本發(fā)明涉及治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)的藥物，具體地說是以中草藥為原料制備的一種蛭草明目合劑，同時，本發(fā)提供一種蛭草明目合劑制備方法。

背景技術(shù)：

糖尿病是臨床上常見的代謝性疾病，長期的代謝異常會導(dǎo)致血管并發(fā)癥的發(fā)生，DR是糖尿病嚴重的微血管并發(fā)癥之一；DR已成為成人致盲的重要原因。

研究表明，DR的發(fā)病是一個復(fù)雜的、與多因素相關(guān)的病理過程，其確切機制尚未完全闡明，但業(yè)已證明，與高血糖所致的體內(nèi)代謝的異常有關(guān)，主要包括脂質(zhì)代謝異常，血液流變學(xué)異常，血清晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGES)的形成和堆積，AGES是指蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸等大分子在沒有酶參與的條件下，自發(fā)地與葡萄糖或其他還原單糖反應(yīng)所生成的穩(wěn)定的共價加成物；AGES可在視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞、周細胞及基底膜沉積，可誘導(dǎo)細胞因子的產(chǎn)生，對細胞產(chǎn)生損傷，還可產(chǎn)生氧化應(yīng)激，引起視網(wǎng)膜血流動力學(xué)異常及導(dǎo)致周細胞凋亡，從而導(dǎo)致了視網(wǎng)膜微循環(huán)障礙，是公認的DR發(fā)生發(fā)展中的最主要因素之一；

DR患者存在著明顯的血液流變學(xué)障礙，而DR的發(fā)生發(fā)展與血液流變學(xué)紊亂有密切的關(guān)系；

此外，糖尿病患者不但存在糖代謝異常，而且還存在著脂質(zhì)代謝的異常，尤其是老年患者；脂質(zhì)代謝的異常，促進了脂質(zhì)在微血管壁的沉積，增加血液粘滯度，從而加重視網(wǎng)膜組織的缺血、缺氧，導(dǎo)致其微血管內(nèi)皮損傷，管腔堵塞，引起微血管瘤的形成，它們可以加快和加重原有的糖尿病視網(wǎng)膜的微血管病變。

目前對于DR的治療主要分激光及玻璃體手術(shù)治療和藥物治療兩方面；隨著視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)及玻璃體切割手術(shù)等技術(shù)的發(fā)展，DR致盲的危險性明顯下降，但就其本質(zhì)這些治療方法均屬于被動治療，到了激光及玻切這一步治療時，往往患者的視網(wǎng)膜已經(jīng)有了相當(dāng)嚴重的破壞，而且治療 時副作用也很大；

如何盡早進行DR的治療，或防患于未然應(yīng)該是DR治療的關(guān)鍵；盡管DR的西醫(yī)發(fā)病機理雖未完全闡明，但現(xiàn)有的學(xué)說已基本得到學(xué)術(shù)界的公認，針對這些機理而隨之研制開發(fā)出的各種西藥相繼問世，然而藥物療效卻未達到預(yù)期的效果，除少數(shù)改善微循環(huán)藥物(如導(dǎo)升明)外，其余藥物均未廣泛應(yīng)用于臨床；

很多研究表明，中藥對于改善眼底微循環(huán)，降低血糖等方面均有效，而且在降低血脂、糾正血液流變學(xué)異常，促進血小板活化，清除自由基等方面均起作用，故我們認為中藥在治療DR中占重要而獨特的地位，并且隨著對DR病機探討的不斷深入，中藥治療DR越來越顯示出其廣闊的前景。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的主要目的在于提供一種蛭草明目合劑及其制備方法，其能有效改善視力及眼底病情，并顯著降低了患者血液中AGES、膽固醇水平，使患者血液流變學(xué)異常得以糾正；通過降低患者血液AGES、膽固醇水平，改善患者的血液流變學(xué)異常，從而起到了改善微循環(huán)，有效治療糖尿病視網(wǎng)膜病變。

