本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種治療彌漫性肺間質(zhì)纖維化陰虛內(nèi)熱證的中藥顆粒(又稱養(yǎng)陰抗纖方，以下同)。

二、

背景技術(shù)：

彌漫性肺間質(zhì)纖維化是由多種原因引起的肺間質(zhì)的炎癥性疾病，病變主要累及肺間質(zhì)，也可累及肺泡上皮細(xì)胞及肺血管。特發(fā)性肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是一種發(fā)生于成人的原因不明的慢性進(jìn)展性纖維化型間質(zhì)性肺炎的特殊類型，也是肺纖維化較為嚴(yán)重的類型，確診后的中位生存期為3－5年。目前國(guó)內(nèi)該病尚無準(zhǔn)確的流行病學(xué)資料。2009年，Tzilas等報(bào)道IPF的病死率男性6.43/10萬/年，女性5.84/10萬/年，并呈上升趨勢(shì)；確診后的平均生存時(shí)間的中位數(shù)是2.8年，60％的患者直接死于該病。2014年資料顯示，意大利大中南區(qū)域的IPF發(fā)病率為7.5－25.6/10萬/年。一項(xiàng)來自美國(guó)國(guó)家老年人醫(yī)療保險(xiǎn)的數(shù)據(jù)顯示，2011年65歲及以上的保險(xiǎn)受益人肺纖維化的發(fā)生率為494.5/10萬，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于2003年的93.7/10萬。肺纖維化患者生活質(zhì)量低下、社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重，IPF患者較同齡非IPF病人年住院率高134％(48.7vs 20.8％)，年總治療費(fèi)用高134％($20,887vs.$8,932)，在美國(guó)，每年用于IPF的醫(yī)療費(fèi)用高達(dá)近20億美元。目前，IPF的藥物治療雖以抗纖維化為目的，但尚無一個(gè)治療方案能改變或逆轉(zhuǎn)IPF的纖維化性病變。目前臨床上主要采用抗炎、免疫抑制、抗凝、抗氧化、抑酸、肺移植等手段進(jìn)行治療，常用藥物如糖皮質(zhì)激素、硫唑嘌呤、環(huán)孢素、干擾素γ、華法林、N-乙酰半胱氨酸以及抑酸藥等，但這些藥物存在潛在的不良反應(yīng)，如細(xì)胞毒性藥物會(huì)造成骨髓毒性、彌漫性肺泡出血等?？梢姡琁PF是危害巨大的重大疑難疾病，具有患病率高、死亡率高、致殘率高、疾病負(fù)擔(dān)沉重等特點(diǎn)，嚴(yán)重危害患者的健康和生活質(zhì)量。在2015年美國(guó)胸科學(xué)會(huì)(ATS)/歐洲呼吸學(xué)會(huì)(ERS)/日本呼吸學(xué)會(huì)(JRS)/拉丁美洲胸科協(xié)會(huì)(ALAT)修訂版的IPF治療臨床實(shí)踐指南中推薦使用吡啡尼酮、尼達(dá)尼布以及抑酸劑治療。尼達(dá)尼布在我國(guó)尚未上市，抑酸治療需要根據(jù)患者的臨床指征用藥，而吡非尼酮的價(jià)格十分昂貴，目前在我國(guó)推廣度較低。因此，亟需加強(qiáng)有效防治該病的臨床基礎(chǔ)研究，以為臨床治療的中藥新藥研發(fā)提供依據(jù)，將具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值和社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。

中醫(yī)學(xué)并無特發(fā)性肺纖維化的病名，根據(jù)該病干咳，氣促的癥狀及其慢性、反復(fù)性發(fā)作的特點(diǎn)，通常都被歸為“肺痿”、“肺痹”、“咳嗽”等范疇。近10余年來，臨床研究文獻(xiàn)系統(tǒng)評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，中醫(yī)治療IPF具有較好的效果，可以顯著改善癥狀體征、延緩病程進(jìn)展、改善肺通氣功能、減少急性加重、提高運(yùn)動(dòng)能力和生活質(zhì)量等。不容忽視的是，目前高質(zhì)量臨床報(bào)道較少而多數(shù)證據(jù)的級(jí)別較低，缺乏針對(duì)IPF特點(diǎn)治療的方法/方藥。近年來，我們提出“正虛絡(luò)痹積損”為IPF主要病機(jī)觀點(diǎn)，總結(jié)了病機(jī)規(guī)律，認(rèn)為肺病及腎，正氣虧虛為IPF病本，常兼有痰瘀，陰虛內(nèi)熱是肺纖維化形成早期的主要特點(diǎn)。據(jù)此病機(jī)理論而制定了中藥復(fù)方--養(yǎng)陰抗纖方，具有養(yǎng)陰清熱、化痰止咳功效，治療IPF早期具有明顯效果。因此，近一步加強(qiáng)IPF早期的中藥治療與研究開發(fā)，對(duì)于提高臨床防治水平和能力具有重要意義。

