本發(fā)明屬于提取液領(lǐng)域，具體是涉及一種七彩菊提取液及其制備方法和應(yīng)用，特別是一種具有美白抗氧化效果的七彩菊提取液及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

七彩菊又名洋菊花，變色菊，產(chǎn)于西藏高山之中，純天然野生。其外觀茶色、晶黃、透亮，具有散風(fēng)清熱、平肝明目的作用。其可內(nèi)服、外用，具有抗疲勞，護(hù)膚養(yǎng)顏，明目清心；具有清潤肺、清熱解毒、明目之功效。還具有理氣解郁，和血散瘀，治肝胃氣痛，新風(fēng)久痹，咯血吐血，月經(jīng)不調(diào)，赤帶白下，痢疾，乳痛，腫毒，以及護(hù)膚養(yǎng)顏，清新潤肺，調(diào)經(jīng)活血等功效。特別具有安定神經(jīng)與助消化的作用，最適合餐后和睡前飲用，是失眠患者的最佳飲品之一。

酪氨酸酶活性抑制作用的測試是傳統(tǒng)用來篩選美白藥品的測試方法。當(dāng)中酪氨酸會因為酪氨酸酶的作用而轉(zhuǎn)化成左旋多巴(l-dopa)，再轉(zhuǎn)化成為多巴色素(dopachrome)。多巴色素在492nm波長下有吸亮度，故此可以量化及計算酪氨酸酶的活性。多巴色素只是暫存物，它會轉(zhuǎn)化成黑色素(melanin)。人類皮膚上的黑色素是由黑色素細(xì)胞(melanocytes)所產(chǎn)生的多巴色素轉(zhuǎn)化而成的。黑色素會漸漸地在黑色素細(xì)胞內(nèi)的黑色素體(melanosome)內(nèi)成熟，成熟后黑色素體便會沿著黑色素細(xì)胞的樹突(dentrite)轉(zhuǎn)移到角質(zhì)細(xì)胞(keratinocytes)，使膚色變深。抑制酪氨酸酶活性能有效減少多巴色素及黑色素的產(chǎn)生，從而使膚色變得更淡更白?，F(xiàn)時大部份的美白藥品如對苯二酚(hydroquinone)及熊果苷(arbutin)等均為針對酪氨酸酶活性而達(dá)至美白功效的。雖然對苯二酚的美白功效明顯，卻于2006年因為致癌的風(fēng)險而被禁用。及后，熊果苷亦因為化學(xué)結(jié)構(gòu)與對苯二酚相似而被禁用?，F(xiàn)時科學(xué)界正找尋安全性較高的美白藥品來取締對苯二酚等藥品。

近年來許多疾病的發(fā)生已證實與自由基有關(guān),因此,利用抗氧化機(jī)理來治療許多疾病也陸續(xù)受到重視,包括:心血管疾病,慢性腎炎,老年癡呆癥(alzheimer’sdisease)及過敏性疾病等。具有抗氧化能力的天然產(chǎn)物,更被廣泛用于抗皮膚衰老的化妝品上。本研究用學(xué)界認(rèn)為可以準(zhǔn)確測定抗氧化能力的試劑盒(totalantioxidantcapacitycolorimetricassaykit)來檢測七彩菊的抗氧化能力。

美白和抗衰老的產(chǎn)品日新月異，對于天然原材料的開發(fā)需求殷切，本項目應(yīng)用生物活性和安全性作為篩選指標(biāo),能快捷有效的進(jìn)行篩選,目前市場上還沒有七彩菊用于美白及抗衰老產(chǎn)品產(chǎn)品的報道,因此七彩菊將成為美白和抗衰老產(chǎn)品天然原材料的新的一員,可廣泛用于保健品、食品和美容產(chǎn)品當(dāng)中。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

基于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種七彩菊的提取液的制備方法，該方法簡單易操作，成本較低，適合大規(guī)模生產(chǎn)，且由該法得到的提取液具有最佳的美白抗氧化效果。

實現(xiàn)上述目的技術(shù)方案如下：

一種七彩菊的提取液的制備方法，包括以下步驟：

a)振搖：將七彩菊磨粉，過篩，以七彩花40～60倍重量的水在常溫浸泡搖動，搖動時間為50～70分鐘，振搖頻率為150±10rev/min；或

熱浸：將七彩菊磨粉，過篩，以40～60倍重量的水浸泡攪拌，浸泡溫度為80±5℃，浸泡時間為50～70分鐘；或

超聲：將七彩菊磨粉，過篩，以七彩菊40～60倍重量的水，超聲提取50～70分鐘小時；

b)過濾：將七彩菊提取液過濾，濾液定容至濃度為0.02±0.005g/ml，得到七彩菊提取液。

在其中一個實施例中，包括以下步驟：a)振搖：將七彩菊磨粉，過篩，以粉末重量50倍體積的水浸泡振搖，溫度為25℃，振搖時間為1小時，振搖頻率為150rev/min，得七彩菊的水藥液；或

