本申請是申請?zhí)枮?00980105251.3的中國專利申請的分案申請，原申請是申請日為2009年2月12日的國際申請pct/ep2009/051640的中國國家階段申請。本發(fā)明涉及用25-羥基維生素d3(麥角鈣化固醇(calcifediol))治療人高血糖癥。血糖被降低至比基線更接近正常的水平。任選地，可以與25-羥基維生素d3一起使用維生素d3。
背景技術(shù)：
：維生素d(例如麥角鈣化醇和膽鈣化固醇)是由其生物活性定義的一組脂溶性化合物。維生素d缺乏在兒童中引起佝僂病，在成年人中引起骨軟化癥。但是，在數(shù)月慢性攝入多于100倍推薦每日允許量(即5-15μg或200-600iu維生素d)后可能發(fā)生毒性。對維生素d而言，“毒性閾值是每日500到600mcg/kg體重。通常，成年人不應(yīng)長期消耗多于rda的三倍”(garrison&somer,thenutritiondeskreference,thirded.,mcgraw-hill,pg.82,1997)。在大于375nmol/l25-羥基維生素d的血濃度下可發(fā)生血鈣過多。更近來地，安全的維生素d上限水平被鑒定為至少250μg/天(10’000iu)(hathcock等，am.jclin.nutr.85:6-18,2007)。這樣的膳食補(bǔ)充劑的攝入已顯示導(dǎo)致約200nmol/l25-羥基維生素d3的血濃度。維生素d是一種激素原，其必須在肝中被羥基化，產(chǎn)生25-羥基維生素d(麥角鈣化固醇，25-oh維生素d；25-ohd)，其隨后在腎和其它組織中經(jīng)歷另外的羥基化，產(chǎn)生維生素d的活性激素形式——1,25-二羥基維生素d。1,25-二羥基維生素d被釋放進(jìn)血液中，與維生素d結(jié)合蛋白(dbp)結(jié)合，并被轉(zhuǎn)運(yùn)至目標(biāo)組織。1,25-二羥基維生素d和維生素d受體之間的結(jié)合允許復(fù)合物在細(xì)胞核中發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的作用。維生素d缺乏可促進(jìn)骨的再吸收。其也可調(diào)控心血管、免疫和肌肉系統(tǒng)的功能。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)了維生素d攝入及其對血壓或葡萄糖代謝影響之間的關(guān)聯(lián)。維生素d的活性受甲狀旁腺激素的負(fù)反饋控制。維生素d和25-ohd3二者過去均作為藥物被施用。維生素d當(dāng)然是可廣泛獲得的，25-ohd3之前在美國由organonusa以名稱"calderol"出售，但是現(xiàn)在在fda的停止供應(yīng)的藥品(discontinueddrug)列表上。其為含有玉米油和25-ohd3的明膠膠囊。25-ohd3的液體形式目前在西班牙由faesfarma以名稱"hidroferol"在油性溶液中出售。維生素d和25-ohd3的組合已經(jīng)在動物飼料中使用。用于飼料中的25-ohd3可以從dsm以名稱"rovimixhy-d"商業(yè)獲得。tritsch等(us2003/0170324)公開了一種飼料預(yù)混物組合物，其至少包含以5％和50％(wt/wt)之間的量溶于油中的25-ohd3，和抗氧化劑、包封25-ohd3和油微滴的試劑，和營養(yǎng)添加劑(例如維生素d3)。預(yù)混物可以被添加至家禽、豬、狗或貓的食物。該組合物使25-ohd3穩(wěn)定化以抵擋氧化。simoes-nunes等(us2005/0064018)公開了向動物飼料添加25-oh維生素d3和維生素d3的組合。具體地，向豬飼料中添加約10μg/kg到約100μg/kg的25-oh維生素d3和約200iu/kg到約4,000iu/kg的維生素d3。這種添加促進(jìn)豬的骨強(qiáng)度。stark等(us5,695,794)公開了對家禽飼料添加25-oh維生素d3和維生素d3的組合，來改善脛骨軟骨發(fā)育不良的影響。