本發(fā)明屬于現(xiàn)代中醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種含有黑茶提取物的藥品組合物在治療膿毒癥中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

膿毒癥是目前臨床上所面臨的棘手難題之一，由其誘發(fā)的膿毒性休克和多器官衰竭綜合征一直是外科重癥監(jiān)護(hù)(intensivecareunits，icu)病人死亡的主要原因。目前臨床上仍有30％-45％的膿毒癥患者因不能及時(shí)控制病情而死亡，且膿毒癥的發(fā)病率有繼續(xù)增長的趨勢。雖然因抗生素的不斷發(fā)展更新，危重病人的治療取得了不錯(cuò)的進(jìn)展，但膿毒癥仍是臨床上久攻不克的難題之一。膿毒癥是由感染或高度可疑感染灶引起的全身性炎癥反應(yīng)綜合征，是嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、休克、大手術(shù)后常見的并發(fā)癥。研究顯示，膿毒癥的發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜，涉及到全身炎性網(wǎng)絡(luò)效應(yīng)、免疫抑制反應(yīng)、凝血功能障礙、基因多態(tài)性等等多個(gè)方面，同時(shí)還與多個(gè)器官和多個(gè)系統(tǒng)的病理生理改變密切相關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道，細(xì)菌內(nèi)毒素可誘發(fā)膿毒癥，機(jī)體單核巨噬細(xì)胞及其他炎性細(xì)胞因感染而被激活，誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生并釋放大量的炎性介質(zhì)，它們相互作用形成網(wǎng)絡(luò)炎性效應(yīng)，進(jìn)而引起全身各器官和系統(tǒng)產(chǎn)生損傷。目前對膿毒癥的病理生理機(jī)制還不完全清楚，至今還沒有藥物能有效治療膿毒癥。因此，開發(fā)一種用于膿毒癥治療的藥物迫在眉睫。

黑茶是中國特有的一大茶類，屬于后發(fā)酵茶。目前在保健品和醫(yī)藥領(lǐng)域已有應(yīng)用，具有非常好的保健品和醫(yī)藥開發(fā)前景。黑茶，六大茶類之一，屬全發(fā)酵茶，經(jīng)殺青、揉捻、渥堆、松柴明火干燥等四大工藝加工而成的，由于其特殊的加工過程，尤其是微生物的參與時(shí)期具有特殊的中醫(yī)藥理活性。近幾年對黑茶的研究不斷增多，主要集中在其降血脂、抗氧化、降血糖、殺菌、抗輻射等方面的研究，而沒有意識(shí)到其膿毒癥治療方面的用途。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)黑茶提取物可以用于膿毒癥治療，特別是本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過腹腔注射40mg/kg脂多糖(lps)和盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)建立小鼠膿毒癥模型，黑茶提取物可提高膿毒癥小鼠7天的存活率，并利用細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對其作用機(jī)制做了初步探討，發(fā)現(xiàn)黑茶多糖對10μg/ml脂多糖(lps)誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞程序性壞死有較好的抑制作用。目前現(xiàn)有技術(shù)中尚沒有把黑茶應(yīng)用于膿毒癥治療領(lǐng)域，因此，無法認(rèn)識(shí)到并將其作為藥物來研究開發(fā)推向醫(yī)藥市場。

即本發(fā)明的目的在于提供一種黑茶提取物在治療膿毒癥中的應(yīng)用，所述黑茶提取物為黑茶水提物或黑茶多糖提取物。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述黑茶提取物在治療膿毒癥中的應(yīng)用中，所述黑茶水提物的制備方法為將黑茶粉碎過篩后，加蒸餾水浸提，過濾后取濾液減壓蒸餾濃縮1～2次，冷凍干燥即得黑茶水提物；更優(yōu)選地，所述黑茶與蒸餾水的重量比為1:5-1:20，所述黑茶水提物減壓蒸餾濃縮至原體積的1/3-1/10。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述黑茶提取物在治療膿毒癥中的應(yīng)用中，所述黑茶多糖提取物的制備方法為將黑茶粉碎過篩后，加蒸餾水浸提，過濾后取濾液減壓蒸餾濃縮，精濾后使用有機(jī)溶劑萃取濾液，取水相減壓蒸餾濃縮，冷凍干燥后即得黑茶多糖提取物；更優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑萃取為按體積比1:1進(jìn)行2次二氯甲烷萃取，按體積比1:1進(jìn)行3次乙酸乙酯萃取，按體積比1:1進(jìn)行3次異丙醇萃??；更優(yōu)選地，所述黑茶與蒸餾水的重量比為1:5-1:20，所述黑茶多糖提取物減壓蒸餾濃縮至原體積的1/3-1/10。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述黑茶提取物在治療膿毒癥中的應(yīng)用中，所述黑茶水提物或黑茶多糖提取物的給藥劑量為200-1000mg/kg。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述黑茶提取物在治療膿毒癥中的應(yīng)用中，所述黑茶水提物或黑茶多糖提取物的給藥對象為哺乳動(dòng)物；更優(yōu)選地，黑茶水提物或黑茶多糖提取物的給藥對象為小鼠；最優(yōu)選地，黑茶水提物或黑茶多糖提取物的給藥對象為人。