三、

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述情況，為解決現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的是提供一種治療彌漫性肺間質(zhì)纖維化、中醫(yī)辨證為陰虛內(nèi)熱證的中藥顆粒，可有效解決彌漫性肺間質(zhì)纖維化的早期治療用藥問題。

本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，該中藥顆粒是由重量計(jì)的：由麥冬6-15g、南沙參6-15g、西洋參3-9g、瓜蔞6-15g、浙貝母6-12g、白頭翁6-15g、赤芍6-15g、紫蘇子6-15g和陳皮6-15g制成；

所述的中藥顆粒的制備方法為：將西洋參粉碎成極細(xì)粉(過150目篩)，得西洋參極細(xì)粉Ⅰ，備用；將陳皮加入陳皮重量6倍量的水蒸餾5小時(shí)，收集揮發(fā)油，陳皮藥渣備用，將揮發(fā)油與揮發(fā)油8倍重量的β-環(huán)糊精研磨包合，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉(過80目篩)，得β-環(huán)糊精包合物Ⅱ，備用；將陳皮藥渣與浙貝母、赤芍、紫蘇子合并，加質(zhì)量濃度為70％的乙醇，每次加入乙醇量為陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子總重量的8-12倍，回流提取2次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.20(50℃)的第一浸膏，備用；乙醇回流后的陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子的混合藥渣加入陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子總重量6倍量的水，煎煮1小時(shí)，濾過，得第一濾液，備用；將麥冬、南沙參、瓜蔞、白頭翁混合，加水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，每次加水量為麥冬、南沙參、瓜蔞、白頭翁總重量的8-15倍量，濾過，合并濾液，得第二濾液，合并第一濾液和第二濾液，混勻，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.20(50℃)，得第二浸膏；將第一浸膏與第二浸膏合并，混勻，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉(過80目篩)，得浸膏細(xì)粉Ⅲ，備用；將上述西洋參極細(xì)粉Ⅰ、β-環(huán)糊精包合物Ⅱ與浸膏細(xì)粉Ⅲ合并，加入西洋參極細(xì)粉Ⅰ、β-環(huán)糊精包合物Ⅱ與浸膏細(xì)粉Ⅲ總重量20％-40％的糊精，混合均勻，加入質(zhì)量濃度為70％的乙醇，加入乙醇量為藥粉重量10％-15％，混勻，制粒，干燥，即得。

本發(fā)明原料豐富，制備方法科學(xué)、先進(jìn)，其中藥顆粒養(yǎng)陰清肺、化痰止咳，可有效用于治療彌漫性肺間質(zhì)纖維化陰虛內(nèi)熱證，是中藥上的創(chuàng)新。

四、具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說明。

實(shí)施例1

本發(fā)明在具體實(shí)施中，本發(fā)明中藥顆粒由麥冬6g、南沙參6g、西洋參3g、瓜蔞6g、浙貝母6g、白頭翁6g、赤芍6g、紫蘇子6g和陳皮6g制成；其中，將西洋參粉碎成極細(xì)粉(過150目篩)，得西洋參極細(xì)粉Ⅰ，備用；將陳皮加入陳皮重量6倍量的水蒸餾5小時(shí)，收集揮發(fā)油，陳皮藥渣備用，將揮發(fā)油與揮發(fā)油8倍重量的β-環(huán)糊精研磨包合，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉(過80目篩)，得β-環(huán)糊精包合物Ⅱ，備用；將陳皮藥渣與浙貝母、赤芍、紫蘇子合并，加質(zhì)量濃度為70％的乙醇，每次加入乙醇量為陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子總重量的8倍，回流提取2次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.15(50℃)的第一浸膏，備用；乙醇回流后的陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子的混合藥渣加入陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子總重量6倍量的水，煎煮1小時(shí)，濾過，得第一濾液，備用；將麥冬、南沙參、瓜蔞、白頭翁混合，加水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，每次加水量為麥冬、南沙參、瓜蔞、白頭翁總重量的8倍量，濾過，合并濾液，得第二濾液，合并第一濾液和第二濾液，混勻，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15(50℃)，得第二浸膏；將第一浸膏與第二浸膏合并，混勻，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉(過80目篩)，得浸膏細(xì)粉Ⅲ，備用；將上述西洋參極細(xì)粉Ⅰ、β-環(huán)糊精包合物Ⅱ與浸膏細(xì)粉Ⅲ合并，加入西洋參極細(xì)粉Ⅰ、β-環(huán)糊精包合物Ⅱ與浸膏細(xì)粉Ⅲ總重量20％的糊精，混合均勻，加入質(zhì)量濃度為70％的乙醇，加入乙醇量為藥粉重量10％，混勻，制粒，干燥，即得。

