本申請是申請日為2009年2月25日的題為“用于防止和治療急性腎損傷的方法”的中國專利申請no.200980106215.9的分案申請。相關(guān)申請的交叉引用本申請要求于2008年2月26日提交的美國臨時申請?zhí)?1/031,585的優(yōu)先權(quán)益，其全文通過引用將結(jié)合在此。本發(fā)明涉及一種用于保護(hù)腎臟免于腎損傷的方法。
背景技術(shù)：
：急性腎損傷(ari)，也被稱為急性腎衰竭(arf)或急性腎臟損傷(aki)，是一種嚴(yán)重的急性腎臟醫(yī)學(xué)病況。ari的特征是腎小球?yàn)V過率、尿產(chǎn)量的下降或這兩者均下降。ari伴隨著一種炎性應(yīng)答，這種炎性應(yīng)答若未加抑制可以導(dǎo)致腎纖維化和慢性腎衰竭。ari通常存在數(shù)小時或數(shù)天的期間并且是潛在性可逆的。ari在住院患者中是一種常見并發(fā)癥，并且它的發(fā)生率在過去15年中已經(jīng)顯著增長。一種特殊類型的ari，對比物誘導(dǎo)的(contrast-induced)腎病，是由一些放射性對比劑(radiocontrastagent)的毒性效應(yīng)所引起的。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種用于在有需要的受試者體內(nèi)保護(hù)腎臟免于急性腎損傷的方法。該方法包括給予該受試者有效量的一種芳香族陽離子肽。這種芳香族陽離子肽具有：(a)至少一個凈正電荷；(b)最少三個氨基酸；(c)最多約二十個氨基酸；(d)在凈正電荷的最少數(shù)目(pm)與氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間的一種關(guān)系，其中3pm是小于或等于r+1的最大數(shù)目；以及(e)在芳基基團(tuán)的最小數(shù)目(a)與凈正電荷的總數(shù)(pt)之間的一種關(guān)系，其中3a是小于或等于pt+1的最大數(shù)目，除外當(dāng)a是1時pt也可以是1。在一個實(shí)施方案中，肽是在使用一種放射性對比劑之前或同時給予至受試者，以防止或改善對比物誘導(dǎo)的腎病的發(fā)病率。在一個實(shí)施方案中，這種肽是選自下組，其組成為：phe-d-arg-phe-lys-nh2(ss-20)或d-arg-2'6'dmt-lys-phe-nh2(ss-31)。在一個實(shí)施方案中，這種急性腎損傷與受試者暴露于一種腎毒性劑相關(guān)聯(lián)。在一個實(shí)施方案中，在受試者暴露于該腎毒性劑之前或同時給予這種肽。在一個實(shí)施方案中，該腎毒性劑是一種放射性對比染料(radiocontrastdye)，例如：醋碘苯酸鹽；泛影酸鹽；碘達(dá)胺；碘格利酸鹽(ioglicate)；碘酞酸鹽(iothalamate)；碘羥拉酸鹽(ioxithalamate)；甲泛影酸鹽；甲泛葡胺；碘海醇；碘帕醇；碘噴托；碘普胺；以及碘佛醇。在一個實(shí)施方案中，該腎毒性劑是一種藥物或化學(xué)品。在說明性的實(shí)施方案中，這種藥物或化學(xué)品是選自下組的化合物中的一種或多種，該組的組成為：順鉑；慶大霉素；頭孢噻啶；環(huán)孢霉素；兩性霉素；四氯化碳；三氯乙烯；以及二氯代乙炔。在另一方面，本發(fā)明提供了一種在有需要的受試者體內(nèi)治療急性或慢性腎損傷的方法。該方法包括對該受試者給予有效量的一種芳香族陽離子肽。這些芳香族陽離子肽具有：(a)至少一個凈正電荷；(b)最少三個氨基酸；(c)最多約二十個氨基酸；(d)在凈正電荷的最少數(shù)目(pm)與氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間的一種關(guān)系，其中3pm是小于或等于r+1的最大數(shù)目；以及(e)在芳基基團(tuán)的最小數(shù)目(a)與凈正電荷的總數(shù)(pt)之間的一種關(guān)系，其中3a是小于或等于pt+1的最大數(shù)目，除外當(dāng)a是1時pt也可以是1。在一個實(shí)施方案中，在該受試者暴露于一種腎毒性劑之后給予這種肽。在一個實(shí)施方案中，這種肽是選自下組，其組成為：phe-d-arg-phe-lys-nh2(ss-20)和d-arg-2'6'dmt-lys-phe-nh2(ss-31)。在一個實(shí)施方案中，這種肽是由化學(xué)式i限定的：其中r1和r2是各自獨(dú)立地選自：(i)氫；(ii)直鏈的或支鏈的c1-c6烷基；(iii)其中m＝1-3；(iv)(v)r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、r11以及r12是各自獨(dú)立地選自：(i)氫；(ii)直鏈的或支鏈的c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷氨基；(vi)c1-c4二烷氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”涵蓋了氯、氟、溴、以及碘；并且n是從1至5的整數(shù)。在一個具體的實(shí)施方案中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、r11以及r12全部是氫；并且n是4。在另一個實(shí)施方案中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、以及r11全部是氫；r8和r12是甲基；r10是羥基；并且n是4。在一個實(shí)施方案中，這種肽是由化學(xué)式ii限定的：其中r1和r2是各自獨(dú)立地選自：(i)氫；(ii)直鏈的或支鏈的c1-c6烷基；(iii)其中m＝1-3；(iv)(v)r3和r4是各自獨(dú)立地選自：(i)氫；(ii)直鏈的或支鏈的c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷氨基；(vi)c1-c4二烷氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”涵蓋了氯、氟、溴、以及碘；r5、r6、r7、r8、以及r9各自是獨(dú)立地選自：(i)氫；(ii)直鏈的或支鏈的c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷氨基；(vi)c1-c4二烷氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”涵蓋了氯、氟、溴、以及碘；并且n是從1至5的整數(shù)。在一個具體的實(shí)施方案中，r1和r2是氫；r3和r4是甲基；r5、r6、r7、r8以及r9全部是氫；并且n是4。在一方面，本披露提供了一種用于在有需要的受試者體內(nèi)保護(hù)腎臟免于慢性腎損傷的方法，該方法包括對該受試者給予有效量的一種肽，這種肽選自下組，其組成為：phe-d-arg-phe-lys-nh2(ss-20)和d-arg-2'6'dmt-lys-phe-nh2(ss-31)。在一個實(shí)施方案中，這種慢性腎損傷與給予或暴露于一種腎毒性試劑相關(guān)聯(lián)，例如一種能夠引起慢性腎損傷的藥物或化學(xué)品。在一個具體的實(shí)施方案中，該藥物或化學(xué)品是四氯化碳。在一些實(shí)施方案中，這些肽對于防止和/或治療由局部缺血、藥物(對乙酰氨基酚、酒精)、病毒、肥胖癥(非酒精性脂肪性肝炎)、以及阻塞(膽管阻塞、腫瘤)所引起的急性肝損傷是有用的。在一些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽給予受試者以防止或治療急性肝衰竭(alf)。附圖說明圖1(a-d)顯示了使用tunel對凋亡細(xì)胞進(jìn)行染色的腎切片的顯微圖像。圖2顯示了用h&e(圖2a-2d)以及pas(圖2e-2h)進(jìn)行染色的腎切片的顯微圖像。圖3是一個圖示，顯示了用ss-20或ss-31進(jìn)行治療顯著地改進(jìn)了由于局部缺血45分鐘以及再灌注24小時所引起的組織病理學(xué)的得分。圖4a和4b呈現(xiàn)了以下圖示，這些圖示顯示用ss-20或ss-31進(jìn)行治療顯著地增加了在再灌注之后atp產(chǎn)生的速率。圖4a顯示在15分鐘局部缺血結(jié)束時在腎組織中的atp含量。圖4b顯示在局部缺血45分鐘之后的1小時再灌注以后在腎組織中的atp含量。圖5是一個圖示，顯示用ss-20或ss-31進(jìn)行預(yù)處理在局部缺血45分鐘之后顯著地改進(jìn)了腎線粒體呼吸。圖6a-6d呈現(xiàn)了以下數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)顯示了在14天單側(cè)輸尿管梗阻(uuo)模型中ss-1減少髓質(zhì)的纖維化。圖6a-6c對應(yīng)地顯示了在對側(cè)未梗阻的腎臟(ck)、梗阻的腎臟(ok)、或ss-31處理的腎臟的腎小管、腎小球、或間質(zhì)組織中炎癥或纖維化。圖6d是一個圖示，顯示了在ck、ok、以及ss-31處理的腎臟中的間質(zhì)。圖7是一個圖示，顯示在14天uuo模型中ss-31減少了成纖維細(xì)胞的表達(dá)。圖8是一個圖示，顯示在14天uuo模型中ss-31減少了腎小管的凋亡。圖9是一個圖示，顯示在14天uuo模型中ss-31減少了巨噬細(xì)胞的表達(dá)。圖10是一個圖示，顯示在14天uuo模型中ss-31增加了腎小管的增殖。圖11a-11c呈現(xiàn)了以下數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)顯示在14天uuo模型中ss-31減少了氧化損害。圖11a是rt-pcr的結(jié)果以便分析ho-1表達(dá)的照片。圖11b和圖l1c是在被梗阻的腎臟的腎小管和間質(zhì)性隔區(qū)這二者中8-ohdg染色結(jié)果的顯微圖像。圖12是一個圖示，顯示出ss-31降低了由放射性對比染料引起的腎臟功能障礙。圖13是一系列顯微圖像，顯示出ss-31保護(hù)腎小管免于放射性對比染料的損傷。pas染色示出了對照大鼠的腎臟具有正常的形態(tài)學(xué)，由在近端小管上完整的刷狀緣所證明(圖13a)。染料處理導(dǎo)致在近端小管細(xì)胞中特征性腎刷狀緣的損失、這些上皮細(xì)胞變平、連同一些空泡形成(圖13b)。用ss-31處理緩解了這些效應(yīng)。在這些樣品中pas染色示出了完整的刷狀緣和正常的腎小球(圖13c)。圖14是一系列顯微圖像，顯示出ss-31防止了由放射性對比染料損傷所誘導(dǎo)的腎小管凋亡。使用tunel染色以便將凋亡的腎小管可視化。對照腎臟顯示出少量的凋亡細(xì)胞/hpf(圖14a)。運(yùn)載體處理的、注射染料的腎臟在每個高倍視野下(hpf)具有許多凋亡細(xì)胞(圖14b)。這種效應(yīng)在ss-31處理的、注射染料的腎臟中被大大地緩解(圖14c)。圖15是一個圖示，顯示出用于在實(shí)例3、實(shí)驗(yàn)2中所呈現(xiàn)的研究的科學(xué)試驗(yàn)方案和給藥計(jì)劃。圖16a-16c是一系列pas-染色的顯微圖像，顯示出染料處理導(dǎo)致了在近端小管細(xì)胞中特征性腎刷狀緣的損失、連同一些空泡形成(圖16a)。用ss-31處理緩解了這些效應(yīng)，在這些樣品中pas染色示出了完整的刷狀緣以及正常的腎小球(圖16b)。圖16c顯示：對照大鼠的腎臟具有正常的形態(tài)學(xué)，由在近端小管上完整的刷狀緣所證明。圖17a是一個圖示，顯示出在給予放射性對比染料之后在對照物以及ss-31處理的大鼠中血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑c(cystatiinc)方面的變化。圖17b是一個圖示，顯示出在給予放射性對比染料之后在對照物以及ss-31處理的大鼠中g(shù)fr方面的變化。圖18是一個圖示，顯示出在給予放射性對比染料之前和之后在對照物以及ss-31處理的大鼠中的肌酐清除率。圖19是一個圖示，顯示出用于在實(shí)例4、實(shí)驗(yàn)3中所呈現(xiàn)的研究的科學(xué)試驗(yàn)方案和給藥計(jì)劃。圖20是一個圖示，顯示出用于在實(shí)例5、實(shí)驗(yàn)1中所呈現(xiàn)的研究的科學(xué)試驗(yàn)方案和給藥計(jì)劃。圖21a是一個圖示，顯示出在給予放射性對比染料之前和之后、在cin的一種甘油模型中在對照物以及ss-31處理的大鼠中的gfr。圖21b是一個圖示，顯示出在給予放射性對比染料之前和之后、在cin的一種甘油模型中在對照物以及ss-31處理的大鼠中的尿白蛋白。圖22a顯示了來自用甘油、泛影酸鹽以及一種對照物(pbs)處理的大鼠的腎切片pas染色的一系列顯微圖像。圖22b顯示了來自用甘油、泛影酸鹽以及ss-31處理的大鼠的腎切片pas染色的一系列顯微圖像。圖23是一個圖示，顯示出用于在實(shí)例5、實(shí)驗(yàn)2中所呈現(xiàn)的研究的科學(xué)試驗(yàn)方案和給藥計(jì)劃。圖24是一個圖示，顯示出在給予放射性對比染料之前和之后在cin的一種甘油模型中在對照物以及ss-31處理的大鼠中的gfr。圖25是一個圖示，顯示出在給予放射性對比染料之前和之后在cin的一種甘油模型中在對照物以及ss-31處理的大鼠中的尿蛋白。圖26a顯示了來自用甘油、泛影酸鹽以及一種對照物(pbs)處理的大鼠的腎切片pas染色的一系列顯微圖像。圖26b顯示了來自用甘油、泛影酸鹽以及ss-31處理的大鼠的腎切片pas染色的一系列顯微圖像。圖27是一個流程圖，顯示了用于在實(shí)例5、實(shí)驗(yàn)3中所呈現(xiàn)的研究的科學(xué)試驗(yàn)方案和給藥計(jì)劃。圖28是一個圖示，顯示了在給予放射性對比染料之前和之后、在cin的一種甘油模型中在對照物以及ss-31處理的大鼠中的gfr。圖29是一個圖示，顯示了在給予放射性對比染料之前和之后、在cin的一種甘油模型中在對照物以及ss-31處理的大鼠中的尿蛋白。圖30a顯示了來自用甘油、泛影酸鹽以及一種對照物(pbs)處理的大鼠的腎切片pas染色的一系列顯微圖像。圖30b顯示了來自用甘油、泛影酸鹽以及ss-31處理的大鼠的腎切片pas染色的一系列顯微圖像。圖31a-31c是一系列顯微圖像，顯示出ccl4對照組(圖31a)、ss-31處理組(圖31b)、以及首次接受實(shí)驗(yàn)的對照組(圖31c)的h&e染色。圖32a-32e是一系列圖示，顯示了在給予順鉑這種腎毒性劑的大鼠中本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽對總體重(圖32a)、腎臟重量(圖32b)、血清肌酐(圖32c)、bun(圖32d)、以及肌酐清除率(圖32e)的影響。具體實(shí)施方式本發(fā)明是基于諸位發(fā)明家的出乎意料的新發(fā)現(xiàn)：即某些芳香族陽離子肽可以防止和/或治療急性器官衰竭，例如在受試者體內(nèi)急性腎損傷或急性肝衰竭。在一些方面，芳香族陽離子肽可以防止和/或治療慢性器官損害，例如慢性腎損傷。應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的某些方面、方式、實(shí)施方案、變體以及特征在以下以不同的詳細(xì)水平中進(jìn)行了描述以便提供對本發(fā)明的實(shí)質(zhì)上的理解。在本發(fā)明的實(shí)踐中，使用了許多在分子生物學(xué)、蛋白生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、以及重組dna方面的常規(guī)方法。這些技術(shù)是熟知的，并且對應(yīng)地在以下文獻(xiàn)中進(jìn)行了解釋，例如currentprotocolsinmolecularbiology,vols.i-iii,ausubel,ed.(1997)；sambrooketal.,molecularcloning:alabatymanual,seconded.(coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,ny,1989)；dnacloning:apracticalapproach,vols.iandii,glover,ed.(1985)；oligonuchotidesynthesis,gait,ed.(1984)；nucleicacidhybridization,hames&higgins,eds.(1985)；transcriptionandtranslation,hames&higgins,eds.(1984)；animalcellculture,freshney,ed.(1986)；immobilizedcellsandenzymes(irlpress,1986)；perbal,apracticalguidetomolecularcloning；theseries,meth.enzymol.,(academicpress,inc.,1984)；genetransfervectorsformammaliancells,miller&calos,eds.(coldspringharborlaboratory,ny,1987)；andmeth.enzymol.,vols.154and155,wu&grossman,andwu,eds。在此引用的所有參考文獻(xiàn)均通過引用以其全文并且出于所有的目的都結(jié)合在此，其程度如同每份單獨(dú)的公開文件、專利、或?qū)＠暾埑鲇谒械哪康囊云淙谋惶貏e地并且個別地通過引用被結(jié)合一樣。以下提供了在本說明書中所使用的某些術(shù)語的定義。除非另有限定，在此所使用的所有技術(shù)術(shù)語以及科學(xué)術(shù)語通常具有與本發(fā)明所屬的
技術(shù)領(lǐng)域：