本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)上述目的：

一種蛭草明目合劑，其由如下材料經(jīng)浸泡、煎煮、合并濾液、濃縮、沉淀過濾、以及添加和灌裝后所得：

進一步的，上述材料均需加8倍水浸泡30分鐘。

進一步的，所述煎煮包括一次煎煮和二次煎煮，所述一次煎煮和所述二次煎煮時間均為30分鐘。

進一步的，所述濃縮為將合并后的濾液濃縮至100ml。

進一步的，所述沉淀過濾包括于濃縮后的過濾液中加入苯甲酸鈉2g并 使其溶解，進而冷藏12小時后進行二次過濾。

進一步的，所述添加和灌裝包括于二次過濾后的濃縮液中加入蒸餾水直至100ml并攪勻后進行灌裝。

本發(fā)明還提供一種蛭草明目合劑制備方法，包括如下步驟：

1)取決明子10-80g、菊花20-85g、牛膝10-35g、水蛭10-40g、密蒙花10-20g、澤瀉10-85g、以及谷精草10-40g經(jīng)浸泡后進行一次煎煮并進行過濾；

2)二次煎煮，并進行過濾；

3)合并步驟1)和步驟2)的濾液并將其濃縮至100ml；

4)于步驟3)中的濃縮液加入苯甲酸鈉2g并使其溶解，進而冷藏12小時后進行二次過濾；

5)于步驟4)中進行二次過濾后的濃縮液添加蒸餾水直至100ml，后進行灌裝。

進一步的，步驟1)中各材料均需加8倍水浸泡30分鐘。

進一步的，所述一次煎煮和所述二次煎煮時間均為30分鐘。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的一種蛭草明目合劑及其制備方法，其能有效改善視力及眼底病情，并顯著降低了患者血液中AGES、膽固醇水平，使患者血液流變學(xué)異常得以糾正；通過降低患者血液AGES、膽固醇水平，改善患者的血液流變學(xué)異常，從而起到了改善微循環(huán)，有效治療糖尿病視網(wǎng)膜病變。

【具體實施方式】

實施例1：

本實施例提供一種蛭草明目合劑制備方法，包括如下步驟：

1)取決明子10-80g、菊花20-85g、牛膝10-35g、水蛭10-40g、密蒙花10-20g、澤瀉10-85g、以及谷精草10-40g經(jīng)浸泡后進行一次煎煮并進行過濾；

2)二次煎煮，并進行過濾；

3)合并步驟1)和步驟2)的濾液并將其濃縮至100ml；

4)于步驟3)中的濃縮液加入苯甲酸鈉2g并使其溶解，進而冷藏12小時后進行二次過濾；

5)于步驟4)中進行二次過濾后的濃縮液添加蒸餾水直至100ml，后進 行灌裝；

步驟1)中各材料均需加8倍水浸泡30分鐘；

一次煎煮和二次煎煮時間均為30分鐘。

其中：

決明子：其為豆科植物決明或小決明的干燥成熟種子，以其有明目之功而名之；決明子味苦、甘、咸，性微寒，入肝、腎、大腸經(jīng)；潤腸通便，降脂明目，治療便秘及高血脂，高血壓。清肝明目，利水通便，有緩瀉作用，降血壓降血脂；

菊花：菊花含有揮發(fā)油，主要成分為菊油環(huán)酮、龍腦、樟腦、以及含有木犀草素以及糖類和氨基酸；其具有能疏散風(fēng)熱，清肝明目，平肝陽，解毒等功效；

牛膝：牛膝的根主要含有三萜皂苷類，又含多種多糖類、蛻皮甾酮、牛膝甾酮、多種氨基酸、以及生物堿有香豆素類；其可以用于治療：腰膝酸痛、下肢痿軟、血滯經(jīng)閉、痛經(jīng)、產(chǎn)后血瘀腹痛、癥瘕、胞衣不下、熱淋、血淋、跌打損傷、癰腫惡瘡、咽喉腫痛；

水蛭：水蛭含有17種氨基酸；尚含蛋白質(zhì)、肝素、抗凝血酶等；還含有人體必需的元素納、鉀、鈣、鎂等，另含有28中微量元素；其干制品炮制后中醫(yī)入藥，具有治療中風(fēng)、高血壓、清瘀、閉經(jīng)、跌打損傷等功效；

