本發(fā)明屬于高分子藥物載體領(lǐng)域，具體涉及一種負(fù)載順鉑的水凝膠載藥體系及其制備方法。

背景技術(shù)：

由于鉑類藥物抗癌譜廣，在抗癌領(lǐng)域得到迅速發(fā)展，且順鉑已成為癌癥化療中主要的藥物之一。順鉑臨床多以注射劑使用，但是由于順鉑在體內(nèi)易與蛋白質(zhì)類物質(zhì)結(jié)合而導(dǎo)致藥物失效，且順鉑較長的半衰期導(dǎo)致它具有長期生物毒性，因此臨床應(yīng)用受到了限制。為了解決直接注射給藥的強(qiáng)毒副作用，近年來研究人員將常規(guī)化療藥物與高分子藥物載體結(jié)合形成具有局部緩釋作用的高分子藥物儲(chǔ)庫，通過瘤周/瘤內(nèi)局部給藥后對(duì)藥物進(jìn)行控制釋放，保證在體內(nèi)的安全性和有效性。在目前已知的高分子材料中，水凝膠因其優(yōu)益的仿生性能、良好的生物相容性、生物體可降解性、載藥量大等受到人們的重視。其中，可注射自愈合水凝膠由于其可直接注射到病灶部位而不需要外科手術(shù)，方便快捷等優(yōu)點(diǎn)越來越受到科研工作者的關(guān)注。

普魯蘭多糖是一種線型微生物多糖，具有良好的生物相容性，抗氧化性，能夠被體內(nèi)酶降解等優(yōu)點(diǎn)，是一種良好的藥物載體材料。普魯蘭多糖富含羥基，易被氧化形成富含醛基的氧化多糖。聚氨基酸類共聚物是一類新型的生物可降解高分子材料。由于ε-聚賴氨酸在降解過程中能釋放出天然的小分子氨基酸，因此具有良好的生物相容性，容易被機(jī)體吸收和代謝，故該材料在藥物載體及藥物控制釋放等方面受到廣泛關(guān)注。枝化聚乙烯亞胺是一種陽離子性水溶性聚胺，其分子鏈中含有大量的氨基n原子，易交聯(lián)。且小分子量的枝化聚乙烯亞胺毒性小，富含氨基，易被生物體代謝出去，已被應(yīng)用于藥物釋放、ph及生物傳感器構(gòu)建等多個(gè)領(lǐng)域。因此將富含醛基的氧化多糖與富含氨基的聚合物結(jié)合，極易發(fā)生席夫堿反應(yīng)，使聚合物鏈之間交聯(lián)形成具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的水凝膠。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在提供一種負(fù)載廣譜抗癌藥物-順鉑的水凝膠載藥體系的制備方法。本發(fā)明原料簡單易得，制備工藝純熟，制備周期短，易于操作，不需要昂貴的儀器，且制備的水凝膠體系可以通過物理吸附和共價(jià)交聯(lián)兩種載藥方式載藥，使載藥體系更加穩(wěn)定。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

氧化普魯蘭多糖的合成：將普魯蘭多糖（mn=250000）溶于雙蒸水中配成25mg/ml的溶液，加入高碘酸鉀，避光室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1.5h后，加入丙三醇繼續(xù)室溫?cái)嚢?5min，以終止氧化反應(yīng)。然后，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至透析袋（mw=6000）中，4℃條件下進(jìn)行透析純化3d，冷凍干燥，即得氧化普魯蘭多糖。普魯蘭多糖的重復(fù)單元、高碘酸鉀和丙三醇的摩爾比為1:1:1。

負(fù)載順鉑的水凝膠載藥體系的制備：37℃下將氧化普魯蘭多糖溶于雙蒸水中，使氧化普魯蘭多糖的濃度為0.05g/ml，然后在溶液中加入順鉑，使之完全溶解，使順鉑的濃度為1.5mg/ml。在上述混合溶液中同時(shí)加入0.5g/ml的ε-聚賴氨酸（mn=4000）溶液和0.26g/ml的枝化聚乙烯亞胺（mn=600）溶液，迅速混合均勻。室溫下反應(yīng)40-80s，即得載藥水凝膠體系。將制得的載藥水凝膠放入雙蒸水中沖洗3次，冷凍干燥3d，即得干燥的水凝膠載藥體系。氧化普魯蘭多糖、ε-聚賴氨酸、枝化聚乙烯亞胺、順鉑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)比為：1:0.025~0.225:0.0026~0.013:0.03。