內(nèi)的普通技術(shù)人員一般所理解的相同的意義。除非上下文另有清楚地指示，如在本說明書以及所附的權(quán)利要求中所使用的，“一個/一種”("a","an")、以及“該”這些單數(shù)形式包括了復(fù)數(shù)指代物。例如，提及“一種細(xì)胞”包括兩種或多種細(xì)胞、以及類似情況。如在此所使用的，短語例如因素a是“與因素b相關(guān)聯(lián)”意思是指這兩種因素均存在，但不應(yīng)該解釋為是指一個因素必需與另一個因素是因果性聯(lián)系的。如在此所使用的，對受試者“給予”一種試劑、藥物、或肽包括向受試者引入或遞送一種化合物來執(zhí)行其預(yù)期的功能的任何途徑?？梢酝ㄟ^任何適當(dāng)?shù)耐緩竭M(jìn)行給藥，包括通過口服、鼻內(nèi)、非腸道(通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、或皮下)、經(jīng)直腸、或局部地進(jìn)行給藥。給藥包括自我給藥以及由另一個人進(jìn)行給藥。如在此所使用的，術(shù)語“氨基酸”包括自然發(fā)生的氨基酸以及合成的氨基酸、連同氨基酸類似物以及氨基酸模擬物(它們以與這些自然發(fā)生的氨基酸相類似的方式發(fā)揮作用)。自然發(fā)生的氨基酸是由遺傳密碼子所編碼的氨基酸、連同隨后被修飾的那些氨基酸，例如羥基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸酯、以及o-磷酸絲氨酸。氨基酸類似物是指具有與自然發(fā)生的氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，即，一種α-碳，這種碳結(jié)合到一個氫、一個羧基基團(tuán)、一個氨基基團(tuán)、以及一個r基團(tuán)上，例如同型絲氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亞砜、甲硫氨酸甲基锍。這些類似物具有經(jīng)修飾的r基團(tuán)(例如，正亮氨酸)或經(jīng)修飾的肽骨架，但仍保留與自然發(fā)生的氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。氨基酸模擬物是指以下化學(xué)化合物，這些化合物具有與氨基酸的通?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)不同的結(jié)構(gòu)，但卻按照與自然發(fā)生的氨基酸相類似的方式發(fā)揮作用。在此提及氨基酸是可以利用它們通常已知的三字母符號或利用由iupac-iub生物化學(xué)命名法委員會所推薦的一個字母符號。一種“分離的”或“純化的”多肽或肽是基本上不含來自衍生出該試劑的細(xì)胞或組織來源的細(xì)胞物質(zhì)、或其他污染性多肽，或者在化學(xué)合成的情況下基本上不含化學(xué)前體或其他化學(xué)品。例如，一種分離的芳香族陽離子肽將不含可能會妨礙該試劑的診斷性或治療性用途的材料。此類干擾性物質(zhì)可能包括酶類、激素以及其他蛋白質(zhì)的以及非蛋白質(zhì)的溶質(zhì)。如在此所使用的，術(shù)語“醫(yī)學(xué)病況”包括但不局限于：表現(xiàn)為一種或多種生理的和/或心理學(xué)的癥狀的任何病況或疾病(對于這些癥狀，治療和/或防止是所希望的)，并且包括之前以及最近鑒定的疾病以及其他紊亂。例如，一種醫(yī)學(xué)病況可能是急性腎損傷、或急性肝衰竭、或任何相關(guān)聯(lián)的癥狀或并發(fā)癥。在一個實(shí)施方案中，該醫(yī)學(xué)病況是與給予放射性對比染料相關(guān)聯(lián)的急性腎損傷。如在此所使用的，術(shù)語“多肽”、“肽”以及“蛋白”在此是可以互換使用的，以便是指一種聚合物，該聚合物包括通過肽鍵或經(jīng)修飾的肽鍵彼此結(jié)合的兩種或多種氨基酸，即肽等排體。多肽是指短鏈(通常是指肽類、糖肽類或寡聚體類)、以及較長的鏈(通常被稱為蛋白質(zhì))二者。多肽可以包含除這些20個基因編碼的氨基酸之外的多個氨基酸。多肽包括通過自然過程(例如，翻譯后的加工)、或通過本領(lǐng)域內(nèi)熟知的化學(xué)修飾技術(shù)所修飾的氨基酸序列。此類修飾在基礎(chǔ)文獻(xiàn)中進(jìn)行了很好地說明，并且在專題論文連同在篇幅浩大的研究文獻(xiàn)中更詳細(xì)地做了說明。如在此所使用的，詞語“保護(hù)”或“進(jìn)行保護(hù)”是指減少用本發(fā)明的一種肽進(jìn)行治療的受試者發(fā)展成一種給定的疾病或紊亂(例如，急性腎損傷或急性肝衰竭)的可能性和/或風(fēng)險。典型地，發(fā)展成這種疾病或紊亂的可能性被認(rèn)為得到降低，條件是與未用本發(fā)明的一種肽進(jìn)行治療的相同的受試者發(fā)展成組織損傷(例如，急性腎損傷或急性肝衰竭)的可能性和/或風(fēng)險相比，這種可能性降低了至少約10％、優(yōu)選至少約25％、更優(yōu)選至少約50％、甚至更優(yōu)選至少約75％、并且最優(yōu)選至少約90％。在具體的實(shí)施方案中，當(dāng)在使用該對比劑之前或同時給予這些肽時，這些肽保護(hù)受試者免于由一種對比劑所引起的急性腎損傷(即，對比物誘導(dǎo)的腎病)。如在此所使用的，術(shù)語“受試者”是指任何脊椎動物物種中的一員。在此所披露的主題的方法對于恒溫脊椎動物是特別有用的。在此提供的是對于哺乳動物(例如，人類)、連同由于瀕臨滅絕而尤為重要的哺乳動物、在經(jīng)濟(jì)上對人類重要的哺乳動物(用于人類消耗的、在農(nóng)場喂養(yǎng)的動物)和/或在社會上對人類重要的哺乳動物(作為寵物或在動物園中保存的動物)。在具體的實(shí)施方案中，該受試者是人類。如在此所使用的，術(shù)語“進(jìn)行治療”或“治療”或“改善”是指治療性治療、以及預(yù)防性或防止性的措施這兩者，其中目標(biāo)是防止或減緩(縮小)所靶向的病理狀況或紊亂。一位受試者針對一種疾病或病況得到了成功地“治療”，條件是根據(jù)本發(fā)明的這些方法在接受了治療量的這些芳香族陽離子肽之后，該受試者顯示出一種具體疾病或病況的一種或多種征象的可觀察和/或可測量的下降或缺失。例如，對于急性腎損傷，治療或防止可以包括在代謝性酸中毒、高血鉀、少尿或無尿方面的下降、體液平衡的恢復(fù)、以及對其他器官系統(tǒng)的改進(jìn)的作用。腎功能還可以通過測量血清肌酐水平、血清肌酐清除率、或血液尿素氮水平來進(jìn)行評定。還應(yīng)當(dāng)理解的是，如所說明的治療或防止醫(yī)學(xué)病況的不同方式是旨在意味著是“實(shí)質(zhì)性的”，這不僅包括完全的但還包括小于完全的治療或防止，并且其中實(shí)現(xiàn)了一些生物學(xué)或醫(yī)學(xué)上相關(guān)的結(jié)果。肽在本發(fā)明中有用的這些芳香族陽離子肽是水溶性的，并且是高度極性的。盡管具有這些特性，這些肽能夠很容易穿過細(xì)胞膜。本發(fā)明中有用的這些芳香族陽離子肽包括最少3個氨基酸(并且優(yōu)選包括最少4個氨基酸)，這些氨基酸是通過肽鍵共價連接的。本發(fā)明的芳香族陽離子肽中所存在的氨基酸最大數(shù)目是通過肽鍵共價連接的大約20個氨基酸。優(yōu)選地，氨基酸的最大數(shù)目是大約12個，更優(yōu)選是大約9個，并且最優(yōu)選是約6個。最佳的狀況是，在這種肽中所存在的氨基酸數(shù)目是4。在本發(fā)明中有用的芳香族陽離子肽的氨基酸可以是任何氨基酸。如在此所使用的，術(shù)語“氨基酸”用來是指含有至少一個氨基基團(tuán)以及至少一個羧基基團(tuán)的任何有機(jī)分子。優(yōu)選地，至少一個氨基基團(tuán)位于相對于羧基基團(tuán)的α位。這些氨基酸可以是自然發(fā)生的。自然發(fā)生的氨基酸包括，例如通常情況下在哺乳動物蛋白質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的20種最為常見的左旋(l)氨基酸，即丙氨酸(ala)、精氨酸(arg)、天冬酰胺(asn)、天冬氨酸(asp)、半胱氨酸(cys)、谷氨酰胺(gin)、谷氨酸(glu)、甘氨酸(gly)、組氨酸(his)、異亮氨酸(ile)、亮氨酸(leu)、賴氨酸(lys)、甲硫氨酸(met)、苯丙氨酸(phe)、脯氨酸(pro)、絲氨酸(ser)、蘇氨酸(thr)、色氨酸(trp)、酪氨酸(tyr)、以及纈氨酸(val)。其他自然發(fā)生的氨基酸包括例如在與蛋白質(zhì)合成無關(guān)的代謝過程中合成的氨基酸。例如，鳥氨酸和瓜氨酸這些氨基酸是在哺乳動物代謝合成中在脲產(chǎn)生過程中合成的。在本發(fā)明中有用的這些肽可含有一種或多種非自然發(fā)生的氨基酸。這些非自然發(fā)生的氨基酸可以是左旋(l)、右旋(d)、或它們的混合物。這種肽可能沒有自然發(fā)生的氨基酸。非自然發(fā)生的氨基酸是典型地在活生物體內(nèi)在正常的代謝過程中未合成的、并且并未在蛋白質(zhì)中自然發(fā)生的氨基酸。額外地，在本發(fā)明中有用的非自然發(fā)生的氨基酸優(yōu)選地也不被通常的蛋白酶識別。這些非自然發(fā)生的氨基酸可以存在于這種肽的任何位置。例如，這種非自然發(fā)生的氨基酸可以位于n-端、c-端、或在n-端與c-端之間的任何位置。例如，這些非自然發(fā)生的氨基酸可以包括烷基、芳基、或烷芳基基團(tuán)。烷基氨基酸的一些實(shí)例包括：α-氨基丁酸、β-氨基丁酸、γ-氨基丁酸、δ-氨基戊酸、以及ε-氨基己酸。芳基氨基酸的一些實(shí)例包括鄰-、間-、以及對-氨基苯甲酸。烷芳基氨基酸的一些實(shí)例包括鄰-、間-、以及對-氨基苯乙酸、以及γ-苯基-β-氨基丁酸。非自然發(fā)生的氨基酸還包括自然發(fā)生的氨基酸的衍生物。自然發(fā)生的氨基酸的衍生物可以例如包括向自然發(fā)生的氨基酸上添加一個或多個化學(xué)基團(tuán)。例如，可以將一個或多個化學(xué)基團(tuán)添加到苯丙氨酸或酪氨酸殘基的芳香環(huán)的2'、3'、4'、5'、或6'位中的一個或多個位置上，或者色氨酸殘基的苯并環(huán)的4'、5'、6'、或7'位中的一個或多個位置上。該基團(tuán)可以是能夠添加到芳香環(huán)上的任何化學(xué)基團(tuán)。此類基團(tuán)的一些實(shí)例包括支鏈或直鏈的c1-c4烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、或叔丁基，c1-c4烷氧基(即，烷氧基)，氨基，c1-c4烷氨基、以及c1-c4二烷氨基(例如，甲氨基、二甲氨基)，硝基，羥基，鹵素(即，氟、氯、溴、或碘)。自然發(fā)生的氨基酸的非自然發(fā)生衍生物的一些具體實(shí)例包括正纈氨酸(nva)、正亮氨酸(nle)、以及羥基脯氨酸(hyp)。在本發(fā)明的這些方法中有用的肽中的氨基酸修飾的另一個實(shí)例是這種肽的天冬氨酸或谷氨酸殘基的羧基基團(tuán)衍生化。衍生化作用的一個實(shí)例是酰胺化作用，這是使用氨或使用一種伯胺或仲胺(例如，甲胺、乙胺、二甲胺或二乙胺)來進(jìn)行的。衍生化作用的另一個實(shí)例包括用例如甲醇或乙醇進(jìn)行酯化。另一種這樣的修飾包括賴氨酸、精氨酸、或組氨酸殘基的氨基基團(tuán)的衍生化作用。例如，此類氨基基團(tuán)可以被?；?。一些適合的?；鶊F(tuán)包括，例如包括以上提及的c1-c4烷基基團(tuán)中任何一種的苯甲?；鶊F(tuán)以及鏈烷?；鶊F(tuán)，如乙酰基以及丙?；鶊F(tuán)。這些非自然發(fā)生的氨基酸對于通常的蛋白酶是優(yōu)選抵抗的、并且更優(yōu)選地是不敏感的。對于蛋白酶抵抗或不敏感的非自然發(fā)生的氨基酸的實(shí)例包括以上所提及的自然發(fā)生的l-氨基酸中的右旋(d-)形式、連同l-和/或d-非自然發(fā)生的氨基酸。d-氨基酸在正常情況下并非在蛋白質(zhì)中發(fā)生，盡管在某些抗生素肽中發(fā)現(xiàn)了它們，這些抗生素肽是通過除了細(xì)胞的正常核糖體蛋白合成機(jī)制之外的手段進(jìn)行合成的。如在此所使用的，這些d-氨基酸可以認(rèn)為是非自然發(fā)生的氨基酸。為了使蛋白酶的敏感性最小化，本發(fā)明的方法中有用的肽應(yīng)該具有小于五個、優(yōu)選小于四個、更優(yōu)選小于三個、并且最優(yōu)選小于兩個鄰近的由通常的蛋白酶所識別的l-氨基酸，無論這些氨基酸是否是自然發(fā)生的或非自然發(fā)生的。最佳的情況是，這種肽僅含有d-氨基酸，而不含有l(wèi)-氨基酸。如果這種肽含有蛋白酶敏感的氨基酸序列，則在這些氨基酸中至少有一種優(yōu)選是非自然發(fā)生的d-氨基酸，由此賦予了蛋白酶抗性。蛋白酶敏感序列的一個實(shí)例包括容易被通常的蛋白酶(例如，肽鏈內(nèi)切酶以及胰蛋白酶)剪切的兩個或多個鄰近的堿性氨基酸。堿性氨基酸的實(shí)例包括精氨酸、賴氨酸以及組氨酸。在適合的實(shí)施方案中，與在這種肽中的氨基酸殘基總數(shù)相比，這些芳香族陽離子肽在生理ph下具有最小數(shù)目的凈正電荷。在生理ph下凈正電荷的最小數(shù)目在下文中表示為(pm)。在這種肽中氨基酸殘基的總數(shù)在下文中表示為(r)。下文所討論的凈正電荷的最小數(shù)目都是在生理ph條件下。如在此所使用的，術(shù)語“生理ph”是指哺乳動物身體的組織和器官的細(xì)胞中的正常ph。例如，人的生理ph在正常情況下大約為7.4，但是在哺乳動物中正常的生理ph可以是從約7.0至約7.8的任何一種ph。如在此所使用的，“凈電荷”是指由存在于這種肽中的氨基酸所攜帶的正電荷的數(shù)目與負(fù)電荷的數(shù)目的差值。在本說明書中，應(yīng)當(dāng)理解的是凈電荷是在生理ph下測量的。在生理ph下帶有正電荷的自然發(fā)生的氨基酸包括l-賴氨酸、l-精氨酸、以及l(fā)-組氨酸。在生理ph下帶有負(fù)電荷的自然發(fā)生的氨基酸包括l-天冬氨酸以及l(fā)-谷氨酸。典型地，一種肽具有一個帶有正電荷的n-端氨基基團(tuán)以及一個帶有負(fù)電荷的c-端羧基基團(tuán)。在生理ph下這些電荷彼此抵消。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，這些芳香族陽離子肽在生理ph下的凈正電荷的最小數(shù)目(pm)與氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間具有一種關(guān)系，其中3pm是小于或等于r+l的最大數(shù)。在這個實(shí)施方案中，在凈正電荷的最小數(shù)目(pm)與氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間的關(guān)系如下：表1.氨基酸數(shù)目與凈正電荷(3pm≤p+1)(r)34567891011121314151617181920(pm)112223334445556667在另一個實(shí)施方案中，這些芳香族陽離子肽在凈正電荷的最小數(shù)目(pm)與氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間具有一種關(guān)系，其中2pm是小于或等于r+l的最大數(shù)。在這種實(shí)施方案中，在凈正電荷的最小數(shù)目(pm)與氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間的關(guān)系如下：表2.氨基酸數(shù)目與凈正電荷(2pm≤p+1)(r)34567891011121314151617181920(pm)22334455667788991010在一種實(shí)施方案中，凈正電荷的最小數(shù)目(pm)與氨基酸殘基的總數(shù)(r)是相等的。在另一實(shí)施方案中，這些肽具有三個或四個氨基酸殘基、以及最少一個凈正電荷，優(yōu)選是最少兩個凈正電荷，并且更優(yōu)選為最少三個凈正電荷。在適合的實(shí)施方案中，與凈正電荷的總數(shù)(pt)相比這些芳香族陽離子肽具有最少量的芳香基團(tuán)。芳香基團(tuán)的最小數(shù)目在下文中表示為(a)。具有一種芳香基團(tuán)的自然發(fā)生的氨基酸包括組氨酸、色氨酸、酪氨酸、以及苯丙氨酸。例如，六肽lys-gln-tyr-d-arg-phe-trp具有2個芳香基團(tuán)(由賴氨酸和精氨酸殘基貢獻(xiàn))、以及3個芳香基團(tuán)(由酪氨酸、苯丙氨酸、以及色氨酸殘基貢獻(xiàn))的凈正電荷。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，在本發(fā)明的這些方法中有用的芳香族陽離子肽在生理ph下在芳香基團(tuán)的最小數(shù)目(a)與凈正電荷的總數(shù)(pt)之間具有一種關(guān)系，其中3a是小于或等于pt+1的最大數(shù)目，除外當(dāng)pt是1時a也可以是1。在這種實(shí)施方案中，在氨基酸殘基的最小數(shù)目(a)與凈正電荷的最小數(shù)目(pt)之間的關(guān)系如下：表3.芳香基團(tuán)與凈正電荷(3a≤p+1或a＝pt＝1)(pt)1234567891011121314151617181920(a)11112223334445556667在另一個實(shí)施方案中，這些芳香族陽離子肽在芳基基團(tuán)的最小數(shù)目(a)與凈正電荷的總數(shù)(pt)之間具有一種關(guān)系，其中2a是小于或等于pt+1的最大數(shù)。在這種實(shí)施方案中，在氨基酸殘基的最小數(shù)目(a)與凈正電荷的總數(shù)目(pt)之間的關(guān)系如下：表4.芳香基團(tuán)與凈正電荷(3a≤p+1或a＝pt＝1)(pt)1234567891011121314151617181920(a)1122334455667788991010在另一個實(shí)施方案中，芳香基團(tuán)的數(shù)目(a)與凈正電荷的總數(shù)(pt)是相等的。羧基基團(tuán)、尤其是c-端氨基酸的末端羧基基團(tuán)，可以用例如氨進(jìn)行酰胺化以形成c-端酰胺?？商娲?，c-端氨基酸的末端羧基可以用任何伯胺或仲胺進(jìn)行酰胺化。這種伯胺或仲胺可以是例如一種烷基(尤其是一種支鏈或無支鏈的c1-c4烷基)、或一種芳基胺。相應(yīng)地，這種肽c-端的氨基酸可以被轉(zhuǎn)化成酰胺基、n-甲基酰胺基、n-乙基酰胺基、n,n-二甲基酰胺基、n,n-二乙基酰胺基、n-甲基-n-乙基酰胺基、n-苯胺基、或n-苯基-n-乙基酰胺基基團(tuán)。并未發(fā)生在本發(fā)明的芳香族陽離子肽的c-端的天冬酰胺殘基、谷氨酰胺殘基、天冬氨酸殘基、以及谷氨酸殘基的游離羧基基團(tuán)也被酰胺化，不論它們發(fā)生在這種肽的什么位置上。這些內(nèi)部位置上的酰胺化作用可以使用氨或以上所說明的伯胺或仲胺中的任何一種來進(jìn)行。在一個實(shí)施方案中，在本發(fā)明的方法中有用的芳香族陽離子肽是具有兩個凈正電荷以及至少一種芳香族氨基酸的肽。在一個具體的實(shí)施方案中，在本發(fā)明的方法中有用的芳香族陽離子肽是具有兩個凈正電荷以及兩種芳香族氨基酸的三肽。