本發(fā)明涉及生物材料領(lǐng)域，特別是涉及一種大鯢分泌物粘性生物膜及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：大鯢，也被稱為“中國(guó)大蠑螈”，屬于大鯢科，是最大的現(xiàn)存兩棲動(dòng)物物種之一。它在生物多樣性，遺傳進(jìn)化和生物化學(xué)領(lǐng)域顯示了巨大的研究進(jìn)展和寶貴的潛力。大鯢粘液是大鯢體表受刺激后的一種大鯢分泌物，前期的研究發(fā)現(xiàn)大鯢分泌物具有粘合性能好、生物相容性好且可降解等優(yōu)點(diǎn)，可開(kāi)發(fā)成為止血材料、粘合劑及軟組織填充材料等。然而，傳統(tǒng)的大鯢分泌物應(yīng)用形式大多為粉末狀或凝膠狀。在臨床上，需要使用膜狀材料對(duì)創(chuàng)面覆蓋或包裹，粉末和凝膠均無(wú)法滿足上述臨床需求。因此急需開(kāi)發(fā)大鯢分泌物粘性生物膜。但是由于大鯢分泌物的難溶性，研究人員不斷嘗試將大鯢分泌物制備成膜，但都難以在不破壞大鯢分泌物本身粘合性、生物相容性等原有性能的前提下形成大鯢分泌物粘性生物膜。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：基于此，有必要提供一種能夠在不破壞大鯢分泌物原有性能的基礎(chǔ)上形成大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法。此外，還提供一種大鯢分泌物粘性生物膜及其應(yīng)用。一種大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法，包括如下步驟：將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中，得到大鯢分泌物溶液，其中，所述酸性溶液選自維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中的至少一種；及將所述大鯢分泌物溶液凍干成膜或真空干燥成膜，得到所述大鯢分泌物粘性生物膜。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述酸性溶液為維生素c溶液，所述維生素c溶液中維生素c的濃度為0.1mol/l～1mol/l；及/或，所述酸性溶液為鹽酸溶液，所述鹽酸溶液中氯化氫的濃度為0.1mol/l～1mol/l；及/或，所述酸性溶液為醋酸溶液，所述醋酸溶液中醋酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l；及/或，所述酸性溶液為硫酸溶液，所述硫酸溶液中硫酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l；及/或，所述酸性溶液為磷酸溶液，所述磷酸溶液中磷酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l；及/或，所述酸性溶液為硝酸溶液，所述硝酸溶液中硝酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l。在一個(gè)實(shí)施方式中，將所述大鯢分泌物溶液凍干成膜，所述凍干成膜的步驟具體包括：將大鯢分泌物-溶液以恒定的速率降溫至-50℃～-30℃冷凍0.5h～4h；及將冷凍后的所述大鯢分泌物溶液置于絕對(duì)壓強(qiáng)為1pa～10pa的條件下放置12h～48h。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述大鯢分泌物為大鯢粘液的干燥粉。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述大鯢分泌物溶液中所述大鯢分泌物的濃度為0.001g/ml～1g/ml。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述大鯢分泌物通過(guò)如下方法制備：從大鯢的外表面刮取大鯢粘液；將所述大鯢粘液置于溫度為-30℃～-10℃的條件下冷凍0.5h～2h；及將冷凍后的所述大鯢粘液置于溫度為-50℃～-30℃、絕對(duì)壓強(qiáng)為5pa～20pa的條件下真空冷凍干燥，得到所述大鯢分泌物。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述大鯢分泌物的粒徑為1μm～100μm。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中的步驟中，所述溶解的操作為在溫度為10℃～35℃條件下攪拌處理4h～8h。一種大鯢分泌物粘性生物膜，通過(guò)上述任一項(xiàng)所述的大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法制備得到。上述的大鯢分泌物粘性生物膜在制備止血膜、組織粘合膜或繃帶中的應(yīng)用。上述大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法，先將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中，得到大鯢分泌物溶液，然后將大鯢分泌物溶液凍干成膜或真空干燥成膜，得到大鯢分泌物粘性生物膜。