denv)是黃病毒科黃病毒屬的成員。它們是包膜病毒，具有11kb的正義rna基因組，可編碼十種蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)是膜(m)蛋白、包膜(e)蛋白、衣殼(c)蛋白和非結(jié)構(gòu)(ns)蛋白。ns蛋白是ns1、ns2a、ns2b、ns3、ns4a、ns5b和ns5。這些蛋白質(zhì)被翻譯成單一的多聚蛋白，其被蛋白酶切割成單個蛋白質(zhì)。ns5蛋白是最大的非結(jié)構(gòu)蛋白，充當病毒rna依賴性rna聚合酶以及rna2'-o-甲基轉(zhuǎn)移酶。rna依賴性rna聚合酶(rdrp)活性負責病毒基因組的復(fù)制。

2、登革熱是熱帶地區(qū)的地方性流行病，包括東地中海、美洲、東南亞、西太平洋和非洲。隨著攜帶登革熱的伊蚊分布范圍擴大，以前從未發(fā)現(xiàn)過登革熱的地區(qū)也出現(xiàn)了新病例。美國疾病控制與預(yù)防中心報告稱，最近在夏威夷(2015年)、佛羅里達(2013年、2020年)和德克薩斯(2013年)爆發(fā)了本地感染登革熱疫情(https://www.cdc.gov/dengue/areaswithrisk/in-the-us.html)。攜帶登革熱的蚊子現(xiàn)在在美國東南部大部分地區(qū)都很常見(rivera等人.2020.travel-associated?and?locally?acquired?dengue?cases-united?states,2010-2017.mmwr?morb?mortal?wkly?rep?69:149-154)。

3、盡管以前登革熱血清型的分布僅限于特定地區(qū)，但隨著疾病在世界范圍內(nèi)傳播，血清型的分布也變得更加普遍(《自然》雜志“登革熱病毒”)。這尤其令人擔憂，因為如果一個人感染了一種血清型，后來又感染了第二種血清型，他們患上嚴重登革熱的風險就會更大。嚴重登革熱(或登革出血熱)伴有嚴重的血漿滲漏、嚴重出血、休克和器官受損。如果不治療，嚴重登革熱的死亡率為13％(疾病控制和預(yù)防中心，dengue?for?healthcareproviders,clinical?presentation,2023年4月13日更新)。

4、除了登革熱疫情的地理分布外，最近的疫情更為嚴重。自2000年以來，全球發(fā)病率增加了8倍。不僅疫情爆發(fā)的頻率增加了，而且規(guī)模也增加了。世界衛(wèi)生組織估計，全球一半人口面臨感染風險，每年有數(shù)億人感染(https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/dengue-and-severe-dengue)。還報告了近50萬例嚴重登革熱病例。大多數(shù)面臨感染登革熱風險的人是兒童(aranda?c等人,2018.arbovirus?surveillance:first?denguevirus?detection?in?local?aedes?albopictus?mosquitoes?in?europe,catalonia,spain,2015.euro?surveill?23,wilder-smith等人,2014.the?2012dengue?outbreak?inmadeira:exploring?the?origins.euro?surveill?19:20718)。

5、針對登革熱的疫苗已經(jīng)研發(fā)出來，但存在一些缺點。最顯著的是一種被稱為抗體依賴性增強(ade)的現(xiàn)象。唯一獲得許可的疫苗dengvaxia針對不同血清型提供的保護不全面(https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/first-fda-approved-vaccine-prevention-dengue-disease-endemic-regions)且不均衡，對denv1的保護率僅為50％，對denv2的保護率更低(sabchareon等人,2012.protective?efficacy?of?therecombinant,live-attenuated,cyd?tetravalent?dengue?vaccine?in?thai?schoolchildren:a?randomized,controlled?phase?2b?trial.lancet?380:1559-67；villar等人,2015.efficacy?of?a?tetravalent?dengue?vaccine?in?children?in?latinamerica.n?engl?j?med.372:113-23)。因此，接種疫苗可能會促進ade，從而導(dǎo)致未感染登革熱的個體出現(xiàn)嚴重感染(aguiar等人,2016.the?impact?ofnewly?licensed?denguevaccine?in?endemic?countries.plos?negl?trop?dis.10:e0005179)。因此，疫苗接種僅限于9-16歲且至少有過一次登革熱病毒感染記錄的個體。盡管登革熱病毒目前已成為全球范圍內(nèi)的健康威脅，且其重要性日益凸顯，但安全有效的泛登革熱疫苗尚未研制成功。