本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于：所述水凝膠載藥體系所用原料簡單易得，制備工藝純熟，制備周期短，制備的載藥水凝膠生物相容性好，順鉑可以通過共價(jià)反應(yīng)和吸附作用兩種方式載入水凝膠，使載藥體系更加穩(wěn)定。此外，載藥水凝膠的自愈合性與可注射性使其可直接注射到病人的病灶部位，不需要外科手術(shù)，減輕了病人的痛苦；溫度和ph敏感性使得水凝膠載藥體系能夠在腫瘤環(huán)境更快的釋放藥物；同時(shí)，由于水凝膠體系能夠?qū)樸K進(jìn)行控制釋放，進(jìn)一步減少了藥物的毒副作用。

附圖說明

圖1是實(shí)施例5制得的載藥水凝膠體系掃描電鏡圖（氧化普魯蘭多糖、ε-聚賴氨酸、聚乙烯亞胺和順鉑的質(zhì)量比為100:22.5:1:0.03）。

圖2是順鉑在ph7.4的磷酸鹽緩沖溶液條件下從實(shí)施例5制得的水凝膠體系中的體外累積釋放曲線圖（氧化普魯蘭多糖、ε-聚賴氨酸、聚乙烯亞胺和順鉑的質(zhì)量比為100:22.5:1:0.03）。

具體實(shí)施方式

為進(jìn)一步公開而不是限制本發(fā)明，以下結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。

