本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種抑制nox1基因表達(dá)的小干擾核酸及其制藥用途。

背景技術(shù)：

1、rna干擾(rna?interference，縮寫為rnai)是指一種分子生物學(xué)上由雙鏈rna誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象，其機(jī)制是通過(guò)阻礙特定基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯來(lái)抑制基因表達(dá)。當(dāng)細(xì)胞中導(dǎo)入與內(nèi)源性信使rna(messenger?rna，縮寫為mrna)編碼區(qū)同源的雙鏈rna時(shí)，可誘導(dǎo)靶mrna降解從而導(dǎo)致基因表達(dá)沉默。長(zhǎng)度為20-25nt的雙鏈小干擾rna(small?interfering?rna，sirna)能夠引發(fā)rnai，特異性下調(diào)或關(guān)閉特定基因的表達(dá)，并具備高效性、易合成和易操作等優(yōu)點(diǎn)，因此該技術(shù)已被廣泛用于基因功能探索和傳染性疾病及惡性腫瘤的基因治療領(lǐng)域。

2、原發(fā)性膽汁性膽管炎(pbc)和原發(fā)性硬化性膽管炎(psc)是慢性膽汁淤積性肝病，其特征是肝內(nèi)和肝外膽管的炎癥、纖維化和破壞，可進(jìn)展為晚期纖維化、肝硬化、門脈高壓和肝細(xì)胞癌(hcc)，嚴(yán)重的患者需要進(jìn)行肝移植治療。此外，pbc和psc可并發(fā)相關(guān)免疫介導(dǎo)疾病如炎癥性腸病、關(guān)節(jié)病和其他具有共同易感性疾病。目前，對(duì)于pbc和psc的一線治療藥物是熊去氧膽酸(udca)，但約有三分之一的患者對(duì)udca沒有完全反應(yīng)；二線治療藥物奧貝膽酸(oca)受到顯著的副作用限制，包括瘙癢和高脂血癥，并禁用于門脈高壓和/或肝失代償?shù)幕颊?，且二者的治療周期長(zhǎng)，需每天服藥導(dǎo)致患者的依從性較差。研究表明膽管上皮細(xì)胞衰老參與了pbc和psc的發(fā)病。因此探尋調(diào)控膽管上皮細(xì)胞衰老的關(guān)鍵分子等對(duì)于pbc和psc的疾病防治及新型藥物的開發(fā)具有重大的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種抑制nox1基因表達(dá)的小干擾核酸及其制藥用途，對(duì)治療原發(fā)性膽汁性膽管炎和/或原發(fā)性硬化性膽管炎起到重要作用。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

3、一種抑制nox1基因表達(dá)的小干擾核酸在制備原發(fā)性膽汁性膽管炎和/或原發(fā)性硬化性膽管炎藥物中的用途。

4、優(yōu)選的，所述小干擾核酸由其正義鏈與其反義鏈組成，所述正義鏈和反義鏈完全或部分反向互補(bǔ)形成雙鏈區(qū)，所述反義鏈與靶基因上的區(qū)段反向互補(bǔ)，所述正義鏈具有如seq?id?no.1所示的核苷酸序列和/或該核苷酸序列的任意核苷酸進(jìn)行了修飾的序列，所述反義鏈具有如seq?id?no.2所示的核苷酸序列和/或?qū)塑账嵝蛄械娜我夂塑账徇M(jìn)行了修飾的序列；

5、其中：

6、正義鏈為5’-cugagucuuggaagtggauccuu-3’(seq?id?no.1)；

7、反義鏈為5’-aaggauccacuuccaagacucag-3’(seq?id?no.2)。

8、優(yōu)選的，為了增加了分子的生物穩(wěn)定性或者增加多核酸分子與靶核酸之間形成的雙鏈體的物理穩(wěn)定性，所述小干擾核酸在2’位置處糖部分進(jìn)行修飾。

9、優(yōu)選的，所述糖部分的修飾為2’-o-甲基修飾、2’-o-甲氧基乙基修飾、2’-o-氨基丙基修飾、2’-脫氧修飾、t-脫氧-2’-氟代修飾、2’-o-氨基丙基修飾、2’-o-二甲基氨基乙基修飾、2'-o-二甲基氨基丙基修飾、t-o-二甲基氨基乙氧基乙基修飾或2’-o-n-甲基乙酰胺基修飾中的一種或多種。

10、優(yōu)選的，所述小干擾核酸中至少有一個(gè)磷酸酯基為含有修飾基團(tuán)的磷酸酯基，所述含有修飾基團(tuán)的磷酸酯基為磷酸酯基中的磷酸二酯鍵中的至少一個(gè)氧原子被硫原子取代而形成的硫代磷酸酯基。

11、優(yōu)選的，所述正義鏈和/或反義鏈的3’末端連接有1至4個(gè)額外的核苷酸，在所述正義鏈和反義鏈互補(bǔ)配對(duì)后形成至少一個(gè)由1至4個(gè)核苷酸構(gòu)成的3’突出端，所述3’突出端末尾為連續(xù)的2個(gè)脫氧胸腺嘧啶核苷酸dtdt。