6、因此，全球范圍內(nèi)對抗登革熱的潛在策略是藥物，例如直接作用抗病毒藥物(daa)。不幸的是，目前還沒有批準用于治療登革熱的daa。在denv中，病毒聚合酶是非結(jié)構(gòu)蛋白ns5(karuna等人,2020年,acyclic?phosphoramidate?prodrug?of?2’-deoxy-2’-fluoro-2’c-methylguanosine?for?the?treatment?of?dengue?virusinfection.antimicrob?agents?chemother?64)。盡管denv?rdrp已成為許多研究性daa的靶點，包括許多核苷/核苷酸類似物(troost等人,2020.recent?advances?in?antiviraldrug?development?towards?dengue?virus.curr?opin?virol?43:9-21)，但迄今為止，只對一種核苷即胞嘧啶類似物巴拉匹韋進行了臨床測試(karuna等人,2020.acyclicphosphoramidate?prodrug?of?2’-deoxy-2’-fluoro-2’c-methylguanosine?for?thetreatment?of?dengue?virus?infection.antimicrob?agents?chemother?64；nguyen等人,2013.arandomized,double-blind?placebo-controlled?trial?of?balapiravir,apolymerase?inhibitor,in?adult?dengue?patients.j?infect?dis.207:1442-50)。不幸的是，在抗病毒反應(yīng)、細胞因子譜和退燒時間方面，化合物治療和安慰劑治療之間沒有觀察到差異(nguyen等人,2013.arandomized,double-blind?placebo-controlled?trial?ofbalapiravir,a?polymerase?inhibitor,in?adult?dengue?patients.j?infect?dis.207:1442-50)。

7、文獻中還報道了其他靶向ns5或其他病毒蛋白的化合物。在2017年，janssen公開了一系列與ns3蛋白結(jié)合的化合物(wo?2017/167951)。在2020年，manfroni實驗室描述了抑制ns5的吡啶并苯并噻唑酮(cannalire,r.等人.pyridobenzothiazolones?exert?potentanti-dengue?activity?by?hampering?multiple?functions?of?ns5?polymerase,acsmed?chem?lett,2020?11,773-782)。描述登革熱抑制劑的其他出版物包括但不限于moquin等人,nitd-688,apan-serotype?inhibitor?of?the?dengue?virus?ns4b?protein,showsfavorable?pharmacokinetics?and?efficacy?in?preclinical?animal?models.sciencetranslational?medicine,2021,13,579；kaptein,s.等人apan-serotype?dengue?virusinhibitor?targeting?the?ns3-ns4b?interaction.nature,2021,598,504-509；shimizu,h.等人discovery?of?a?small?molecule?inhibitor?targeting?dengue?virus?ns5?rna-dependent?rnapolymerase.plos?negl?trop?dis.2019,13,e0007894；yin,z.等人anadenosine?nucleoside?inhibitor?of?dengue?virus,pnas,2009,106,20435-20439；putra,h.等人identification?of?natural?product?compounds?as?ns5?rdrp?inhibitorfor?dengue?virus?serotype?1-4through?in?silico?analysis.aip?conferenceproceedings?2020,2237；wang,q.-y.等人a?small-molecule?dengue?virus?entryinhibitor.antimicrobial?agents?and?chemotherapy,2009,53,1823-1831；deoliviera,l.等人the?small?molecule?azd6244?inhibits?dengue?virus?replicationin?vitro?and?protects?against?lethal?challenges?in?a?mouse?model.2020,archives?of?virology,doi:10.1007/s00705-020-04524-7；和celegato,m.等人small-molecule?inhibitor?of?flaviviral?ns3-ns5?interaction?with?broad-spectrumactivity?and?efficacy?in?vivo,antimicrobial?chemotherapy,2022?14(1)e03097-22。