本發(fā)明的另一方面是提供一種包含黑茶提取物的藥物組合物在治療膿毒癥中的應(yīng)用，其中所述藥物組合物包括如上所述的黑茶提取物、虎杖苷以及輔料，其中所述黑茶提取物與虎杖苷的重量比為3:1～6:1。

優(yōu)選地，本發(fā)明的包含黑茶提取物的藥物組合物為膠囊劑、片劑或口服液。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

膿毒癥是目前臨床上所面臨的棘手難題之一，膿毒癥的發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜，至今還沒有藥物能有效治療膿毒癥。而本發(fā)明發(fā)現(xiàn)黑茶提取物可以用于膿毒癥治療，如本發(fā)明的后續(xù)實(shí)施例中所示，黑茶提取物可大大改善多種因素誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠存活率，而且本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)黑茶多糖在細(xì)胞水平上對誘導(dǎo)性巨噬細(xì)胞程序性壞死有較好的抑制作用。因此，本發(fā)明提供了將黑茶提取物應(yīng)用于膿毒癥治療領(lǐng)域的可靠技術(shù)方案，并給出將其作為藥物開發(fā)推向醫(yī)藥市場的現(xiàn)實(shí)可能性。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例3中的黑茶水提物對lps致膿毒癥小鼠7天存活率的影響示意圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例3中的黑茶多糖提取物對lps致膿毒癥小鼠7天存活率的影響示意圖；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例3中的黑茶水提物對盲腸結(jié)扎穿孔致膿毒癥小鼠7天的影響示意圖；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例3中的黑茶多糖提取物對lps誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞程序性壞死的影響示意圖；

圖5為本發(fā)明實(shí)施例3中的黑茶多糖提取物對lps誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞程序性壞死的影響示意圖；

圖6為本發(fā)明實(shí)施例3中的黑茶多糖提取物對lps誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞程序性壞死的影響示意圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明中的實(shí)施例，對本發(fā)明中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1黑茶水提物的制備

取安化茯磚茶(購自湖南梅山崖安化黑茶研發(fā)中心，產(chǎn)地是湖南安化)100g去塵凈化，粉碎過60目篩，黑茶：水＝1:10(重量比)，加蒸餾水80℃水浴中浸提30min，形成黑茶提取物浸提液；

(2)、過濾：

將黑茶提取物浸提液，先用紗布進(jìn)行粗濾，得粗濾液，重復(fù)提取過濾3次，合并粗濾液；

(3)、靜置：

將粗濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60℃減壓蒸餾濃縮，濃縮至原體積的1/3，然后置于4℃冰箱靜置12小時(shí)；

(4)、精濾：

取上清液，經(jīng)離心機(jī)離心分離，以除去沉淀及懸浮物，得黑茶水提取物精濾液；

(5)、濃縮：

精濾液再進(jìn)行減壓濃縮，濃縮溫度為60℃，濃縮至原體積的1/2；

(6)、干燥：

濃縮液經(jīng)凍干機(jī)干燥，得黑茶水提取物18.75g。

經(jīng)檢測分析，本發(fā)明的黑茶水提取物中包含茶多糖、茶多酚、茶黑素等多種成分。

實(shí)施例2黑茶多糖提取物的制備

(1)、提取

取安化茯磚茶(購自湖南梅山崖安化黑茶研發(fā)中心，產(chǎn)地是湖南安化)100g去塵凈化，粉碎過60目篩，黑茶：水＝1:10(重量比)，加蒸餾水80℃水浴中浸提30min，形成黑茶提取物浸提液；