在本發(fā)明的方法中有用的芳香族陽離子肽包括但不限于以下的肽的實(shí)例：lys-d-arg-tyr-nh2,d-tyr-trp-lys-nh2,trp-d-lys-tyr-arg-nh2,tyr-his-d-gly-met,tyr-d-arg-phe-lys-glu-nh2,met-tyr-d-lys-phe-arg,d-his-glu-lys-tyr-d-phe-arg,lys-d-gln-tyr-arg-d-phe-trp-nh2,phe-d-arg-lys-trp-tyr-d-arg-his,gly-d-phe-lys-tyr-his-d-arg-tyr-nh2,val-d-lys-his-tyr-d-phe-ser-tyr-arg-nh2,trp-lys-phe-d-asp-arg-tyr-d-his-lys,lys-trp-d-tyr-arg-asn-phe-tyr-d-his-nh2,thr-gly-tyr-arg-d-his-phe-trp-d-his-lys,asp-d-trp-lys-tyr-d-his-phe-arg-d-gly-lys-nh2,d-his-lys-tyr-d-phe-glu-d-asp-d-his-d-lys-arg-trp-nh2,ala-d-phe-d-arg-tyr-lys-d-trp-his-d-tyr-gly-phe,tyr-d-his-phe-d-arg-asp-lys-d-arg-his-trp-d-his-phe,phe-phe-d-tyr-arg-glu-asp-d-lys-arg-d-arg-his-phe-nh2,phe-tyr-lys-d-arg-trp-his-d-lys-d-lys-glu-arg-d-tyr-thr,tyr-asp-d-lys-tyr-phe-d-lys-d-arg-phe-pro-d-tyr-his-lys,glu-arg-d-lys-tyr-d-val-phe-d-his-trp-arg-d-gly-tyr-arg-d-met-nh2,arg-d-leu-d-tyr-phe-lys-glu-d-lys-arg-d-trp-lys-d-phe-tyr-d-arg-gly,d-glu-asp-lys-d-arg-d-his-phe-phe-d-val-tyr-arg-tyr-d-tyr-arg-his-phe-nh2,asp-arg-d-phe-cys-phe-d-arg-d-lys-tyr-arg-d-tyr-trp-d-his-tyr-d-phe-lys-phe,his-tyr-d-arg-trp-lys-phe-d-asp-ala-arg-cys-d-tyr-his-phe-d-lys-tyr-his-ser-nh2,gly-ala-lys-phe-d-lys-glu-arg-tyr-his-d-arg-d-arg-asp-tyr-trp-d-his-trp-his-d-lys-asp,thr-tyr-arg-d-lys-trp-tyr-glu-asp-d-lys-d-arg-his-phe-d-tyr-gly-val-ile-d-his-arg-tyr-lys-nh2.在一些實(shí)施方案中，在本發(fā)明的方法中有用的肽是具有一種酪氨酸殘基或一種酪氨酸衍生物的那些肽類。優(yōu)選的酪氨酸衍生物包括：2'-甲基酪氨酸(mmt)；2′,6′-二甲基酪氨酸(2′6′dmt)；3′,5′-二甲基酪氨酸(3′5′dmt)；n,2′,6′-三甲基酪氨酸(tmt)；以及2′羥基-6′-甲基酪氨酸(hmt)。在一個實(shí)施方案中，這種肽具有化學(xué)式tyr-d-arg-phe-lys-nh2(在此被稱作ss-01)。ss-01具有三個芳香基團(tuán)(由酪氨酸、精氨酸、以及賴氨酸這些氨基酸所貢獻(xiàn))、并且具有兩個芳香基團(tuán)(由苯丙氨酸和酪氨酸這些氨基酸所貢獻(xiàn))的凈正電荷。ss-01的酪氨酸可以是一種經(jīng)修飾的酪氨酸衍生物(例如在2’,6’-二甲基酪氨酸中)，從而產(chǎn)生具有化學(xué)式2',6'-dmt-d-arg-phe-lys-nh2的化合物(在此被稱作ss-02)。在一個適當(dāng)?shù)膶?shí)施方案中，n-端的氨基酸是精氨酸。這種肽的一個實(shí)例是d-arg-2′6′dmt-lys-phe-nh2(在此被稱作ss-31)。在另一個實(shí)施方案中，n-端的氨基酸是苯丙氨酸或其衍生物。優(yōu)選的苯丙氨酸衍生物包括：2'-甲基苯丙氨酸(mmp)、2′,6′-二甲基苯丙氨酸(dmp)、n,2′,6′-三甲基苯丙氨酸(tmp)、以及2′-羥基6′-甲基苯丙氨酸(hmp)。這種肽的一個實(shí)例是phe-d-arg-phe-lys-nh2(在此被稱作ss-20)。在一個實(shí)施方案中，ss-02的氨基酸序列被重新安排，這種使得dmt并不位于n-端。這種芳香族陽離子肽的一種實(shí)例具有化學(xué)式d-arg-2′6′dmt-lys-phe-nh2(ss-31)。在又另一個實(shí)施方案中，這種芳香族陽離子肽具有化學(xué)式phe-d-arg-dmt-lys-nh2(在此稱作ss-30)?？商娲?，這種n-端的苯丙氨酸可以是苯丙氨酸的衍生物，如2′,6′-二甲基苯丙氨酸(2'6'dmp)。在氨基酸位置1上含有2',6'-二甲基苯丙氨酸的ss-01具有化學(xué)式2',6'-dmp-d-arg-dmt-lys-nh2。ss-20、ss-31、以及它們的衍生物可以進(jìn)一步包括功能類似物。這種肽被認(rèn)為是ss-20或ss-31的功能類似物，條件是該類似物具有與ss-20或ss-31類似的功能。例如，這種類似物可以是ss-01或ss-31的一種取代變體，其中一種或多種氨基酸被另一種氨基酸取代。ss-20或ss-31的適合的取代變體包括保守的氨基酸取代。氨基酸根據(jù)它們的物理化學(xué)性質(zhì)可以進(jìn)行如下的分組：(a)非極性氨基酸：ala(a)ser(s)thr(t)pro(p)gly(g)cys(c)；(b)酸性氨基酸：asn(n)asp(d)glu(e)gln(q)；(c)堿性氨基酸：his(h)arg(r)lys(k)；(d)疏水性氨基酸：met(m)leu(l)ile(i)val(v)；以及(e)芳香族氨基酸：phe(f)tyr(y)trp(w)his(h)。肽中的一個氨基酸被同一組的另一個氨基酸取代被稱作一種保守取代，并且可以保留起始肽的物理化學(xué)性質(zhì)。相比之下，肽中的一個氨基酸被不同組的另一個氨基酸取代總體上更有可能改變起始肽的性質(zhì)。在本發(fā)明的實(shí)踐中有用的類似物的實(shí)例包括但不限于：在表5中所示的這些芳香族陽離子肽。表5.肽類似物的實(shí)例cha＝環(huán)己基在某種情況下，可能有利的是使用一種還具有阿片樣物質(zhì)受體激動劑活性的肽。在本發(fā)明的實(shí)踐中有用的類似物的實(shí)例包括但不限于：在表6中所示的這些芳香族陽離子肽。表6具有阿片樣物質(zhì)受體激動劑活性的肽類似物dab＝二氨基丁酸dap＝二氨基丙酸dmt＝二甲基酪氨酸mmt＝2'-甲基酪氨酸t(yī)mt＝n,2',6'-三甲基酪氨酸hmt＝2'-羥基,6'-甲基酪氨酸dnsdap＝β-丹磺?；?l-α,β-二氨基丙酸dnsdap＝β-氨茴?；?l-α,β-二氨基丙酸bio＝生物素在表5和6中顯示的這些肽的氨基酸可能是l-或d-構(gòu)形。肽的合成在本發(fā)明的方法中有用的這些肽可以通過本領(lǐng)域內(nèi)所熟知的任何方法來進(jìn)行化學(xué)合成。用于合成這種蛋白的適合的方法包括例如由stuart和young在"solidphasepeptidesynthesis,"secondedition,piercechemicalcompany(1984)以及在"solidphasepeptidesynthesis,"methodsenzymol.289,academicpress,inc,newyk(1997)中所描述的那些方法。保護(hù)并且治療受試者體內(nèi)腎損傷的方法總體上。在此所說明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者的腎臟免于腎損傷方面是有用的。急性腎損傷(ari)是指從患者的血液中排泄廢物的腎臟功能的下降。典型地，ari的特征在于包括：腎小球?yàn)V過率(gfr)的下降到一定水平，該水平如此之低以至于很少有尿形成、或不形成尿。因此，通常由腎臟消除的物質(zhì)保留在體內(nèi)。ari的原因是多方面的，但是它們可以被分為三個種類：(1)腎前的ari，其中腎臟未接收到充分的血液供給，例如由于體循環(huán)血壓下降(正如在休克/心搏停止時、或在出血之后)；(2)內(nèi)在的ari，其中衰竭發(fā)生在腎臟內(nèi)，例如由于藥物誘導(dǎo)的毒性；以及(3)腎后的ari，由腎臟尿流出的損傷所引起的，正如在由于腎結(jié)石或膀胱/前列腺癌引起的輸尿管梗阻中。ari可以與這些種類中的任何一種或一種組合相關(guān)聯(lián)。急性腎損傷的早期診斷和治療在一些情況下可以防止急性腎損傷發(fā)展成慢性腎衰竭。ari伴隨著一種炎性應(yīng)答，該應(yīng)答若未加抑制可以導(dǎo)致腎纖維化和慢性腎衰竭。慢性腎衰竭(crf)是指腎功能的一種進(jìn)行性損失以及不可逆的腎臟受損。用于評價腎功能的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的，并且包括但不局限于：全身性血壓和腎小球毛細(xì)血管壓的測量、蛋白尿(例如，白蛋白尿)、微量血尿和大量血尿、血清肌酐水平(例如，用于在人類中估計(jì)腎功能的一個公式使2.0mg/dl的肌酐水平等同于正常腎功能的50％，并且4.0mg/dl等同于正常腎功能的25％)、腎小球?yàn)V過率(gfr)方面的下降(例如，肌酐清除率)、以及腎小管受損的程度。例如，這類評估可以包括使用生物學(xué)和/或生理參數(shù)(如血清肌酐水平、肌酐清除率、24小時尿蛋白分泌、腎小球?yàn)V過率(gfr)、尿白蛋白肌酐比率、白蛋白排泄率、以及腎臟活組織檢查)來評價至少一種腎功能。用于評估腎臟結(jié)構(gòu)退化的方法也是熟知的。在實(shí)例中說明了說明性的方法。此類方法包括腎成像(例如，mri、超聲)、或腎臟活組織檢查的組織學(xué)評價。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的這些方法減少了腎結(jié)構(gòu)的退化，正如例如通過腎小管間質(zhì)或腎小球受害的程度和/或腎纖維化的程度(例如，膠原和纖連蛋白的沉積)所判定。對于腎功能和疾病狀況的詳細(xì)綜述，見thekidneyphysiologyandpathophysiology,eds.seldinetal,3rded.,lippincottwilliams&wilkinspublishers,2000。在正常情況下，每24小時期間小于0.15g的蛋白質(zhì)被排泄到尿中。幾乎所有類型的腎病都引起輕度(每天達(dá)到500mg)至中等(每天達(dá)到4g)的蛋白質(zhì)滲漏進(jìn)入到尿中。在尿中白蛋白的正常濃度是小于1.0mg/dl?？傮w上，30-300mg/dl的尿白蛋白被認(rèn)為是微量白蛋白尿(microalbuminuria)，并且300mg/dl以及更高被認(rèn)為是大量白蛋白尿(macroalbuminuria)。血清肌酐的正常值對于男性是0.6-1.5mg/dl，并且對于女性是0.6-1.1mg/dl。防止或治療由局部缺血所引起的ari的方法。腎臟未接受對于該腎臟而言充分的血液供給的病況的一種實(shí)例是局部缺血。局部缺血是ari的一個主要原因。一個或兩個腎都局部缺血是在主動脈手術(shù)、腎臟移植、或在心血管的麻醉過程中所經(jīng)歷的一個共同的問題。涉及到將主動脈和/或腎動脈夾緊的手術(shù)操作(例如，用于腎上和近腎腹主動脈瘤以及腎臟移植的手術(shù))也特別容易產(chǎn)生腎臟局部缺血，導(dǎo)致顯著的手術(shù)后并發(fā)癥以及早期的同種異體移植排斥。在經(jīng)歷這些手術(shù)形式的高危患者中，腎功能障礙的發(fā)生率已經(jīng)報告為高達(dá)50％。局部缺血可以是由失血、液體從體內(nèi)喪失(作為嚴(yán)重腹瀉或燒傷的結(jié)果)、休克、以及與在移植之前供體腎臟的存儲相關(guān)聯(lián)的局部缺血造成的。在這些情況中，流向腎臟的血流可以被降低到一個危險的低水平，該水平持續(xù)一段時期，足以引起針對腎小管上皮細(xì)胞的局部缺血性損傷、這些上皮細(xì)胞脫落下來進(jìn)入到腎小管腔中、腎小管流量的阻塞(這種阻塞導(dǎo)致腎小球?yàn)V過作用的損失以及急性腎損傷)。受試者在接受麻醉、手術(shù)、或α-腎上腺素能激動劑之后，由于相關(guān)的全身性或腎血管收縮，還可能變得易受ari傷害。額外地，由過敏反應(yīng)、以及抗高血壓的藥物、膿毒癥、或藥物過量所引起的全身性血管舒張也可以引起ari，因?yàn)樯眢w的自然防衛(wèi)將關(guān)閉，即非重要的器官(例如，腎臟)的血管收縮。因此，在一個實(shí)施方案中，處于ari危險的受試者可以是經(jīng)歷了該腎臟的血液供給或血壓的干擾或降低的受試者?？梢栽谑褂么祟惛蓴_或降低少血液供給之前或同時對這些受試者給予本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽。類似地，芳香族陽離子肽可以在該治療劑之后進(jìn)行給藥以治療局部缺血。防止或治療由藥物誘導(dǎo)的毒性所引起的ari的方法。ari的另一個原因包括藥物誘導(dǎo)的毒性。例如，腎毒素可以引起對于腎小管上皮細(xì)胞的直接毒性。腎毒素包括但不局限于：治療性藥物，例如順鉑、慶大霉素、頭孢噻啶、環(huán)孢素、兩性霉素、放射性對比染料(以下進(jìn)一步詳細(xì)說明)；殺蟲劑(例如，百草枯)；以及環(huán)境污染物(例如，三氯乙烯和二氯代乙炔)。其他實(shí)例包括：嘌呤霉素氨基核苷(pan)；氨基糖苷類，如慶大霉素；頭孢霉素類，如頭孢噻啶；鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶抑制劑，如他克莫司或西羅莫司。藥物誘導(dǎo)的腎毒性還可能是由非甾體抗炎性物質(zhì)、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒、抗細(xì)胞因子、免疫抑制素、腫瘤藥物(oncologicaldrug)、或ace抑制劑所引起的。藥物誘導(dǎo)的腎毒性可以進(jìn)一步是由以下各項(xiàng)引起的：鎮(zhèn)痛藥(nalgesic)濫用、環(huán)丙沙星、氯吡格雷、可卡因、cox-2抑制劑、利尿劑、膦甲酸(foscamet)、金、異環(huán)磷酰胺、免疫球蛋白、中草藥、干擾素、鋰、甘露醇、美沙拉秦、絲裂霉素、亞硝基脲類、青霉胺、青霉素類、噴他瞇、奎寧、利福平、鏈佐星、磺胺類藥、噻氯匹定、氨苯喋啶、丙戊酸、阿霉素、甘油、西多福韋、托普霉素、硫酸新霉素、多粘菌素、萬古霉素、阿米卡星、頭孢噻肟、順鉑、阿昔洛韋、鋰、白細(xì)胞介素-2、環(huán)孢素、或茚地那韋。除了對腎小管上皮細(xì)胞的直接毒性之外，一些腎毒素還降低了腎灌注、引起對已知具有限制性氧利用率區(qū)域(內(nèi)部髓質(zhì)區(qū)域)的損傷。這類腎毒素包括兩性霉素和放射性對比染料。腎衰竭甚至可以由這些藥物在臨床上的相關(guān)劑量當(dāng)與局部缺血、容積耗盡、阻塞、或感染相組合時所引起的。一種實(shí)例是在具有受損的腎功能的患者體內(nèi)使用放射性對比染料。在正常的患者中對比染料(contrast-dye)腎病(cin)的發(fā)病率是3％-8％，但對于患有糖尿病的患者增加至25％。大多數(shù)ari病例發(fā)生在患有素因性并存疾病(predisposingcombidities)的患者中(mccombs,p.r.&roberts,b.surggynecolobstet,148:175-178(1979))。因此，在一個實(shí)施方案中，處于ari危險的受試者可能接受了具有腎毒性作用的一種或多種治療性藥物。在使用此類治療劑之前或同時可以對這些受試者給予本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽。類似地，可以在該治療劑之后給予芳香族陽離子肽以治療腎毒性。防止或治療由放射性對比劑所引起的ari的方法。在一個實(shí)施方案中，將本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽給予處于對比物誘導(dǎo)腎病(cin)危險的受試者，以便保護(hù)該受試者免于這種病況。cin是急性腎衰竭的一個重要病因。cin被定義為在暴露于血管內(nèi)放射造影對比材料48小時之內(nèi)發(fā)生的急性腎衰竭。cin仍然是放射顯影操作的一種共同的并發(fā)癥。當(dāng)受試者暴露于放射性對比染料時(例如，在冠狀血管造影、心臟血管造影、或神經(jīng)-血管造影操作過程中)出現(xiàn)了cin。對比染料對于許多診斷性和介入性操作是必需的，因?yàn)樗贯t(yī)生能夠看見梗阻的身體組織。處于cin最大風(fēng)險的受試者是老年人、以及那些患有糖尿病、慢性腎病、或晚期心力衰竭的人群。血清肌酐測試可用于監(jiān)測cin的發(fā)作、監(jiān)測治療、連同監(jiān)測本發(fā)明的這些肽在保護(hù)受試者免于cin發(fā)作方面的有效性。在一些實(shí)施方案中，在給予一種對比劑之前或同時給予受試者本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽，以便提供保護(hù)防止cin。例如，該受試者可以在接受該對比劑之前從約1至2小時、約1至6小時、約1至12小時、約1至24小時、或約1至48小時接受這些肽。類似地，該受試者可以在大約與該對比劑相同的時間給予了這些肽。此外，將這些肽給予該受試者可以在給予這種對比劑之后繼續(xù)。在一些實(shí)施方案中，該受試者可以在給予該對比劑之后以大約1、2、3、4、5、6、7、8、12、24、以及48小時的間隔繼續(xù)接受這種肽，以便提供一種保護(hù)性的或預(yù)防性的作用對抗cin。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽是在給予一種對比劑之后進(jìn)行給藥的，以便治療cin。例如，該受試者可以在接受該對比劑之后從約1至2小時、約1至6小時、約1至12小時、約1至24小時、約1至48小時、或約1至72小時接受這些肽。例如，該受試者可以在接受本發(fā)明的這些肽之前顯示出cin的一種或多種跡象或癥狀，例如，增加的血清肌酐水平和/或減少的尿量。