8、治療某些rna病毒的特定抗病毒化合物包括化合物1和化合物2。例如，在美國專利號9,828,410中公開了游離堿化合物1。

9、

10、化合物2(公開于美國專利號10,519,186中)是((r)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2-氨基-6-(甲基氨基)-9h-嘌呤-9-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?-l-丙氨酸異丙酯的半硫酸鹽，并且特別公開了其用于治療病毒感染，例如丙型肝炎病毒。據(jù)報道化合物2還對sars-cov2(covid19感染的病原體)具有活性(參見例如美國專利10,874,687)。化合物2的s-磷非對映異構(gòu)體目前正在進行人體臨床試驗，用于治療hcv和covid19。

11、

12、在美國專利號10,946,033中，atea?pharmaceuticals,inc.公開了化合物1或化合物2通常用于治療黃病毒的用途，并具有針對黃熱病、登革熱(血清型2)、西尼羅病毒和寨卡病毒的活性數(shù)據(jù)。

13、盡管有這些披露，但由于上述挑戰(zhàn)性問題，有效治療登革熱仍很困難。醫(yī)學(xué)上仍然迫切需要確定安全、有效和耐受性良好的治療登革熱的適當方案。

14、因此，本發(fā)明的目的是提供治療登革熱感染的有利方案。本發(fā)明的另一個目的是提供化合物1和化合物2(其為磷r-非對映異構(gòu)體)的新制備方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、意外地發(fā)現(xiàn)，當將高劑量(即，每劑至少約700mg或750mg，更通常為700-1000mg(為了方便，可以以一個、兩個或三個單獨的劑型遞送)，每日兩次、三次或更多次)的化合物1或化合物2(其中化合物1可以是其藥學(xué)上可接受的鹽)施用于有此需要的宿主(例如人類)時，有利于治療登革熱病毒。在典型的實施方案中，化合物1或化合物2以一種或多種藥物組合物提供以達到此有效量。

2、此外，還發(fā)現(xiàn)化合物1或化合物2還對登革熱血清型1、3和4具有活性。通過這一新發(fā)現(xiàn)，證實了本文所述的高劑量方案中的化合物1和化合物2對所有血清型的登革熱病毒(登革熱病毒血清型1、2、3和4)均具有效力。

3、

4、本說明書中使用的術(shù)語“化合物1”可以指其游離堿或其藥學(xué)上可接受的鹽?；衔?是((r)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2-氨基-6-(甲基氨基)-9h-嘌呤-9-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?-l-丙氨酸異丙酯。

5、還發(fā)現(xiàn)化合物1(及其半硫酸鹽化合物2)具有有利的雙重作用機制?；钚源x物是病毒蛋白ns5的rna依賴性rna聚合酶(rdrp)域的抑制劑，也是ns5的2'-o-甲基轉(zhuǎn)移酶(mtase)域的抑制劑。ns5蛋白的兩種功能都是復(fù)制所必需的。抑制參與rna復(fù)制的兩種關(guān)鍵蛋白質(zhì)功能可降低形成抗性突變體的機會。

6、如實施例2中所述以及表1和圖2中所示，已發(fā)現(xiàn)化合物1(at-281)對所有四種登革熱血清型均表現(xiàn)出體外效力，包括血清型1(ec50＝0.57μm)、血清型2(多種菌株中ec50<7μm)、血清型3(多種菌株中ec50<1.5μm)和血清型4(多種菌株中ec50<1.2μm)。泛血清型活性是有利的，因為它將嚴重登革熱的風險降至最低，并減少或消除了在施用該化合物之前進行血清型測試的需要。

7、或者，化合物1可以以游離堿形式或任何所需的藥學(xué)上可接受的鹽形式用于本文所述的高劑量方案?；衔?是化合物1的半硫酸鹽，其是具有改進的體內(nèi)特性的化合物1的有利形式。例如，化合物2在登革熱感染(d2y98p病毒株)的小鼠模型中體內(nèi)有效，如實施例18所述。例如，使用化合物2可在感染后(pi)第6天和第8天觀察到圖8a所示血液中和圖8b所示脾臟中的病毒血癥有顯著差異。此外，與載體對照處理的動物相比，在感染后第3天至第8天觀察到圖9a所示體重減輕和圖9b所示健康評分惡化的顯著預(yù)防效果。重要的是，如圖10所示，存活時間顯著延長，這證明了化合物2對抗登革熱病毒的功效，或者化合物1作為游離堿或其藥學(xué)上可接受的鹽的功效。