密蒙花：密蒙花含有多種苷類；可治目赤腫痛、多淚羞明、青盲翳障、以及風(fēng)弦爛眼等病癥；

澤瀉：澤瀉塊莖含澤瀉醇等，并含膽堿、糖和鉀、鈣、鎂等無機元素；可治小便不利、水腫脹滿、嘔吐、瀉痢、痰飲、腳氣、淋病以及尿血等病癥；

谷精草：谷精草約含有1.5％的酚性成分；具有疏散風(fēng)熱，明目退翳的功效；用于肝經(jīng)風(fēng)熱、目赤腫痛、目生翳障、風(fēng)熱頭痛、夜盲癥等癥。

本實施例的一種蛭草明目合劑制備方法，其制備所得的蛭草明目合劑能有效改善視力及眼底病情，并顯著降低了患者血液中AGES、膽固醇水平，使患者血液流變學(xué)異常得以糾正；通過降低患者血液AGES、膽固醇水平，改善患者的血液流變學(xué)異常，從而起到了改善微循環(huán)，有效治療糖尿病視網(wǎng)膜病變。

實施例2：

對實施例1制備得到的蛭草明目合劑進行鑒別和檢查：

【鑒別】

(1)取樣20ml，加鹽酸調(diào)至pH2～3，以乙醚萃取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加乙醇1ml溶解，作為供試品溶液。另取夏枯草粉末5g，加水煎煮，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲醇-醋酸(7∶2∶2.5∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％三氯化鐵醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍色斑點。

(2)取樣30ml，濃縮，加甲醇30ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，再加鹽酸3ml，置水浴上加熱30min，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加氯仿1ml使溶解，作為供試品溶液。另取決明子粉末1g，加甲醇10ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的橙色熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，斑點變?yōu)榧t色。

【檢查】

樣品檢驗報告書

藥品檢驗報告單

結(jié)論：各項檢查均符合規(guī)定

實施例3：

對實施例1制備得到的蛭草明目合劑進行穩(wěn)定性試驗：

將三批小樣，在室溫條件下留樣6個月，觀察其穩(wěn)定性，現(xiàn)將蛭草明目湯的考察情況報告如下：

一、考察方法：正常室溫留樣觀察法，蛭草明目湯三批樣品(20040901、200403902、20040903)在上市條件下進行穩(wěn)定性考察，放置6個月，分別在1、2、3、6個月考察一次，并按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項下有關(guān)規(guī)定進行考察。

二、考察項目：性狀、鑒別、檢查(相對密度、pH、裝量差異)、微生物限度。

三、考察結(jié)果：見表。

四、結(jié)論：蛭草明目湯在正常室溫條件下放置6個月，各項監(jiān)測指標(biāo)均未見明顯改變，產(chǎn)品質(zhì)量較穩(wěn)定。

樣品名稱：蛭草明目湯

注：表中鑒別項下B代表決明子的薄層鑒別。

實施例4：

對實施例1制備得的蛭草明目合劑進行急性毒性試驗

1)摘要：經(jīng)灌胃給藥進行小鼠急性毒性試驗，因給藥體積及濃度所限，未能測出其灌胃給藥的LD50值，而測得其灌胃給藥的最大耐受量為114.1g(生藥)/kg，相當(dāng)于成人用推薦劑量的68倍，未見任何毒性反應(yīng)。

2)試驗?zāi)康模河^察受試物經(jīng)小鼠一日內(nèi)灌胃給藥最大劑量所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)，并測其最大耐受量，為臨床應(yīng)用提供安全性的實驗依據(jù)。