12、優(yōu)選的，所述小干擾核酸至少為下列兩種修飾序列中的一種：

13、sinox1-1：

14、正義鏈：

15、5’-mc-s-mu-s-mgmamgmumcmumumgfgmafamgtmgmgmamumcmcmumudtdt-3’；

16、反義鏈：

17、5’-ma-s-fa-s-mg-fg-fa-fu-mc-fcmafcmumumcfcmafamgmamcmumcmamgdtdt-3’；

18、sinox1-2：

19、正義鏈：5’-csusgagucuuggaagtmgmgmamumcmcmumudtdt-3’；

20、反義鏈：5’-ma-s-ma-s-mgmgmamumccacuuccaagacucagdtdt-3’；

21、其中m表示該字母右側(cè)的一個(gè)核苷酸的核糖基團(tuán)為2’-甲氧基核糖基；s表示該字母兩側(cè)的核糖核苷酸之間磷酸酯基為硫代磷酸酯基；f表示該字母左側(cè)的一個(gè)核苷酸的核糖基被氟取代而成的2’-氟代核糖基；d表示該字母右側(cè)的一個(gè)核苷酸為脫氧核糖核苷酸。

22、有益效果：

23、本發(fā)明針對(duì)的小干擾核酸可以抑制nox1基因的表達(dá)，有效降低肝臟部位的氧化壓力，改善膽管上皮細(xì)胞衰老，抑制肝部的炎性水平和肝纖維化；可有效縮小ddc誘導(dǎo)小鼠psc模型中肝臟部位膽色素沉積和肝纖維化面積，改善小鼠的肝纖維化癥狀。另外可以降低在膽管結(jié)扎手術(shù)后小鼠模型的肝纖維化程度。相比于現(xiàn)有技術(shù)具有更好地治療效果，可以有效應(yīng)用在治療如原發(fā)性膽汁性膽管炎或原發(fā)性硬化性膽管炎的肝臟疾病的藥物中。

技術(shù)特征：

1.一種抑制nox1基因表達(dá)的小干擾核酸在制備原發(fā)性膽汁性膽管炎和/或原發(fā)性硬化性膽管炎藥物中的用途。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：所述小干擾核酸由其正義鏈與其反義鏈組成，所述正義鏈和反義鏈完全或部分反向互補(bǔ)形成雙鏈區(qū)，所述反義鏈與靶基因上的區(qū)段反向互補(bǔ)，所述正義鏈具有如seq?id?no.1所示的核苷酸序列和/或該核苷酸序列的任意核苷酸進(jìn)行了修飾的序列，所述反義鏈具有如seq?id?no.2所示的核苷酸序列和/或?qū)塑账嵝蛄械娜我夂塑账徇M(jìn)行了修飾的序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于：所述小干擾核酸在2’位置處糖部分進(jìn)行修飾。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于：所述糖部分的修飾為2’-o-甲基修飾、2’-o-甲氧基乙基修飾、2’-o-氨基丙基修飾、2’-脫氧修飾、t-脫氧-2’-氟代修飾、2’-o-氨基丙基修飾、2’-o-二甲基氨基乙基修飾、2'-o-二甲基氨基丙基修飾、t-o-二甲基氨基乙氧基乙基修飾或2’-o-n-甲基乙酰胺基修飾中的一種或多種。

5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于：所述小干擾核酸中至少有一個(gè)磷酸酯基為含有修飾基團(tuán)的磷酸酯基，所述含有修飾基團(tuán)的磷酸酯基為磷酸酯基中的磷酸二酯鍵中的至少一個(gè)氧原子被硫原子取代而形成的硫代磷酸酯基。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于：所述正義鏈和/或反義鏈的3’末端連接有1至4個(gè)額外的核苷酸，在所述正義鏈和反義鏈互補(bǔ)配對(duì)后形成至少一個(gè)由1至4個(gè)核苷酸構(gòu)成的3’突出端。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或6任所述的用途，其特征在于：所述小干擾核酸至少為下列兩種修飾序列中的一種：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種抑制NOX1基因表達(dá)的小干擾核酸及其制藥用途。要求保護(hù)一種抑制NOX1基因表達(dá)的小干擾核酸在制備原發(fā)性膽汁性膽管炎或原發(fā)性硬化性膽管炎藥物中的用途。該小干擾核酸通過(guò)抑制NOX1基因表達(dá)可以有效改善膽管上皮細(xì)胞衰老的情況，降低炎癥介導(dǎo)的肝纖維化過(guò)程的速度，從而有望應(yīng)用在治療原發(fā)性膽汁性膽管炎或原發(fā)性硬化性膽管炎的藥物上。

技術(shù)研發(fā)人員：樸美玉,武佳琦,張含鑫,張昱,蘇瀛晞,周璐
受保護(hù)的技術(shù)使用者：佑嘉（杭州）生物醫(yī)藥科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30