8、在某些方面，化合物2或化合物1(作為游離堿或其藥學(xué)上可接受的鹽)通常以本文所述的高劑量方案施用于患者，其中該患者患有多種黃病毒，其中一種黃病毒是登革熱，例如患者患有登革熱血清型1、2、3或4和另一種黃病毒?；衔?(at-281)在降低3種不同細胞類型中體外測試的7種黃病毒的11種不同菌株的病毒滴度方面表現(xiàn)出強效作用，0.21至1.41μm的濃度范圍可實現(xiàn)對病毒誘導(dǎo)的細胞病變效應(yīng)(cpe)的50％抑制(表1和圖2)。

9、如實施例10所述和圖1所示，化合物2或化合物1的活性代謝物(化合物5)充當gtp類似物，并通過ns5?rna依賴性rna聚合酶(rdrp)摻入rna，從而立即終止合成。

10、

11、使用所有四種denv血清型，在競爭性核苷酸摻入試驗中測量了化合物5的鏈終止效率。與天然底物三磷酸鳥苷相比，化合物5摻入rna的量少9到12倍(即每摻入約7-8個gtp，就會摻入一個at-9010)。相比之下，每摻入100個utp(天然三磷酸尿苷)，三磷酸索非布韋會摻入不到1次rna。

12、鑒別試驗數(shù)據(jù)如下。

13、 偏好 denv1 denv2 denv3 denv4 gtp>at-9010 7.7±0.5 9.3±0.1 11.6±1.3 11.2±0.7 gtp>at-9002 19.4±2.8 18.2±0.2 17.5±1.5 41.5±7.3 utp>sof-tp >100 >100 >100 >100

14、化合物5(以及化合物1和化合物2)也是登革熱病毒ns5的2'-o-甲基轉(zhuǎn)移酶(mtase)結(jié)構(gòu)域的抑制劑。mtase結(jié)構(gòu)域負責封閉復(fù)制的病毒rna的2'端。rna帽可減輕宿主對病毒rna的免疫反應(yīng)。抑制mtase結(jié)構(gòu)域是化合物5的第二種作用機制。

15、通過熱位移分析測量了化合物5與mtase結(jié)構(gòu)域的結(jié)合。化合物5對denv1、denv2、denv3和denv4?mtase結(jié)構(gòu)域的穩(wěn)定性幾乎是之前報道的mtase抑制劑西奈芬凈(sinefungin)的兩倍(西奈芬凈為1.9±0.1℃，而化合物5為3.8±0.1℃)。

16、此外，化合物5比天然底物三磷酸鳥苷更有效地穩(wěn)定了rdrp結(jié)構(gòu)域(化合物5為5.6±0.1℃，而gtp為4.5±0.2℃)，而西奈芬凈對rdrp結(jié)構(gòu)域的穩(wěn)定作用可忽略不計(0.1℃±0.1℃)。

17、確認化合物5針對mtase結(jié)構(gòu)域的活性，在過濾結(jié)合試驗中測得的ic50為29.6+2μm。之前已證明化合物5在細胞中的濃度可達數(shù)百微摩爾(good,s.等人preclinicalevaluation?of?at-527,a?novel?guanosine?nucleotide?prodrugwith?potent,pan-genotypic?activity?against?hepatitis?c?virus,plos?one?15(1):e0227104)，ic50為29.6μm表明化合物5是mtase結(jié)構(gòu)域的有效抑制劑。

18、因此，化合物5(其是化合物2和化合物1的活性代謝物)具有多種對抗登革熱病毒的作用機制。多種作用機制可能阻止耐藥性的產(chǎn)生，尤其是針對高度保守的mtase結(jié)構(gòu)域。

19、在本發(fā)明的某些方面中，式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽任選地在藥學(xué)上可接受的載體中，以高劑量(每劑至少700或750mg，例如每劑700-1000mg(其可以為方便吞咽提供1、2、3或4種不同的劑型)，每日兩次、三次或更多次)施用，以治療有此需要的宿主(通常是人類)的登革熱病毒感染：