borenstein等us5,043,170公開了維生素d3和1-α-羥基膽鈣化固醇或1α,25-羥基膽鈣化固醇的組合用于在下蛋的母雞和老母雞中改善蛋強(qiáng)度和腿強(qiáng)度。chung等，wo2007/059960公開了用含維生素d3以及25-羥基維生素d3的膳食飼喂的母豬(sow)具有改善的一般健康狀態(tài)、身體輪廓(bodyframe)、產(chǎn)仔數(shù)和健康和其它生產(chǎn)參數(shù)。還公開了25-ohd3人食物補(bǔ)充劑，但是其劑量范圍(5-15微克/kg體重)非常高，等于每人300-900微克的極高的每日劑量。就我們所知，現(xiàn)有技術(shù)沒有教導(dǎo)或者暗示25-羥基維生素d3作為藥物治療人高血糖癥的用途。用有效量的維生素d3和25-羥基維生素d3處理人時(shí)組合物的形式和劑量提供了想要的效果。其它優(yōu)點(diǎn)和改進(jìn)描述于下文，或可由本文的公開內(nèi)容揭示。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：已發(fā)現(xiàn)25-羥基維生素d3(麥角鈣化固醇)可以被用作藥物，在人中降低高血糖或?qū)⒀蔷S持在正常水平。藥物可任選地還包含維生素d3(膽鈣化固醇)。人可以是任何年齡，包括兒童和青少年(juveniles)，從出生開始到成年，和從18歲到80歲的年齡，或大于80歲的年齡。本發(fā)明還公開了藥物組合物的形式和劑量，以及用于制造藥物的方法。在第一方面，本發(fā)明提供了對人施用至少25-羥基維生素d3的方法。這允許血糖被降低或維持在更接近正常的水平(例如對于空腹成年人而言每升血漿少于約7mmol葡萄糖)。任選地，可以與25-羥基維生素d3一起或單獨(dú)地施用維生素d3。它們可以每天一次、每周一次或每月一次地施用。在另一方面，本發(fā)明提供了適合人使用的藥物組合物，所述藥物組合物以降低人血糖水平的量包含維生素d3、25-羥基維生素d3和可藥用載劑。其它方面可以通過以下的說明書和權(quán)利要求及其推廣明確得知。具體實(shí)施方式發(fā)明詳述在說明書和權(quán)利要求書通篇中使用時(shí)，適用以下定義：“維生素d”表示維生素d3(膽鈣化固醇)和/或維生素d2(麥角鈣化醇)。人不能制造維生素d2(麥角鈣化醇)，但是能夠使用其作為維生素d的來源。維生素d2可以由多種植物合成，并且通常作為維生素d的等同物用于補(bǔ)充劑中的維生素d中?！熬S生素d代謝產(chǎn)物”表示除25-羥基維生素d3之外的任何其它維生素d代謝產(chǎn)物?！?5-ohd3”特指25-羥基維生素d3?！?5-ohd”指維生素d2或維生素d3的25-羥基化的代謝產(chǎn)物，其為血漿中存在的主要循環(huán)形式?！邦A(yù)防”意欲包括疾病的改善，癥狀嚴(yán)重性的減輕，早期干預(yù)，和疾病開始持續(xù)時(shí)間的延長，其不旨在受限于下述情況，所述情況下患者不再能夠染上疾病或經(jīng)歷任何癥狀。維生素d3和25-羥基維生素d3可得自任何來源，可以使用便利的技術(shù)來制備其組合物。通常，通過加熱和攪動將維生素d3、25-羥基維生素d3的晶體或二者(單獨(dú)或一起)溶于油中。優(yōu)選地，將油轉(zhuǎn)移進(jìn)管中并加熱。之后向管中添加維生素d3、25-羥基維生素d3或二者，同時(shí)保持油的溫度或使其隨時(shí)間提高。攪動組合物以溶解維生素d3、25-羥基維生素d3或二者的晶體。在向油中添加之前，可以通過研磨和/或過篩使晶體尺寸減小，從而增強(qiáng)溶解?？梢酝ㄟ^攪拌、管旋轉(zhuǎn)、混合、勻化、再循環(huán)或超聲處理攪動組合物。優(yōu)選地，可以在管中將油加熱至約80℃到約85℃的溫度，將大小經(jīng)處理的晶體(sizedcrystal)引入管中，攪拌內(nèi)含物，以將晶體溶于油中?！坝汀笨梢允侨魏慰墒秤玫挠?