熱浸：將七彩菊磨粉，過篩，以50倍重量的水浸泡攪拌，浸泡溫度為80℃，浸泡時間為1小時，得七彩菊的水藥液；或

超聲：將七彩菊其他7種花卉植物分別磨粉，過篩，以七彩菊50倍重量的水，超聲提取1小時，得七彩菊的水藥液；

b)過濾：將得到的七彩菊水藥液過濾，濾液定容至濃度為0.02g/ml，得到七彩菊水提取液。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種七彩菊的提取液，該提取液具有美白抗氧化效果。

具體技術(shù)方案為：根據(jù)上述制備方法得到的七彩菊提取液。

本發(fā)明的另一個目的是提供上述七彩菊的提取液在美白和/或抗氧化中的應(yīng)用。

具體技術(shù)方案為：上述制備方法得到的七彩菊的提取液在制備美白產(chǎn)品中的應(yīng)用。

上述制備方法得到的七彩菊的提取液在制備抗氧化的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

所述美白和/或抗衰老產(chǎn)品為保健品、食品、飲料、食品添加劑、營養(yǎng)強(qiáng)化劑或美容用品。

所述抗衰老產(chǎn)品為保健品、食品、飲料、食品添加劑、營養(yǎng)強(qiáng)化劑。

本發(fā)明所述的七彩菊提取液及其制備方法具有以下優(yōu)點和有益效果：

本發(fā)明找到了適合七彩菊的提取方法，可應(yīng)用于工業(yè)，具有簡單易操作的特點，該工藝僅需在水浸和過濾兩個主要步驟，極大地簡化了制備工藝。而且，本發(fā)明通過優(yōu)化七彩菊的提取方法,找出具有最佳的美白和抗氧化效果的提取方法。本發(fā)明得到的提取液對細(xì)胞無毒害及刺激增生作用，可安全應(yīng)用在美容及相關(guān)的產(chǎn)品。

本發(fā)明所述的提取方法可以很好地用于七彩菊為原料的提取液的制備，得到的七彩菊的提取液可加工為各種產(chǎn)品，廣泛地用于保健品、食品和美容產(chǎn)品中，具有巨大的市場潛力。

附圖說明

圖1為實施例2七彩菊與其他7種花卉植物的水提取液,包括金邊玫瑰花、梔子花、玉蘭花、金盞花、臘梅花、密蒙花和白樺樹皮,對酪氨酸酶活性的抑制作用結(jié)果。

圖2為實施例2使用不同提取方法的七彩菊水提取液對酪氨酸酶活性的抑制作用結(jié)果。

圖3為實施例3trolox在570nm下的吸亮度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖4為實施例3七彩菊與其他7種花卉植物的水提取液的抗氧化能力測試結(jié)果,包括金邊玫瑰花、梔子花、玉蘭花、金盞花、臘梅花、密蒙花和白樺樹皮。

圖5為實施例3使用不同提取方法的七彩菊水取液的的抗氧化能力測試結(jié)果。

圖6為實施例4不同濃度七彩菊的水提取液對皮膚黑色素細(xì)胞b16的生長狀態(tài)和密度的結(jié)果。

圖7為實施例4不同濃度七彩菊的水提取液對皮膚黑色素細(xì)胞b16的存活率的結(jié)果。

圖8為實施例4不同濃度七彩菊的水提取液對皮膚黑色素細(xì)胞b16的黑色素分泌抑制的結(jié)果。

具體實施方式

以下將結(jié)合附圖和具體實施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)說明。

實施例1

本實施例所述的七彩菊水提取液的制備方法，包括以下步驟：

a)振搖：將七彩菊磨粉，過篩，以七彩菊原料50倍重量的水，室溫放在搖床振搖1小時，振搖頻率為150rev/min；或

b)熱浸：將七彩菊磨粉，過篩，以50倍重量的水浸泡攪拌，浸泡溫度為80℃，浸泡時間為1小時；或

c)超聲：將七彩菊和其他7種花卉植物分別磨粉，過篩，以七彩菊50倍重量的水，超聲提取1小時；

d)過濾：將a),b)和c)所得的七彩菊以及分別7種花卉植物的藥液過濾，濾液定容至藥液濃度為0.02g/ml，分別得到七彩菊提取液和7種花卉植物的提取液；

由該制備方法制得的七彩菊提取液，可用于美白抗衰老產(chǎn)品，包括保健品、食品、飲料、食品添加劑、營養(yǎng)強(qiáng)化劑或美容用品。

實施例2

本實施例所述的酪氨酸酶抑制作用實驗，包括以下步驟：

a)將各提取液分別用于酪氨酸酶活性抑制作用測試，同時加入沒有任何抑制劑的測試結(jié)果作為實驗對照、維生素c(美白作用)的測試結(jié)果作為實驗陽性對照。

b)同時還以實施例1制備方法分別得到七彩菊水提取液，用于酪氨酸酶活性抑制作用實驗。

酪氨酸酶活性抑制作用測試是篩選美白藥品的傳統(tǒng)測試方法(journalofethnopharmacology129(2010)387–390screeningofchineseherbalmedicinesforantityrosinaseactivityinacellfreesystemandb16cellsyanye,gui-xinchoua,,dan-danmu,huiwan,jian-hongchu,alexanderkai-manleung，wang-funfong，zhi-lingyu)。由于酪氨酸酶可以將酪氨酸轉(zhuǎn)化為多巴色素，故此在該測試中，多巴色素生成量越低，則說明提取液對酪氨酸酶的抑制作用越好。

