本發(fā)明屬于天然物提取的技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種羅漢果提取物的制備方法。

背景技術(shù)：

羅漢果，葫蘆科多年生藤本植物的果實(shí)。別名拉汗果、假苦瓜、光果木鱉、金不換、羅漢表、裸龜巴，被人們譽(yù)為“神仙果”，其葉心形，雌雄異株，夏季開花，秋天結(jié)果。主要產(chǎn)于廣西壯族自治區(qū)桂林市永?？h龍江鄉(xiāng)、龍勝和百壽等鎮(zhèn)，永福縣和龍勝縣是羅漢果之鄉(xiāng)種植歷史比較悠久，其中永福種植羅漢果已經(jīng)有300多年歷史，龍勝縣種植羅漢果已經(jīng)有200多年歷史，中國百分之九十羅漢果產(chǎn)于永福縣和龍勝縣，羅漢果是桂林名貴的土特產(chǎn)，也是國家首批批準(zhǔn)的藥食兩用材料之一，其主要功效是能止咳化痰。果實(shí)營養(yǎng)價(jià)值很高，含豐富的維生素c(每100克鮮果中含400毫克～500毫克)以及糖甙、果糖、葡萄糖、蛋白質(zhì)、脂類等。

羅漢果味甘性涼，歸肺、大腸經(jīng)，有潤肺止咳、生津止渴的功效、適用于肺熱或肺燥咳嗽、百日咳及暑熱傷津口渴等，此外還有潤腸通便的功效。羅漢果為衛(wèi)生部首批公布的藥食兩用名貴中藥材，其所含羅漢果甜甙比蔗糖甜300倍，不產(chǎn)生熱量，是飲料、糖果行業(yè)的名貴原料，是蔗糖的最佳替代品。常飲羅漢果茶，可防多種疾病，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，羅漢果對支氣管炎、高血壓等疾病有顯著療效，還是起到防治冠心病、血管硬化、肥胖癥的作用。營養(yǎng)價(jià)值高，有清熱解暑、化痰止咳、涼血舒骨、清肺潤腸和生津止渴等功效；可治急慢性氣管炎、咽喉炎、支氣管哮喘、百日咳、胃熱、便秘、急性扁桃體炎等癥，糖尿病患者亦宜服用。

羅漢果具有較多的保健功效，現(xiàn)在研究中，雖然發(fā)現(xiàn)羅漢果有抗癌成分，但是是含量非常微弱，因此導(dǎo)致羅漢果的抗癌功效不明顯，也很少有人用來作為抗癌的藥物，因此研究開發(fā)一種具有較強(qiáng)抗癌功效的羅漢果提取物非常有必要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供羅漢果提取物的制備方法，得到的羅漢果提取物具有顯著的抗癌功效。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供羅漢果提取物的制備方法，包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎，加入其重量份6～10倍的乙醇溶液，超高壓處理，得到漿液；

2)將漿液放入磁場中處理；

3)超聲波提取，得到粗提取液；

4)將粗提取液過大孔吸附樹脂柱層析，以乙醇溶液和乙酸乙酯為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；

5)洗脫液離心分離，濃縮，干燥，得到羅漢果提取物。

本發(fā)明所述步驟1)中，粉碎至50～80目。羅漢果粉碎有利于有效物質(zhì)的溶出，有利于后續(xù)步驟的進(jìn)行。

本發(fā)明所述步驟1)中，在150～180mpa下超高壓處理2～6min。在一定的壓力范圍內(nèi)，有效成分的提取較高，當(dāng)超過180mpa時(shí)，會(huì)破壞羅漢果的抗癌成分，且抗癌成分的提取率低，且抗癌效果下降。

本發(fā)明所述步驟1)中，乙醇溶液的體積濃度為40～50％。乙醇的體積濃度過高時(shí)，羅漢果提取物的總提取率降低，有效成分在乙醇中的溶解度降低，且部分蛋白質(zhì)易凝結(jié)，一些脂溶性成分被提取出來，增大有效成分與提取溶劑的擴(kuò)散阻力。

本發(fā)明所述步驟2)中，在0.4～0.8t的磁場中處理8～16min。將漿液放入磁場中處理，改變抗癌成分的導(dǎo)向，使抗癌成分更易溶出，同時(shí)也為了提高抗癌成分的提取率和純度。

本發(fā)明所述步驟3)中，在45～75khz頻率下超聲波提取30～70min。超聲波的提取頻率與羅漢果的抗癌成分密切相關(guān)，提高提取頻率有利于抗癌成分的溶出，但是過高，不利于部分抗癌成分物質(zhì)的溶出，降低提取率，增大損失。一般情況下，超聲波提取時(shí)間越長越有利于提高提取率，但是過長，大分子物質(zhì)大量進(jìn)入粗提取物中，影響抗癌的純度，在這個(gè)頻率下，還有效保護(hù)羅漢果的抗癌成分不被破壞。