3)試驗藥物：蛭草明目湯，實驗前制成濃度為2.86g(生藥)/ml。

4)試驗動物：昆明種小鼠40只，體重20±2g，雌雄各半。

5)試驗條件：室溫20±2℃，相對濕度50％～60％，光照12小時。

6)試驗方法和結(jié)果：

一、半數(shù)致死量(LD50)的測定

根據(jù)《新藥審批辦法》規(guī)定，對蛭草明目湯進行灌胃給藥的LD50測定。因限于給藥濃度和給藥體積，未能測出其灌胃給藥的LD50值。

二、最大耐受量(MTD)的測定

健康小鼠40只，按體重隨機分為空白組20只，蛭草明目湯組20只。實驗前禁食12小時，正常飲水，蛭草明目湯組每只小鼠按0.04ml/g的容量灌胃2.86g(生藥)/ml蛭草明目湯藥液；空白組灌胃等體積的蒸餾水，一日內(nèi)灌胃2次，用藥后觀察動物活動、毛發(fā)、飲食、呼吸狀況以及鼻、眼和口腔有無異常分泌物等，實驗第8日稱取體重。實驗結(jié)果見表1、2。

表1 蛭草明目湯對急性小鼠體重影響

表2 蛭草明目湯急性毒性試驗觀察結(jié)果

結(jié)果表明動物用藥后，動物的一般行為活動正常。呼吸、皮膚、毛發(fā)等未見異常。試驗期間未發(fā)生動物死亡。第15天處死動物剖檢，未見肝臟、腎臟、脾、心臟、肺、及胃腸等臟器出現(xiàn)異常。在本試驗條件下，小鼠經(jīng)口灌胃蛭草明目湯的最大耐受量為114.4g(生藥)/kg，相當(dāng)于臨床人用量的68倍時未見明顯的毒性反應(yīng)。

試驗結(jié)論 蛭草明目湯以114.1g(生藥)/kg劑量給小鼠灌胃，動物無明顯急性毒性反應(yīng)。

實施例5：

對實施例1制備得到的蛭草明目合劑進行與適應(yīng)癥或者功能主治有關(guān)的主要藥效學(xué)試驗：

1.材料與方法

1.1研究對象

糖尿病視網(wǎng)膜病變患者：按1985年全國眼底病協(xié)作組制定的DR診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，根據(jù)直接眼底鏡和(或)熒光眼底血管造影(fundus fluore sceinangiography，F(xiàn)FA)結(jié)果診斷為DR的老年2型糖尿病患者。2型糖尿病的診斷均符合1999年WHO與ADA認可的新的糖尿病診斷和分型標(biāo)準(zhǔn)。所有研究對象近期均未應(yīng)用過影響脂代謝及血液流變學(xué)的藥物?；颊呔鶠橛陂L春市某醫(yī)院進行就診的門診或住院患者，共150例，300只眼，男120例，240只眼，女30例，60只眼，年齡63-78歲，病程8個月至20年。根據(jù)有無視網(wǎng)膜新生血管，將DR分為增殖型DR(proliferative diabetic retinopathy，PDR)和非增殖型DR(non-prolirative diabetic retinopathy，NPDR)2型，此實驗中，PDR患者120例，240只眼，男105例，210只眼，女15例，30只眼，年齡65至78歲，平均69.5±10.2，病程1年至20年，平均11.2±5.5，NPDR患者30例，60只眼，男15例，30只眼，女15例，30只眼，年齡63-68歲，平均66.3±6.2，病程8個月至13年，平均8.5±6.4。DR患者使用胰島素注射治療及口服降糖藥物，空腹血糖控制在7-8mmol/L，餐后血糖控制在 11.1mmol/L以內(nèi)。臨床資料及眼科情況療效判定指標(biāo)規(guī)定范圍見表1，表2。

表1 PDR與NPDR患者兩組自然狀況及用藥前視力

注：*代表PDR組與NPDR組病程比較P＜0.05。

表2 患者眼科情況療效判定指標(biāo)范圍

注：以上視力、眼底變化治療具備其一者即認為有效或顯效。

1.2研究方法

患者皮下注射胰島素或口服降糖藥物，口服蛭草明目湯，1/2付，早晚各一次餐后30分鐘后口服。連續(xù)服藥1個月。服藥前及服藥1個月后，分別檢測以下研究相關(guān)指標(biāo)。