發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量的探索研究，預(yù)料不到地發(fā)現(xiàn)，大鯢分泌物在維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中具有較高的溶解度，因此能夠?qū)⒋篥F分泌物溶解在上述酸性溶液中形成大鯢分泌物溶液，然后將大鯢分泌物溶液凍干成膜獲得大鯢分泌物粘性生物膜。這種制備方法不破壞大鯢分泌物的原有結(jié)構(gòu)，形成的大鯢分泌物粘性生物膜保留了大鯢分泌物較好的粘合性、生物相容性等優(yōu)點(diǎn)，且該大鯢分泌物粘性生物膜質(zhì)地均勻、韌性和強(qiáng)度較好，能夠作為止血膜、組織粘合膜或繃帶等對(duì)創(chuàng)面進(jìn)行覆蓋或包裹，具有廣闊的應(yīng)用前景。附圖說(shuō)明圖1為一實(shí)施方式的大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法的流程圖；圖2為實(shí)施例1中制備的大鯢分泌物粘性生物膜的示意圖；圖3為測(cè)試四中對(duì)照組和用實(shí)施例2制備的大鯢分泌物粘性生物膜處理傷口的結(jié)果比對(duì)圖；圖4為測(cè)試五中用實(shí)施例3制備的大鯢分泌物粘性生物膜植入到小鼠皮下囊后隨時(shí)間變化的結(jié)果比對(duì)圖。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合具體實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式做詳細(xì)的說(shuō)明。在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來(lái)實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進(jìn)，因此本發(fā)明不受下面公開(kāi)的具體實(shí)施的限制。除非另有定義，本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與屬于本發(fā)明的
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說(shuō)明書中所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體的實(shí)施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。請(qǐng)參閱圖1，一實(shí)施方式的大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法包括如下步驟s110～s150。s110、從大鯢的外表面刮取大鯢粘液。具體地，將鮮活大鯢用清水清洗體表并去除蛻皮等雜質(zhì)，然后用扁平物如勺子來(lái)回刮擦大鯢體表，待大鯢體表分泌大量乳白色粘液時(shí)，刮取收集大鯢粘液。一般每次可從5kg左右的成年大鯢上收集約5g大鯢粘液。本實(shí)施方式中，總共刮取獲得30g大鯢粘液。s120、將s110中收集的大鯢粘液置于溫度為-30℃～-10℃的條件下冷凍0.5h～2h。具體地，將收集的大鯢粘液置于-20℃冰箱中冷凍1h。s130、將s120中冷凍后的大鯢粘液置于溫度為-50℃～-30℃、絕對(duì)壓強(qiáng)為5pa～20pa的條件下真空冷凍干燥，得到大鯢分泌物。具體地，將冷凍后的大鯢粘液置于溫度為-50℃～-30℃、絕對(duì)壓強(qiáng)為5pa～20pa的條件下真空冷凍干燥的操作中，真空冷凍干燥的時(shí)間為12h～48h。具體地，絕對(duì)壓強(qiáng)為5pa～20pa表示實(shí)際壓強(qiáng)低于大氣壓的真空條件下去除大鯢粘液內(nèi)部的水分，獲得大鯢粘液的干燥粉。本實(shí)施方式中，將冷凍后的大鯢粘液置于凍干機(jī)中，在溫度為-40℃、絕對(duì)壓強(qiáng)為10pa的條件下，干燥48h，使得大鯢粘液干燥形成粉末狀。具體地，s120中的冷凍溫度高于s130中真空冷凍干燥的溫度，使得大鯢粘液逐步冷卻，避免驟冷破壞大鯢粘液內(nèi)部結(jié)構(gòu)。在一個(gè)實(shí)施方式中，真空冷凍干燥得到大鯢粘液的干燥粉后，還包括將大鯢粘液的干燥粉粉碎形成微小顆粒。具體地，用低溫超微粉碎機(jī)粉碎大鯢粘液的干燥粉，邊粉碎邊加液氮，使溫度保持低溫，粉碎后得到微小顆粒狀的大鯢分泌物，促進(jìn)大鯢分泌物溶解在酸性溶液中，從而制備大鯢分泌物粘性生物膜。在一個(gè)實(shí)施方式中，大鯢分泌物的粒徑為1μm～100μm。在一個(gè)實(shí)施方式中，大鯢分泌物的粒徑為20μm～60μm。本實(shí)施方式中，大鯢分泌物的粒徑為50μm。s140、將s130中得到的大鯢分泌物溶解在酸性溶液中，得到大鯢分泌物溶液，其中酸性溶液選自維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中的至少一種。具體地，大鯢分泌物為大鯢粘液的干燥粉。其中酸性溶液選自維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中的至少一種。在一個(gè)實(shí)施方式中，酸性溶液為維生素c溶液，維生素c溶液中維生素c的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，維生素c溶液中維生素c的濃度為0.5mol/l～1mol/l。