20、

21、其中：

22、r2為c1-6烷基(包括甲基、乙基、丙基和異丙基)、c3-7環(huán)烷基、芳基、芳基(c1-c4烷基)-、雜芳基、雜芳基(c1-c4烷基)-或雜烷基，其各自任選地被1、2、3或4個取代基取代，所述取代基在每種情況下獨立地選自r22；

23、r3為氫或任選取代有1、2、3或4個取代基的c1-6烷基，所述取代基在每種情況下獨立地選自r33；

24、r4a和r4b獨立地選自氫、c1-6烷基、芳基(c1-6烷基)-、c3-7環(huán)烷基、c3-7環(huán)烷基(c1-6烷基)-、雜芳基(c1-6烷基)-和芳基，其每個任選地被1、2、3或4個取代基取代，所述取代基在每種情況下獨立地選自r44；

25、r5為氫、c1-6烷基(包括甲基、乙基、丙基和異丙基)、c1-6鹵代烷基或c3-7環(huán)烷基，且在替代性實施方案中，r5為芳基(c1-c4烷基)-、芳基、雜芳基或雜烷基，其任選地被1、2、3或4個取代基取代，所述取代基在每種情況下獨立地選自r55；

26、r22、r33、r44和r55在每種情況下獨立地選自氫、c1-c6烷基、c3-c7環(huán)烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、雜環(huán)、雜環(huán)烷基、鹵代烷氧基、鹵代烷基、c(o)r66、c(o)or66、c(o)n(r66)2和氰基；

27、r66在每種情況下獨立地選自氫、c1-c6烷基、芳基(c1-c6烷基)-、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基(c1-c6烷基)-、雜芳基(c1-c6烷基)-和芳基。

28、在本發(fā)明的某些方面中，式ii化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽任選地在藥學(xué)上可接受的載體中，以高劑量(每劑至少700-1000mg，例如每劑700-850mg，每日兩次、三次或更多次)施用，以治療有此需要的宿主(通常是人類)的登革熱病毒感染：

29、

30、其中：

31、r3為氫或任選取代有1、2、3或4個取代基的c1-6烷基，所述取代基在每種情況下獨立地選自r33；

32、r4a和r4b獨立地選自氫、c1-6烷基、芳基(c1-6烷基)-、c3-7環(huán)烷基、c3-7環(huán)烷基(c1-6烷基)-、雜芳基(c1-6烷基)-和芳基，其每個任選地被1、2、3或4個取代基取代，所述取代基在每種情況下獨立地選自r44；

33、r5為氫、c1-6烷基(包括甲基、乙基、丙基和異丙基)、c1-6鹵代烷基或c3-7環(huán)烷基，且在替代性實施方案中，r5為芳基(c1-c4烷基)-、芳基、雜芳基或雜烷基，其任選地被1、2、3或4個取代基取代，所述取代基在每種情況下獨立地選自r55；

34、r22、r33、r44和r55在每種情況下獨立地選自氫、c1-c6烷基、c3-c7環(huán)烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、雜環(huán)、雜環(huán)烷基、鹵代烷氧基、鹵代烷基、c(o)r66、c(o)or66、c(o)n(r66)2和氰基；

35、r66在每種情況下獨立地選自氫、c1-c6烷基、芳基(c1-c6烷基)-、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基(c1-c6烷基)-、雜芳基(c1-c6烷基)-和芳基。

36、所有r基團均應(yīng)以不包括冗余的方式進行解釋，即如本領(lǐng)域所知，烷基不會被烷基取代；但是，例如被烷氧基取代的烷氧基不是冗余的。被芳基取代的芳基在有限的范圍內(nèi)落入芳基的定義。除非上下文中明確指出，否則r基團不是任選取代的。

37、c1-c6烷基的非限制性實例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、仲丁基、異丁基、-ch2c(ch3)3、-ch(ch2ch3)2和-ch2ch(ch2ch3)2。c3-c6環(huán)烷基的非限制性實例包括環(huán)丙基、ch2-環(huán)丙基、環(huán)丁基和ch2-環(huán)丁基。