、脂質(zhì)或脂肪：例如巴巴蘇油(babassuoil)、椰子油、羽葉棕櫚油(cohuneoil)、murumyru油脂、棕櫚仁油(palmkerneloil)或星實(shí)櫚油(tucumoil)。油可以是天然的、合成的、半合成的或其任何組合。天然油可來自于任何來源(例如動物、植物、真菌、海產(chǎn)(marine))；合成或半合成的油可通過便利的技術(shù)生產(chǎn)。優(yōu)選地，油是植物中鏈甘油三酯(主要是辛酸酯和癸酸酯)的混合物。組合物可任選地含有一種或多種其它的合適成分，例如抗氧化劑、防腐劑、溶出劑(dissolutionagent)、表面活性劑、ph調(diào)節(jié)劑或緩沖劑、致濕劑(humectants)及其任何組合。前述是可藥用載劑的例子。合適的抗氧化劑包括生育酚，混合的生育酚，來自天然或合成來源的生育酚，丁基化的羥基甲苯(bht)，丁基化的羥基茴香醚(bha)，天然的抗氧化劑例如迷迭香提取物，沒食子酸丙酯和人用藥物制造中使用的任何其它抗氧化劑。優(yōu)選地，抗氧化劑是生育酚。合適的防腐劑包括對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、苯甲酸及其任何組合。合適的溶出劑包括無機(jī)或有機(jī)溶劑：例如醇、含氯烴及其任何組合。合適的表面活性劑可以是陰離子、陽離子或非離子的，例如棕櫚酸抗壞血酸酯、聚山梨酯、聚乙二醇、及其任何組合。合適的ph調(diào)節(jié)劑或緩沖劑包括檸檬酸-檸檬酸鈉、磷酸-磷酸鈉、乙酸-乙酸鈉及其任何組合。合適的致濕劑包括甘油、山梨醇、聚乙二醇、丙二醇及其任何組合。一旦形成，可以將油性組合物加入多種其它有用的組合物中，其中一些組合物在下文討論。例如，可以形成乳液，所述乳液可以任選地被包封或噴霧干燥。可以通過將上述非水性組合物與水性組合物組合來制備多種乳液。乳液可以是任何類型的。合適的乳液包括水包油乳液、油包水乳液、無水乳液、固體乳液和微乳液。可以通過任何便利的技術(shù)制備乳液。乳液含有水性組合物和非水性(例如油性)組合物，其中后者包含以基于油性組合物總重按重量計(jì)約3％和約50％之間的用量溶于油中的維生素d3、25-羥基維生素d3或二者(單獨(dú)或一起)。在本文中，“水性組合物”和“水相”可互換使用。通常，乳液可含有從約20％到約95％的水性組合物和從約5％到約80％的非水性組合物。然而優(yōu)選地，乳液含有從約85％到約95％(體積/體積)的水性組合物和從約5％到約15％(體積/體積)的非水性組合物。便利地，非水性組合物可以作為微滴分散于水性組合物中。例如，水性組合物中的微滴可具有小于約500nm的平均直徑。便利地，微滴具有約100nm和約200nm之間的平均直徑。在一個(gè)尤其有利的實(shí)施方案中，乳液含有包封劑，其有助于在(例如通過噴霧干燥)將乳液進(jìn)一步加工后包封油性組合物。包封劑可以是能夠包封油性組合物的任何可食用的物質(zhì)。優(yōu)選地，包封劑主要是膠體材料。這類材料包括淀粉、來自動物來源的蛋白質(zhì)(包括明膠)、來自植物來源的蛋白質(zhì)、酪蛋白、果膠、藻酸鹽、瓊脂、麥芽糖糊精、磺酸木質(zhì)素、纖維素衍生物、糖、糖類、山梨醇、膠質(zhì)及其任何組合。合適的淀粉包括：植物淀粉(例如來自nationalstarch&chemicalcorp.,newyork,ny的或)，其它改性的食物淀粉及其任何組合。優(yōu)選地，淀粉是改性的植物淀粉。來自動物來源的合適的蛋白質(zhì)包括：明膠(例如牛明膠、具有不同bloom數(shù)量的豬明膠(a型或b型)、魚明膠)、脫脂奶蛋白質(zhì)、酪蛋白酸鹽及其任何組合。優(yōu)選地，動物蛋白質(zhì)是明膠。來自植物來源的合適蛋白質(zhì)包括：馬鈴薯蛋白(例如來自roquettepreressocieteanonyme,lestrem,法國的)、豌豆蛋白、大豆蛋白及其任何組合。優(yōu)選地，植物蛋白質(zhì)是馬鈴薯蛋白。具有不同葡糖當(dāng)量的合適的麥芽糖糊精包括：麥芽糖糊精5、麥芽糖糊精10、麥芽糖糊精15、麥芽糖糊精20、麥芽糖糊精25及其任何組合。