具體地，維生素c溶液的溶劑為水。在一個(gè)實(shí)施方式中，酸性溶液為鹽酸溶液，鹽酸溶液中氯化氫的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，鹽酸溶液中氯化氫的濃度為0.5mol/l～1mol/l。具體地，鹽酸溶液的溶劑為水。在一個(gè)實(shí)施方式中，酸性溶液為醋酸溶液，醋酸溶液中醋酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，醋酸溶液中醋酸的濃度為0.5mol/l～1mol/l。具體地，醋酸溶液的溶劑為水。在一個(gè)實(shí)施方式中，酸性溶液為硫酸溶液，硫酸溶液中硫酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，硫酸溶液中硫酸的濃度為0.1mol/l～0.5mol/l。具體地，硫酸溶液的溶劑為水。在一個(gè)實(shí)施方式中，酸性溶液為磷酸溶液，磷酸溶液中磷酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，磷酸溶液中磷酸的濃度為0.5mol/l～1mol/l。具體地，磷酸溶液的溶劑為水。在一個(gè)實(shí)施方式中，酸性溶液為硝酸溶液，硝酸溶液中硝酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，硝酸溶液中硝酸的濃度為0.5mol/l～1mol/l。具體地，硝酸溶液的溶劑為水。發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量的探索研究，預(yù)料不到地發(fā)現(xiàn)，大鯢分泌物在維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中具有較高的溶解度，因此能夠?qū)⒋篥F分泌物溶解在上述酸性溶液中形成大鯢分泌物溶液，然后將大鯢分泌物溶液凍干成膜獲得大鯢分泌物粘性生物膜。雖然上述酸性溶液為什么能夠溶解大鯢分泌物的機(jī)制尚不明確，可能是跟酸性溶液中的h離子能夠與大鯢分泌物形成離子鍵有關(guān)。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，大鯢分泌物在上述酸性溶液中具有較高的溶解度，在常溫下能夠達(dá)到1g/ml。因而能夠在上述酸性溶液中溶解較高劑量的大鯢分泌物，進(jìn)而冷凍干燥成膜，制備大鯢分泌物粘性生物膜。在一個(gè)實(shí)施方式中，大鯢分泌物溶液中大鯢分泌物的濃度為0.001g/ml～1g/ml。具體地，大鯢分泌物溶液中大鯢分泌物的濃度為0.1g/ml～1g/ml。優(yōu)選地，大鯢分泌物溶液中大鯢分泌物的濃度為0.005g/ml～0.5g/ml。如大鯢分泌物的濃度過(guò)高，不易溶解，較難形成混合均勻的大鯢分泌物溶液。如大鯢分泌物的濃度過(guò)低，難以凍干形成膜狀生物材料。本實(shí)施方式的大鯢分泌物的濃度為0.001g/ml～1g/ml，濃度適宜，能夠制備形成韌性和強(qiáng)度較好大鯢分泌物粘性生物膜。在一個(gè)實(shí)施方式中，將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中的步驟中，溶解的操作為在溫度為10℃～35℃條件下攪拌處理4h～8h。具體地，將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中的步驟中，溶解的操作為在溫度為15℃～25℃條件下攪拌處理5h～7h。溶解大鯢分泌物時(shí)的溫度條件適宜，使得大鯢分泌物能夠在酸性溶液中溶解，且同時(shí)避免溫度過(guò)高破壞大鯢粘液的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。通過(guò)攪拌處理，加速大鯢分泌物的溶解，從而形成混合均勻的溶液。s150、將s140中得到的大鯢分泌物溶液凍干成膜或真空干燥成膜，得到大鯢分泌物粘性生物膜。大鯢分泌物溶液中溶解了大鯢分泌物，凍干時(shí)，酸性溶液溶劑被揮發(fā)，形成膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。在一個(gè)實(shí)施方式中，將大鯢分泌物溶液凍干成膜的步驟具體包括以下步驟s151～s152。s151、將大鯢分泌物-溶液以恒定的速率降溫至-50℃～-30℃冷凍0.5h～4h。一般在室溫下例如10℃～35℃條件下溶解大鯢分泌物，大鯢分泌物溶液以恒定的速率降溫至-50℃～-30℃，逐步冷卻，避免驟冷破壞大鯢分泌物內(nèi)部結(jié)構(gòu)。在一個(gè)實(shí)施方式中，將大鯢分泌物-溶液加入成型模具中，其中大鯢分泌物溶液在成型模具中的液體厚度為0.5cm～10cm。然后將裝載有大鯢分泌物-溶液的成型模具放入凍干機(jī)中，以0.5℃/min～2℃/min的速率降溫至-50℃～-30℃，冷凍0.5h～4h。具體地，成型模具的大小以及形狀可以根據(jù)實(shí)際需要調(diào)整。在-50℃～-30℃低溫條件下保持一段時(shí)間有利于提高大鯢分泌物的韌性以及強(qiáng)度。s152、將s151中冷凍后的大鯢分泌物溶液置于絕對(duì)壓強(qiáng)為1pa～10pa的條件下放置12h～48h。在絕對(duì)壓強(qiáng)為1pa～10pa的條件下，大鯢分泌物溶液中的溶劑被揮發(fā)，得到膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。