實(shí)施例2

本發(fā)明在具體實(shí)施中，本發(fā)明中藥顆粒由麥冬15g、南沙參15g、西洋參9g、瓜蔞15g、浙貝母12g、白頭翁15g、赤芍15g、紫蘇子15g和陳皮15g制成；其中，將西洋參粉碎成極細(xì)粉(過150目篩)，得西洋參極細(xì)粉Ⅰ，備用；將陳皮加入陳皮重量6倍量的水蒸餾5小時(shí)，收集揮發(fā)油，陳皮藥渣備用，將揮發(fā)油與揮發(fā)油8倍重量的β-環(huán)糊精研磨包合，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉(過80目篩)，得β-環(huán)糊精包合物Ⅱ，備用；將陳皮藥渣與浙貝母、赤芍、紫蘇子合并，加質(zhì)量濃度為70％的乙醇，每次加入乙醇量為陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子總重量的12倍，回流提取2次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.20(50℃)的第一浸膏，備用；乙醇回流后的陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子的混合藥渣加入陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子總重量6倍量的水，煎煮1小時(shí)，濾過，得第一濾液，備用；將麥冬、南沙參、瓜蔞、白頭翁混合，加水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，每次加水量為麥冬、南沙參、瓜蔞、白頭翁總重量的15倍量，濾過，合并濾液，得第二濾液，合并第一濾液和第二濾液，混勻，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20(50℃)，得第二浸膏；將第一浸膏與第二浸膏合并，混勻，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉(過80目篩)，得浸膏細(xì)粉Ⅲ，備用；將上述西洋參極細(xì)粉Ⅰ、β-環(huán)糊精包合物Ⅱ與浸膏細(xì)粉Ⅲ合并，加入西洋參極細(xì)粉Ⅰ、β-環(huán)糊精包合物Ⅱ與浸膏細(xì)粉Ⅲ總重量40％的糊精，混合均勻，加入質(zhì)量濃度為70％的乙醇，加入乙醇量為藥粉重量15％，混勻，制粒，干燥，即得。

實(shí)施例3

本發(fā)明在具體實(shí)施中，本發(fā)明中藥顆粒由麥冬10g、南沙參10g、西洋參6g、瓜蔞11g、浙貝母9g、白頭翁11g、赤芍10g、紫蘇子10g和陳皮11g制成；其中，將西洋參粉碎成極細(xì)粉(過150目篩)，得西洋參極細(xì)粉Ⅰ，備用；將陳皮加入陳皮重量6倍量的水蒸餾5小時(shí)，收集揮發(fā)油，陳皮藥渣備用，將揮發(fā)油與揮發(fā)油8倍重量的β-環(huán)糊精研磨包合，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉(過80目篩)，得β-環(huán)糊精包合物Ⅱ，備用；將陳皮藥渣與浙貝母、赤芍、紫蘇子合并，加質(zhì)量濃度為70％的乙醇，每次加入乙醇量為陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子總重量的10倍，回流提取2次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.17(50℃)的第一浸膏，備用；乙醇回流后的陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子的混合藥渣加入陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子總重量6倍量的水，煎煮1小時(shí)，濾過，得第一濾液，備用；將麥冬、南沙參、瓜蔞、白頭翁混合，加水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，每次加水量為麥冬、南沙參、瓜蔞、白頭翁總重量的12倍量，濾過，合并濾液，得第二濾液，合并第一濾液和第二濾液，混勻，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.18(50℃)，得第二浸膏；將第一浸膏與第二浸膏合并，混勻，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉(過80目篩)，得浸膏細(xì)粉Ⅲ，備用；將上述西洋參極細(xì)粉Ⅰ、β-環(huán)糊精包合物Ⅱ與浸膏細(xì)粉Ⅲ合并，加入西洋參極細(xì)粉Ⅰ、β-環(huán)糊精包合物Ⅱ與浸膏細(xì)粉Ⅲ總重量30％的糊精，混合均勻，加入質(zhì)量濃度為70％的乙醇，加入乙醇量為藥粉重量13％，混勻，制粒，干燥，即得。