38、芳基(c1-c4烷基)-的非限制性實例是芐基。芳基的非限制性實例是苯基和萘基。

39、在某些方面，該化合物是式iia化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

40、

41、其中所有變量如本文所定義。

42、在某些方面，該化合物是式iib化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

43、

44、其中所有變量如本文所定義。

45、在某些方面，本文所述的選定化合物用于治療登革熱病毒感染，其可為血清型1、3和/或4。在一些實施方案中，本文所述的選定化合物用于治療登革熱病毒感染，其可為血清型1、2、3和/或4，通過向有此需要的患者施用約700-1000mg(例如每劑700-850mg)的劑量，每日兩次、三次或更多次(并且在一些實施方案中，施用650、675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975或1000mg的劑量，每日兩次或三次)來治療。在某些實施方案中，化合物1或化合物2以約700-1000mg的劑量施用，例如每次給藥至少約700、750或800mg(其可以以多種固體劑型遞送以達到全劑量)。

46、在特定實施方案中，化合物2以每日兩次、每次三個250mg游離堿重量的固體劑型的劑量遞送，以達到750mg的總劑型劑量。在其他實施方案中，化合物2以每日兩次、每次兩個375mg固體劑型的劑量遞送，以達到750mg的總劑型劑量。

47、在某些實施方案中，將化合物1或化合物2每日給藥兩次、三次或四次，持續(xù)四天、五天、六天、七天、八天、九天或十天。在某些實施方案中，該治療方案可治療登革熱病毒血清型1、3和/或4，或甚至1、2、3和/或4。為清楚起見，除非另有說明，施用的活性化合物的毫克劑量基于核苷酸氨基磷酸酯(nucleotide?phosphoramidate)的鹽的重量(如果使用藥學(xué)上可接受的鹽)。出于換算目的，約750mg劑量的化合物2對應(yīng)于約692mg劑量的化合物1(在“約700mg”的范圍內(nèi))，化合物1為游離堿形式。

48、本發(fā)明包括治療和預(yù)防性(prophylactic或preventative)療法。在一些實施方案中，根據(jù)本文提供的高劑量方法，將本文所述的活性ns5rdrp抑制化合物作為預(yù)防劑施用于已暴露于登革熱病毒感染(例如登革熱1型病毒、登革熱2型病毒、登革熱3型病毒和/或登革熱4型病毒)并因此有感染登革熱病毒感染風險的宿主(例如人類)。在另一替代實施方案中，提供了預(yù)防傳播的方法，包括在暴露于可能被感染的人群之前(包括在旅行或公共活動或會議期間)向人類施用本文所述的高劑量有效量的本文所述的化合物之一持續(xù)足夠長的時間，包括例如在傳染性情況發(fā)生前最多3、5、7、10、12、14天或更多天。

49、本發(fā)明還提供了用于可擴展制備化合物1的立體選擇性方法，其中rp非對映異構(gòu)體以基本純的形式生成。非對映異構(gòu)體的基本上純的形式通常是指rp非對映異構(gòu)體相對于sp非對映異構(gòu)體至少約90％或更多。式中間體a、中間體b的化合物與基于脲的活化劑(例如1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽(hatu))的反應(yīng)優(yōu)先形成sp氨基磷酸酯中間體c。wo?2022/040473a1中描述了類似的方法，該專利已轉(zhuǎn)讓給atea?pharmaceuticals，其中所需產(chǎn)物是sp氨基磷酸酯。

50、

51、中間體c的氨基磷酸酯上的芳氧基被一個、兩個或三個r6基團取代，從而激活它例如通過吸電子作用進行置換。在第二步中，活化的苯氧基離去基團被苯酚替換，從而反轉(zhuǎn)磷立體化學(xué)以形成化合物1。