具體地，絕對(duì)壓強(qiáng)為1pa～10pa的條件下放置12h～48h后，得到膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜具有微小地孔隙，從而能夠?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)輸提供通道，提高膜的生物相容性。在另一個(gè)實(shí)施方式中，也可以將大鯢分泌物溶液真空干燥成膜。即將大鯢分泌物溶液置于真空條件(低于大氣壓即可)的條件下，大鯢分泌物溶液中的溶劑揮發(fā)，形成大鯢分泌物粘性生物膜。具體地，真空干燥成膜的溫度一般不超過(guò)37℃。上述大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法，先將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中，得到大鯢分泌物溶液，然后將大鯢分泌物溶液凍干成膜或真空干燥成膜，得到大鯢分泌物粘性生物膜。發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量的探索研究，預(yù)料不到地發(fā)現(xiàn)，大鯢分泌物在酸性溶液選自維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中具有較高的溶解度，因此能夠?qū)⒋篥F分泌物溶解在上述酸性溶液中形成大鯢分泌物溶液，然后將大鯢分泌物-溶液凍干成膜獲得大鯢分泌物粘性生物膜。這種制備方法不破壞大鯢分泌物的原有結(jié)構(gòu)，形成的大鯢分泌物粘性生物膜保留了大鯢分泌物較好的粘合性、生物相容性等優(yōu)點(diǎn)，且該大鯢分泌物粘性生物膜質(zhì)地均勻、韌性和強(qiáng)度較好，能夠作為止血膜、組織粘合膜或繃帶等對(duì)創(chuàng)面進(jìn)行覆蓋或包裹，具有廣闊的應(yīng)用前景。需要說(shuō)明的是，實(shí)際應(yīng)用中，大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法不局限于上述步驟s110～s150的順序。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整。如當(dāng)預(yù)先已經(jīng)提取大鯢粘液干燥形成大鯢分泌物或者直接從市場(chǎng)購(gòu)買獲得大鯢分泌物時(shí)，步驟s110～s130可以省略。一實(shí)施方式的大鯢分泌物粘性生物膜，通過(guò)上述的大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法制備得到。上述大鯢分泌物粘性生物膜作為止血膜、組織粘合膜或繃帶的應(yīng)用。該大鯢分泌物粘性生物膜保留了大鯢分泌物較好的粘合性、生物相容性等優(yōu)點(diǎn)，且生物膜的質(zhì)地均勻、韌性和強(qiáng)度較好，能夠作為止血膜、組織粘合膜或繃帶等對(duì)創(chuàng)面進(jìn)行覆蓋或包裹，具有廣闊的應(yīng)用前景。下面為具體實(shí)施例(以下實(shí)施例如無(wú)特殊說(shuō)明，則不含有除不可避免的雜質(zhì)以外的其他未明確指出的組分)實(shí)施例中采用試劑和儀器如非特別說(shuō)明，均為本領(lǐng)域常規(guī)選擇。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如文獻(xiàn)、書本中所述的條件或者試劑盒生產(chǎn)廠家推薦的方法實(shí)現(xiàn)。實(shí)施例1將鮮活大鯢用清水清洗體表并去除蛻皮等雜質(zhì)，然后用勺子來(lái)回刮擦大鯢體表，待大鯢體表分泌大量乳白色粘液時(shí)，刮取收集大鯢粘液。一般每次可從5kg左右的成年大鯢上收集約5g大鯢粘液，總共刮取獲得30g大鯢粘液。將收集的大鯢粘液置于-20℃冰箱中冷凍2h。將冷凍后的大鯢粘液置于凍干機(jī)中，在溫度為-40℃、絕對(duì)壓強(qiáng)為10pa的條件下真空冷凍干燥48h，得到大鯢粘液的干燥粉。用低溫超微粉碎機(jī)粉碎大鯢粘液的干燥粉，邊粉碎邊加液氮，使溫度保持低溫，粉碎后得到平均粒徑為50μm的大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml維生素c溶液中，其中維生素c溶液中維生素c的濃度為0.5mol/l。在常溫下(20℃)攪拌處理6h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取20ml大鯢分泌物溶液注入長(zhǎng)×寬為4cm×4cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機(jī)中，以1℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置2h。隨后將成型模具置于絕對(duì)壓強(qiáng)為5pa的條件下放置24h，得到質(zhì)地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。制備的大鯢分泌物粘性生物膜如圖2(玻璃皿中白色塊狀物)所示。實(shí)施例2按實(shí)施例1的方法制備大鯢分泌物。取0.5g大鯢分泌物加入到20ml的鹽酸溶液中，其中鹽酸溶液中氯化氫的濃度為1mol/l。