實(shí)施例4

本發(fā)明在具體實(shí)施中，本發(fā)明中藥顆粒由麥冬6g、南沙參15g、西洋參4g、瓜蔞8g、浙貝母11g、白頭翁10g、赤芍8g、紫蘇子15g和陳皮8g制成；其中，將西洋參粉碎成極細(xì)粉(過150目篩)，得西洋參極細(xì)粉Ⅰ，備用；將陳皮加入陳皮重量6倍量的水蒸餾5小時(shí)，收集揮發(fā)油，陳皮藥渣備用，將揮發(fā)油與揮發(fā)油8倍重量的β-環(huán)糊精研磨包合，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉(過80目篩)，得β-環(huán)糊精包合物Ⅱ，備用；將陳皮藥渣與浙貝母、赤芍、紫蘇子合并，加質(zhì)量濃度為70％的乙醇，每次加入乙醇量為陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子總重量的8倍，回流提取2次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.20(50℃)的第一浸膏，備用；乙醇回流后的陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子的混合藥渣加入陳皮、浙貝母、赤芍、紫蘇子總重量6倍量的水，煎煮1小時(shí)，濾過，得第一濾液，備用；將麥冬、南沙參、瓜蔞、白頭翁混合，加水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，每次加水量為麥冬、南沙參、瓜蔞、白頭翁總重量的10倍量，濾過，合并濾液，得第二濾液，合并第一濾液和第二濾液，混勻，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.17(50℃)，得第二浸膏；將第一浸膏與第二浸膏合并，混勻，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉(過80目篩)，得浸膏細(xì)粉Ⅲ，備用；將上述西洋參極細(xì)粉Ⅰ、β-環(huán)糊精包合物Ⅱ與浸膏細(xì)粉Ⅲ合并，加入西洋參極細(xì)粉Ⅰ、β-環(huán)糊精包合物Ⅱ與浸膏細(xì)粉Ⅲ總重量27％的糊精，混合均勻，加入質(zhì)量濃度為70％的乙醇，加入乙醇量為藥粉重量14％，混勻，制粒，干燥，即得。

根據(jù)中醫(yī)藥學(xué)原理，正虛絡(luò)痹積損為肺纖維化主要病機(jī)。以肺之虛損為本，肺絡(luò)痹阻、痰瘀互結(jié)為標(biāo)，其中肺之虛損有陰虛內(nèi)熱、氣虛及陽之分。肺纖維化早期以陰虛內(nèi)熱主要病機(jī)，常兼痰濁，以陰虛內(nèi)熱為本為主，治法當(dāng)宜養(yǎng)陰清肺、化痰止咳。方中麥冬為君，甘微苦寒，養(yǎng)陰潤(rùn)肺而清虛熱除煩。南沙參，甘微寒，養(yǎng)陰清肺生津；陰虛內(nèi)熱常有傷氣之虞，而成氣陰兩虛，使陰虛難復(fù)，故用西洋參養(yǎng)陰益氣、清熱生津，有如《本草從新》記載：“補(bǔ)肺降火，上津液，除煩熱。虛而有火者相宜”。南沙參、西洋參配伍為臣，輔麥冬以養(yǎng)陰潤(rùn)肺而清虛熱。肺之陰虛內(nèi)熱，煉津成痰，而生痰阻肺，復(fù)以損傷陰津，常呈虛實(shí)間雜，故用瓜蔞清肺化痰、寬胸而通腸，并取肺與大腸之表里兼顧之意；浙貝母清肺化痰散結(jié)，二味配伍清肺化痰以祛邪實(shí)也為臣。陰虛內(nèi)熱生痰，日久不復(fù)，肺絡(luò)痹阻，常有熱毒、瘀血之變，故佐用白頭翁、赤芍，白頭翁以清熱解毒并增強(qiáng)瓜蔞、浙貝母清肺化痰之力，赤芍活血化瘀以防治瘀血之變。紫蘇子止咳化痰平喘也為佐，不僅針對(duì)咳喘而設(shè)，又助瓜蔞、浙貝母化痰功效。陳皮為使，理氣調(diào)中、化痰止咳，調(diào)理脾胃以防諸藥之滋補(bǔ)、寒涼而損害中州，正如《本草綱目》中載：“其治百病，總是取其理氣燥濕之功。同補(bǔ)藥則補(bǔ)，同瀉藥則瀉，同升藥則升，同降藥則降。脾乃元?dú)庵福文藬z氣之籥，故橘皮為二經(jīng)氣分之藥，但隨所配而補(bǔ)瀉升降也”。

