本發(fā)明涉及阿霉素靶向藥物的制備，具體涉及一種Fe₃O₄表面雙修飾的阿霉素靶向藥物的制備方法。

背景技術(shù)：

磁性靶向給藥系統(tǒng)（magnetic drug targeting，MDT）可通過外部磁場對磁性納米粒的磁性起到導向作用，提高化療藥物到達病灶部位的效率，增強靶向性。阿霉素靶向藥物是針對腫瘤細胞定向的靶向性藥物，可以降低化療藥物對正常細胞的毒副作用。Fe₃O₄磁性納米粒子表面修飾的化學物質(zhì)包括：檸檬酸、聚乙二醇、殼聚糖、聚苯胺、聚山梨醇酯等有機小分子或高分子化合物，以及金、碳、二氧化硅等無機化合物。其中，聚乙二醇（PEG）已被美國食品和藥品管理局（FDA）批準使用。如公開號為CN104623658的發(fā)明專利申請，就公開了以殼聚糖或殼聚糖和聚乙二醇嫁接修飾Fe₃O₄表面的阿霉素磁靶向藥物制備技術(shù)，該技術(shù)通過Fe₃O₄納米粉體用油酸分散，再與單甘酸阿霉素混合液混合，在超聲條件下，加入殼聚糖水溶液或殼聚糖和聚乙二醇嫁接水溶液進行表面修飾，得到阿霉素磁靶向藥物。雖然該阿霉素磁靶向藥物也有殼聚糖-聚乙二醇Fe₃O₄表面雙修飾，但敏感性不足，因為腫瘤部位的酸性環(huán)境與正常組織之間存在著明顯的差異（正常組織的pH值一般為7.4左右，而腫瘤部位為4.5~6.0），將磁靶向與酸敏感雙重作用機制聯(lián)合，此類雙重靶向機制，F(xiàn)e₃O₄納米顆粒作為磁靶向部位具有磁控導向作用，通過外部磁場定向到達病灶，在腫瘤部位濃集，而腫瘤酸性環(huán)境同時促使腙鍵發(fā)生斷裂，從而釋放出藥物，克服腫瘤的耐藥性，減少化療藥物的毒副作用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種具有良好的超順磁性能和酸敏感的藥物緩釋行為的Fe₃O₄表面雙修飾的阿霉素靶向藥物的制備方法。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種Fe₃O₄表面雙修飾的阿霉素靶向藥物的制備方法，其步驟如下：

a、檸檬酸修飾的四氧化三鐵納米粒子的制備：在三頸瓶中加入5~10mL氨水、2~5mL水合肼和50~70mL 去離子水，升溫至80~100℃反應溫度，加入由1~2g FeCl₂·4H₂O和2~3g FeCl₃·6H₂O溶于20~30mL水中的溶液，攪拌反應至反應液變?yōu)楹谏?，再攪拌反?0~60min，然后在反應液pH 9~10條件下，邊攪拌邊滴加濃度為0.3g /mL的檸檬酸10~20mL，檸檬酸滴加完畢，在85~95℃反應溫度下，攪拌反應1.5~2 h，冷卻至室溫，利用外部強力磁鐵收集黑色沉淀物，黑色沉淀物用丙酮水溶液洗滌，除去未反應完全的檸檬酸，黑色沉淀物在30~50℃下真空干燥12~24h，得到檸檬酸修飾的四氧化三鐵納米粒子；

b、檸檬酸/聚乙二醇雙修飾的四氧化三鐵納米粒子的制備：在超聲作用下，將5~10g上述檸檬酸修飾的四氧化三鐵磁性納米粒子分散于20~40mL水中，再滴加8~15g二環(huán)己基碳二亞胺（DCC）和3~8g4-二甲氨基吡啶（DMAP）偶聯(lián)劑，然后加入5~10mg雙羧基聚乙二醇，再超聲30~60min后轉(zhuǎn)入兩頸瓶中，室溫下攪拌反應24~48h，攪拌反應完畢，加入1~3mL水合肼，然后再攪拌反應24~48h，反應完畢利用外部強力磁鐵收集黑色沉淀物，黑色沉淀物用丙酮水溶液洗滌，除去未反應完全的雙羧基聚乙二醇，黑色沉淀物在30 ~50℃下真空干燥12 ~24h，得到檸檬酸/聚乙二醇雙修飾的四氧化三鐵納米粒子；