在常溫下(20℃)攪拌處理4h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取5ml大鯢分泌物溶液注入長(zhǎng)×寬為1cm×6cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機(jī)中，以0.5℃/min的速率降溫至-30℃，并在-30℃溫度條件下冷凍放置0.5h。隨后將成型模具置于絕對(duì)壓強(qiáng)為10pa的條件下放置12h，得到質(zhì)地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。實(shí)施例3按實(shí)施例1的方法制備大鯢分泌物。取0.1g大鯢分泌物加入到20ml的醋酸溶液中，其中醋酸溶液中醋酸的濃度為0.5mol/l。在25℃下攪拌處理4h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取20ml大鯢分泌物溶液注入直徑為0.6cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機(jī)中，以1℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置0.5h。隨后將成型模具置于絕對(duì)壓強(qiáng)為8pa的條件下放置12h，得到質(zhì)地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。實(shí)施例4取1g按實(shí)施例1的方法制備保存的大鯢分泌物加入到20ml的硫酸溶液中，其中硫酸溶液中硫酸的濃度為0.1mol/l。在常溫下(20℃)攪拌處理8h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取20ml大鯢分泌物溶液注入長(zhǎng)×寬為10cm×2cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機(jī)中，以2℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置2h。隨后將成型模具置于絕對(duì)壓強(qiáng)為10pa的條件下放置15h，得到質(zhì)地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。實(shí)施例5取0.02g按實(shí)施例1的方法制備保存的大鯢分泌物加入到20ml的磷酸溶液中，其中磷酸溶液中磷酸的濃度為0.1mol/l。在常溫下(20℃)攪拌處理4h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取20ml大鯢分泌物溶液注入長(zhǎng)×寬為2cm×2cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機(jī)中，以2℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置4h。隨后將成型模具置于絕對(duì)壓強(qiáng)為10pa的條件下放置48h，得到質(zhì)地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。實(shí)施例6取20g按實(shí)施例1的方法制備保存的大鯢分泌物加入到20ml的硝酸溶液中，其中硝酸溶液中硝酸的濃度為0.5mol/l。在常溫下(20℃)攪拌處理8h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取20ml大鯢分泌物溶液注入長(zhǎng)×寬為3cm×3cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機(jī)中，以2℃/min的速率降溫至-50℃，并在-50℃溫度條件下冷凍放置2h。隨后將成型模具置于絕對(duì)壓強(qiáng)為5pa的條件下放置24h，得到質(zhì)地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。對(duì)比例1按實(shí)施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的水中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在水中基本不溶解，因而無(wú)法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對(duì)比例2按實(shí)施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的丙酮中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在丙酮中基本不溶解，因而無(wú)法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對(duì)比例3按實(shí)施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的乙醇中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在乙醇中基本不溶解，因而無(wú)法