本發(fā)明治療肺纖維化的中藥顆粒，具有養(yǎng)陰清肺、化痰止咳功效，有效用于治療肺纖維化初期階段。本發(fā)明中藥顆粒(養(yǎng)陰抗纖方)治療彌漫性肺間質(zhì)纖維化大鼠的療效有關(guān)研究資料如下：

1.材料與方法

1.1動(dòng)物：SPF級(jí)SD大鼠40只，雌雄各半，2月齡，體重200±20g(豫XK2005-0001，河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。

1.2藥物：注射用鹽酸博來霉素，15mg/瓶，(日本化藥株式會(huì)社，進(jìn)口藥品注冊(cè)證號(hào)：H20090885)。醋酸潑尼松片(5mg/片)由浙江仙琚制藥股份有限公司提供。養(yǎng)陰抗纖方由河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥物分析實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3試劑與儀器：非束縛小動(dòng)物肺功能測(cè)量?jī)x(BUXCO，美國(guó))；Hema-screen 18型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(Hema-screen，意大利)；PM-10AD光學(xué)顯微鏡及照相系統(tǒng)(Olympus，Japan)；Plus 6.0專業(yè)圖像分析系統(tǒng)(Media Cybernetics,Inc.，USA)等。

1.4模型制備：大鼠購(gòu)回后適應(yīng)性飼養(yǎng)7天。飼養(yǎng)條件為：室溫(25±l)℃，相對(duì)濕度(50±10)％，換氣量10～15次/h，氨濃度≤14mg/m³，噪聲≤60db。滅菌飼料喂養(yǎng)，自由飲用滅菌水，定期檢查凈化操作系統(tǒng)，保持環(huán)境安靜。大鼠腹腔注射10％水合氯醛(3.0ml/kg)體質(zhì)量麻醉后，行氣管插管，注射BLM溶液(30mg/ml)100μl，假手術(shù)組注射等體積生理鹽水，并繼續(xù)向氣管內(nèi)快速推注0.3～0.5ml空氣，立即將大鼠直立旋轉(zhuǎn)，以使藥液在雙肺內(nèi)分布均勻。

1.5分組與給藥：大鼠40只隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、養(yǎng)陰抗纖組(本發(fā)明)和醋酸潑尼松組，每組10只。自第1天(d1)起，各組分別給予生理鹽水(2ml/只)、生理鹽水(2ml/只)、醋酸潑尼松(5mg/kg/d)和養(yǎng)陰抗纖方(8.9g/kg/d)灌胃，至d56停藥。灌胃時(shí)間為8～9時(shí)和17～18時(shí)，每周稱量體重以調(diào)整用藥量。給藥共12周，第20周取材。

1.7取材與處理

1.7.1一般情況：觀察大鼠的精神狀況、活動(dòng)、皮毛、分泌物、進(jìn)食進(jìn)水量變化、大小便，以及咳嗽、氣喘、體重等癥狀體征的變化。

1.7.2肺功能：采用PFT測(cè)量系統(tǒng)(FinePointe^TM series PFT system，BUXCO，USA)檢測(cè)FVC。

1.7.3外周血常規(guī)分析：大鼠尾靜脈取血，檢測(cè)血常規(guī)中白細(xì)胞(WBC)、中性粒細(xì)胞(NEU)、淋巴細(xì)胞(LYM)、單核細(xì)胞(MON)計(jì)數(shù)，以10⁹/L表示。

1.7.4肺系數(shù)：取材時(shí)，將肺完全剝離，稱取肺組織濕重。肺系數(shù)＝肺組織濕重/體重。

1.7.5羥脯氨酸含量檢測(cè)：按照試劑盒說明書操作。將肺組織稱重，加入堿水解液，95℃水浴20分鐘，冷卻后，依次加入指示劑、調(diào)PH甲液、調(diào)PH乙液，待PH調(diào)至6.0～6.8時(shí)，加入雙蒸水定容至10ml，取3ml水解液加入到含有20～30mg活性炭的試管中，混勻，3500RPM，離心10min，取上清1ml，加入一號(hào)試劑，混勻，靜置10min，加入二號(hào)試劑，混勻，靜置5min，加入三號(hào)試劑，混勻，60℃水浴加熱15min，冷卻后，3500RPM，離心10min，取上清液用酶標(biāo)儀或紫外分光光度計(jì)測(cè)OD值。

1.7.4肺組織病理：左肺用10％甲醛固定72h，以肺門為中心，30°、90°、120°各切取3mm厚組織，石蠟包埋，4μm切片，行HE染色。采用PM-10AD光學(xué)顯微鏡，觀察氣管、支氣管、肺泡病理改變，照相，并對(duì)。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間比較采用單因素方差分析的最小顯著差法，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示。顯著性水準(zhǔn)取α＝0.05。