優(yōu)選地，麥芽糖糊精是麥芽糖糊精15。合適的纖維素衍生物包括：乙基纖維素、甲基乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素及其任何組合。合適的糖類包括乳糖、蔗糖或其任何組合。優(yōu)選地，糖類是蔗糖。合適的膠質(zhì)包括：阿拉伯膠、刺槐豆膠(locustbean)、角叉菜膠及其任何組合。優(yōu)選地，膠質(zhì)是阿拉伯膠。當(dāng)乳液含有包封劑時(shí)，包封劑可通過任何便利的技術(shù)分散于水中，形成水相。水相可以是溶液或混合物，這取決于選擇的組分的特性。所選擇的組分可以通過任何便利的技術(shù)分散，所述技術(shù)包括：勻化、混合、乳化、再循環(huán)、靜態(tài)混合、超聲、攪拌、加熱或其任何組合。然后可以根據(jù)，需要通過添加水，來調(diào)節(jié)得到的水相的粘度。乳液的水性組合物可任選地含有任何其它合適的材料，這包括但不限于上文關(guān)于非水性組合物所討論的材料。優(yōu)選地，水性組合物可包括包封劑、成膜劑、增塑劑、防腐劑、抗氧化劑或其任何組合。合適的防腐劑包括對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、抗壞血酸、山梨酸鉀、苯甲酸鈉及其任何組合。合適的抗氧化劑包括抗壞血酸鈉、抗壞血酸、檸檬酸及其任何組合。優(yōu)選地，水相含有改性的食物淀粉，例如辛烯基琥珀酰淀粉麥芽糖糊精、和抗壞血酸鈉。另一種優(yōu)選的水相含有馬鈴薯蛋白麥芽糖糊精20和抗壞血酸鈉。可以通過任何便利的技術(shù)(優(yōu)選攪拌)將選擇的組分溶于水中。優(yōu)選地勻化混合物，直至其均一并且沒有團(tuán)塊。優(yōu)選地，勻化在約50℃和約75℃之間的溫度下進(jìn)行。可以將得到的水相的最終粘度調(diào)節(jié)至期望的粘度，優(yōu)選地約250cp到約450cp，更優(yōu)選地約300cp到約400cp，進(jìn)一步更優(yōu)選地約385cp?？梢酝ㄟ^任何手段(包括勻化、轉(zhuǎn)子-定子剪切、高壓剪切和氣蝕(cavitation)、高速“cowles”或剪力攪動及其任何組合)來乳化非水性組合物和水相，形成乳液。優(yōu)選地，可以在乳化后通過添加水來調(diào)節(jié)乳液的體積和粘度。優(yōu)選地，通過勻化，來乳化非水性和水性組合物。優(yōu)選地，乳液應(yīng)當(dāng)不含有任何礦物質(zhì)、過渡金屬或過氧化物。如上文所述，可以在生產(chǎn)其它有用的組合物，特別是經(jīng)包封的油(例如噴霧干燥的粉末)時(shí)加入或使用乳液。通常，經(jīng)包封的油包含油性組合物和包封所述油性組合物的包封劑，其中所述油性組合物含有以基于油性組合物總重按重量計(jì)約5％和約50％之間的用量溶于油中的維生素d3、25-羥基維生素d3或二者。可以通過任何便利的技術(shù)生產(chǎn)經(jīng)包封的油，例如通過任何常規(guī)技術(shù)干燥上述乳液，所述常規(guī)技術(shù)包括噴霧干燥、冷凍干燥、流化床干燥、托盤干燥(traydrying)、吸附及其任何組合。優(yōu)選地，通過將下述乳液噴霧干燥生產(chǎn)經(jīng)包封的油，所述乳液具有上文含有包封劑的水相；噴霧干燥參數(shù)由最終經(jīng)包封的油中期望的物理特性決定。這類物理參數(shù)包括顆粒大小、粉末形狀和流動，以及水含量。優(yōu)選地，基于經(jīng)包封的油總重，按重量計(jì)，油的用量小于約30％，小于約20％，小于約10％或小于約5％。經(jīng)包封的油應(yīng)當(dāng)具有良好的流動性，并且維生素d3和/或25-羥基維生素d3應(yīng)當(dāng)均勻分布于組合物各處。便利地，經(jīng)包封的油是粉末?？梢韵蚪?jīng)包封的油中添加任何其它合適的添加劑。一種這類添加劑可以是提高經(jīng)包封的油的流動性的流動劑，例如二氧化硅。