(2)、過濾：

將黑茶提取物浸提液，先用紗布進(jìn)行粗濾，得粗濾液，重復(fù)提取過濾3次，合并粗濾液；

(3)、靜置：

將粗濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60℃減壓蒸餾濃縮，濃縮至原體積的1/3，然后置于4℃冰箱靜置12小時(shí)；

(4)、精濾：

取上清液，經(jīng)離心機(jī)離心分離，以除去沉淀及懸浮物，得黑茶水提取物精濾液；

(5)、萃?。?/p>

按體積比1:1進(jìn)行2次二氯甲烷萃取，按體積比1:1進(jìn)行3次乙酸乙酯萃取，按體積比1:1進(jìn)行3次異丙醇萃??；

(6)、濃縮：

將萃取后的水層用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60℃進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至原體積的1/2，除去有機(jī)溶劑。

(7)、干燥：

濃縮液經(jīng)凍干機(jī)干燥，得黑茶多糖提取物11.07g。

經(jīng)檢測分析，以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品為對照測得多糖提取物中多糖含量為32.88％.

實(shí)施例3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

一、黑茶提取物對lps誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥治療作用實(shí)驗(yàn)

(1)、藥物黑茶提取物(分別由實(shí)施例1、實(shí)施例2制備獲得)給藥劑量(以黑茶提取物計(jì)算)是：黑茶水提取物500mg/kg、黑茶多糖提取物500mg/kg。

(2)、動(dòng)物spf級屏障系統(tǒng)飼養(yǎng)的icr雄性小鼠，6-7周齡，體重20±2g。置于干燥清潔的的塑料籠具內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料飼養(yǎng)，自由進(jìn)水進(jìn)食。

(3)、實(shí)驗(yàn)方法動(dòng)物按體重隨機(jī)分組，每組10只。實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對照組、lps對照組、黑茶水提物給藥組和黑茶多糖給藥組。

腹腔注射40mg/kglps前3天，黑茶水提物給藥組和黑茶多糖給藥組連續(xù)灌胃給藥500mg/kg3天，腹腔注射lps后繼續(xù)給藥500mg/kg3天?？瞻讓φ战M和lps對照組按0.2ml/20g同時(shí)給予蒸餾水。

(4)、觀察指標(biāo)每8小時(shí)觀察記錄一次小鼠的狀態(tài)和存活情況，并計(jì)算小鼠7天的存活率。

(5)、結(jié)果

表1黑茶各提取物對lps誘導(dǎo)的膿毒癥7d存活率的影響(n＝10)

與單純照射組相比，*為p＜0.05，**為p＜0.01

結(jié)果表明，lps腹腔注射8h后，發(fā)現(xiàn)小鼠活動(dòng)和進(jìn)食均逐漸減少、四肢無力、蜷縮發(fā)抖、反應(yīng)遲鈍、豎毛、雙眼發(fā)炎且分泌物增多及粘液便等癥狀。如圖1,2所示，小鼠的死亡時(shí)間主要集中在腹腔注射lps后24h-48h，lps對照組小鼠在此區(qū)間死亡達(dá)8只，96h后lps對照組小鼠全部死亡，而黑茶水提取組和黑茶多糖組小鼠7d后分別有4、和3只存活。而且與lps對照組相比，兩組給藥組小鼠的平均存活時(shí)間明顯延長。由上表可見，黑茶水提物和黑茶多糖對lps誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠均有一定的治療作用。

二、黑茶提取物對盲腸結(jié)扎穿孔致小鼠膿毒癥治療作用實(shí)驗(yàn)

(1)、藥物黑茶提取物給藥劑量(以黑茶提取物計(jì)算)是：黑茶水提取物(實(shí)施例1制備)500mg/kg。

(2)、動(dòng)物spf級屏障系統(tǒng)飼養(yǎng)的icr雄性小鼠，6-7周齡，體重20±2g。置于干燥清潔的的塑料籠具內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料飼養(yǎng)，自由進(jìn)水進(jìn)食。

(3)、實(shí)驗(yàn)方法動(dòng)物按體重隨機(jī)分組，每組12只。實(shí)驗(yàn)設(shè)假手術(shù)對照組、手術(shù)對照組和黑茶水提物給藥組。手術(shù)前3天，黑茶水提物給藥組連續(xù)灌胃給藥3天，手術(shù)后繼續(xù)給藥3天。假手術(shù)對照組和手術(shù)對照組按0.2ml/20g同時(shí)給予蒸餾水。