請參閱圖1。七彩菊和其他7種花卉植物的水提取液，對酪氨酸酶均有的抑制作用，七彩菊水提取液具有明顯效果。

請參閱圖2，使用不同提取方法的七彩菊水提取液對酪氨酸酶均有的抑制作用，其中以熱浸的水提取液的作用最佳。

由此可知，本發(fā)明公開的七彩菊提取液制備方法，對酪氨酸酶活性具有顯著抑制而起到美白作用，可用于制備各種美白產(chǎn)品。

實施例3

本實施例所述的抗氧化能力實驗，包括以下步驟：

a)trolox(一種維生素e的類似物)的抗銅離子氧化能力來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

b)各提取液分別用于抗氧化能力的試劑盒測試，同時以沒有加入任何提取液的測試結(jié)果為實驗陰性對照。

同時還以實施例1中以熱浸方式的七彩菊水提取液，用于抗氧化能力實驗。

請參閱圖3。此圖以trolox(一種維生素e的類似物)的抗銅離子氧化能力建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)曲線來計算七彩菊與其他7種花卉植物提取液的總抗氧化能力。在此測試中，trolox等值越高，則說明提取液抗氧化能力越好。

請參閱圖4。七彩菊與其他7種花卉植物提取液水取液，均有的抗氧化作用。而七彩菊水取液更好。

請參閱圖5，使用不同提取方法的七彩菊水取液的抗氧化作用，熱浸提取方法所得的提取液的抗氧化能力較強(qiáng)。

由此可知，本發(fā)明公開的七彩菊提取液，有抗氧化作用，可廣泛用于抗皮膚衰老的化妝品上。

實施例4

另外有些美容藥品可刺激皮膚細(xì)胞增生,可能會增加患皮膚癌的潛在風(fēng)險,本發(fā)明將七彩菊水提取液與皮膚黑色素細(xì)b16細(xì)胞一起培養(yǎng),對其細(xì)胞的生長狀態(tài),密度和細(xì)胞存活率進(jìn)行測試,確認(rèn)七彩菊對黑色素細(xì)胞的活性,從而間接評估七彩菊提取液的安全性。另外黑色素素在405nm波長下有吸亮度，故此將培胞培養(yǎng)液分離后量度405nm吸亮度，可以量化培養(yǎng)液中的黑色素含量，以計算七彩菊水提取液對黑色素形成的抑制作用。

本實施例所述的皮膚黑色素細(xì)b16的活性作用實驗，包括以下步驟：

a)實施例1中以熱浸方式的七彩菊水提取液過濾，稀釋,其中，作為對照的維他命c的濃度為1mm。

b)向a)所得溶液加入b16黑色素細(xì)胞一起培養(yǎng)，于48小時后收取細(xì)胞。

c)使用顯微鏡觀察b)所得細(xì)胞的生長狀態(tài)和密度，同時拍下照片，與沒有加入提取液的陰性對照做比較。

d)在不同時間收取細(xì)胞,應(yīng)用血球計數(shù)器試驗測試細(xì)胞存活率,與沒有加入提取液的陰性對照作比較。

請參閱圖6。七彩菊水提取液,對于黑色素細(xì)胞的生長狀態(tài)和密度與對照沒有明顯分別,細(xì)胞密度適中，生長形態(tài)沒有異常。不會影響細(xì)胞的存活率和生長形態(tài),也不會刺激黑色素細(xì)胞增生。

請參閱圖7。七彩菊水提取液，對于黑色素細(xì)胞的存活率與對照沒有明顯分別,不會影響細(xì)胞的生長率,也不會刺激黑色素細(xì)胞增生。

請參閱圖8。七彩菊水提取液，對黑色素細(xì)胞的黑色素形成均有抑制作用，呈劑量依賴性。

由此可知，七彩菊水提取液可安全用于各種產(chǎn)品中。

由上述實驗可知，本發(fā)明所述的七彩菊水提取液對酪氨酸酶和黑色素分泌有抑制作用而起到美白作用，同時具有抗氧化作用而起到抗衰老效果。提取液對細(xì)胞生長不會產(chǎn)生影響,也不會刺激黑色素細(xì)胞增生,可安全應(yīng)用在美白抗衰老產(chǎn)品中，包括保健品、食品、飲料、食品添加劑、營養(yǎng)強(qiáng)化劑或美容用品。

本發(fā)明所公開七彩菊水提取液的制備方法，其工藝流程簡單。按照該方法所制得的七彩菊水提取液，具有最佳的美白及抗氧化效果,同時不會刺激皮膚細(xì)胞增生。本發(fā)明所得的七彩菊水提取液提取液可加工為各種產(chǎn)品，使這種少為人知、價格相宜的天然補(bǔ)品以相對較低的原料成本和產(chǎn)品價格，廣泛地用于保健品、食品和美容產(chǎn)品，具有巨大的市場潛力。

以上所述實施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。