劑量每日。其中兩種活性成分要單獨(dú)或獨(dú)自施用的根據(jù)本發(fā)明的組合物以從約1μg到約50μg、優(yōu)選地約5μg和約25μg的用量含有維生素d或25-ohd3?；蛘?，具有維生素d和25-ohd3二者的單一每日劑量以從約1μg到約50μg、優(yōu)選地約5μg和25μg的用量含有每種活性成分。維生素d與25-ohd3的劑量比例可以從約50:1到約1:50，更優(yōu)選地從約25:1到約1:25，進(jìn)一步更優(yōu)選地從約6:1到約1:6?？梢栽趩我辉噭┖?或容器)中包裝多個(gè)單獨(dú)的劑量。例如，試劑盒可由單獨(dú)(即60個(gè)單獨(dú)劑量)或組合(即含有兩種活性成分的30個(gè)劑量)的兩種活性劑的三十個(gè)單獨(dú)的每日劑量組成。試劑盒中可包括對人施用劑量的說明書。每周。單周劑量以從約7μg到約350μg、優(yōu)選地從約35μg到175μg的用量含有維生素d或25-ohd3。或者，單周劑量可含有維生素d和25-ohd3二者，每種的用量從約7μg到約350μg，優(yōu)選地從約35μg到175μg。維生素d與25-ohd3的劑量比可以從約50:1到約1:50，更優(yōu)選地從約25:1到約1:25，進(jìn)一步更優(yōu)選地從約6:1到約1:6。每月。單月劑量以從約30μg到約1500μg、優(yōu)選地約75μg到約500μg的用量含有維生素d或25-ohd3?；蛘撸瑔卧聞┝靠珊芯S生素d和25-ohd3二者，每種的用量從約30μg到約1500μg，優(yōu)選地約75μg到約500μg。試劑盒可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個(gè)每周或每月劑量。維生素d與25-ohd3的劑量比例可以從約50:1到約1:50，更優(yōu)選地從約25:1到約1:25，進(jìn)一步更優(yōu)選地從約6:1到約1:6?？梢允褂脺y定血或其級分(例如血漿和血清)中葡萄糖量的酶聯(lián)測定法便利地測量血糖?？梢垣@得用于監(jiān)測糖尿病人血糖的許多測定法和設(shè)備?？梢詼y量糖基化的血紅蛋白來監(jiān)測高血糖癥，因?yàn)樵诟咚狡咸烟侵斜┞堆娱L的時(shí)間段時(shí)血紅蛋白被糖基化。高血糖可導(dǎo)致糖尿病人中的下述癥狀，如顯著的饑餓(多食)、過度口渴(多飲)、過度排尿(多尿)、疲勞、體重減輕和傷口愈合差?？崭钩赡耆苏５难?漿)糖水平被認(rèn)為是從約4mmol/l到約7mmol/l。與口服施用的維生素d3相比，口服施用的25-羥基維生素d3及其導(dǎo)致的人全身濃度之間關(guān)系的數(shù)據(jù)缺乏。迄今為止對維生素d3和25-羥基維生素d3動理學(xué)數(shù)據(jù)的最全面的分析是由barger-lux等進(jìn)行的(osteoperosis8:222-230,1998)。在八周的時(shí)間段中對健康男性施用高達(dá)1250μg/天的維生素d3，在四周的時(shí)間段中施用高達(dá)50μg/天的25-羥基維生素d3。展示了維生素d3和血漿25-羥基維生素d3關(guān)系的曲線動理學(xué)，并且提出這可能歸因于肝中羥化酶活性的飽和。這得到以下內(nèi)容的支持：未報(bào)道過用25-羥基維生素d3給藥產(chǎn)生曲線動理學(xué)(barger-lux等,1998)。盡管關(guān)于25-羥基維生素d3的數(shù)據(jù)不顯示曲線動理學(xué)，但是只有在劑量擴(kuò)大超過被認(rèn)為導(dǎo)致最大生理益處的水平時(shí)才是明顯的，這可能表明在非常高劑量下被壓倒的內(nèi)穩(wěn)態(tài)機(jī)制的活性。在生理學(xué)范圍內(nèi)，該關(guān)系顯示為線性的，并且可與barger-lux等比較。這些數(shù)據(jù)表明最大健康益處需要10μg和60μg25-羥基維生素d之間的每日劑量。