2.結(jié)果

2.1一般情況：模型組大鼠出現(xiàn)皮毛無光澤，形體消瘦，精神倦怠，活動(dòng)減少，進(jìn)食量、飲水量減退，大便溏薄，墊料潮濕等情況。養(yǎng)陰抗纖組和醋酸潑尼松組大鼠上述情況均有不同程度的改善，其中以養(yǎng)陰抗纖組尤為明顯。

2.2肺功能：第7d時(shí)，模型組FVC較對(duì)照組明顯降低(P<0.01)，養(yǎng)陰抗纖組較模型組明顯升高(P<0.05)，醋酸潑尼松組升高不明顯(P>0.05)。第14、28d模型組FVC較對(duì)照組明顯降低(P<0.01)，養(yǎng)陰抗纖組較模型組明顯升高(P<0.05或P<0.01)，醋酸潑尼松組亦明顯升高(P<0.01)。第42、70d模型組FVC較對(duì)照組明顯降低(P<0.01)，第42d醋酸潑尼松組較模型組明顯升高(P<0.01)，第70d養(yǎng)陰抗纖組明顯升高(P<0.05)。養(yǎng)陰抗纖組和醋酸潑尼松組間無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表1。

表1各組大鼠FVC變化(ml,)

注：與對(duì)照組比較，^*P﹤0.05，^**P﹤0.01，與模型組比較，^#P﹤0.05，^##P﹤0.01，與醋酸潑尼松組比較，^△P﹤0.05，^△△P﹤0.01

2.3外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞計(jì)數(shù)：與對(duì)照組比較，模型組第7和14天的外周血中白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯升高(P<0.05或P<0.01)，第28天白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞顯著升高(P<0.01)，第42天淋巴細(xì)胞顯著升高(P<0.01)，第72天白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，養(yǎng)陰抗纖組第7天白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞明顯降低(P<0.05或P<0.01)，第14天白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞顯著降低(P<0.05或P<0.01)、單核粒細(xì)胞升高(P<0.01)，第28天中性粒細(xì)胞顯著降低(P<0.01)，第42天淋巴細(xì)胞顯著降低(P<0.05)、單核粒細(xì)胞升高(P<0.05)，第70天淋巴細(xì)胞顯著降低(P<0.01)。與模型組比較，醋酸潑尼松組第28、42天白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞顯著下降(P<0.05或P<0.01)，第7、14、42天淋巴細(xì)胞降低(P<0.01)，第14天單核細(xì)胞升高(P<0.01)。與醋酸潑尼松組比較，養(yǎng)陰抗纖組第7天白細(xì)胞顯著降低(P<0.05)，第14天白細(xì)胞和單核細(xì)胞降低(P<0.05或P<0.01)，第42天白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞均不同程度地升高(P<0.05或P<0.01)。見表2～5。

表2各組大鼠外周血白細(xì)胞變化(10⁹/L,)

注：與對(duì)照組比較，^*P﹤0.05，^**P﹤0.01，與模型組比較，^#P﹤0.05，^##P﹤0.01，與醋酸潑尼松組比較，^△P﹤0.05，^△△P﹤0.01

表3各組大鼠外周血中性粒細(xì)胞變化(10⁹/L,)

注：與對(duì)照組比較，^*P﹤0.05，^**P﹤0.01，與模型組比較，^#P﹤0.05，^##P﹤0.01，與醋酸潑尼松組比較，^△P﹤0.05，^△△P﹤0.01

表4各組大鼠外周血淋巴粒細(xì)胞變化(10⁹/L,)

注：與對(duì)照組比較，^*P﹤0.05，^**P﹤0.01，與模型組比較，^#P﹤0.05，^##P﹤0.01，與醋酸潑尼松組比較，^△P﹤0.05，^△△P﹤0.01

表5各組大鼠外周血單核粒細(xì)胞變化(10⁹/L,)

注：與對(duì)照組比較，^*P﹤0.05，^**P﹤0.01，與模型組比較，^#P﹤0.05，^##P﹤0.01，與醋酸潑尼松組比較，^△P﹤0.05，^△△P﹤0.01

2.4肺系數(shù)：第7d時(shí)，模型組肺系數(shù)較對(duì)照組明顯升高(P<0.01)。第14d模型組肺系數(shù)較對(duì)照組明顯升高(P<0.01)，養(yǎng)陰抗纖組和醋酸潑尼松組均較模型組明顯降低(P<0.01)，以醋酸潑尼松組降低明顯(P<0.01)。第28、42、70d模型組肺系數(shù)較對(duì)照組明顯升高(P<0.01)，第28d時(shí)醋酸潑尼松組明顯降低(P<0.05)。養(yǎng)陰抗纖組和醋酸潑尼松組間無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表6。