與未給予這些肽的一種對照受試者相比，給予本發(fā)明的這些肽在該受試者中改進(jìn)了腎功能的這些指示物中一個或多個指示物。對比劑的類型。cin的發(fā)病率是由化學(xué)結(jié)構(gòu)影響的，并且特別是由所使用的對比劑的滲透性和離子性(或非離子性)結(jié)構(gòu)影響的(見zirogiannisetal,"contrastmediainducednephropathyinpatientsundergoingcardiaccatheterization."hellenicjcardiol,45:07-113(2004))。如在此所使用的，一種“對比劑”是指一種化合物，該化合物被用來改進(jìn)內(nèi)在身體結(jié)構(gòu)在圖像中(例如，ct或mri掃描)的可見性。術(shù)語“對比劑”在此還被稱為一種“成像劑”("imagingagent")。成像劑包括在本領(lǐng)域內(nèi)所已知的那些，如染料、熒光染料、金顆粒、氧化鐵顆粒、以及其他對比劑(包括順磁性分子、x射線衰減化合物(用于ct或x射線)、用于超聲的對比劑、γ-射線發(fā)射同位素(閃爍掃描術(shù))、以及正電子發(fā)射同位素(pet))。對比劑可以通過例如胃腸外注射(例如，靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、腹內(nèi)、皮下地、肌內(nèi))、口服的(例如，作為一種片劑或飲料)、經(jīng)直腸、或經(jīng)由吸入來給予受試者的。例如，一種x射線對比劑可以包括硫酸鋇、或可以在一種有機(jī)(非離子性)化合物中或在一種離子化合物中包括碘。碘對比劑的實(shí)例包括在表7中所示的那些。表7.示例性碘化對比劑一種mri對比劑可以包括一種順磁性對比劑(如，一種釓化合物)、一種超順磁性對比劑(如，氧化鐵納米顆粒)、一種抗磁性劑(如，硫酸鋇)、以及它們的組合物。對于mri優(yōu)選的金屬離子包括具有原子序數(shù)21-29、39-47、或57-83的那些離子，并且更優(yōu)選具有原子序數(shù)21-29、42、44、或57-83的一種順磁性的金屬離子形式。特別優(yōu)選的順磁性金屬離子是選自下組，該組的組成為：gd(ⅲ)、fe(ⅲ)、mn(ⅱ和ⅲ)、cr(ⅲ)、cu(ⅱ)、dy(ⅲ)、tb(ⅲ和iv)、ho(ⅲ)、er(ⅲ)、pr(ⅲ)、以及eu(ⅱ和ⅲ)。gd(iii)是特別有用的。注意到如在此所使用的，術(shù)語“gd”是指傳送離子形式的金屬釓；這種離子形式可以被寫為gd(ⅲ)、gd3+、等等，而沒有考慮離子形式的差異。一種ct對比劑可以包括碘(離子性或非離子性配制品)、鋇、硫酸鋇、泛影鈉-泛影葡胺合劑(泛影葡胺與泛影酸鈉的溶液)、以及它們的組合。在另一個實(shí)施方案中，一種pet或spect對比劑可以包括一種金屬螯合物。如以上所述，對比劑包括但不局限于帶有一個或多個碘部分(moieties)的分子。碘可以結(jié)合到一種有機(jī)化合物或離子化合物中。最早的對比劑是離子性的，包含從水性溶液中的碘所解離的鈉原子。有機(jī)化合物具有少量的副作用，因?yàn)樗鼈儾唤怆x成組分分子。碘化的對比介質(zhì)可以被分成水溶性的、不溶于水的、以及油性的對比介質(zhì)。不溶于水的對比介質(zhì)包括在支氣管造影術(shù)中使用的丙碘酮的水性懸浮液。油性對比介質(zhì)包括：lipiodol(在含40％碘的罌粟子油中的一種穩(wěn)定化合物)、以及l(fā)ipiodolfluid以及(對應(yīng)地包含48％和37％碘的罌粟子油的碘化脂肪酸的乙基酯)。這些油用于淋巴造影術(shù)，并且一些還用于子宮輸卵管造影術(shù)。碘代苯基十一烷酸(碘苯酯)是一種用于油性脊髓造影術(shù)的對比介質(zhì)(商標(biāo)名稱：)。到目前為止，這種水溶性的對比介質(zhì)代表了最大組的碘化對比介質(zhì)。這些對比介質(zhì)可以被分為：高重量克分子滲透壓濃度、低重量克分子滲透壓濃度、以及等重量克分子滲透壓濃度的對比介質(zhì)。重量克分子滲透壓濃度與這些對比介質(zhì)的一些不良事件有關(guān)。單體離子性對比介質(zhì)由兩個主要的組所組成：口服的膽系對比介質(zhì)以及尿路/血管造影介質(zhì)。這些介質(zhì)的實(shí)例包括：醋碘苯酸鹽泛影酸鹽碘達(dá)胺碘格利酸鹽碘酞酸鹽碘羥拉酸鹽以及甲泛影酸鹽這些尿/血管造影介質(zhì)都是三碘化苯甲酸衍生物的鹽類，并且僅在側(cè)鏈位置3和5中有所不同。這些鹽的陽離子主要是鈉或甲基葡胺、或這二者的混合物。與甲基葡胺相比，鈉鹽總體上對血管內(nèi)皮以及對血-腦屏障和神經(jīng)組織更具有毒性。與單獨(dú)使用任一種鹽相比，鈉和甲基葡胺的混合物具有更低的心臟毒性。一些制造商已經(jīng)用鈣和鎂部分地置換了鈉以降低毒性。用于血管內(nèi)用途的這些離子性單體對比介質(zhì)是所謂的高滲透性對比介質(zhì)(hocm)，在通常的臨床使用中具有七至八倍于血漿的重量克分子滲透壓濃度。這種高滲透性決定了幾種主觀的和客觀的副作用，如疼痛、內(nèi)皮受損、血栓形成以及血栓性靜脈炎、血-腦屏障的紊亂、心血管造影中的心動過緩、以及肺循環(huán)中增加的壓力。低滲透性對比介質(zhì)(locm)的引入基本上已經(jīng)降低了這些副作用。重量克分子滲透壓濃度依賴于每體積單位溶液的分子數(shù)目。這些離子性單體藥劑是解離為兩種分子的鹽類：由于三個碘原子而具有不透射線特性的一種陰離子、以及沒有不透射線特性的一種陽離子。這些藥劑還被稱為：3:2或比率為1.5的藥劑(每兩分子中具有三個碘原子)。存在著三個策略以獲得具有更低的重量克分子滲透壓濃度、而沒有x射線吸收損失的對比介質(zhì)：1)非離子性單體的產(chǎn)物、2)離子性二聚物的產(chǎn)物、或3)非離子性二聚物的產(chǎn)物。非離子性對比介質(zhì)不未離解，并且它們的水溶解度總體上是通過幾個親水性羥基基團(tuán)而達(dá)到的。三碘化的非離子性單體具有離子性單體(它們是3:1或比率為3的藥劑)的大約一半的重量克分子滲透壓濃度。已經(jīng)出現(xiàn)了幾種可供使用的、處于非離子性單體對比介質(zhì)的方便的立即使用的溶液中的藥劑，并且這些藥劑包括：甲泛葡胺碘海醇碘帕醇碘噴托碘普胺以及碘佛醇這些對比介質(zhì)具有附接到所有三條側(cè)鏈上的親水性羥基基團(tuán)，一種還已經(jīng)促成了它們毒性減少的特征。除了重量克分子滲透壓濃度之外，毒性還取決于化學(xué)結(jié)構(gòu)(有時被稱為化學(xué)毒性的一種內(nèi)在毒性)。盡管對比介質(zhì)的毒性的機(jī)制沒有得到完全理解，據(jù)信化學(xué)毒性是與該介質(zhì)的蛋白結(jié)合能力有關(guān)的，該能力是由在這種對比介質(zhì)與圍繞的生物分子(例如，酶類)之間的非特異性弱相互作用所引起的。這種交互作用是通過電力(它們僅對于離子性藥劑是存在的)介導(dǎo)的，并且通過在該分子(對于對比介質(zhì)而言它主要是苯環(huán))的多個疏水性部分之間的交互作用介導(dǎo)的。這些第二代的非離子性單體的許多親水性側(cè)基基團(tuán)保護(hù)內(nèi)部的疏水性苯環(huán)免于交互作用，由此降低了化學(xué)毒性。這種分子的相對疏水性/親水性被稱作它的分配系數(shù)；低分配系數(shù)是有利的，因?yàn)楦哂H水性有助于低蛋白結(jié)合。具有兩個三-碘化的苯環(huán)的二聚體性對比介質(zhì)由三個主要的組所組成：離子性靜脈內(nèi)的膽系對比介質(zhì)、一價的離子性對比介質(zhì)、以及非離子性對比介質(zhì)。后兩組均屬于所謂的低滲透對比介質(zhì)。僅存在著一種一價的離子性二聚物：碘克沙酸葡胺鈉這種二聚體性陰離子具有一個羧基基團(tuán)，其他已經(jīng)被一種非離子化的側(cè)基基團(tuán)替換。這樣每兩個顆粒給出六個碘原子；對比介質(zhì)是一種6:2(＝3:1)或比率為3的藥劑(類似于這些非-離子性單體)。部分地由于其離子的特性、部分地由于其少量羥基基團(tuán)的緣故，與具有相類似的重量克分子滲透壓濃度的這些非離子性單體相比碘克沙酸鹽是更具有毒性的(但是由于重量克分子滲透壓濃度更低，與這些離子性單體相比毒性更低)。這些非離子性二聚物每分子產(chǎn)生六個碘原子(比率為6的藥劑)。非離子性二聚物對比介質(zhì)的實(shí)例包括：碘曲侖和碘克沙醇碘曲侖是與血漿(0.32osm/kgh2o)接近等滲透的，而碘克沙醇實(shí)際是比血漿低滲透的。與血漿(0.29osm/kgh2o)的等滲透性是在任何碘濃度下通過加入適當(dāng)量的鹽水而獲得的。這些藥劑具有非常低的毒性，這是部分地由于它們的等滲透性、部分地由于它們的非離子特性、并且部分地由于它們具有非常多的羥基基團(tuán)(低分配系數(shù))這一事實(shí)的緣故。用于尿路造影術(shù)和血管造影術(shù)(離子性和非離子性的單體、非離子性二聚物)的不同的水溶性對比介質(zhì)都是細(xì)胞外對比介質(zhì)，并且是通過腎小球?yàn)V過作用、未經(jīng)代謝而排出的。在第一個6小時之內(nèi)，所注射的劑量中大約85％-90％在尿中發(fā)現(xiàn)；在第一個24小時之內(nèi)95％-100％在尿中發(fā)現(xiàn)?？傮w上，小于2％可以在糞便中發(fā)現(xiàn)。與離子性對比劑(在它們的分子中包含3個碘陰離子)相比，非離子性對比劑(在它們的分子中包含6個碘陰離子)被認(rèn)為是腎毒性較小的。然而，在一項(xiàng)最近的研究中，其中443位患者被隨機(jī)分配一種非離子性對比劑(碘帕醇)以及一種離子性對比劑(泛影酸鹽)，cin的發(fā)病率沒有統(tǒng)計(jì)差異(對應(yīng)地8.2％和10.2％)(zirogiannisetal.,“contrastmediainducednephropathyinpatientsundergoingcardiaccatheterization.”hellenicjcardiol45:107-113(2004))。此外，最近的證據(jù)還指出：在mri研究過程中在暴露于一種含釓對比劑與患有晚期腎病的患者中腎源性纖維性皮病(nephrogenicfibrosingdermopathy)的發(fā)病率之間的一種相關(guān)性(agahtehraniandmoussa,vasculardiseasemanagement,4:49-59(2007))。因此，無論對比劑的類型如何，對于腎衰竭的機(jī)制似乎是相同的，并且本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在防止或治療由這些藥劑所引起的ari中是有用的。在ari中對于芳香族陽離子肽的額外應(yīng)用。在一種另外的實(shí)施方案中，一位有需要的受試者可能是患有尿流受損的受試者。尿流阻塞可以發(fā)生在尿路的任何地方，并且具有許多不同的可能原因。此類原因包括腎結(jié)石或膀胱/前列腺癌。單側(cè)輸尿管梗阻(uuo)是與尿流阻塞相關(guān)聯(lián)的一種常見的臨床紊亂。它還與腎小管細(xì)胞凋亡、巨噬細(xì)胞浸潤、以及間質(zhì)性纖維化相關(guān)聯(lián)。間質(zhì)性纖維化導(dǎo)致了低氧環(huán)境并且有助于在腎功能方面的進(jìn)行性降低，盡管有手術(shù)矯正。因此，可以對具有或處于uuo危險的受試者給予本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽以保護(hù)或治療該受試者免于ari。在本發(fā)明的又另一個方面，提供了在一種具需要的哺乳動物中用于保護(hù)腎臟免予腎纖維化的一種方法。該方法包括給予該哺乳動物如以上所說明的有效量的一種芳香族陽離子肽。以上所說明的這些肽可以如以上所說明、通過本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員所已知的任何方法給予需要它們的一種哺乳動物。術(shù)語“纖維化”是指纖維組織的異常進(jìn)程、或類纖維化或纖維退化。纖維化可以由不同的損傷或疾病造成，并且經(jīng)?？梢杂膳c不同器官的移植有關(guān)的慢性移植排斥造成。纖維化典型地涉及細(xì)胞外基質(zhì)組分的異常產(chǎn)生、積累、或沉淀，包括例如膠原和纖連蛋白的過量產(chǎn)生以及增加的沉淀。如在此所使用的，術(shù)語“腎纖維化”是指腎臟的纖維化。例如，腎纖維化與細(xì)胞外基質(zhì)組分(特別是膠原)的過量產(chǎn)生或異常沉淀相關(guān)聯(lián)，導(dǎo)致腎功能的退化或損傷。在本發(fā)明的另一方面，提供了用于在一種有需要的哺乳動物體內(nèi)治療急性腎損傷的一種方法。該方法包括給予該哺乳動物如以上說明的有效量的一種芳香族陽離子肽。如以上所說明的這些肽可以如以上所說明、通過本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員所已知的任何方法給予需要它們的一種哺乳動物。本發(fā)明的這些方法可能在患有腎功能不全、腎衰竭、或腎病末期(可至少部分地歸因于一種藥物或化學(xué)品的腎毒性)是特別有用的。其他適應(yīng)癥可包括具有低于97(男性)以及88(女性)ml/min的肌酐清除率水平，20-25mg/dl或更高的血尿素。此外，該治療在以下患者中時有用的，這些患者每24小時期間具有超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10g或更高的微量白蛋白尿、大量白蛋白尿、和/或尿蛋白水平、和/或大約1.0、1.5、2.0、2.5、3、3.5、4.0、4.5、5、5.5、6、7、8、9、10mg/dl、或更高的血清肌酐水平。本發(fā)明的這些方法可用于減緩或逆轉(zhuǎn)以下患者的腎病進(jìn)展，相對于對照受試者而言這些患者的腎功能比正常低25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％、或更多。在一些實(shí)施方案中，相對于對照受試者而言本發(fā)明的這些方法使腎功能的損失減緩了至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或更多。在一些實(shí)施方案中，相對于對照受試者而言本發(fā)明的這些方法將這些患者的血清肌酐水平、蛋白尿、和/或尿白蛋白排泄物改進(jìn)了至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、或更多。用于評估腎功能的非限制性說明性的方法在此進(jìn)行了說明，并且例如在wo01/66140中。在另一個實(shí)施方案中，在本發(fā)明中有用的這些肽還可以用來保護(hù)受試者的腎臟在移植之前免于急性腎損傷。例如，可以將一個移出的腎臟置于包含以上所說明的這些肽的溶液中。在標(biāo)準(zhǔn)的緩沖溶液中肽的濃度是可以由本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員容易確定的。這類濃度可以是，例如在約0.01nm至約10μm、約0.1nm至約10μm、約1μm至約5μm、或約1nm至約100nm之間。治療ari的方法在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了用于在有需要的受試者體內(nèi)治療急性腎損傷的一種方法。該方法包括給予該受試者如以上說明的有效量的一種芳香族陽離子肽。這些肽可以如以上所說明、通過本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員所已知的任何方法給予需要它們的受試者。需要保護(hù)免于或治療急性腎損傷或急性腎損傷的受試者還包括經(jīng)受與氧化損傷相關(guān)聯(lián)的一種疾病、病況、或治療的受試者。典型地，這種氧化損傷是由自由基(例如，活性氧(ros)和/或活性氮(rns))引起的。ros和rns的實(shí)例包括羥基(ho·)、超氧陰離子基(o2·-)、一氧化氮(no·)、過氧化氫(h2o2)、次氯酸(hocl)、以及過氧化亞硝酸鹽陰離子(onoo-)。局部缺血或毒性損傷可以導(dǎo)致一種急性的二次病況、被稱為急性腎小管壞死(atn)的腎功能的常見可逆性損失，它是ari的另一個常見的原因。atn的過程是三個時期的(triphasic)。atn的起始期的特征是腎小球?yàn)V過率(gfr)的突然下降，這是由局部缺血以及相關(guān)聯(lián)的血液動力學(xué)改變所觸發(fā)的、并且伴隨亞致死性的或致死性的腎小管上皮細(xì)胞損傷。atn的形成期或持續(xù)其的特征是gfr的持續(xù)下降。亞致死性的腎小管損傷包括刷狀緣損失、空泡形成、以及近端小管的變平、以及腎小管的舒張。在近端小管可以看到細(xì)胞壞死。腎間質(zhì)組織可能是水腫的，而在髓質(zhì)中可以觀測到白細(xì)胞的浸潤。遠(yuǎn)端腎小管腔可能被管型封閉，并且遠(yuǎn)端(而非近端)的腎小管上皮細(xì)胞更容易涉及到凋亡。在回收期或利尿期過程中解決了此類結(jié)構(gòu)和功能的紊亂，其中修復(fù)性和再生性響應(yīng)修復(fù)了腎結(jié)構(gòu)并且使gfr正常化。由局部缺血和腎毒素所引起的ari的常見機(jī)制涉及：線粒體功能障礙和atp不足，它們導(dǎo)致腎臟近端腎小管細(xì)胞(rptc)損傷并且壞死。就形態(tài)學(xué)與功能這二者而言，rptc是高度特異性的，允許將水、離子、以及大分子經(jīng)由特殊的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制進(jìn)行有效轉(zhuǎn)運(yùn)。rptc包含非常高密度的線粒體，并且氧被用來維持氧化磷酸化以及atp的合成，這需要大量的atp用于腎臟腎小管運(yùn)輸過程。在局部缺血過程中，由于細(xì)胞內(nèi)atp損失這些運(yùn)輸過程被嚴(yán)重破壞。血流的恢復(fù)將會有助于限制細(xì)胞死亡，但是線粒體功能的恢復(fù)取決于局部缺血的持續(xù)時間。延長局部缺血，有證據(jù)顯示氧化磷酸化的速率持續(xù)惡化，盡管進(jìn)行了再灌注。進(jìn)行性局部缺血導(dǎo)致線粒體電子傳遞鏈中幾個組分(包括復(fù)合物i、復(fù)合物v、以及腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)的抑制、以及atp產(chǎn)物的下降。此外，局部缺血降低了心臟線粒體中的心磷脂和細(xì)胞色素c的含量，這兩者均會抑制細(xì)胞色素c氧化酶的活性。