在口服施用經(jīng)噴霧干燥的25-羥基維生素d3、經(jīng)噴霧干燥的維生素d3或二者的人中開始藥物代謝動理學(xué)研究，來研究它們的生理學(xué)相互作用。具體地，感興趣的是它們的劑量-應(yīng)答曲線(隨設(shè)定時(shí)間過程指出維生素d3和25-羥基維生素d3的循環(huán)濃度，并非簡單地是平均濃度或達(dá)到的最大濃度)的形狀和穩(wěn)態(tài)動理學(xué)。就前一觀點(diǎn)而言，研究暴露于維生素d3和25-羥基維生素d3二者時(shí)劑量-應(yīng)答曲線形狀的改變是重要的。就后一觀點(diǎn)而言，在給藥比每日給藥更不頻繁時(shí)，研究其穩(wěn)態(tài)動理學(xué)也是必需的，因?yàn)閷γ咳帐褂醚a(bǔ)充劑可能具有低順應(yīng)性的人群(如老年人)而言這是優(yōu)選的方案。提供以下非限制性實(shí)施例來更好地闡述本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例1臨床試驗(yàn)配制材料和方法提供作為粉末的25-羥基維生素d3經(jīng)噴霧干燥的配制物。簡言之，將25-羥基維生素d3和dl-α-生育酚溶于中鏈甘油三酯的油中，然后乳化進(jìn)改性淀粉、蔗糖和抗壞血酸鈉的水性溶液中。在存在二氧化硅時(shí)將所述乳液在噴霧干燥器中霧化。在水含量(ldo)小于4％時(shí)收集得到的粉末，并通過400μm過篩。將其包裝并密封在鋁袋中，然后在低于15℃的干燥處儲存，并在其制造后12個(gè)月以內(nèi)使用。制造了獨(dú)立的三組。詳細(xì)地，通過在70℃真空下，在具有錨攪拌器(anchorstirrer)的frymix加工單元中混合120分鐘生產(chǎn)由以下組成的混合物：·17.300kg水(wbi)·13.460kg改性的食物淀粉(capsulhs)·3.270kg蔗糖·0.730kg抗壞血酸鈉通過在82℃下在具有螺旋槳攪拌器的雙壁管中混合35分鐘，制備由以下組成的油相：·0.550kgbergabestmct油60/40·0.049kg麥角鈣化固醇(hy-dusp)·0.183kgdl-α-生育酚將油相轉(zhuǎn)移至frymix加工單元內(nèi)的基質(zhì)中，并用內(nèi)部膠體磨預(yù)乳化(60分鐘，70℃)。預(yù)乳液通過高壓勻化器(20min)流通。將在70℃下粘度為60mpa·s到90mpa·s的乳液通過高壓泵轉(zhuǎn)移至噴嘴。向塔中加入二氧化硅(sipernat320ds)作為流化劑。噴霧和干燥參數(shù)在下文列出：參數(shù)噴霧干燥進(jìn)氣口位置塔頂部塔頂部進(jìn)氣口進(jìn)料1500m3/h1400m3/h進(jìn)氣口溫度170c加熱器關(guān)掉ifb進(jìn)氣口進(jìn)料500m3/h500m3/hifb進(jìn)氣口溫度65℃50℃排氣口位置塔底部塔底部精細(xì)粉末再循環(huán)至ifb至ifb乳液進(jìn)料速度50kg/h乳液進(jìn)料停止sio2進(jìn)料位置塔頂部sio2進(jìn)料停止sio2酸進(jìn)料速度100g/hsio2進(jìn)料停止對于這三組25-羥基維生素d3中的每一組而言，獲得了平均8.4kg的噴霧干燥的粉末，其具有約0.25％的25-羥基維生素d3含量。配制物的其它成分為：73.2％改性的食物淀粉、17.6％蔗糖、4.0％抗壞血酸鈉、3.0％中鏈甘油三酯、1.0％二氧化硅和1.0％dl-α-生育酚。經(jīng)噴霧干燥的維生素d3配制物作為粉末提供。簡言之，將維生素d3和dl-α-生育酚溶于中鏈甘油三酯的油中，然后乳化進(jìn)改性淀粉、蔗糖和抗壞血酸鈉的水性溶液中。在存在二氧化硅時(shí)將所述乳液在噴霧干燥器中霧化。在水含量(lod)小于4％時(shí)收集得到的粉末，并過篩去除大團(tuán)塊。將其在低于15℃的干燥處儲存，并在其制造后12個(gè)月以內(nèi)使用。