1.2.1標(biāo)本采集及檢測項目：所有受檢對象研究期間均未應(yīng)用過影響脂代謝及血液粘稠度的藥物。采血前8-12小時內(nèi)禁食，抽取患者肘靜脈血約8毫升。其中3毫升用于膽固醇(cholesterol，CHOL)、甘油三酯(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、載脂蛋白A1(apolipoprotein A1，APOA1)、載脂蛋白B(apolipoprotein B，APOB)等血脂各項指標(biāo)的檢測。3毫升用于血液流變學(xué)各項指標(biāo)的檢測。另外2毫升血液，于400轉(zhuǎn)/分離心后留取1毫升 血清，用于晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGES)的檢測?；颊叩囊暳z查均在清醒狀態(tài)下，采用國際標(biāo)準(zhǔn)對數(shù)視力表測得。眼底檢查，應(yīng)用直接檢眼鏡或間接檢眼鏡檢查。

1.2.2檢測方法及儀器：脂代謝相關(guān)指標(biāo)的檢測儀器為日本產(chǎn)日立747型全自動生化分析儀，AGES的檢測采用熒光分光光度法，應(yīng)用日本津島生產(chǎn)的RF-540型熒光分光光度計進行檢測(激發(fā)光波長為370nm，發(fā)射熒光波長為440nm)。血液流變學(xué)檢測由北京普利生公司生產(chǎn)的LBY-N6A型自清洗旋轉(zhuǎn)式粘度計完成。

1.2.3統(tǒng)計方法：數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。數(shù)據(jù)分析時，患者用藥前后相關(guān)治療指標(biāo)的比較，采用配對設(shè)計t檢驗。兩組間均數(shù)比較采用配對或成組分析t檢驗。兩組間顯效率的比較采用x2檢驗。

1.3方劑組成及藥物提供：

蛭草明目湯。

2.結(jié)果

2.1一般資料：PDR組與NPDR組之間年齡上無顯著性差異(P＜0.05)；PDR組病程明顯長于NPDR組(P＜0.05)；見表1。

2.2視力及眼底情況：根據(jù)視力及眼底變化分為顯效、有效和無效，見表2。其中有4名患者4只眼，因玻璃體積血保守治療積血無明顯吸收，行玻璃體切割手術(shù)，但術(shù)后視力亦無明顯提高。從表4中可以看出中藥治療患者眼部情況PDR有效率為77.08％，NPDR組為91.67，總有效率達80.00％。

2.3血清AGES水平：用中藥后，血清AGES水平較用藥前顯著下降(P＜0.0005)。PDR組與NPDR組間用藥前后血清AGES水平無顯著性差異(P＞0.05)。見表1。

2.4血脂水平：用藥后血清CHOL水平較服藥前顯著下降(P＜0.01)，TG、LDL-C、HDL-C、APOA1、APOB水平較用藥前無顯著性差異(P＞0.05)。PDR組與NPDR組間用藥前后血脂各項指標(biāo)無顯著性差異(P＞0.05)。見表3。

2.5血液流變學(xué)指標(biāo)：用藥后全血粘度高切、血沉、全血還原粘度高切較用藥前顯著下降(P＜0.05)，紅細胞變性指數(shù)較用藥前項指標(biāo)無顯著性差異(P＞0.05)。見表3。

表3 治療前后兩組患者血清AGES、血脂、血液流變學(xué)指標(biāo)對比

注：*為P＜0.05(患者治療前后比較)

表4 兩組患者治療前后眼部情況對比(眼)

(顯效+有效)顯著升高(P＜0.05)。

結(jié)論：實施例1的一種蛭草明目合劑制備方法制備所得的蛭草明目合劑，其能有效改善視力及眼底病情，并顯著降低了患者血液中AGES、膽固醇水平，使患者血液流變學(xué)異常得以糾正；通過降低患者血液AGES、膽固醇水平，改善患者的血液流變學(xué)異常，從而起到了改善微循環(huán)，有效治療糖尿病視網(wǎng)膜病變。

以上所述的僅是本發(fā)明的一些實施方式。對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。