因此，線粒體在局部缺血過程中可以遭受損傷，這將在用再灌注來恢復(fù)氧和底物時限制它們產(chǎn)生atp的能力。此外，在再灌注過程中受損的線粒體產(chǎn)生了大量的ros，并且作為局部缺血之后鐵過載的結(jié)果存在著過量的羥基。線粒體在正常情況下由線粒體抗氧化劑體系的多層網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行保護(hù)免于氧化損傷，但是黨ros產(chǎn)物超過線粒體的抗氧化劑能力時它們可以經(jīng)受氧化損傷。ros可以啟動對線粒體中的核酸、蛋白、以及脂質(zhì)的損害。蛋白質(zhì)的氧化作用和硝化作用在線粒體電子傳遞鏈中導(dǎo)致了多種酶的功能改變，而腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的氧化作用削弱了adp進(jìn)入基質(zhì)用于atp合成的注入量。通過增強(qiáng)膜通透性、降低f0f1atp酶活性、并減少atp產(chǎn)物，ros已經(jīng)顯示損害了腎臟的線粒體。因此，線粒體功能障礙可以導(dǎo)致壞死或凋亡。壞死的特征是細(xì)胞膨脹和細(xì)胞膜的破裂，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物的釋出、尤其是蛋白水解酶類，這些酶可以導(dǎo)致相鄰細(xì)胞的破壞。另一方面，凋亡被定義為編程性細(xì)胞死亡，其中有機(jī)體消除了衰老的異常細(xì)胞、而沒有影響周圍的細(xì)胞，并且被認(rèn)為對于該生物體的存活是優(yōu)選的，因?yàn)樗ㄟ^吞噬作用除去即將死亡的細(xì)胞。在通過凋亡或壞死而死亡之間的決定性步驟似乎取決于細(xì)胞內(nèi)atp的含量。凋亡涉及要求能量的步驟，特別是在apaf-1與細(xì)胞色素c之間凋亡體復(fù)合物的形成。因此，當(dāng)細(xì)胞atp顯著地耗盡時，死亡只得通過壞死發(fā)生。存在著不斷積累的證據(jù)，表明線粒體ros由于腎毒素在急性腎毒性中的作用(baligaetal.drugmetabrev,31:971-997(1999))。順鉑誘導(dǎo)的線粒體氧化應(yīng)激，降低的atp和谷胱甘肽、心磷脂過氧化反應(yīng)和凋亡，以及順鉑的腎毒性可以用羥基清除劑進(jìn)行改善(n.a.,etal.,cancerchemotherpharmacol,61:145-155(2008))。放射性對比染料增加了體內(nèi)(beeri,r.,etal.rapiddnafragmentationfromhypoxiaalongthethickascendinglimbofratkidneys.kidneyint,47:1806-1810(1995))、以及體外(hizohetal.,nephroldialtransplant,13:911-918(1998)；heinrichetal.,radiology,235:843-849(2005))的腎小管細(xì)胞凋亡的速率。然而，放射性對比染料介質(zhì)的腎毒性(nephrotocixity)不能僅僅通過氧化應(yīng)激來解釋，并且線粒體能學(xué)和完整性似乎也發(fā)揮一種重要的作用(zageretal.,radiographiccontrastmedia-inducedtubularinjury:evaluationofoxidantstressandplasmamembraneintegrity.kidneyint,64:128-139(2003)；humesetal.,amjphysiol,252:f246-255(1987))。氧化損傷還已經(jīng)涉及到腎后阻塞性ari，并且有證據(jù)顯示內(nèi)在的線粒體介導(dǎo)的凋亡通路參與了牽張誘導(dǎo)的腎小管細(xì)胞凋亡(zhang,g.,etal.,expnephrol,9:71-80(2001))。在上皮細(xì)胞被損害時，它們釋放炎性介導(dǎo)物(包括il-1β和tnfα)，它們導(dǎo)致了由白細(xì)胞的浸潤以及促炎性細(xì)胞因子、趨化因子、以及ros的釋放所啟動的一種強(qiáng)烈的炎癥應(yīng)答。觀察到了白細(xì)胞浸潤以及腎臟的局部缺血再灌注、輸尿管梗阻、以及腎毒素，并且該炎性過程促進(jìn)了ari。浸潤性淋巴細(xì)胞巨噬細(xì)胞被激活并且開始分泌促纖維化(profibrotic)細(xì)胞因子以及生長因子(如tgfβ、il-13、以及pdgf)，它們進(jìn)一步激活巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。tgfβ通過下調(diào)e-鈣粘素并且上調(diào)α-sma表達(dá)、以及增加膠原產(chǎn)物、在上皮的-間充質(zhì)轉(zhuǎn)變(emt)中發(fā)揮一種中樞作用。當(dāng)肌纖維母細(xì)胞合成新膠原超過其降解的速率時發(fā)生纖維化，這樣使得膠原的總量隨著時間增加。這些趨化因子(如mcp-1)還通過將巨噬細(xì)胞和肌纖維母細(xì)胞招募到損傷位點(diǎn)上而在纖維化方面發(fā)揮作用。膠原周轉(zhuǎn)和ecm重新塑造是由不同的基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp)調(diào)節(jié)的。保護(hù)或治療受試者免于組織損傷或器官衰竭的方法本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在防止或治療ari方面是有用的這一發(fā)現(xiàn)還適用于包括腎臟在內(nèi)的其他系統(tǒng)中的組織損傷和器官衰竭。例如，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽預(yù)計(jì)使線粒體功能障礙、細(xì)胞死亡、炎癥、以及纖維化最小化。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療受試者的方法，該受試者患有一種組織損傷，例如非感染性的病理學(xué)病況，如胰腺炎、局部缺血、多重創(chuàng)傷、出血性休克、以及免疫介導(dǎo)的器官損傷。這種組織損傷可以與例如主動脈瘤修復(fù)、多重創(chuàng)傷、外周血管疾病、腎血管疾病、心肌梗塞、中風(fēng)、膿毒癥、以及多重器官衰竭相關(guān)聯(lián)。在一個方面，本發(fā)明涉及治療受試者的方法，該受試者具有一種組織，例如來自經(jīng)歷一種損傷和/或局部缺血事件的心臟、腦、脈管系統(tǒng)、腸、肝臟、腎臟、以及眼睛。這種方法包括給予受試者治療有效量的一種芳香族陽離子肽以提供一種治療性或預(yù)防性的作用。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案提供了給予本發(fā)明的這些肽以改進(jìn)選自下組的一種或多種器官的功能，該組的組成為：腎臟、肺、心臟、肝臟、腦、胰、等等。在一種具體的實(shí)施方案中，肺功能方面的改進(jìn)是選自下組，其組成為：降低水平的水腫、改進(jìn)的組織學(xué)損傷得分、以及降低水平的炎癥。在一些實(shí)施方案中，這些肽對于防止和/或治療由局部缺血、藥物(對乙酰氨基酚、酒精)、病毒、肥胖癥(非酒精性脂肪性肝炎)、以及阻塞(膽管阻塞、腫瘤)所引起的急性肝損傷是有用的。在一些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽給予受試者以防止或治療急性肝衰竭(alf)。alf是一種臨床病況，該病況是由肝細(xì)胞的嚴(yán)重且廣泛的損傷而引起的，導(dǎo)致在正常情況下發(fā)揮作用的肝臟發(fā)生衰竭。alf由于肝細(xì)胞大范圍壞死而產(chǎn)生，導(dǎo)致肝性腦病和嚴(yán)重的肝功能損傷。它是由不同種類的疾病所引起的，如病毒性肝炎(甲型、乙型、丙型)、藥物毒性、頻繁的酒精中毒、以及自身免疫性肝炎。alf是一種高死亡率的非常嚴(yán)重的臨床病況。在美國，藥物相關(guān)的肝細(xì)胞毒性是alf的主導(dǎo)原因。在一些實(shí)施方案中，在使用已知的或懷疑為誘導(dǎo)肝細(xì)胞毒性的一種藥物或藥劑(例如，對乙酰氨基酚)進(jìn)行給藥之前或同時將本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽給予受試者以便提供針保護(hù)免受alf。例如，該受試者可以在接受該藥物或藥劑之前從約1至2小時、約1至6小時、約1至12小時、約1至24小時、或約1至48小時接受這些肽。。類似地，可以在與該藥物或藥劑相同的時間將這些肽給予該受試者以提供一種預(yù)防性的作用來對抗針由這種藥物或藥劑所引起的alf。此外，可以在給予這種藥物或藥劑之后繼續(xù)將這些肽給予該受試者。在一些實(shí)施方案中，該受試者可以在給予這種藥物或藥劑之后以大約1、2、3、4、5、6、7、8、12、24、以及48小時的間隔繼續(xù)接受這種肽，以便提供一種保護(hù)性或預(yù)防性的作用。在一些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽給予受試者，該受試者展示了alf的一種或多種跡象或癥狀，包括但不局限于：升高水平的肝酶類(轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶)、升高的血清膽紅素、升高的血清氨、升高的血清葡萄糖、升高的血清乳酸鹽、或升高的血清肌酐。與未給予這些肽的對照受試者相比，給予本發(fā)明的這些肽在該受試者中改進(jìn)了肝功能的這些指示物中一個或多個指示物。該受試者可以在alf的第一個跡象或癥狀之后從約1至2小時、約1至6小時、約1至12小時、約1至24小時、約1至48小時、或約1至72小時接受這些肽。給藥方式在本發(fā)明的這些方法中有用的這些肽可以按照一個量值給予受試者，該量值對于在有需要的受試者體內(nèi)保護(hù)受試者免于急性腎損傷或急性肝衰竭是有效的。同樣，在本發(fā)明的這些方法中有用的這些肽還可以按照一個量值給予受試者，該量值對于在有需要的受試者體內(nèi)治療急性腎損傷或急性肝衰竭是有效的。如在此所使用的，術(shù)語“有效量”或“藥學(xué)上有效的量”或“治療有效量”的一種組合物是一個量值，該量值足以達(dá)到一種令人希望的治療性和/或預(yù)防性的效果，例如導(dǎo)致與ari或alf相關(guān)聯(lián)的癥狀的防止或減少的一個量值。給予該受試者的本發(fā)明的一種組合物的量值將取決于這種疾病的類型和嚴(yán)重程度以及該個體的特征，如總體健康狀態(tài)、年齡、性別、體重、以及對藥物的耐受性。它還將取決于疾病的程度、嚴(yán)重程度和類型。熟練的行家將能夠根據(jù)這些及其他因素來確定適當(dāng)?shù)膭┝?。本發(fā)明的這些組合物還可以與一種或多種額外的治療性化合物進(jìn)行聯(lián)合給藥。在本發(fā)明的這些方法中，可以將這些芳香族陽離子肽給予一位受試者，該受試者患有由一種疾病或病況所引起的ari的一種或多種跡象。給予有效量的這些芳香族陽離子肽可以改進(jìn)該受試者體內(nèi)的ari的至少一種跡象或癥狀，例如代謝性酸中毒(血液酸化)、高鉀血癥(hyperkalaemia)(升高的鉀水平)、少尿或無尿(尿產(chǎn)生減少或停止)、體液平衡的改變、以及對其他器官系統(tǒng)的作用。例如，“治療有效量”的芳香族陽離子肽是指以下水平，其中急性腎衰竭的生理效應(yīng)在最小程度上是得到了改善。典型地，與未給予這些肽的受試者或一類受試者相比，測量了這種生物效應(yīng)的效力。這種有效量是在臨床前試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)過程中、通過內(nèi)科醫(yī)師和臨床醫(yī)生所熟悉的方法來進(jìn)行確定的。在本發(fā)明的這些方法中有用的有效量的一種肽(優(yōu)選在一種藥物組合物中)可以通過對于給予藥物化合物所熟知的多種方法來給予有需要的受試者。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，這種肽可以進(jìn)行系統(tǒng)給藥或局部給藥。在一個實(shí)施方案中，這種肽是經(jīng)靜脈內(nèi)給藥的。例如，在本發(fā)明的這些方法中有用的這些芳香族陽離子肽可以是經(jīng)由快速靜脈內(nèi)彈丸注射來進(jìn)行給藥。然而，優(yōu)選地是這種肽作為一種恒速的靜脈內(nèi)輸注來進(jìn)行給藥。這種肽還可以通過口服、局部、鼻內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、或經(jīng)皮進(jìn)行給藥。在本發(fā)明的這些方法中有用的這些肽還可以通過持續(xù)釋放對受試者進(jìn)行給藥，如在本領(lǐng)域中所已知。持續(xù)釋放給藥是遞送藥物以便在一個特定的時間段達(dá)到該藥物某一水平的方法。這種水平典型地是通過血清或血漿濃度而測量的。用于通過控制釋放來遞送一種化合物的方法的說明可以見于pct申請?zhí)杦o02/083106中。在藥學(xué)領(lǐng)域中已知的任何配制品是適合于給予在本發(fā)明的這些方法中有用的這些芳香族陽離子肽的。為了進(jìn)行口服給藥，可以使用液體或固體的配制品。配制品的一些實(shí)例包括：片劑、明膠膠囊、丸劑、錠劑、酏劑、懸浮液、糖漿、晶片、口香糖、以及類似劑型。這些肽可以與一種適當(dāng)?shù)乃幱幂d體(運(yùn)載體)或賦形劑進(jìn)行混合，如本領(lǐng)域內(nèi)的專業(yè)人員所理解。載體和賦形劑的實(shí)例包括：淀粉、奶、糖、某些類型的粘土、明膠、乳酸、它們的硬脂酸或其鹽類(包括硬脂酸鎂或硬脂酸鈣、滑石、植物油或脂油、膠質(zhì)、以及乙二醇)。為了進(jìn)行全身、口服、腹膜內(nèi)、局部、鼻內(nèi)、皮下、或經(jīng)皮給藥，在本發(fā)明的這些方法中有用的這些芳香族陽離子肽的配制品可以使用如在本領(lǐng)域中已知的常規(guī)的稀釋劑、載體、或賦形劑、等等以遞送這些肽。例如，這些配制品可以包括以下各項(xiàng)中的一種或多種：一種穩(wěn)定劑、一種表面活性劑(優(yōu)選一種非離子型表面活性劑)、以及可任選的一種鹽和/或一種緩沖劑。這種肽可以按照一種水性溶液的形式、或按照一種凍干的形式進(jìn)行遞送。例如，該穩(wěn)定劑可以是一種氨基酸，例如像甘氨酸；或一種寡糖，例如像蔗糖、丁糖(tetralose)、乳糖、或一種葡聚糖?？商娲?，該穩(wěn)定劑可以是一種糖醇，例如像甘露醇；或它們的一種組合。優(yōu)選地，該穩(wěn)定劑或穩(wěn)定劑的組合構(gòu)成了這種肽重量的從約0.1％至約10％的重量。該表面活性劑優(yōu)選地是一種非離子型表面活性劑，如一種聚山梨酸酯。適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣┑囊恍?shí)例包括：tween20、tween80；一種聚乙二醇或一種聚氧乙烯聚氧化丙烯二醇，如從約0.001％(重量/體積)至約10％(重量/體積)的普流尼克f-68。這種鹽或緩沖劑可以是任何鹽或緩沖劑，例如對應(yīng)地像：氯化鈉、或磷酸鈉/磷酸鉀。優(yōu)選地，該緩沖劑將這種藥物組合物的ph維持在約5.5至約7.5的范圍內(nèi)。這種鹽和/或緩沖劑對于將重量克分子滲透壓濃度維持在一個適合于給予人類或動物的水平上是有用的。這種鹽和/或緩沖劑可以按照大約150mm至大約300mm的大致等滲濃度而存在。在本發(fā)明的這些方法中有用的這些肽的配制品可以額外地包含一種或多種常規(guī)的添加劑。此類添加劑的一些實(shí)例包括：一種增溶劑，例如像甘油；一種抗氧化劑，例如像氯化芐烷銨(季銨化合物的混合物，被稱為“季銨化合物”)、苯甲醇、氯丁醇或三氯叔丁醇；麻醉劑，例如像一種嗎啡衍生物；或一種等滲劑、等等，如以上所說明。作為針對氧化作用或其他酸敗的一種進(jìn)一步的預(yù)防措施，這些藥物組合物可以在氮?dú)庀聝Υ嬖谟貌豢蓾B透的塞子密封在小瓶中。實(shí)例實(shí)例1.保護(hù)免受由局部缺血-再灌注(i/r)所引起的腎前性ari在由i/r所引起的一種動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由局部缺血-再灌注所引起的ari中的作用。將斯普拉-道來氏大鼠(約250至300g)分配為四組：(1)假手術(shù)組，沒有i/r；(2)i/r+鹽水運(yùn)載體處理；(3)i/r+ss-20處理；(4)i/r+ss-31處理。每個實(shí)驗(yàn)組由8只大鼠組成。在局部缺血之前30分鐘并且在再灌注發(fā)作之前立即將ss-20和ss-31(3mg/kg，溶解在鹽水中)給予大鼠。按相同的計(jì)劃將鹽水單獨(dú)給予這些對照大鼠。用氯胺酮(90mg/kg，腹腔注射)與賽拉嗪(4mg/kg，腹腔注射)的混合物使大鼠麻醉。使用顯微夾具將左側(cè)的腎血管蒂暫時封閉30或45分鐘。在局部缺血期結(jié)束時，通過去除該夾具建立再灌注。在那時，將對側(cè)右腎去除。在再灌注24小時之后，將動物殺死并且通過心臟穿刺獲得血液樣品。通過血尿素氮(bun)和血清肌酐(bioassaysystemsdiur-500and和dict-500)來測定腎功能。腎臟形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)：腎臟被固定在10％的中性緩沖的福爾馬林中，并且被包埋在石蠟中。將三微米的切片用蘇木精-曙紅(h&e)以及高碘酸-希夫(pas)進(jìn)行染色，并且通過光學(xué)顯微觀察進(jìn)行分析。使用以下指標(biāo)來對損害評分：[1]單個細(xì)胞的有絲分裂以及壞死；[2]在相鄰的近曲小管中全部細(xì)胞的壞死，伴隨有周圍腎小管的存活；[3]限定于該近曲小管的遠(yuǎn)端三分之一的壞死，伴隨有在內(nèi)部皮質(zhì)延伸的壞死帶；以及[4]影響該近曲小管全部三個區(qū)段的壞死。用于凋亡的tunel測定：將腎組織切片脫蠟并且由二甲苯、梯度乙醇系列、以及去離子h2o再水化，并接著在rt下在20μg/ml的蛋白酶k中孵育20分鐘。根據(jù)制造商的說明、使用原位細(xì)胞死亡檢測pod試劑盒(roche，in,usa)。簡言之，通過用在甲醇中的0.3％h2o2孵育10分鐘將在腎切片中的內(nèi)源性過氧化物酶活性阻斷。然后，在37℃下將這些切片在一個潮濕容器中、在黑暗中、用tunel反應(yīng)混合物孵育30分鐘。