臨床試驗(yàn)受試者使用知情同意書募集健康的絕經(jīng)后女性(年齡50到70歲)，并使用以下標(biāo)準(zhǔn)篩選：血清25-羥基維生素d3在20nmol/l和50nmol/l之間，身體質(zhì)量指數(shù)在18kg/m2和27kg/m2之間，血壓低于146/95mmhg，血清鈣低于2.6nmol/l，空腹葡萄糖低于100mg/dl，一周不超過三次高強(qiáng)度運(yùn)動，未治療高血壓，不使用高劑量的維生素d或鈣補(bǔ)充劑或影響骨代謝的藥物(例如雙磷酸酯(biphosphonate)、降鈣素、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、激素替代療法、甲狀旁腺激素)，并且在研究期間不訪問“陽光充足”的地方。將受試者隨機(jī)分配至七個(gè)治療組之一(即每日、每周、作為單一劑量大丸劑，和作為組合劑量的大丸劑)。每組包括五個(gè)受試者。冬季期間，在瑞士zürich對她們隨訪4個(gè)月。設(shè)計(jì)目標(biāo)是研究和比較施用給人的維生素d3和25-羥基維生素d3的藥物代謝動力學(xué)特征。研究了等摩爾量的兩種物質(zhì)。給藥方案以20μg/天(或以每周為基礎(chǔ)的其等同物)的25-羥基維生素d3為基礎(chǔ)。為了比較的目的，必須施用等摩爾量的維生素d3或25-羥基維生素d3。就維生素d3的施用而言，該劑量被認(rèn)為足以克服背景變化并對參與者提供有效的劑量。每日：120次施用1.25-羥基維生素d320μg2.維生素d320μg(800iu)每周：16次施用3.25-羥基維生素d3140μg4.維生素d3140μg(5600iu)大丸劑：單次施用5.25-羥基維生素d3140μg6.維生素d3140μg(5600iu)大丸劑：組合施用(comboadministration)7.d3和25(oh)d3140μg(5600iu)+140μg包裝在瓶中的硬凝膠膠囊在每粒膠囊中含有20μg或140μg的經(jīng)噴霧干燥的維生素d3或25-羥基維生素d3。每個(gè)劑量在早餐時(shí)口服消耗。對于“每日”和“每周”組而言，研究的持續(xù)時(shí)間為四個(gè)月。“大丸劑”組中募集的受試者在第二次研究訪問時(shí)口服消耗單一劑量。通過在攝入劑量后多個(gè)時(shí)間從受試者獲得樣品來測定25-羥基維生素d3的血漿濃度(例如峰狀態(tài)和穩(wěn)態(tài))。為了篩選的目的和為了建立基線值，在進(jìn)入研究之前獲得血樣和臨床實(shí)驗(yàn)室測量的血清中維生素d3、25-羥基維生素d3、鈣、肌酸酐、白蛋白和空腹葡萄糖。在該研究第1周的周一，在24小時(shí)內(nèi)評價(jià)血清維生素d3、25-羥基維生素d3和1,25-二羥基維生素d3；血清標(biāo)記物(即維生素d3、25-羥基維生素d3、鈣、肌酸酐、白蛋白pth、got、gpt、alp、甘油三酯、hdl、ldl、總膽固醇、balp和空腹葡萄糖)；和尿標(biāo)記物(即鈣、肌酸酐和dpd)的藥物代謝動力學(xué)。在第1周剩余日期和第2周的周一采取每日樣品，來評價(jià)血清維生素d3和25-羥基維生素d3、血清標(biāo)記物(即鈣、肌酸酐、白蛋白)和尿標(biāo)記物(即鈣、肌酸酐)。在第3、5、7、9、11、13和15周的周一繼續(xù)評價(jià)。在第16周的周一采樣，來評價(jià)血清維生素d3、25-羥基維生素d3和1,25-二羥基維生素d3；血清標(biāo)記物(即維生素d3、25-羥基維生素d3、鈣、肌酸酐、白蛋白、pth、got、gpt、alp、甘油三酯、hdl、ldl、總膽固醇、balp、和空腹葡萄糖)和尿標(biāo)記物(即鈣、肌酸酐和dpd)。結(jié)果因?yàn)閮蓚€(gè)原因，不能對獲得的結(jié)果進(jìn)行嚴(yán)格的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。