本發(fā)明所述步驟3)中，超聲波提取時(shí)的溫度為45～55℃。一定范圍內(nèi)，溫度越高，越有利于羅漢果有效成分的溶出，提高提取率，但是溫度過高會(huì)破壞有效成分，而在這樣的溫度范圍內(nèi)提取，條件溫和，有效保護(hù)羅漢果有效成分的同時(shí)，有利于加快提取速度。

本發(fā)明所述步驟4)中，乙醇溶液的體積濃度為75～95％。當(dāng)乙醇的體積濃度超過95％時(shí)，乙醇中的含水量減少，乙醇分子通透性發(fā)生變化，導(dǎo)致溶液中羅漢果的有效成分向樹脂外擴(kuò)散的難度增大，影響洗脫。

本發(fā)明所述步驟4)中，乙醇溶液與乙酸乙酯的重量比為3～8:1。使用混合的溶劑，有利于有效成分的洗脫，提高純度。

本發(fā)明所述步驟5)中，在3400～4600r/min轉(zhuǎn)速下離心分離4～8min。離心分離有利于羅漢果有效成分的純化，提高提取率。

通過本發(fā)明方法制備羅漢果提取物，得到的提取物具有顯著的抗癌功效，拓寬羅漢果的應(yīng)用，提高羅漢果的價(jià)值，用于治療已經(jīng)注射小鼠肉瘤s180腹水型瘤株的小鼠，平均存活天數(shù)相比不使用藥物治療的已經(jīng)注射小鼠肉瘤s180腹水型瘤株的小鼠多62～83天。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。

實(shí)施例1

羅漢果提取物的制備方法，包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎至50目，加入其重量份10倍體積濃度為40％的乙醇溶液，在150mpa下超高壓處理2min，得到漿液；

2)將漿液放入0.8t的磁場中處理8min；

3)在70khz頻率下超聲波提取30min，得到粗提取液；

4)將粗提取液過大孔吸附樹脂柱層析，以重量比為8:1體積濃度為75％的乙醇溶液和乙酸乙酯為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；

5)洗脫液在4600r/min轉(zhuǎn)速下離心分離4min，濃縮，干燥，得到羅漢果提取物。

實(shí)施例2

羅漢果提取物的制備方法，包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎至60目，加入其重量份9倍體積濃度為45％的乙醇溶液，在180mpa下超高壓處理3min，得到漿液；

2)將漿液放入0.7t的磁場中處理10min；

3)在75khz頻率下超聲波提取40min，得到粗提取液；

4)將粗提取液過大孔吸附樹脂柱層析，以重量比為6:1體積濃度為80％的乙醇溶液和乙酸乙酯為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；

5)洗脫液在4300r/min轉(zhuǎn)速下離心分離5min，濃縮，干燥，得到羅漢果提取物。

實(shí)施例3

羅漢果提取物的制備方法，包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎至70目，加入其重量份8倍體積濃度為50％的乙醇溶液，在170mpa下超高壓處理4min，得到漿液；

2)將漿液放入0.6t的磁場中處理12min；

3)在65khz頻率下超聲波提取50min，得到粗提取液；

4)將粗提取液過大孔吸附樹脂柱層析，以重量比為5:1體積濃度為85％的乙醇溶液和乙酸乙酯為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；

5)洗脫液在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離6min，濃縮，干燥，得到羅漢果提取物。

實(shí)施例4

羅漢果提取物的制備方法，包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎至80目，加入其重量份7倍體積濃度為40％的乙醇溶液，在160mpa下超高壓處理5min，得到漿液；

2)將漿液放入0.5t的磁場中處理14min；

3)在55khz頻率下超聲波提取60min，得到粗提取液；

4)將粗提取液過大孔吸附樹脂柱層析，以重量比為4:1體積濃度為90％的乙醇溶液和乙酸乙酯為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；

5)洗脫液在3700r/min轉(zhuǎn)速下離心分離7min，濃縮，干燥，得到羅漢果提取物。

實(shí)施例5

羅漢果提取物的制備方法，包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎至50目，加入其重量份6倍體積濃度為50％的乙醇溶液，在150mpa下超高壓處理6min，得到漿液；

2)將漿液放入0.4t的磁場中處理16min；

3)在45khz頻率下超聲波提取70min，得到粗提取液；

4)將粗提取液過大孔吸附樹脂柱層析，以重量比為3:1體積濃度為95％的乙醇溶液和乙酸乙酯為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；

5)洗脫液在3400r/min轉(zhuǎn)速下離心分離8min，濃縮，干燥，得到羅漢果提取物。