洗滌之后，將這些載玻片用50-100μlconverter-pod在一個潮濕容器中在rt下孵育30分鐘。將這些載玻片在dab溶液中進(jìn)行孵育(1-3分鐘)、并且用蘇木精進(jìn)行復(fù)染、通過一種梯度系列的乙醇進(jìn)行干燥、并且在permount中封固用于顯微觀察。免疫組織化學(xué)：將腎切片從石蠟塊切下，并且在載玻片上封固。在用二甲苯去除石蠟之后，使用梯度乙醇系列以及去離子h2o將這些載玻片再水化。在檸檬酸鹽緩沖液(10mm檸檬酸、0.05％tween20、ph6.0)中對抗原修復(fù)(antigenretrieval)加熱。使用在甲醇中的0.3％過氧化氫對內(nèi)源性過氧化物酶進(jìn)行封閉。然后，使用針對血紅素加氧酶-1(ho-1)的第一抗體(大鼠抗-ho-1/hmox1/hsp32單克隆抗體(r&dsystems,mn,usa)，在1:200稀釋下))以及第二抗體(hrp-偶聯(lián)的山羊抗-大鼠igg，vectastainabc(vectorlabinc.mi,usa)進(jìn)行免疫組織化學(xué)。底物試劑3-氨基-9-乙基咔唑(aec,sigma,mo,usa)用于顯現(xiàn)紅顏色。蘇木精用于進(jìn)行復(fù)染。蛋白質(zhì)印跡法：將腎組織在冰上在2ml的ripa裂解緩沖液(santacruz,ca,usa)中勻漿，并且以500xg離心30分鐘以去除細(xì)胞碎片。將這些上清液的等分部分儲存在-80℃。將每種樣品的三十(30)μg的蛋白質(zhì)懸浮在加樣緩沖液中并且煮沸5分鐘，然后使每個樣品經(jīng)受10％的sds-page凝膠電泳。將經(jīng)分辨的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到pvdf膜上。在將這種膜在5％的脫脂奶粉以及1％的牛血清白蛋白中封閉1小時之后，將這種硝酸纖維素印跡與一種1:2000稀釋的抗-ho-1/hmox1/hsp32或一種1:1000稀釋的抗-ampkα-1單克隆抗體(r&dsystems,mn,usa)進(jìn)行孵育，然后與辣根過氧化酶-偶聯(lián)的第二抗體進(jìn)行孵育。使用enhancedchemiluminescence檢測系統(tǒng)(cellsignaling,ma,usa)和x射線膠片將在該印跡中的蛋白質(zhì)條帶檢測出。相對密度測量值提供了量化。atp含量測定：將腎組織立即放入10ml的5％三氯乙酸中(具有10mmdtt、2mmedta)，并且切成小塊。將該組織在冰上勻漿、再孵育10分鐘、以2000xg離心10分鐘、并且用10nkoh中和至ph7.6。在以2000×g離心10分鐘之后，將所得到的上清液的等分部分儲存在-80℃。通過生物發(fā)光(atp生物發(fā)光試劑盒，sigma,mo,usa)來測量atp。結(jié)果:在此研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽對由局部缺血-再灌注所引起的ari模型的作用。按照以上所說明的這些操作將腎線粒體分離，并且測量了氧耗量。結(jié)果如下。表8.bun和血清肌酐值假i/r+鹽水i/r+ss-20i/r+ss-31bun(mg/ml)40.8±4.6170±1.7*130.7±5.5#113.8±11.4#血清肌酐(mg/ml)0.56±0.041.73±0.12*1.06±0.11#1.05±0.16#以上表格顯示了在局部缺血45分鐘并且再灌注24小時之后用ss-20或ss-31進(jìn)行治療改進(jìn)大鼠中的bun和血清肌酐值。使用來自生物測定系統(tǒng)(bioassaysystems，diur-500和dict-500)的試劑盒測定了bun和血清肌酐。*指示與該假組相比，p<0.05。#指示與ir＝鹽水組相比，p<0.05。圖1顯示：在30分鐘局部缺血并且再灌注24小時之后用ss-20或ss-31進(jìn)行治療防止腎小管細(xì)胞的凋亡。使用tunel針對凋亡細(xì)胞將腎切片進(jìn)行染色。在未經(jīng)受i/r的動物髓質(zhì)區(qū)域中觀察到非常少的tunel陽性細(xì)胞(圖.1a)。在局部缺血30分鐘并且再灌注24小時之后的動物髓質(zhì)中觀察到了大量的tunel陽性上皮細(xì)胞(圖1b)。在局部缺血30分鐘開始之前、并且剛好在再灌注之前用ss-20(3mg/kg)或ss-31(3mg/kg)處理30分鐘，在髓質(zhì)中顯著地阻止了tunel正性細(xì)胞(圖1c和圖1d)。圖2顯示：在局部缺血45分鐘并且再灌注24小時之后用ss-20或ss-31進(jìn)行治療防止腎小管細(xì)胞損傷。將腎切片用h&e(圖2a-2d)和pas(圖2e-2h)染色。局部缺血-再灌注導(dǎo)致了在髓質(zhì)內(nèi)部的近端小管中刷狀緣損失、空泡形成以及壞死，并且這些遠(yuǎn)端小管是由管型封閉的(圖2b)。用ss-20或ss-31進(jìn)行預(yù)處理在這些近端小管中保護(hù)了刷狀緣并且防止壞死(圖2c和圖2d)。圖3顯示：用ss-20或ss-31進(jìn)行治療顯著地改進(jìn)了由于局部缺血45分鐘并且再灌注24小時所導(dǎo)致的組織病理學(xué)得分。數(shù)據(jù)顯示為平均數(shù)±sd。單因素方差分析(one-wayanova)和scheffe’s檢驗(yàn)用于多個成對的比較。圖4a和4b顯示：用ss-20或ss-31進(jìn)行治療在再灌注之后顯著地增加了atp產(chǎn)生的速率。在局部缺血15分鐘結(jié)束時(圖4a)、并且在局部缺血45分鐘之后再灌注1小時以后(圖4b)測定在腎組織中的atp含量。在局部缺血15分鐘之后atp被顯著降低，并且這沒有通過用ss-20或ss-31進(jìn)行預(yù)處理而被改變。在運(yùn)載體對照組中在再灌注1小時之后atp的含量仍然是非常低的，但是在用ss-20或ss31處理的動物中是顯著地更高的。圖5顯示：用ss-20或ss-31進(jìn)行預(yù)處理在局部缺血45分鐘之后顯著地改進(jìn)了腎線粒體的呼吸。加入adp來啟動呼吸狀態(tài)3。在局部缺血45分鐘之后從大鼠分離的線粒體中氧耗量是顯著降低的。用ss-20或ss-31進(jìn)行預(yù)處理顯著地改進(jìn)了氧耗量，這樣使得局部缺血的線粒體與非局部缺血性對照沒有不同?？傊?，這些結(jié)果表明：這種肽ss-31和ss-20在減低由局部缺血-再灌注所引起的ari的發(fā)病率中是有效的。這樣，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由局部缺血所引起的ari的方法中是有用的。實(shí)例2.保護(hù)免受由輸尿管梗阻所引起的ari在一種輸尿管梗阻的動物模型中，研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由輸尿管梗阻所引起的ari方面的作用。這個實(shí)例說明了此類實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。經(jīng)歷了在無菌條件下用4-0絲線經(jīng)由中線剖腹術(shù)對斯普拉-道來氏大鼠進(jìn)行單側(cè)輸尿管結(jié)扎(uuo)。通過在下部輸尿管的末端(正好在輸尿管膀胱接點(diǎn)以上)結(jié)扎左側(cè)輸尿管實(shí)施輸尿管梗阻。在uuo的前一天經(jīng)腹膜內(nèi)給予ss-31(1mg/kg或3mg/kg；n＝8)，并且持續(xù)14天。對一個分開的動物組供給鹽水，作為一種運(yùn)載體對照物(n＝16)。腎組織學(xué)：由通過專業(yè)資格認(rèn)證的病理學(xué)家(svs，腎病理學(xué)專家)檢驗(yàn)石蠟包埋的標(biāo)本的三色切片，并且按照0-+++的等級對纖維化進(jìn)行評分。免疫組織化學(xué)分析：使用針對ed-1(serotec)的單克隆抗體對巨噬細(xì)胞進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，如以前所說明。由兩位不同的獨(dú)立的調(diào)查者以一種盲法方式在10個高倍視野中(x400)對巨噬細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。如在實(shí)例1中所說明進(jìn)行tunel測定。使用免疫組織化學(xué)來檢驗(yàn)成纖維細(xì)胞的存在，如在實(shí)例1中所說明。所使用的抗體是dako#s100-a4(1:100稀釋)。s100-a4抗原也被稱為fsp-1(成纖維細(xì)胞特異性蛋白)。通過在烘箱中將細(xì)胞與蛋白酶k孵育達(dá)20分鐘使抗原修復(fù)。根據(jù)常規(guī)操作進(jìn)行剩余的免疫過氧化物酶的科學(xué)試驗(yàn)方案。在紡錘形間質(zhì)細(xì)胞中、并且還在圓形的且由病理學(xué)家鑒定為炎癥細(xì)胞的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了針對s100-a4的染色。僅僅將紡錘形細(xì)胞歸入這些計(jì)數(shù)中。未用與第一抗體進(jìn)行孵育的樣品沒有顯示出染色。使用蛋白酶k用于抗原修復(fù)來進(jìn)行8-ohdg染色。所使用的抗體來自日本衰老控制研究所(thejapaninstitutecontrolofaging)，并且將其以1:200-1:500的稀釋進(jìn)行使用。聚合酶鏈反應(yīng)分析：以下對從腎臟分離的血紅素加氧酶-1(ho-1)進(jìn)行pcr。收獲大鼠的腎臟，并且將其保存在-80℃直到使用。使用-氯仿提取操作來提取總rna。根據(jù)制造商的說明書，使用oligotexmrna提取試劑盒來純化mrna(qiagen，valencia,california)。通過在260nm測量吸光度來確定mrna的濃度和純度。使用qiagen的一步法pcr試劑盒(qiagen，valencia，california)進(jìn)行rt-pcr。pcr是在自動化的熱循環(huán)器thermohybrid,px2中進(jìn)行的，其中起始活化步驟在95℃下持續(xù)15分鐘、之后跟隨在94℃下變性作用45秒循環(huán)35次、在60℃下退火30秒、在72℃下延伸60秒。通過2％的瓊脂糖凝膠電泳使pcr產(chǎn)物分離。通過溴化乙錠使在凝膠上的條帶可視化，并且使用imagej光密度分析軟件對其進(jìn)行分析。對于ho-1的引物是：ctgaagaagattgcgcagaa(seqidno:1)和atggcataaattcccactgc(seqidno:2)[427bp]。gapdh作為對照物來使用。結(jié)果。依照剛才所說明的這些操作，在一種輸尿管梗阻的動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由輸尿管梗阻所引起的ari方面的作用。uuo(14天)在腎臟中產(chǎn)生了一組特征性的變化，包括增加的間質(zhì)性纖維化、腎小管凋亡、巨噬細(xì)胞浸潤、以及腎小管增殖。在uuo的前一天用ss-31將動物預(yù)處理，并且每日一次持續(xù)14天。對照動物在整個uuo期間僅接受鹽水。對側(cè)未梗阻的腎臟(圖6a，ck)在腎小管、腎小球、或間質(zhì)組織中顯示出極少的(若有的話)炎癥或纖維化(數(shù)據(jù)未顯示)。對照運(yùn)載體處理組的梗阻腎臟(圖6b，ok)顯示出中等的(1-2+)髓質(zhì)三色染色、同時局灶腎盂(peripelvic)的區(qū)域具有1+染色。比髓質(zhì)相比，皮質(zhì)顯示出較少的纖維化。ok還可以顯示出中等的炎癥，總體上在皮質(zhì)中得分為1+并且在髓質(zhì)中為2+。ss-31處理的腎臟(圖6c)顯著地顯示出較低的三色染色，在皮質(zhì)為0-痕量并且在髓質(zhì)中為tr-1+。在測量間質(zhì)體積時，與ck中的0.5％±0.1％相比，在對照ok中髓質(zhì)間質(zhì)的體積是69.2％±2.1％(圖6d)。用1mg/kgss-31處理將間質(zhì)體積方面的增加調(diào)整至54.9％±2.3％；更高劑量的ss-31也是有效的。因此，在14天uuo模型中ss-31減少了髓質(zhì)的纖維化。通過針對成纖維細(xì)胞特異性蛋白質(zhì)(fsp-1)的免疫過氧化物酶使成纖維細(xì)胞可視化。在ok組中發(fā)現(xiàn)了fsp-1的增加的表達(dá)(16.9±2.3細(xì)胞/hpf)，在對照ck組中僅存在少量的間質(zhì)成纖維細(xì)胞(1.1±0.3fsp+細(xì)胞/hpf)(圖7)。ss-31(1mg/kg)將ok中成纖維細(xì)胞浸潤的量值顯著地降低至對照物的43.4％；ss-31(3mg/kg)處理將ok中成纖維細(xì)胞浸潤的量值進(jìn)一步降低至未經(jīng)處理的ok的28.0％。因此，在14天uuo模型中ss-31減少了成纖維細(xì)胞的表達(dá)。在未經(jīng)處理的ok中，與ck相比2周uuo導(dǎo)致凋亡的腎小管細(xì)胞顯著增加。通過使用tunel測定使凋亡的細(xì)胞可視化。1mg/kg的ss-31將腎小管的凋亡從15.1±3.1凋亡細(xì)胞/hpf顯著地降低至5.1±0.5細(xì)胞/hpf(p<0.05)；3mg/kg的ss-31造成了腎小管凋亡的進(jìn)一步顯著減少(3.0±0.3凋亡細(xì)胞/hpf)(圖8)。因此，在14天uuo模型中ss-31減少了腎小管的凋亡。與ck相比較，在2周uuo之后在巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入ok方面存在著顯著的增加(0.04±0.03細(xì)胞/hpf對比33.8±6.3細(xì)胞/hpf)。通過針對ed-1的免疫過氧化物酶使巨噬細(xì)胞可視化。1mg/kg和3mg/kg的ss-31這兩者均顯著地降低巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入ok中(圖9)。因此，在14天uuo模型中ss-31減少了巨噬細(xì)胞的表達(dá)。被梗阻的腎臟與腎小管細(xì)胞增加的增殖相關(guān)聯(lián)，如通過針對pcna的免疫過氧化物酶進(jìn)行可視化。ss-31在ok中造成腎小管增殖的顯著增加。在1mg/kg的劑量下腎小管的增殖增加2倍，并且在3mg/kg、在3mg/kg的劑量下增加3.5倍(圖10)。因此，在14天uuo模型中ss-31增加了腎小管的增殖。被梗阻的腎臟(ok)顯示出升高的氧化損傷，正如通過血紅素加氧酶-1(ho-1)以及8-ohdg的增加的表達(dá)所評定。rt-pcr用于ho-1表達(dá)。uuo與ho-1增加的表達(dá)相關(guān)聯(lián)(ho-1/gadph1.09對比在未梗阻的對照物中的0.07)(圖11a)。在被梗阻的腎臟中用ss-31處理降低了ho-1表達(dá)。在被梗阻的腎臟的腎小管和間質(zhì)性隔區(qū)這兩者中均檢出了8-ohdg染色(圖11b)。與ck相比，在ok中8-ohdg陽性細(xì)胞的數(shù)目/hpf顯著增加(5.0±1.4細(xì)胞/hpf對比1.4±0.1細(xì)胞/hpf)，并且用ss-31處理使其顯著降低(圖11c)。因此，在14天uuo模型中ss-31減少了氧化損傷。總之，這些結(jié)果表明：在由輸尿管梗阻所引起的ari動物模型中肽ss-31在降低間質(zhì)性纖維化、腎小管凋亡、巨噬細(xì)胞浸潤、以及腎小管增殖方面是有效的。這樣，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由輸尿管梗阻所引起的急性腎損傷的方法中是有用的。實(shí)例3.在indo/l-name動物模型中治療和防止cin在由給予放射性對比染料所引起的ari動物模型中，研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于cin方面的作用。這個實(shí)例說明了此類實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)1動物模型：一種放射性對比染料誘導(dǎo)的腎衰竭的模型，如在這種實(shí)例中由agmonetal.jclininvest94:1069-1075(1994)所說明。正如在人類中，放射性對比染料當(dāng)給予具有正常腎功能的動物時總體上是無毒的。然而，放射性對比染料在具有受損腎功能的動物中可以誘導(dǎo)ari。在這種模型中，通過給予吲哚美辛(10mg/kg)和l-name(10mg/kg)誘導(dǎo)了受損的腎功能。這些動物被分成3組：1.(1)組對照物(n＝8)2.(2)組吲哚美辛/l-name(分別供給15分鐘)，之后跟隨碘酞酸鹽(angioconray6ml/kg)(n＝7)。3.((3)組在給予吲哚美辛/l-name/碘酞酸鹽之前供給ss-31(3mg/kg，腹腔注射)15分鐘，并且在藥物暴露之后立即重復(fù)第二劑量的ss-31(3mg/kg)(n＝9)。實(shí)驗(yàn)性的科學(xué)試驗(yàn)計(jì)劃：大鼠被放在代謝籠中(nalgeco，rochester，ny)，自由獲取水以及標(biāo)準(zhǔn)的大鼠食物。在收集基線24小時尿之后，用氯胺酮(90mg/kg，腹腔注射)與賽拉嗪(4mg/kg，腹腔注射)的混合物使這些大鼠麻醉。將導(dǎo)管插入左側(cè)股靜脈和動脈，并且提取基線血液樣品(1ml)用于肌酐水平的測量。然后，這些動物接受不同的藥物治療，如以上所指出。然后，將碘酞葡胺60％(對比染料；angioconray6ml/kg)經(jīng)由動脈插管進(jìn)行注射。然后，將左側(cè)股動脈結(jié)扎并且將插管移出。然后，使大鼠返回至代謝籠中用于收集另一個24小時尿。在這一時期結(jié)束時，從尾部靜脈提取血液樣品(1ml)。在此之后，將這些動物麻醉，將腎臟移出并且使這些動物安樂死。腎功能：通過確定基線處以及給予染料24小時之后的gfr來評定腎功能。通過在給予染料之前和之后的24小時內(nèi)所估計(jì)的肌酐清除率來測定gfr。通過測量血漿肌酐(pcr)、尿肌酐(ucr)的水平(bioassaysystems；dict-500)以及尿量來分析肌酐清除率。腎組織學(xué)：腎臟被固定在10％的中性緩沖的福爾馬林中并且被包埋在石蠟中。將三微米的切片用蘇木精-曙紅(h&e)以及高碘酸-希夫(pas)染色，并且由經(jīng)專業(yè)資格認(rèn)證的病理學(xué)家通過光學(xué)顯微觀察進(jìn)行分析。結(jié)果：依照剛才所說明的這些操作，在由給予放射性對比染料所引起的ari動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于cin方面的作用。