實(shí)施例1

1）稱取10.000g普魯蘭多糖溶于400ml雙蒸水中，磁力攪拌充分溶解。

2）將10ml232mg/ml的高碘酸鉀溶液加入1）溶液中，反應(yīng)1.5h。

3）在2）溶液中加入0.72ml丙三醇反應(yīng)15min，以終止氧化反應(yīng)。

4）將溶液3）置于透析袋中于4℃下透析3天，期間每隔6~8h換一次水。

5）將透析后的溶液4）真空冷凍干燥3天得到純的氧化普魯蘭多糖。

6）稱取1.000g氧化普魯蘭多糖固體，加入20ml雙蒸水于37℃溶解。

7）在溶液6）中加入30mg順鉑，于37℃充分溶解。

8）在溶液7）中加入250μl0.5g/ml的ε-聚賴氨酸溶液，充分混勻。

9）在上述溶液8）中加入30μl0.26g/ml的枝化聚乙烯亞胺溶液，迅速混合均勻。室溫下反應(yīng)80s。

10）將制得的載藥水凝膠放入雙蒸水中沖洗3次。-20℃條件下預(yù)凍12h，后真空冷凍干燥3天。

實(shí)施例2

1）稱取10.000g普魯蘭多糖溶解于400ml雙蒸水中，磁力攪拌充分溶解。

2）2）將10ml232mg/ml的高碘酸鉀溶液加入1）溶液中，反應(yīng)1.5h。

3）在2）中加入0.72ml丙三醇反應(yīng)15min，以終止氧化反應(yīng)。

4）將溶液3）置于的透析袋中于4℃下透析3天，期間每隔6~8h換一次水。

5）將透析后的溶液4）真空冷凍干燥3天得到純凈的氧化普魯蘭多糖固體。

6）稱取1.000g氧化普魯蘭多糖固體，加入20ml雙蒸水于37℃溶解。

7）在溶液6）中加入30mg順鉑，于37℃充分溶解。

8）在溶液7）中加入350μl0.5g/ml的ε-聚賴氨酸溶液，充分混勻。

9）在上述溶液8）中加入30μl0.26g/ml的枝化聚乙烯亞胺溶液，迅速混合均勻。室溫下反應(yīng)75s。

10）將制得的載藥水凝膠放入雙蒸水中沖洗3次。-20℃條件下預(yù)凍12h，后真空冷凍干燥3天。

實(shí)施例3

1）稱取10.000g普魯蘭多糖溶解于400ml雙蒸水中，磁力攪拌充分溶解。

2）將10ml232mg/ml的高碘酸鉀溶液加入1）溶液中，反應(yīng)1.5h。

3）在2）中加入0.72ml丙三醇反應(yīng)15min，以終止氧化反應(yīng)。

4）將溶液3）置于透析袋中于4℃下透析3天，期間每隔6~8h換一次水。

5）將透析后的溶液4）真空冷凍干燥3天得到純凈的氧化普魯蘭多糖固體。

6）稱取1.000g氧化普魯蘭多糖固體，加入20ml雙蒸水于37℃溶解。

7）在溶液6）中加入30mg順鉑，于37℃充分溶解。

8）在溶液7）中加入450μl0.5g/ml的ε-聚賴氨酸溶液，充分混勻。

9）在上述溶液8）中加入20μl0.26g/ml的枝化聚乙烯亞胺溶液，迅速混合均勻。室溫下反應(yīng)80s。

10）將制得的載藥水凝膠放入雙蒸水中沖洗3次。-20℃條件下預(yù)凍12h，后真空冷凍干燥3天。

實(shí)施例4

1）稱取10.000g普魯蘭多糖溶解于400ml雙蒸水中，磁力攪拌充分溶解。

2）將10ml232mg/ml的高碘酸鉀溶液加入1）溶液中，反應(yīng)1.5h。

3）在2）中加入0.72ml丙三醇反應(yīng)15min，以終止氧化反應(yīng)。

4）將溶液3）置于透析袋中于4℃下透析3天，期間每隔6~8h換一次水。

5）將透析后的溶液4）真空冷凍干燥3天得到純凈的氧化普魯蘭多糖固體。

6）稱取1.000g氧化普魯蘭多糖固體，加入20ml雙蒸水于37℃溶解。

7）在溶液6）中加入30mg順鉑，于37℃充分溶解。

8）在溶液7）中加入450μl0.5g/ml的ε-聚賴氨酸溶液，充分混勻。

9）在上述溶液8）中加入30μl0.26g/ml的聚乙烯亞胺溶液，迅速混合均勻。室溫下反應(yīng)60s。

10）將制得的載藥水凝膠放入雙蒸水中沖洗3次。-20℃條件下預(yù)凍12h，后真空冷凍干燥3天。

實(shí)施例5

1）稱取10.000g普魯蘭多糖溶解于400ml雙蒸水中，磁力攪拌充分溶解。

2）將10ml232mg/ml的高碘酸鉀溶液加入1）溶液中，反應(yīng)1.5h。

3）在2）中加入0.72ml丙三醇反應(yīng)15min，以終止氧化反應(yīng)。

4）將溶液3）置于透析袋中于4℃下透析3天，期間每隔6~8h換一次水。

5）將透析后的溶液4）真空冷凍干燥3天得到純凈的氧化普魯蘭多糖固體。

6）稱取1.000g氧化普魯蘭多糖固體，加入20ml雙蒸水于37℃溶解。

7）在溶液6）中加入30mg順鉑，于37℃充分溶解。

8）在溶液7）中加入450μl0.5g/ml的ε-聚賴氨酸溶液，充分混勻。

9）在上述溶液8）中加入40μl0.26g/ml的聚乙烯亞胺溶液，迅速混合均勻。室溫下反應(yīng)45s。

10）將制得的載藥水凝膠放入雙蒸水中沖洗3次。-20℃條件下預(yù)凍12h，后真空冷凍干燥3天。

實(shí)施例6

1）稱取10.000g普魯蘭多糖溶解于400ml雙蒸水中，磁力攪拌充分溶解。

2）將10ml232mg/ml的高碘酸鉀溶液加入1）溶液中，反應(yīng)1.5h。

3）在2）中加入0.72ml丙三醇反應(yīng)15min，以終止氧化反應(yīng)。

4）將溶液3）置于透析袋中于4℃下透析3天，期間每隔6~8h換一次水。

5）將透析后的溶液4）真空冷凍干燥3天得到純凈的氧化普魯蘭多糖固體。

6）稱取1.000g氧化普魯蘭多糖固體，加入20ml雙蒸水于37℃溶解。

7）在溶液6）中加入30mg順鉑，于37℃充分溶解。

8）在溶液7）中加入450μl0.5g/ml的ε-聚賴氨酸溶液，充分混勻。

9）在上述溶液8）中加入50μl0.26g/ml的聚乙烯亞胺溶液，迅速混合均勻。室溫下反應(yīng)40s。

10）將制得的載藥水凝膠放入雙蒸水中沖洗3次。-20℃條件下預(yù)凍12h，后真空冷凍干燥3天。

以上所述僅為本發(fā)明的制備方法，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。