表6各組大鼠肺系數(shù)變化(mg/g)

注：與對(duì)照組比較，^*P﹤0.05，^**P﹤0.01，與模型組比較，^#P﹤0.05，^##P﹤0.01，與醋酸潑尼松組比較，^△P﹤0.05，^△△P﹤0.01

2.5肺HYP含量：第7、14d時(shí)，模型組HYP較對(duì)照組無明顯變化(P>0.05)。第28d模型組HYP較對(duì)照組明顯升高(P<0.01)，養(yǎng)陰抗纖組較模型組明顯降低(P<0.05)，醋酸潑尼松組亦明顯升高(P<0.01)。第42、70d模型組較對(duì)照組明顯升高(P<0.01)，第42d養(yǎng)陰抗纖組較模型組明顯降低(P<0.01)，第70d醋酸潑尼松組明顯降低(P<0.05)。養(yǎng)陰抗纖組和醋酸潑尼松組間無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表7。

表7各組大鼠HYP含量變化(ug/mg)

注：與對(duì)照組比較，^*P﹤0.05，^**P﹤0.01，與模型組比較，^#P﹤0.05，^##P﹤0.01

2.6肺臟病理：對(duì)照組肺臟組織大致正常(見圖1)。第7d起，模型組大鼠可見肺泡壁水腫、增厚并有淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔內(nèi)含有多量單核細(xì)胞和脫落的肺泡上皮細(xì)胞，及主要為Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞積聚和透明膜形成(見圖2～6)。第28d起，可見肺泡腔內(nèi)和肺泡間隔不同程度的纖維化(見圖4～6)。隨著時(shí)間的增加，養(yǎng)陰抗纖組、醋酸潑尼松組肺組織上述病理改變均不同程度減輕(見圖7～16)。

第7、14、28、42和70d，模型組肺組織病理評(píng)分較對(duì)照組均明顯增高(P<0.01)。第7、14、28d時(shí)，養(yǎng)陰抗纖組肺組織病理評(píng)分較模型組顯著降低(P<0.05)，第14、28和42d，醋酸潑尼松組肺組織病理評(píng)分較模型組顯著降低(P<0.05或P<0.01)。養(yǎng)陰抗纖組和醋酸潑尼松組間無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表8。

表8各組大鼠肺組織病理評(píng)分

注：與對(duì)照組比較，^*P﹤0.05，^**P﹤0.01，與模型組比較，^#P﹤0.05，^##P﹤0.01，與醋酸潑尼松組比較，^△P﹤0.05，^△△P﹤0.01

3結(jié)論

正虛絡(luò)痹積損為肺纖維化主要病機(jī)。以肺之虛損為本，肺絡(luò)痹阻、痰瘀互結(jié)為標(biāo)，其中肺之虛損有陰虛內(nèi)熱、氣虛及陽之分。肺纖維化早期以陰虛內(nèi)熱主要病機(jī)，常兼痰濁，以陰虛內(nèi)熱為本為主，治法當(dāng)宜養(yǎng)陰清肺、化痰止咳。李建生教授據(jù)此制定了養(yǎng)陰抗纖方，課題組前期臨床試驗(yàn)表明，該方能夠改善肺纖維化患者臨床癥狀，減緩肺功能下降，提高運(yùn)動(dòng)能力和生活質(zhì)量等，減少急性加重次數(shù)。

大部分肺纖維化患者均存在不同程度的營(yíng)養(yǎng)不良，伴有惡病質(zhì)者情況尤為突出，與氣道和全身炎癥反應(yīng)、肺功能等狀況密切相關(guān)；改善患者營(yíng)養(yǎng)狀況可改善其肺功能，提高生活質(zhì)量。本組資料表明，肺纖維化大鼠多表現(xiàn)為精神倦怠，皮毛無光澤，形體消瘦，活動(dòng)減少，進(jìn)食進(jìn)水量減少，大便溏薄，小便增多等類似肺陰虛內(nèi)熱的證候。養(yǎng)陰抗纖方可以在一定程度上改善上述癥狀、體征，增加體重，改善營(yíng)養(yǎng)狀況。

肺纖維化肺功能改變以肺通氣和彌散功能下降為主。但由于彌散功能檢測(cè)的困難，本研究?jī)H檢測(cè)了肺通氣功能。本研究采用PFT系統(tǒng)評(píng)估大鼠的肺功能，發(fā)現(xiàn)肺纖維化大鼠肺通氣功能較正常大鼠顯著降低，養(yǎng)陰抗纖方可顯著改善肺通氣功能，且療效與醋酸潑尼松無明顯差異。