這些結(jié)果如下。在這些對照大鼠中，在第一個24小時期間(235.0±30.5μl/min/g)與第二個24小時期間(223.7±44.0μl/min/g)之間gfr沒有顯著差異(圖12)。在將對比染料給予用吲哚美辛和l-name預(yù)處理的動物時，gfr在24小時內(nèi)從230.8±21.0μl/min/g減少至87.6±10.6μl/min/g。在給予染料之前和之后用ss-31治療降低了腎功能的下降，并且gfr僅僅從247.9±20.4μl/min/g下降至157.9±26.6μl/min/g。ss-31對染料注射之后的gfr的作用是顯著的(當(dāng)與運(yùn)載體處理組相比時p<0.05)。九只ss-31治療的大鼠中有六只幾乎受到完全地保護(hù)免于染料的作用。因此，ss-31降低了由放射性對比染料所引起的腎功能障礙。pas染色示出了對照大鼠腎具有正常形態(tài)學(xué)，這是通過近端小管上完整的刷狀緣所證明的(圖13a)。染料處理導(dǎo)致了近端小管細(xì)胞中特征性腎刷狀緣的損失、連同一些空泡形成(圖13b)。用ss-31處理緩解了這些效應(yīng)，在這些樣品中pas染色示出了完整的刷狀緣以及正常的腎小球(圖13c)。因此，ss-31保護(hù)腎小管免于放射性對比染料損傷。tunel染色用于是凋亡的腎小管可視化。對照腎臟顯示出少量的凋亡細(xì)胞/hpf(圖14a)。運(yùn)載體處理的、注射染料的腎臟具有大量的凋亡細(xì)胞/hpf(圖14b)。這種效應(yīng)在ss-31處理的、注射染料的腎臟中被大大地緩解(圖14c)。因此，ss-31防止了由放射性對比染料損傷所誘導(dǎo)的腎小管凋亡?？傊?，這些結(jié)果表明肽ss-31在減低腎功能障礙、保護(hù)腎小管免于放射性對比染料損傷方面是有效的。這樣，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由對比劑所引起的急性腎損傷的方法方面是有用的。實(shí)驗(yàn)2動物模型：在本實(shí)驗(yàn)中使用了如以上所說明的相同的吲哚美辛和l-name模型。在這種模型中，通過給予吲哚美辛(8mg/kg)和l-name(10mg/kg)誘導(dǎo)了受損的腎功能。這些動物被分成2組，使用了在圖15中所呈現(xiàn)的給藥計(jì)劃以及科學(xué)研究試驗(yàn)方案。腎功能：使用來自bioassayssystems的dict試劑盒(hayward，ca)、通過確定基線處的以及給予染料26小時之后的血清和尿肌酐來評定腎功能。通過bca蛋白測定試劑盒(thermoscientific，rockford，il)還確定了基線處的和給予染料26小時之后的尿蛋白濃度。通過t檢驗(yàn)分析樣品，并且差異在p<0.05被認(rèn)為是顯著的。腎組織學(xué)：腎臟被固定在10％的中性緩沖的福爾馬林中，并且被包埋在石蠟中。將三微米的切片用蘇木精-曙紅(h&e)以及高碘酸-希夫(pas)染色，并且由專業(yè)資格認(rèn)證的病理學(xué)家通過光學(xué)顯微觀察進(jìn)行分析。結(jié)果：依照剛才所說明的這些操作，在由放射性對比染料給藥所引起的ari動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于cin方面的作用。這些結(jié)果如下。表9.腎功能分析的結(jié)果基線1天a:indo/l-name/染料/pbs動物的數(shù)目97體重(g)278±2.5263±2.2scr(mg/dl)0.61±0.020.85±0.07ucr(mg/dl)11.88±3.1158.97±11.62尿量(ml)n.a.n.a.尿蛋白(mg/ml)bradfordn.a.n.a.尿蛋白(mg/ml)bca4.32±1.6521.72±4.63b:indo/l-name/染料/ss-31動物的數(shù)目97體重(g)278±5258±5scr(mg/dl)0.67±0.090.73±0.04ucr(mg/dl)15.54±3.8738.12±8.19尿量(ml)n.a.n.a.尿蛋白(mg/ml)bradfordn.a.n.a.尿蛋白(mg/ml)bca4.28±1.1511.76±2.71數(shù)據(jù)表示為平均數(shù)±sem對于用吲哚美辛和l-name預(yù)處理的大鼠，給予對比染料將血清肌酐從基線水平0.61±0.02(mg/dl)誘導(dǎo)增加至0.85±0.07(mg/dl)；并且尿蛋白濃度在26h時從4.32±1.65(mg/ml)增加至21.72±4.63(mg/ml)。這代表在給予對比染料26小時之后scr增加40％并且蛋白濃度增加4倍。相比之下，在給予染料之前和之后用ss-31處理降低了腎功能的下降，并且血清肌酐僅僅從基線水平0.67±0.09(mg/dl)增加至0.73±0.04(mg/dl)；并且尿蛋白濃度從4.28±1.15(mg/ml)增加至11.76±2.71(mg/ml)。這代表在給予對比染料26小時之后scr僅僅增加9％并且蛋白濃度增加1.7倍。七只ss-31處理的大鼠中有五只受到保護(hù)免于對比染料誘導(dǎo)的腎病(即，在用染料26小時之后scr增加小于25％)。pas染色示出了染料處理導(dǎo)致近端小管細(xì)胞中特征性腎刷狀緣的損失、連同一些空泡形成(圖16a)。用ss-31處理使這些效應(yīng)得到緩解，在這些樣品中pas染色示出了完整的刷狀緣以及正常的腎小球(圖16b)。圖16c顯示對照大鼠的腎臟具有正常的形態(tài)學(xué)，這是由近端小管上完整的刷狀緣所證明的。因此，ss-31防止了由放射性對比染料損傷所誘導(dǎo)的腎小管凋亡?？傊?、這些結(jié)果表明肽ss-31在減低腎功能障礙、保護(hù)腎小管免于放射性對比染料損傷方面是有效的。這樣，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由對比劑所引起的急性腎損傷的方法方面是有用的。實(shí)例4.在糖尿病動物模型中治療和防止cin實(shí)驗(yàn)1動物模型：由糖尿病所引起的腎功能損害是針對對比物誘導(dǎo)的腎病的主要誘病因素(pre-disposingfactor)之一(mccullough,petal.,j.am.collegeofcardiology,2008,51,1419-1428)。在這種實(shí)驗(yàn)中，用高脂飲食飼喂總共57只sd大鼠達(dá)6周，隨后注射低劑量的鏈脲菌素(30mg/kg)。在9周多之后，測量血糖、血清肌酐、以及半胱氨酸蛋白酶抑制劑c?；谝韵逻x擇指標(biāo)：scr>250μm、半胱氨酸蛋白酶抑制劑c>750ng/ml、以及血糖≥16.7um，選擇20只大鼠來進(jìn)行對比物誘導(dǎo)的腎病研究。這些動物被分成2組。對組1的大鼠飼喂給予碘海醇和ss-31；對組2的大鼠給予碘海醇以及一種對照運(yùn)載體。第1天，從在每組大鼠收集血清樣品，并且使用bradford測定來測量尿中的總蛋白。第2天和第3天，在染料注射(6ml/kg，尾靜脈注射)之前30分鐘，皮下給予3mg/kgss-31(組1)或一種運(yùn)載體(組2)。在給予染料2小時和24小時之后，重復(fù)給予ss-31(組1)或pbs(組2)。在第4天和第5天收集血清和尿樣品。第5天，將這些大鼠安樂死來收獲腎臟以及重要的器官。通過t檢驗(yàn)來分析樣品，并且差異在p<0.05被認(rèn)為是顯著的。腎功能：使用jianchengcr試劑盒(nanjing,p.r.c)、通過確定基線處的以及給予染料48小時和72小時之后的血清和尿肌酐來評定腎功能?；趕cr、ucr、以及尿量來計(jì)算肌酐清除率。通過bradford蛋白測定試劑盒(sigma，st.louis，mo)來確定尿蛋白濃度。用westang大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑c試劑盒(shanghai,p.r.c)來測量半胱氨酸蛋白酶抑制劑c。結(jié)果：依照剛才所說明的這些操作，在一種糖尿病動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在緩解cin方面的作用。這些結(jié)果概括于表10以及圖17a和圖17b中。表10.腎功能分析的結(jié)果在將對比染料給予糖尿病大鼠時，對于運(yùn)載體處理組而言，血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑c(一種aki生物標(biāo)志物)的水平從655.9±49.1(基線)升高至938.4±57.9(給予染料之后48小時)以及1576.7±149.9(ng/ml)(給予染料之后72小時)；而對于ss-31處理組而言，半胱氨酸蛋白酶抑制劑c在相同的時間內(nèi)僅僅從708.6±51.3升高至1008.1±46.4和1303.6±147.1(ng/ml)(圖17a)。在72小時，ss-31在對半胱氨酸蛋白酶抑制劑c的增加進(jìn)行緩解方面是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(p<0.05)。在將對比染料給予糖尿病大鼠中時，對于運(yùn)載體處理組而言，在染料注射之后48小時肌酐清除率降低了超過20％(圖17b)。相比之下，對于ss-31處理組，在染料注射之前和之后在相同的時間內(nèi)肌酐清除率沒有發(fā)生顯著變化。ss-31在對由給予染料所誘導(dǎo)的肌酐清除率進(jìn)行緩解方面是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(p<0.05)。因此，在一種糖尿病動物模型中ss-31降低了由放射性對比染料所引起的腎功能障礙。這樣，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由對比劑所引起的急性腎損傷的方法方面是有用的。實(shí)驗(yàn)2在本實(shí)驗(yàn)中，用高脂飲食飼喂30只sd大鼠達(dá)6周，隨后注射低劑量的鏈脲菌素(30mg/kg)。在9周多之后，將這些大鼠用于對比物誘導(dǎo)的腎病研究。這些動物被分成2組，使用以下的劑量、給藥計(jì)劃以及科學(xué)研究試驗(yàn)方案。第0天，確定這些動物的重量并且收集葡萄糖和血清樣品。第1天，測定scr并且進(jìn)行定點(diǎn)尿的收集。第2天和第3天，在染料注射(6ml/kg，尾靜脈注射)之前30分鐘皮下給予3mg/kgss-31(組1)或一種運(yùn)載體(組2)。在給予染料之后2小時、1天、2天、3天、4天、以及5天重復(fù)給予ss-31(組1)或pbs(組2)。第8天，收集血清和尿樣品并且將這些大鼠安樂死以收獲腎臟和重要的器官。腎功能：使用jianchengcr試劑盒(nanjing,p.r.c)通過確定基線處的以及給予對比染料之后24小時、3天、以及6天的血清和尿肌酐來評定腎功能。基于scr、ucr、以及尿量來計(jì)算肌酐清除率。通過t檢驗(yàn)來分析樣品，并且差異在p<0.05被認(rèn)為是顯著的。結(jié)果：依照剛才所說明的這些操作，在一種糖尿病動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在緩解cin方面的作用。這些結(jié)果呈現(xiàn)在表11和圖18中。表11.腎功能分析的結(jié)果當(dāng)將對比染料給予糖尿病大鼠中時，對于運(yùn)載體處理組而言，在染料注射之后24小時肌酐清除率降低了超過27％，從172±16.1降低至125.2±7.3(μl/min/100g)(圖18)。相比之下，對于ss-31處理組，在染料注射之前和之后在相同的時間中肌酐清除率沒有發(fā)生顯著變化，159.2±25.1至159.9±9(μl/min/100g)。ss-31在對由給予染料所誘導(dǎo)的肌酐清除率進(jìn)行緩解方面是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(p<0.05)。因此，在一種糖尿病動物模型中ss-31降低了由放射性對比染料所引起的腎功能障礙。這樣，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由對比劑所引起的急性腎損傷的方法方面是有用的。實(shí)驗(yàn)3在本實(shí)驗(yàn)中，用高脂飲食飼喂20只sd大鼠達(dá)6周，隨后注射低劑量的鏈脲菌素(35mg/kg)。在15周多之后，使這些大鼠經(jīng)歷對比物誘導(dǎo)的腎病研究。這些hfd/stz動物被分成2組，使用在圖19中所呈現(xiàn)的劑量、給藥計(jì)劃、以及科學(xué)研究試驗(yàn)方案。此外，在此包括了一個正常的對照組，其中將該同樣批次的、接受規(guī)則飲食的9只大鼠經(jīng)歷相同的科學(xué)試驗(yàn)方案。腎功能：使用jianchengcr試劑盒(nanjing,p.r.c)通過確定基線處的以及給予對比染料(iohexol)之后24小時、3天、以及6天的血清和尿肌酐來評定腎功能?；趕cr、ucr、以及尿量來計(jì)算肌酐清除率。通過t檢驗(yàn)來分析樣品，并且差異在p<0.05被認(rèn)為是顯著的。結(jié)果：依照剛才所說明的這些操作，在一種糖尿病動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在緩解cin方面的作用。這些結(jié)果呈現(xiàn)在表12中。表12.對于研究組的血清肌酐結(jié)果從以上的表格中，可以看見對照動物(組a)中scr在任何這些動物中在對比染料染料損害之后24小時沒有增加。對于hfd/stz大鼠，在運(yùn)載體處理組中，10只動物中有5只在給予對比染料之后24小時具有升高的scr，超過20％。相比之下，在相同的時間內(nèi)用ss-31進(jìn)行處理，9只大鼠中僅有2只具有超過20％的scr增加。因此，在一種糖尿病動物模型中ss-31降低了由放射性對比染料所引起的腎功能障礙。這樣，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由對比劑所引起的急性腎損傷的方法方面是有用的。實(shí)例5.在甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤動物模型中治療和防止cin在一種由給予放射性對比染料所引起的甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)和/或治療受試者免于cin方面的作用。該實(shí)例說明了此類實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)1動物模型：之前的研究表明：在具有由甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤所損害的腎臟的動物中給予對比染料可以引起cin(parvez,zetal.investigativeradiology,1989,24,698-702；duanetal.actaradiologica,2000,41,503–507)。在這種模型中，使體重為300-400g的sd大鼠脫水24小時，隨后以10ml/kg的劑量通過肌內(nèi)注射25％的甘油溶液(體積/體積)。二十四小時(24小時)后，將這些大鼠分組并且經(jīng)歷如在圖20中所詳述的一種對比物誘導(dǎo)的腎病研究科學(xué)試驗(yàn)方案。通過將來自組c的動物的腎功能與來自組b的進(jìn)行比較，可以檢驗(yàn)ss-31對ari的作用。通過t-檢驗(yàn)來分析樣品，并且差異在p<0.05被認(rèn)為是顯著的。腎功能：使用jianchengcr試劑盒(nanjing,p.r.c)通過確定基線處的、脫水之后24小時、以及給予對比染料之后48小時的血清和尿肌酐來評定腎功能?；趕cr、ucr、以及尿量來計(jì)算肌酐清除率。通過競爭性elisa測定來確定尿微量白蛋白濃度。結(jié)果：依照剛才所說明的這些操作，在一種甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在緩解cin方面的作用。這些結(jié)果呈現(xiàn)在圖21a-21b和圖22a-22b中。當(dāng)將對比染料給予甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤大鼠中時，對于運(yùn)載體處理組而言，在染料注射之后48小時肌酐清除率降低13％(圖21a-21b)。相比之下，對于ss-31處理組，在染料注射之前和之后在相同的時間內(nèi)肌酐清除率沒有發(fā)生顯著變化(圖21a)。白蛋白尿是腎小球膜的滲透性增加的一種指示物，并且它可以被對比染料誘導(dǎo)。在脫水24小時之后(t0)，對于gly/染料/pbs組而言尿微量白蛋白水平是385.1±59.8(μg/24小時)，并且對于gly/染料/ss-31組而言是757.7±462.9(μg/24小時)(在這個時間點(diǎn)沒有肽處理)(圖21b)。肌內(nèi)注射給予甘油，注射之后24小時(t1)，由于甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤在這兩組中尿微量白蛋白的水平是實(shí)質(zhì)上增加的。然而，在t2時間點(diǎn)，與運(yùn)載體處理組相比，在ss-31處理組中總的白蛋白尿顯著地降低，這提示ss-31對于在這種甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤模型中由對比染料所引起的腎小球基底膜的滲透性具有一種保護(hù)作用。pas染色示出了以下染料處理，這種處理導(dǎo)致在近端小管細(xì)胞中特征性腎刷狀緣的損失、膨脹的腎小球、以及在腎小管細(xì)胞中標(biāo)記的蛋白管型沉淀(圖22a)。用ss-31進(jìn)行治療緩解了這些效應(yīng)，這是因?yàn)樵谶@些樣品中pas染色示出了在這些腎小管細(xì)胞中完整的刷狀緣、正常的腎小球、以及最小限度的蛋白管型(圖22b)。因此，ss-31保護(hù)腎小管免于放射性對比染料損傷。實(shí)驗(yàn)2使體重為300-400g的sd大鼠脫水達(dá)24小時，隨后以10ml/kg的劑量肌內(nèi)注射25％的甘油溶液(體積/體積)。二十四小時后，將這些大鼠分組并且經(jīng)歷對比物誘導(dǎo)的腎病研究科學(xué)試驗(yàn)方案。將16只體重為300-350g的sd大鼠隨機(jī)化分成三組，使用在圖23中所呈現(xiàn)的劑量、給藥計(jì)劃、以及科學(xué)研究試驗(yàn)方案。