首先，使數(shù)據(jù)知情(unblinding)后，發(fā)現(xiàn)在各組基線葡萄糖水平之間存在差異，并且所述差異在整個(gè)研究中持續(xù)。其次，檢查個(gè)體的胰島素水平后，注意到大量這些胰島素水平在至少一次訪問中被記錄為“0.0”。這表明分析、樣品、方法或組合存在問題。然而，盡管存在上述問題，但是進(jìn)行了以下觀察。葡萄糖水平：接受每日或每周維生素d3的十個(gè)個(gè)體在第15周具有與第2周相比更低的葡萄糖水平。對25-ohd3而言，10個(gè)中的6個(gè)具有更低的葡萄糖水平。因此，看起來維生素d3和25-oh均可降低葡萄糖水平。胰島素水平：在接受每日或每周維生素d3的十名個(gè)體中，只有四名具有在任何訪問中都不包含“0.0”結(jié)果的胰島素水平。在這四名個(gè)體中，三名在第15周具有比第2周更高的胰島素水平，只有一名具有更低值。在接受每日或每周25-ohd3的十名個(gè)體中，五名具有在任何訪問中都不包含“0.0”的胰島素水平。在這五名個(gè)體中，一名在第15周具有比第2周更高的胰島素水平，但是有四名具有更低的水平。更低的胰島素水平是期望的結(jié)果，因?yàn)槠浔砻饕葝u素靈敏度被提高。因此，顯示25-ohd3改善胰島素靈敏度的能力比維生素d3更好。實(shí)施例2小鼠研究在小鼠中的兩種研究中測試25-ohd3或25-ohd3和維生素d3的組合對血糖的影響。在第一種研究中，在肌肉肥大(musclehypertrophy)模型中測定25-ohd3對血糖的影響。簡言之，麻醉兩組10只動物，并固定動物的左后肢。所有動物接受鎮(zhèn)痛劑。通過皮膚在腓腸肌上切開小口。暴露整個(gè)腓腸肌和腱。將腓腸肌的兩頭小心地從下面完整的肌肉上切除，小心不要使神經(jīng)和血管斷裂。用絲線閉合皮膚，并使動物返回籠中。從麻醉中恢復(fù)后，動物能夠在其籠中沒有問題地直接移動。以50μg/kg的每日劑量，通過強(qiáng)飼法用25-ohd3將動物處理三周，對照組接收運(yùn)載體。在研究結(jié)束時(shí)，采血并通過hitachi912自動分析儀分析血漿葡萄糖濃度。在第二種研究中，在肌萎縮模型中測試25-ohd3或25-ohd3與維生素d3的組合對血糖的影響。簡言之，在研究開始時(shí)將九個(gè)月齡的動物隨機(jī)分入五組，每組10只動物。將動物在特定籠中安置三周長的時(shí)間，并懸吊其尾，這導(dǎo)致去負(fù)荷(unloading)的后肢骨骼肌萎縮。將無后肢去負(fù)荷的另一組置于相同的籠中，從而檢測去負(fù)荷的影響。所有小鼠單獨(dú)居住并且可以隨意自由取用飼料和水。在整個(gè)3周實(shí)驗(yàn)中，通過強(qiáng)飼法每日處理所有動物：1.接受運(yùn)載體(明膠)的無去負(fù)荷對照組2.接受運(yùn)載體(明膠)的去負(fù)荷對照組3.接受維生素d3(50μg/kg/bw)的去負(fù)荷維生素d3組4.接受25-ohd3(50μg/kg/bw)的去負(fù)荷25-ohd3組5.接受維生素d3+25-ohd3(50+50μg/kg/bw)的去負(fù)荷25-ohd3加維生素d3組表1展示了完成研究1后的血漿葡萄糖值。表1血糖(以mmol/l為單位)對照組15.5325-ohd3組14.65表2展示了完成研究2后的血漿葡萄糖值。表2來自表1的結(jié)果表明，用25-ohd3處理導(dǎo)致與未處理對照組相比血漿葡萄糖的降低。表2的結(jié)果表明后肢去負(fù)荷導(dǎo)致血糖水平的提高(無去負(fù)荷對照組與有去負(fù)荷對照組相比)。用維生素d3或25-ohd3處理導(dǎo)致血糖水平的適度降低。然而，用維生素d3和25-ohd3的組合處理導(dǎo)致血漿葡萄糖水平的協(xié)同降低，其幾乎達(dá)到了無去負(fù)荷的對照動物的水平，因此減輕了去負(fù)荷的影響。因此，我們的數(shù)據(jù)展示維生素d3和25-ohd3的組合協(xié)同地降低了提高的血糖水平，并使發(fā)生病理改變的葡萄糖水平正?；?。當(dāng)前第1頁12