(4)、觀察指標(biāo)每8小時(shí)觀察記錄一次小鼠的狀態(tài)和存活情況，并計(jì)算小鼠7天的存活率。

(5)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2黑茶提取物對clp致膿毒癥小鼠7d的存活率的影響(n＝12)

與單純照射組相比，*為p＜0.05，**為p＜0.01

如圖3所示，小鼠盲腸結(jié)扎2h后逐漸蘇醒，隨后發(fā)現(xiàn)小鼠活動(dòng)和進(jìn)食均減少、四肢無力、反應(yīng)遲鈍、豎毛、粘液便等癥狀。小鼠的死亡時(shí)間主要集中在手術(shù)后24h-48h，手術(shù)對照組小鼠在此區(qū)間死亡達(dá)7只，黑茶水提物給藥組小鼠僅有4只死亡，而假手術(shù)對照組小鼠7d均未死亡。與手術(shù)對照組相比，黑茶水提物給藥組小鼠的平均存活時(shí)間明顯延長且存活率提高達(dá)25％。由表2可見，黑茶水提物對clp致膿毒癥有一定的治療作用。

三、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

(1)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物spf級屏障系統(tǒng)飼養(yǎng)的icr雄性小鼠，體重23-24g。置于干燥清潔的的塑料籠具內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料飼養(yǎng)，自由進(jìn)水進(jìn)食。

(2)骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞：

取icr雄性小鼠20只，質(zhì)量在23-24g間，頸椎脫臼處死，于75％的酒精溶液中浸泡(5-10min)消毒滅菌，在無菌的條件下取小鼠的所有股骨，踢出全部肌肉組織，剪去股骨頭，梅花頭一端用2.5ml無菌注射器刺穿，用預(yù)冷的含2％胎牛血清的pbs反復(fù)沖洗骨髓腔，直至股骨變?yōu)榘咨?至少?zèng)_洗5遍)，3-5ml/只，混合所有沖洗液，用無菌200目過濾網(wǎng)布過濾，4℃離心1500r/min5min，用0.075mol/lkcl低滲溶液破除其中的紅細(xì)胞，用預(yù)冷的含2％胎牛血清的pbs沖洗兩遍，用含10％胎牛血清的rpmi1640培養(yǎng)液調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至2×10⁶/ml。在細(xì)胞懸液中加入誘導(dǎo)因子m-csf，使其濃度為20ng/ml。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％co2飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3天換一次液，繼續(xù)用含誘導(dǎo)因子的培養(yǎng)液培養(yǎng)。

(3)瑞氏染色檢測巨噬細(xì)胞的純度：

細(xì)胞培養(yǎng)至第7天，取部分細(xì)胞消化、離心和重懸，取細(xì)胞懸液1滴加于潔凈載玻片上，制備涂片，自然干燥，瑞氏染色后將干燥好的涂片置光學(xué)顯微鏡下觀察。先用低倍鏡觀察涂片體尾交界處細(xì)胞薄厚分布及染色情況，再用油鏡計(jì)數(shù)細(xì)胞，計(jì)算巨噬細(xì)胞的純度。

(4)lps誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞程序性壞死：

①、細(xì)胞預(yù)處理：

將鑒定過的巨噬細(xì)胞消化、離心、重懸和計(jì)數(shù)，按8×10³/孔接種于96孔板(每孔180μl)和1×10⁶/孔接種于24孔板(每孔500μl)中，于37℃、5％co2飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。24h后，細(xì)胞給藥前30min加10μllps(終濃度為10μg/ml)誘導(dǎo)其程序性壞死，然后給予10μl不同濃度的黑茶多糖提取物(實(shí)施例2制備)藥物，空白給予等體積培養(yǎng)基，使每組終濃度分別1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml和1mg/ml，每組做5個(gè)平行復(fù)孔，于37℃、5％co2飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24h。

②、mtt檢測：

將96孔板中每孔培養(yǎng)液吸走20μl，每孔加入20μlmtt溶液(5mg/ml，即0.5％mtt)，繼續(xù)培養(yǎng)4h；mtt加入培養(yǎng)4h后，結(jié)晶可充分形成。用移液器將上清去掉，該過程要注意不能把formazan結(jié)晶移走；每孔加入150ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值(od值)，結(jié)果如圖4所示。