通過將來自組a的動物的腎功能與來自組b的進(jìn)行比較，可以檢驗(yàn)ss-31對ari的作用。通過t-檢驗(yàn)來分析樣品，并且差異在p<0.05被認(rèn)為是顯著的。腎功能：使用jianchengcr試劑盒(nanjing,p.r.c)通過確定基線出的、脫水之后24小時、以及給予對比染料之后48小時的血清和尿肌酐來評定腎功能。基于scr、ucr、以及尿量來計(jì)算肌酐清除率。通過bradford蛋白測定試劑盒(sigma，st.louis，mo)來確定尿蛋白濃度。結(jié)果：依照剛才所說明的這些操作，在一種甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在緩解cin方面的作用。這些結(jié)果呈現(xiàn)在圖24、25、以及26中。當(dāng)將對比染料給予甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤大鼠中時，對于運(yùn)載體處理組而言，在染料注射之后48小時肌酐清除率降低25％(圖24)。相比之下，對于ss-31處理組，在相同的時間內(nèi)肌酐清除率的降低是13％。因此，在一種甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤動物模型中ss-31降低了由放射性對比染料所引起的腎功能障礙。蛋白尿是腎損害的一種跡象，并且在尿中過量蛋白的存在指示了吸收的不足或受損的過濾。之前報告了甘油和對比介質(zhì)可以增加腎小球膜的滲透性、并且引起過量的尿蛋白泄漏(thomsenh.s.etal.,actaradiologica,1989,30,217-222)。在運(yùn)載體處理組中，在每個不同的時間點(diǎn)上24小時尿蛋白水平是：tb(基線)＝15.8±1.6mg；t0(用甘油之后24小時)＝52.9±9.1mg；t1(用甘油之后48小時并且用染料之后24小時)＝54.1±5.8mg，t2(用甘油之后72小時并且用染料之后48小時)＝29.7±3.6mg；以及t3(用甘油之后96小時并且用染料之后72小時)＝30.2±5.1mg(圖25)。在ss-31處理組中，在tb(15.5±1.5mg)和t0(50.2±8.6mg)時的24小時尿蛋白水平是可以與運(yùn)載體對照組相比的，其中在這些時間點(diǎn)沒有給予肽。然而，在t1的時間點(diǎn)(用甘油之后48小時并且用染料之后24小時)，在ss-31處理組中24小時尿蛋白降至39.5±3.5mg(圖25)。與在相同的時間點(diǎn)運(yùn)載體處理組相比，這種差異是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(p≤0.05)。這證明了在這種cin動物模型中ss-31肽加速了腎小球基底膜滲透性功能障礙的恢復(fù)。這樣，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在用于治療由放射性對比染料所引起的ari方面是有用的。pas染色示出了以下染料處理，這種處理導(dǎo)致在近端小管細(xì)胞中特征性腎刷狀緣的損失、膨脹的腎小球、以及在腎小管細(xì)胞中經(jīng)標(biāo)記的蛋白管型沉淀(圖26a)。用ss-31治療緩解了這些效應(yīng)，這是因?yàn)樵谶@些樣品中pas染色示出了在這些腎小管細(xì)胞中完整的刷狀緣、正常的腎小球、以及最小限度的蛋白管型(圖26b)。因此，ss-31保護(hù)腎小管免于放射性對比染料損傷。實(shí)驗(yàn)3使體重為300-400g的sd大鼠脫水達(dá)24小時，隨后以10ml/kg的劑量肌內(nèi)注射25％的甘油溶液(體積/體積)。二十四小時(24小時)后，將這些大鼠分組并且經(jīng)歷對比物誘導(dǎo)的腎病研究科學(xué)試驗(yàn)方案。將18只體重為350-400g的sd大鼠隨機(jī)分成三組，使用在圖27中所呈現(xiàn)的劑量、給藥計(jì)劃、以及究科學(xué)研究試驗(yàn)方案。通過將來自組a的動物的腎功能與來自組b的進(jìn)行比較，可以檢驗(yàn)ss-31對ari的作用。腎功能：使用jianchengcr試劑盒(nanjing,p.r.c)通過確定基線處的、脫水之后24小時以及給予對比染料之后48小時的血清和尿肌酐來評定腎功能?；趕cr、ucr、以及尿量來計(jì)算肌酐清除率。通過bradford蛋白測定試劑盒(sigma,u.s.a.)來確定尿蛋白濃度。通過t-檢驗(yàn)來分析樣品，并且差異在p<0.05被認(rèn)為是顯著的。結(jié)果：依照剛才所說明的這些操作，在一種甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在緩解cin方面的作用。這些結(jié)果呈現(xiàn)在圖28和圖29中。當(dāng)將對比染料給予甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤大鼠時，對于運(yùn)載體處理組而言，在染料注射之后48小時肌酐清除率降低24％(圖28)。相比之下，對于ss-31處理組，在相同的時間內(nèi)肌酐清除率沒有發(fā)生顯著變化(圖28)。因此，在一種甘油誘導(dǎo)的橫紋肌瘤動物模型中ss-31降低了由放射性對比染料所引起的腎功能障礙。如以上所討論的，蛋白尿是腎損害的一種跡象，并且在尿中過量蛋白的存在指示了吸收的不足或受損的過濾。將運(yùn)載體處理組中不同時間點(diǎn)的蛋白水平與ss-31處理組進(jìn)行比較，這種肽處理組比運(yùn)載體組恢復(fù)更快(圖29)。這證明了在這種cin動物模型中ss-31肽加速了腎小球基底膜滲透性功能障礙的恢復(fù)。這樣，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在用于治療由放射性對比染料所引起的ari方面是有用的。pas染色示出了以下染料處理，這種處理導(dǎo)致在近端小管細(xì)胞中特征性腎刷狀緣的損失、膨脹的腎小球、以及在腎小管細(xì)胞中經(jīng)標(biāo)記的蛋白管型沉淀(圖30a)。用ss-31治療緩解了這些效應(yīng)，這是因?yàn)樵谶@些樣品中pas染色示出了在這些腎小管細(xì)胞中完整的刷狀緣、正常的腎小球、以及最小限度的蛋白管型(圖30b)。因此，ss-31保護(hù)腎小管免于放射性對比染料損傷?？傊?，來自以上實(shí)例的這些結(jié)果清楚地證明：在幾種動物模型中本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由對比劑所引起的急性腎損傷方面的有用性。此外，在實(shí)驗(yàn)7和8中證明它加速了受損腎臟的恢復(fù)。實(shí)例6：在ccl4慢性腎損傷模型中治療和防止腎毒性動物模型：反應(yīng)基團(tuán)的產(chǎn)生已經(jīng)牽連到四氯化碳誘導(dǎo)的腎毒性，這些基團(tuán)參與了脂質(zhì)過氧化作用、功能障礙性蛋白的積聚，導(dǎo)致腎臟損傷(ozturk,f.etal.urology,2003,62,353-356)。該實(shí)例說明給予芳香族陽離子肽對于防止四氯化碳(ccl4)誘導(dǎo)的慢性腎毒性的作用。研究設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)性的科學(xué)試驗(yàn)方案：在這種模型中，將體重為250g的sd大鼠用0.35g/l苯巴比妥溶液(魯米那水)飼喂達(dá)兩周，然后分成三組并且處理如下。表13.處理組在第五周結(jié)束時，將來自各組的四只大鼠殺死用于肝組織病理學(xué)切片和纖維化檢驗(yàn)。在第7周結(jié)束時，將各組剩余的全部大鼠殺死，并且收獲腎臟和肝組織用于組織病理學(xué)切片和檢驗(yàn)。腎組織學(xué)：腎臟被固定在10％的中性緩沖的福爾馬林中，并且被包埋在石蠟中。將三微米的切片用蘇木精-曙紅(h&e)染色，并且由經(jīng)認(rèn)證的病理學(xué)家通過光學(xué)顯微觀察進(jìn)行分析。結(jié)果：依照如上說明的這些操作，在此研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)對抗ccl4誘導(dǎo)的慢性腎毒性方面的作用。這些結(jié)果呈現(xiàn)在以下表14中。表14.腎組織學(xué)結(jié)果的概述注釋：“-”＝?jīng)]有異常發(fā)現(xiàn)；“±”＝最??；“+”＝輕度；“++”＝中度；“+++”＝重度。ss-31保護(hù)腎小管免于ccl4腎毒性。h&e染色示出了ccl4處理導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞退化和壞死(圖31a)；相比之下，ss-31處理的動物的腎組織學(xué)(圖31b)沒有顯示出可觀察到的組織病理學(xué)變化，并且?guī)缀跏桥c首次接受實(shí)驗(yàn)的對照動物一致的(圖31c)。因此，來自以上實(shí)例的這些結(jié)果清楚地證明：本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由ccl4腎毒性所引起的慢性腎損傷方面的有用性。實(shí)例7.防止由順鉑所引起的ari在由順鉑所引起的ari動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于順鉑誘導(dǎo)的ari方面的作用。第1天，對斯普拉-道來氏大鼠(350-400g)向腹膜內(nèi)供給一個單一劑量的順鉑(7mg/kg)。一組大鼠(n＝8)正好在給予順鉑之前皮下接受一個劑量的ss-31(3mg/kg)，并且每日重復(fù)一次再持續(xù)3天。第二組大鼠(n＝8)在給予順鉑當(dāng)天接受了等體積的鹽水，并且此之后持續(xù)3天。實(shí)驗(yàn)性的科學(xué)試驗(yàn)方案：大鼠在給予順鉑之前自由獲取自來水以及標(biāo)準(zhǔn)的大鼠食物。在給予順鉑之前從尾靜脈獲得對照血液樣品。在順鉑注射之前對這些大鼠皮下給予鹽水或ss-31(溶解在鹽水中)。將順鉑(溶解在鹽水中)以7mg/kg的劑量向腹膜內(nèi)進(jìn)行給藥。然后，所有大鼠每日接受鹽水或ss-31(3mg/kg)持續(xù)3天。將大鼠置于代謝籠中直到最后24小時用于尿收集。在這一時期結(jié)束時，從尾靜脈提取血液樣品。在此之后，使這些動物麻醉，將腎臟移出并且將這些動物安樂死。腎功能：通過血尿素氮(bun)、血清肌酐、尿肌酐、以及尿蛋白(beckmanalxchemicalanalyzer)來評估腎功能。從肌酐清除率估計(jì)gfr，肌酐清除率是從尿肌酐、尿流率、以及血清肌酐確定的。腎組織學(xué)：腎臟被固定在10％的中性緩沖的福爾馬林中，并且被包埋在石蠟中。將三微米的切片用高碘酸-希夫(pas)染色，并且通過光學(xué)顯微觀察進(jìn)行分析。結(jié)果：依照剛才所說明的這些操作，在由給予順鉑所引起的ari動物模型中研究了本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于順鉑腎毒性方面的作用。使用t-檢驗(yàn)來確定在組別之間的比較。在這些鹽水處理的大鼠中，當(dāng)與給予順鉑之前的體重(378.4±8.2g)相比，在給予順鉑之后3天體重出現(xiàn)顯著降低(333±12.6g)(p<0.0001)(圖32a)。在ss-31處理組中體重是與在順鉑處理之前的鹽水組相似的(376.9±5.2g；p＝0.673)，并且在順鉑處理之后3天體重沒有發(fā)生變化(384±28g；p＝0.46)。與鹽水相比，在ss-31處理組中順鉑處理對體重的作用存在著顯著的差異(p＝0.004)。與鹽水處理組(1.4±0.2g)相比，在ss-31處理組中腎臟的重量(1.6±0.2g)也是更高的(p＝0.036)(圖32b)。在這些鹽水處理的大鼠中，在順鉑處理之后3天血清肌酐從0.4±0.09mg/dl增加至2.5±2.8mg/dl(p＝0.065)(圖32c)。相比之下，在ss-31處理組中血清肌酐僅僅從0.4±0.09mg/dl增加至0.8±0.73mg/dl。在大鼠中的變異非常大以至于不能達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。然而，在接受ss-31的8只大鼠中有5只在血清肌酐方面沒有變化(<0.4mg/dl)，而這8只大鼠中僅僅有1只具有小于1.0mg/dl的血清肌酐。與鹽水組(0.5±0.6ml/分鐘)相比，在順鉑處理之后3天在ss-31處理的大鼠中肌酐清除率是顯著更高的(2.2±1.3ml/分鐘)(p＝0.024)(圖32e)。在這些鹽水處理的大鼠中，在順鉑處理之后3天bun從17.3±1.5mg/dll增加至114.4±105mg/dl(p＝0.035)(圖32d)。相比之下，在ss-31處理組中bun僅從15.5±1.7mg/dl增加至29.3±25mg/dl(p＝0.167)。在順鉑處理之后3天在ss-31處理組中bun是顯著較低的(p＝0.042)。總之，ss-31保護(hù)腎臟免于由順鉑所引起的損害。這樣，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在保護(hù)受試者免于由腎毒性劑所引起的急性腎損傷方米是有用的。實(shí)例8.保護(hù)和治療由芳香族陽離子肽引起的alf為了證明對防止和/或治療alf的作用，在alf動物模型上對本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽進(jìn)行了測試。適當(dāng)?shù)膭游锬Ｐ褪褂檬中g(shù)操作、毒性肝損傷、或這兩者的組合在實(shí)驗(yàn)動物中誘導(dǎo)了alf(見belangerandbutterworth,“acuteliverfailure:acriticalappraisalofavailableanimalmodels.”metabolicbraindisease,20:409-423(2005))。為了測試本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽對防止alf的作用，在用藥物或手術(shù)損害之前或同時給予這些肽。在接受這些肽以及那些沒有接受這些肽的受試者之間進(jìn)行了損害之后肝功能的比較。使用一種或多種指示來評定肝功能，如血清肝酶(轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶)的水平、血清膽紅素、血清氨、血清葡萄糖、血清乳酸鹽、或血清肌酐。與對照受試者相比，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽在防止alf方面的效力是由alf的發(fā)生或嚴(yán)重程度的下降所指示的。為了測試本發(fā)明的這些芳香族的陽離子肽對治療alf的作用，在該動物模型中在用于誘導(dǎo)alf的藥物或手術(shù)損害之后給予這些肽。在治療過程之后(在幾小時至幾天的范圍內(nèi))，在接受這些肽以及那些沒有接受這些肽的受試者之間進(jìn)行了肝功能的比較。使用一種或多種指示物來評定肝功能，如血清肝酶(轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶)、血清膽紅素、血清氨、血清葡萄糖、血清乳酸鹽、或血清肌酐的水平。與對照受試者相比，本發(fā)明的這些芳香族陽離子肽對治療alf的效力是通過alf的一種或多種跡象或癥狀(由以上這些標(biāo)志物所指示)的下降所指示的。等效物本發(fā)明不應(yīng)當(dāng)就在本申請中說明的這些具體實(shí)施方案而言受到限制，這些實(shí)施方案是旨在作為本發(fā)明的多個單獨(dú)方面的單一的解說?？梢詫Ρ景l(fā)明做出許多修改和變體而不偏離本發(fā)明的精神和范圍，正如對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言將是很清楚的。從以上的說明中，除了在此已經(jīng)列舉的那些之外，在本發(fā)明范圍之內(nèi)的功能等效的方法和組合物對于本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員而言將是清楚的。此類修改和變體旨在落入所附的權(quán)利要求書的范圍之內(nèi)。本發(fā)明將僅僅由所附的權(quán)利要求的條件、連同這些權(quán)利要求有權(quán)得到的等效物的全部范圍所限制。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明并非限于具體的方法、試劑、化合物組合物或生物系統(tǒng)，當(dāng)然它們可以發(fā)生變化。還應(yīng)當(dāng)理解，在此所使用的術(shù)語僅僅是為了說明具體實(shí)施方案的目的，并且并非旨在是限制性的。此外，在本披露的特征或方面是用markush組的術(shù)語來說明時，本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識到本披露同樣就用markush組的任何單個成員或多個成員的子組而言來進(jìn)行說明的。如本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員所應(yīng)當(dāng)理解的，對于任何和所有目的、特別是就提供一種書面說明書而言，在此披露的所有范圍同樣涵蓋了它們的任何以及所有可能的子范圍以及多個子范圍的組合。任何列出的范圍可以被容易地認(rèn)識到(正如所充分說明的并且使之能夠?qū)崿F(xiàn)的)該同一范圍能夠被分解為至少相等的半份、三分之一份、四分之一份、五分之一份、十分之一份、等等的緣故。作為一個非限制的實(shí)例，在此討論的每一個范圍可以容易地被分解為一個下三分之一、中三分之一、以及上三三分之一、等等正如本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)理解的，所有語言(如“高達(dá)”、“至少”、“大于”、“小于”、以及類似語言)都包括所引敘的數(shù)目并且是指多個范圍，這些范圍隨后可以被分解為正如以上討論的多個子范圍。最后，正如本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的，一種范圍包括每一個單個的成員。因此，例如，具有1-3個細(xì)胞的組是指具有1、2、或3個細(xì)胞的那些組。類似地，具有1-5個細(xì)胞的組是指具有1、2、3、4、或5個細(xì)胞的組，等等。在權(quán)利要求中列出了其他實(shí)施方案。當(dāng)前第1頁12