c、Fe₃O₄表面雙修飾的阿霉素靶向藥物的制備：將10~30 mg上述檸檬酸/聚乙二醇雙修飾的四氧化三鐵納米粒子溶于5~10mL甲醇溶液中，再邊攪拌邊加入5~10mg阿霉素，室溫下攪拌反應48~96h，反應完畢用磁鐵外部沉降，沉淀物用丙酮水溶液洗滌，然后在30~50℃下真空干燥12 ~24h，得到Fe₃O₄表面雙修飾的阿霉素靶向藥物。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于一種Fe₃O₄表面雙修飾的阿霉素靶向藥物的制備方法，先用FeCl₂·4H₂O、FeCl₃·6H₂O和檸檬酸為原料，在氨水、水合肼和水為反應媒介下，反應和干燥得到檸檬酸修飾的Fe₃O₄納米粒子，然后在偶聯(lián)劑和水合肼作用下與雙羧基聚乙二醇反應和干燥，得到檬酸/聚乙二醇雙修飾的四氧化三鐵納米粒子，然后在甲醇溶液中與阿霉素反應，干燥后得到得到Fe₃O₄表面雙修飾的阿霉素靶向藥物；先用檸檬酸修飾Fe₃O₄可以提高其分散性和水溶性，然后用雙羧基聚乙二醇修飾Fe₃O₄可以使雙羧基聚乙二醇通過表面羧基與檸檬酸羥基成酯連接到Fe₃O₄磁性納米粒子表面，并在水合肼作用下能形成成酰肼，阿霉素可以在酰肼作用下，腙鍵鍵合在檸檬酸/聚乙二醇雙修飾的四氧化三鐵納米粒子中，這樣反應設計合理，可以得到磁靶向和酸敏感雙重作用機制聯(lián)合的Fe₃O₄表面雙修飾的阿霉素靶向藥物，載藥能力高達89 %，具有良好的超順磁性能（飽和磁化率達到68.3 emu/g）和pH敏感的藥物，在給藥中，腙鍵逐漸解鍵，藥物緩慢釋放，大大增加藥物作用部位如細胞質(zhì)和細胞核中的濃度，克服腫瘤的耐藥性，減少化療藥物的毒副作用。因此本發(fā)明是一種具有良好的超順磁性能和酸敏感的藥物緩釋行為的Fe₃O₄表面雙修飾的阿霉素靶向藥物的制備方法。

具體實施方式

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。

實施例1

量取5~10mL 氨水和2~5mL水合肼，50~70mL 去離子水溶解于三頸瓶中，升溫至80~100℃，再稱取1~2g FeCl₂·4H₂O和2~3g FeCl₃·6H₂O，溶于20~30mL水中，加入到三頸瓶中形成反應溶液體系反應，到溶液體系變?yōu)楹谏?0~95℃強力攪拌30~60min，然后在溶液pH在9~10下，邊攪拌邊滴加濃度為0.3g /mL的檸檬酸10~20mL，滴加完畢繼續(xù)攪拌1.5~2 h，冷卻至室溫后，利用外部強力磁鐵收集黑色產(chǎn)物，所得產(chǎn)物用去離子水和丙酮混合液洗滌數(shù)遍，除去未反應完全的檸檬酸，黑色產(chǎn)物30 ~50℃下真空干燥12 ~24h，制得檸檬酸修飾的四氧化三鐵（Fe₃O₄）納米粒子。取5~10g檸檬酸修飾的四氧化三鐵磁性納米粒子超聲分散于20~40mL水中，使得成均勻分散體系，再稱取8~15g DCC和3~8gDMAP偶聯(lián)劑，在超聲作用下緩慢滴加，然后加入5~10mg 雙羧基聚乙二醇（COOH-PEG-COOH），加入完畢超聲30~60 min后轉(zhuǎn)入兩頸瓶中，室溫下攪拌反應24~48h，攪拌反應完畢，加入1~3mL水合肼，然后再攪拌反應24~48h，反應完畢利用外部強力磁鐵收集黑色沉淀物，黑色沉淀物用丙酮水溶液洗滌，除去未反應完全的雙羧基聚乙二醇，黑色沉淀物在30 ~50℃下真空干燥12 ~24h，得到檸檬酸/聚乙二醇雙修飾的四氧化三鐵納米粒子。將10~30 mg上述檸檬酸/聚乙二醇雙修飾的四氧化三鐵納米粒子溶于5~10mL甲醇溶液中，再邊攪拌邊加入5~10mg阿霉素，室溫下攪拌反應48~96h，反應完畢用磁鐵外部沉降，沉淀物用丙酮水溶液洗滌，然后在30~50℃下真空干燥12 ~24h，得到Fe₃O₄表面雙修飾的阿霉素靶向藥物。經(jīng)測定飽和磁化率達到68.3 emu/g，載藥能力高達89 %。

實施例2

精密稱取具有最大載藥率的Fe₃O₄表面雙修飾的阿霉素靶向藥物適量分散于pH=7.4的PBS緩沖溶液中，溶液體積為2~4 mL，置于透析袋中，投于裝有8~10 mL的棕色小瓶中，37 ℃下恒溫震蕩，分別在10 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h取樣1~2mL進行體外釋放考察，同時補充相同體積新鮮釋放介質(zhì)，取上清液測定紫外吸收度值，計算累計釋藥率。結(jié)果為，阿霉素在pH=5的條件下釋放速率高于pH=7.4條件下，分別為78%，27%，具有明顯的pH敏感性，緩釋性能好。