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對(duì)比例4按實(shí)施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的乙腈中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在乙腈中基本不溶解，因而無(wú)法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對(duì)比例5按實(shí)施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的二氯甲烷中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在二氯甲烷中基本不溶解，因而無(wú)法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對(duì)比例6按實(shí)施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的二甲亞砜中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在二甲亞砜中基本不溶解，因而無(wú)法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對(duì)比例7按實(shí)施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的三氟乙酸中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在三氟乙酸中部分溶解。取20ml上述方法形成的大鯢分泌物-三氟乙酸溶液，按實(shí)施例1的方法注入長(zhǎng)×寬為4cm×4cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機(jī)中，以1℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置2h。隨后將成型模具置于絕對(duì)壓強(qiáng)為5pa的條件下放置24h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)大鯢分泌物-三氟乙酸溶液形成的膜狀材料均一性和粘性均比實(shí)施例1制備的生物膜差。對(duì)比例8按實(shí)施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的三氟乙醇中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在三氟乙酸中部分溶解。取20ml上述方法形成的大鯢分泌物-三氟乙醇溶液，按實(shí)施例1的方法注入長(zhǎng)×寬為4cm×4cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機(jī)中，以1℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置2h。隨后將成型模具置于絕對(duì)壓強(qiáng)為5pa的條件下放置24h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)大鯢分泌物-三氟乙醇溶液形成的膜狀材料均一性和粘性均比實(shí)施例1制備的生物膜差。測(cè)試一在20℃條件下，取實(shí)施例1的方法制備的大鯢分泌物分別加入到10ml的維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中。維生素c溶液中維生素c的濃度為0.5mol/l，鹽酸溶液中氯化氫的濃度為0.5mol/l，醋酸溶液中醋酸的濃度為0.5mol/l，硫酸溶液中硫酸的濃度為0.5mol/l，磷酸溶液中磷酸的濃度為0.5mol/l，硝酸溶液中硝酸的濃度為0.5mol/l。加入過(guò)程中不斷攪拌，直至出現(xiàn)沉降的現(xiàn)象，則停止加入大鯢分泌物，記錄每種溶液中的總加入量，結(jié)果如表1所示。表1：20℃條件下大鯢分泌物在各酸性溶液中的溶解度溶液(10ml)最高溶解大鯢分泌物的量(g)溶解度(g/ml)維生素c溶液15.21.52g/ml鹽酸溶液12.51.25g/ml醋酸溶液5.60.56g/ml硫酸溶液10.40.104g/ml磷酸溶液4.10.41g/ml硝酸溶液13.11.31g/ml以上結(jié)果表明大鯢分泌物在維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中具有非常好的溶解性。特別是在維生素c溶液溶解度可達(dá)1.52g/ml。因此，將大鯢分泌物溶解在上述酸性溶液中形成均一的大鯢分泌物溶液，從而用于制備大鯢分泌物粘性生物膜。而采用其它溶劑時(shí)，如對(duì)比例1～6中的水、丙酮、乙醇、乙腈、二氯甲烷和二甲亞砜等，相同的方法測(cè)試大鯢分泌物基本不溶解。另外，對(duì)比例7和對(duì)比例8在三氟乙酸和三氟乙醇中，雖然大鯢分泌物能夠部分溶解，但是最后形成的膜狀材料均一性相對(duì)較差。測(cè)試二將一塊實(shí)施例1制備的大鯢分泌物粘性生物膜正反兩面分別粘合在兩塊pdms膜上，然后用萬(wàn)能拉力機(jī)上下夾頭分別夾住兩塊pdms膜，用萬(wàn)能拉力機(jī)拉伸測(cè)試大鯢分泌物粘性生物膜剪切粘附應(yīng)力。