③、凋亡試劑盒檢測：

將24孔板中加lps和黑茶多糖藥物培養(yǎng)24小時(shí)的巨噬細(xì)胞消化置于1.5mlep管中并離心，并用pbs緩沖液和bandingbuffer稀釋液各沖洗一次，然后用bandingbuffer稀釋液重懸至細(xì)胞濃度為1-5×10⁶個(gè)/ml；吸取100μl細(xì)胞懸液置于新ep管中，加入5μl熒光標(biāo)記的annexin-v至細(xì)胞懸液中，室溫下孵育10-15min；將細(xì)胞進(jìn)行離心處理，并用bandingbuffer稀釋液洗滌一次，離心后用200μl的bandingbuffer稀釋液重懸，然后加入5μl的pi染液；20min后，用流式細(xì)胞儀檢測巨噬細(xì)胞的程序性壞死率，結(jié)果見圖5，注：pi：氧化丙啶核染料能透過死細(xì)胞(與annexinv匹配使用可將早晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞區(qū)分)；annexinv：熒光探針標(biāo)記凋亡細(xì)胞；cdt：黑茶多糖的簡稱。

(5)、觀察指標(biāo)：

給藥24h后，用mtt法測定96孔板中巨噬細(xì)胞的存活情況，運(yùn)用細(xì)胞凋亡試劑盒和流式細(xì)胞測定儀測定24孔板中巨噬細(xì)胞的壞死情況。

(6)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

表3黑茶多糖提取物對lps誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞程序性壞死影響的mtt實(shí)驗(yàn)結(jié)果

*為p＜0.05，**為p＜0.01

表4黑茶多糖對lps誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞程序性壞死影響的流式實(shí)驗(yàn)結(jié)果

*為p＜0.05，**為p＜0.01

經(jīng)瑞士染液鑒定，m-csf誘導(dǎo)的骨髓細(xì)胞成巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞所占比例達(dá)98％以上。由表3,4可見，巨噬細(xì)胞給予高濃度的lps后發(fā)生程序性壞死，給予不同濃度的黑茶多糖，觀察巨噬細(xì)胞的存活情況。如圖6所示(注：nec-1:細(xì)胞程序性壞死抑制劑)，mtt實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，黑茶多糖提取物可抑制lps誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞的程序性壞死，并呈現(xiàn)濃度依賴性。利用流式實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明黑茶多糖對lps誘導(dǎo)的細(xì)胞程序性壞死有保護(hù)作用。

實(shí)施例4黑茶提取物的制備例

按照實(shí)施例1方法，取安化茯磚茶(購自湖南梅山崖安化黑茶研發(fā)中心，產(chǎn)地是湖南安化)去塵凈化，黑茶：水＝1:10，加蒸餾水沸水浴中浸提60min，形成黑茶提取物浸提液；將黑茶提取物浸提液，先用紗布進(jìn)行粗濾，得粗濾液，重復(fù)提取過濾3次，合并粗濾液；將粗濾液置于4℃冰箱靜置24小時(shí)；取上清液，經(jīng)離心機(jī)離心分離，以除去沉淀及懸浮物，得黑茶提取物精濾液；精濾液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮溫度為60－70℃；濃縮液經(jīng)凍干機(jī)干燥，得黑茶水提物。

制備例1(膠囊劑)

稱取上述黑茶提取物200g，虎杖苷40g、淀粉50g、混合均勻，制粒，干燥，整粒，裝入膠囊制成1000粒，即得。每次2粒，每日3次。

制備例2(片劑)

稱取上述黑茶提取物200g，虎杖苷40g、淀粉50g、混合均勻，制粒，干燥，整粒，壓片，制成1000粒，即得。每次2粒，每日3次。

制備例3(口服液)

(1)提?。喝“不虼u茶去塵凈化，粉碎過60目篩，黑茶：水＝1:10，加蒸餾水沸水浴中浸提30min，形成黑茶提取物浸提液；

(2)、過濾：將黑茶提取物浸提液，先用紗布進(jìn)行粗濾，得粗濾液，重復(fù)提取過濾3次，合并粗濾液；

(3)、靜置：將粗濾液置于4℃冰箱靜置12小時(shí)；

(4)、精濾：取上清液，經(jīng)離心機(jī)離心分離，以除去沉淀及懸浮物，得黑茶提取物精濾液；

(5)、濃縮：精濾液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮溫度為60－70℃，濃縮到一定的程度加入一定比例的虎杖苷，再加入矯味劑和防腐劑，制備成口服液，使每毫升含有提取前的黑茶0.3g,分裝20ml/瓶，每天一瓶。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。