52、在某些實施方案中，基本上純的r-磷非對映異構(gòu)體的純度為約93％或更高、純度為約95％或更高、純度為約98％或更高或者甚至純度為99％或更高。

53、在某些實施方案中，將700mg至1,000mg劑量以三種固體劑型施用于需要治療登革熱的患者，其中將總計約700mg至約1,000mg固體劑型的化合物1或2每日施用兩次(每日共六粒)。在某些實施方案中，將總計約700mg至約1,000mg的三種固體劑型的化合物1或2連續(xù)施用四天、五天、六天或七天。在某些實施方案中，將總計約700mg至約1,000mg的三種固體劑型的化合物1或2連續(xù)施用八天、九天、十天、十一天、十二天、十三天或十四天。

54、在某些實施方案中，將組合物b連續(xù)施用四、五、六或七天。在某些實施方案中，將組合物a連續(xù)施用八、九、十、十一、十二、十三或十四天。

55、在一些實施方案中，化合物1或其藥學(xué)上可接受的鹽用于組合物a或組合物b。

56、在某些實施方案中，將化合物1或化合物2每日施用兩次，劑量至少約675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975或1000mg，其中作為示例性實例，每8+/-2小時施用一次化合物。

57、在某些方面，本文所述的給藥方案是在癥狀出現(xiàn)后四、三天、兩天或一天內(nèi)給藥。在某些實施方案中，本文所述的給藥方案是在癥狀出現(xiàn)后48小時內(nèi)給藥。

58、因此，本發(fā)明包括以下特點：

59、(a)化合物1或化合物2的給藥方案包括每日兩次或三次向患有登革熱血清型1、2、3和/或4的患者施用每劑至少約675-1000mg或700-1000mg，例如675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975或1000mg的化合物1或化合物2。

60、(b)如本文進一步描述的對登革熱血清型1、3或4的治療。

61、(c)化合物1或化合物2的給藥方案包括每日兩次或三次向患有登革熱血清型1、3和/或4的患者施用每劑至少約675-1000mg，例如675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975或1000mg的化合物1或化合物2。

62、(d)(a)、(b)或(c)的給藥方案，其中將化合物1或化合物2連續(xù)施用三天、四天、五天、六天、七天、八天、九天、十天、十一天、十二天、十三天、十四天或十五天。

63、(e)(a)、(b)或(c)的給藥方案，其中將化合物1或化合物2以約750mg的劑量每日三次施用十四天。

64、(f)(a)、(b)或(c)的給藥方案，其中將化合物1或化合物2以按游離堿重量計約750mg的劑量每日三次施用持續(xù)五天。

65、(g)(a)或(b)的給藥方案，其中化合物1或化合物2以按游離堿重量計約1,000mg的劑量每日兩次施用持續(xù)五天、六天或七天。

66、(h)(a)-(g)中任一項的給藥方案，其中將化合物2施用于患者。

67、(i)(h)的給藥方案，其中將約675mg至1,000mg的劑量以三種固體劑型給藥。

68、(j)(a)-(g)中任一項的給藥方案，其中將化合物1施用于患者。

69、(k)治療有此需要的患者中登革熱的方法，該方法包括按照(a)-(j)中任一項的給藥方案施用化合物1或化合物2。

70、(l)(k)的方法，其中該給藥方案包括施用包含化合物1或化合物2的藥物組合物。

71、(m)(a)-(k)中任一項的給藥方案在制備用于治療登革熱的藥物中的用途。

72、(n)(l)或(m)的用途，其中該給藥方案包括施用包含化合物1或化合物2的藥物組合物。

73、(o)治療有此需要的患者中登革熱的方法，該方法包括根據(jù)本文描述的高劑量方案施用式i化合物。

74、(p)治療有此需要的患者中登革熱的方法，該方法包括根據(jù)本文所述的高劑量方案施用式ii、式iia或式iib的化合物。

75、(q)制備化合物1或2的方法，包括如上所述使式中間體a、中間體b的化合物與脲基活化劑(例如1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽(hatu))以優(yōu)先形成sp氨基磷酸酯中間體c的方式發(fā)生反應(yīng)，然后在第二步中，用苯酚替代活化的苯氧基離去基團，從而反轉(zhuǎn)磷立體化學(xué)以形成r-磷非對映異構(gòu)體構(gòu)型的化合物1。

76、(r)(q)的方法，其中基本上純的r-磷非對映異構(gòu)體的純度為約93％或更高、約95％或更高、約98％或更高、或者甚至99％或更高。