外周血細(xì)胞的變化是反應(yīng)機(jī)體炎癥水平的一個(gè)重要指標(biāo)。本組資料表明，博來霉素干預(yù)可使外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)量明顯升高，養(yǎng)陰抗纖方和醋酸潑尼松均可在一定程度上降低上述細(xì)胞數(shù)目，提示可不同程度地降低炎癥水平，且養(yǎng)陰抗纖方早期抗炎效應(yīng)顯著。

肺系數(shù)是反應(yīng)肺組織水腫的一個(gè)敏感指標(biāo)。急性炎癥期肺系數(shù)會(huì)明顯增大。本研究表明，肺纖維化大鼠肺系數(shù)明顯升高，養(yǎng)陰抗纖方和醋酸潑尼松均可不同程度地降低肺系數(shù)，且隨著治療時(shí)間的增長(zhǎng)而不斷降低，但兩者無明顯差異。

肺HYP含量是肺纖維化一個(gè)特異性指標(biāo)。本組資料表明，第7d時(shí)，肺纖維化大鼠肺組織HYP含量無明顯變化，第14d起有升高趨勢(shì)，并在隨后的14、28、25d(即第28、42、70d)不斷升高。醋酸潑尼松僅在第28d顯示顯著性降低HYP的作用。養(yǎng)陰抗纖方于第28～70d起可顯著降低肺組織HYP含量，作用較強(qiáng)而持續(xù)，療效優(yōu)于醋酸潑尼松。

肺泡炎癥和纖維化等是肺纖維化的主要病理表現(xiàn)。本組資料顯示，肺纖維化大鼠表現(xiàn)出肺泡壁水腫、增厚并有淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔內(nèi)含有多量單核細(xì)胞和脫落的肺泡上皮細(xì)胞，以及肺泡腔內(nèi)和肺泡間隔不同程度的纖維化。養(yǎng)陰抗纖方和醋酸潑尼松均可明顯改善上述病理變化，其中養(yǎng)陰抗纖方減輕肺組織炎癥細(xì)胞滲出、改善肺組織纖維化方面優(yōu)于醋酸潑尼松，可明顯減輕肺部炎癥損傷和肺纖維化的發(fā)生。

綜上所述，養(yǎng)陰抗纖方對(duì)肺纖維化早期具有良好的療效，表現(xiàn)為改善肺功能，減輕肺組織損傷，療效優(yōu)于醋酸潑尼松，有效用于制備治療彌漫性肺間質(zhì)纖維化陰虛內(nèi)熱證的藥物，是治療彌漫性肺間質(zhì)纖維化陰虛內(nèi)熱證藥物上的創(chuàng)新，具有較高的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

五、附圖說明

圖1為本發(fā)明對(duì)照組大鼠肺組織病理照片(100×)。

圖2為本發(fā)明模型組大鼠肺組織病理照片(第7天)(40×)。

圖3為本發(fā)明模型組大鼠肺組織病理照片(第14天)(40×)。

圖4為本發(fā)明模型組大鼠肺組織病理照片(第28天)(40×)。

圖5為本發(fā)明模型組大鼠肺組織病理照片(第42天)(40×)。

圖6為本發(fā)明模型組大鼠肺組織病理照片(第70天)(40×)。

圖7為本發(fā)明養(yǎng)陰抗纖組大鼠肺組織病理照片(第7天)(40×)。

圖8為本發(fā)明養(yǎng)陰抗纖組大鼠肺組織病理照片(第14天)(40×)。

圖9為本發(fā)明養(yǎng)陰抗纖組大鼠肺組織病理照片(第28天)(40×)。

圖10為本發(fā)明養(yǎng)陰抗纖組大鼠肺組織病理照片(第42天)(40×)。

圖11為本發(fā)明養(yǎng)陰抗纖組大鼠肺組織病理照片(第70天)(40×)。

圖12為本發(fā)明醋酸潑尼松組大鼠肺組織病理照片(第7天)(40×)。

圖13為本發(fā)明醋酸潑尼松組大鼠肺組織病理照片(第14天)(40×)。

圖14為本發(fā)明醋酸潑尼松組大鼠肺組織病理照片(第28天)(40×)。

圖15為本發(fā)明醋酸潑尼松組大鼠肺組織病理照片(第42天)(40×)。

圖16為本發(fā)明醋酸潑尼松組大鼠肺組織病理照片(第70天)(40×)。