采用相同的方法測(cè)試實(shí)施例2～實(shí)施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜的剪切粘附應(yīng)力，結(jié)果如下表2所示。表2：大鯢分泌物粘性生物膜的剪切粘附應(yīng)力實(shí)施例剪切粘附應(yīng)力(kpa)實(shí)施例136.1kpa實(shí)施例230.1kpa實(shí)施例324.5kpa實(shí)施例425.4kpa實(shí)施例520.3kpa實(shí)施例634.1kpa從表2中的數(shù)據(jù)可以看出實(shí)施例1～實(shí)施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜粘合力較好，且膜狀材料本身具有韌性和強(qiáng)度較好，能夠作為止血膜、組織粘合膜或繃帶等對(duì)創(chuàng)面進(jìn)行覆蓋或包裹，具有廣闊的應(yīng)用前景。測(cè)試三止血實(shí)驗(yàn)：取wistar大鼠10只，雌雄各半，體重250g±20g，分別將每只大鼠的2條后腿分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)前，將大鼠按30mg/kg腹腔注射2％戊巴比妥鈉水溶液麻醉，大鼠仰臥位固定，用電推理發(fā)器將大鼠后腿內(nèi)側(cè)剃毛，8％硫化鈉脫毛，碘伏、體積分?jǐn)?shù)為75％的乙醇消毒。然后用手術(shù)刀在大鼠的兩后腿內(nèi)側(cè)部位切口，長(zhǎng)30mm，深3mm，有血液流出。切開(kāi)后在實(shí)驗(yàn)組切口部位分別用實(shí)施例1～實(shí)施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜包扎，粘合牢固。對(duì)照組在切口部位用紗布包扎，并按壓止血。用實(shí)施例1～實(shí)施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜包扎實(shí)驗(yàn)組的大鼠后腿在1min內(nèi)停止出血，大鯢分泌物粘性生物膜的表面無(wú)血液滲出。而對(duì)照組按壓3min后才停止出血，紗布表面有明顯的血液滲出。說(shuō)明大鯢分泌物粘性生物膜止血效果明顯。測(cè)試四傷口愈合試驗(yàn)：取balb/c小鼠12只，雌雄各半，八個(gè)月大。在小鼠背部，劃出兩條平行整齊全層的皮膚切口，實(shí)驗(yàn)組：分別用實(shí)施例1～實(shí)施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜粘合在傷口處；對(duì)照組：用手術(shù)縫合線間斷縫合處理。3天后，撕開(kāi)實(shí)驗(yàn)組的粘性生物膜以及拆除對(duì)照組的縫線。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的切口都愈合，但對(duì)照組有更明顯皮膚發(fā)紅和切口邊緣浮腫，而實(shí)驗(yàn)組的傷口愈合的更好。其中一個(gè)實(shí)施例的結(jié)果如圖3所示(圖3中用的粘性生物膜具體為實(shí)施例2制備的大鯢分泌物粘性生物膜)。測(cè)試五降解試驗(yàn)：取balb/c小鼠6只，雌雄各半，八個(gè)月大。分別用實(shí)施例3制備的直徑0.6cm大鯢分泌物粘性生物膜植入到皮下囊。部分小鼠在植入后第1周和第3周制備組織切片并用he染色檢測(cè)。結(jié)果如圖4所示，c1表示大鯢分泌物粘性生物膜皮下植入試驗(yàn)，c2表示植入1一周后he染色顯微圖，c3表示植入3周后he染色顯微圖，c4表示植入9周后大鯢粘液膜部分降解圖。從圖中可以看出，植入大鯢分泌物粘性生物膜后未有可見(jiàn)的紅斑、腫脹、潰瘍和出血或擴(kuò)散。圖c2顯示植入1周后組織切片，在植入膜附近用眼睛觀察沒(méi)有可見(jiàn)腫脹/充血區(qū)域。在植入膜表面沒(méi)有任何明顯炎癥細(xì)胞滲透現(xiàn)象出現(xiàn)，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞。如圖c3，3周后，沒(méi)有任何炎癥細(xì)胞滲透現(xiàn)象，同時(shí)在植入膜上發(fā)現(xiàn)許多孔并帶有細(xì)胞生長(zhǎng)，表明大鯢分泌物粘性生物膜在體內(nèi)逐漸降解和其與組織良好的生物相容性。如圖c4，9周后，大鯢分泌物粘性生物膜逐漸降解而且剩余物保持可見(jiàn)，然而依然沒(méi)有任何肉眼可見(jiàn)紅斑和腫脹。所以，皮下植入試驗(yàn)表明大鯢分泌物粘性生物膜在小鼠體內(nèi)良好的組織相容性，不會(huì)刺激明顯炎癥，可以自然降解。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明實(shí)施例1～實(shí)施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜，具有膜狀材料的韌性和強(qiáng)度，且粘合性較好，制備成膜后大鯢分泌物原有性能沒(méi)有被破壞，保留了大鯢分泌物較好的粘合性、生物相容性等優(yōu)點(diǎn)。以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。當(dāng)前第1頁(yè)12