本發(fā)明涉及化合物Friedolanostanes的新用途，尤其涉及Friedolanostanes在制備治療缺血性腦損傷藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
本發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)riedolanostanes有抗缺血性腦損傷、抗腦缺血/再灌注損傷的藥理作用，具有預(yù)防或者治療缺血性腦損傷的醫(yī)藥用途。
本發(fā)明涉及的化合物Friedolanostanes是一個(gè)2014年發(fā)表(Saranyoo Klaiklay，etal.,Friedolanostanes and xanthones from the twigs of Garcinia hombroniana.Phytochemistry,85(2013)161–166.)的新化合物，該化合物擁有全新的骨架類型，目前的用途僅僅涉及抗炎作用(Saranyoo Klaiklay，et al.,Friedolanostanes and xanthones from the twigs of Garcinia hombroniana.Phytochemistry,85(2013)161–166.)，對于本發(fā)明涉及的Friedolanostanes在制備治療缺血性腦損傷藥物中的用途屬于首次公開，由于屬于全新的結(jié)構(gòu)類型，而且其對于缺血性腦損傷的治療作用活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于缺血性腦損傷的防治顯然具有顯著的進(jìn)步。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有Friedolanostanes研究中未發(fā)現(xiàn)其具有治療缺血性腦損傷的報(bào)道的現(xiàn)狀，提供了Friedolanostanes在制備治療缺血性腦損傷藥物中的應(yīng)用。
所述化合物Friedolanostanes結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示：
本發(fā)明涉及的Friedolanostanes在制備治療缺血性腦損傷藥物中的用途屬于首次公開，由于骨架類型屬于全新的骨架類型，而且其對于缺血性腦損傷的作用強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于治療缺血性腦損傷顯然具有顯著的進(jìn)步。
本發(fā)明人通過具體實(shí)施方式中的實(shí)驗(yàn)證明了Friedolanostanes具有治療或預(yù)防缺血性腦損傷的作用。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明所涉及化合物Friedolanostanes的制備方法參見文獻(xiàn)(Saranyoo Klaiklay，et al.,Friedolanostanes and xanthones from the twigs of Garcinia hombroniana.Phytochemistry,85(2013)161–166.)
以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
實(shí)施例1：本發(fā)明所涉及化合物Friedolanostanes片劑的制備：
取20克化合物Friedolanostanes加入制備片劑的常規(guī)輔料180克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成1000片。
實(shí)施例2：本發(fā)明所涉及化合物Friedolanostanes膠囊劑的制備：
取20克化合物Friedolanostanes加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉180克，混勻，裝膠囊制成1000粒。
下面通過藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步說明其藥物活性。
實(shí)驗(yàn)例1：Friedolanostanes對大鼠局部腦缺血損傷的影響
(1)實(shí)施材料：SD大鼠，雌雄兼用，體重190～210g。陽性對照藥：天保寧，康恩貝集團(tuán)制藥有限公司生產(chǎn)，每片含銀杏葉精提取物40mg。
(2)方法與結(jié)果
1)Friedolanostanes對大鼠中動(dòng)脈血栓(MCAO)模型試驗(yàn)
將60只大鼠隨機(jī)分為六組，即假手術(shù)對照組、MCAO模型組、給藥組3組，天保寧組(24mg/kg)。造模前灌胃給藥，一日一次，共給藥七次，假手術(shù)對照組、MCAT模型組、給予等量的飲用水(1ml/100g)，造模后灌胃給藥一次。大鼠腹腔注射12％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉，大鼠右側(cè)臥位固定，在眼外眥和外耳道連線中點(diǎn)作一弧形切口，長約115cm，夾斷顳骨，用牙科鉆在顴骨與顳鱗骨接合處靠近口側(cè)1mm處做一直徑215mm骨窗，清理殘?jiān)┞洞竽X中動(dòng)脈(位于嗅束及大腦下靜脈之間)。將吸有50％氯化鐵溶液10ul的小片定量濾紙敷在此段大腦中動(dòng)脈上30min后，取下濾紙，用生理鹽水沖洗局部組織，逐層縫合，回籠飼養(yǎng)。假手術(shù)組除不滴加氯化鐵溶液外，其余手術(shù)步驟同模型組。MCAO大鼠神經(jīng)癥狀和梗塞范圍的評定：在手術(shù)不同時(shí)間(6h，24h)，按Bederson等方法并加以改進(jìn)，對動(dòng)物進(jìn)行行為評分。1.提鼠尾離開地面約一尺，觀察前肢屈曲情況。如雙前肢對稱伸向地面，記為0分；如手術(shù)對側(cè)前肢出現(xiàn)肩屈曲、時(shí)屈曲、肩內(nèi)旋或既有腕時(shí)的屈曲又有內(nèi)旋者，記為1分。2.將動(dòng)物置于平滑地面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動(dòng)，檢測阻力。如雙側(cè)阻力對等且有力者記為0分；如向手術(shù)對側(cè)推動(dòng)時(shí)阻力下降者，記為1分。3.將動(dòng)物兩前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察兩前肢的肌張力。雙側(cè)肌張力對等且有力者為0分；手術(shù)對側(cè)前肢肌張力下降記為1分。4.提鼠尾離開地面約一尺，動(dòng)物有不停地向手術(shù)對側(cè)旋轉(zhuǎn)著，記為1分；否則記為0分。根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)評分，滿分為4分，分?jǐn)?shù)越高動(dòng)物的行為障礙越嚴(yán)重。對行為檢測打分值進(jìn)行組間比較，t檢驗(yàn)。結(jié)果見表1。動(dòng)物經(jīng)末次行為評分后，斷頭取腦。去掉嗅球、小腦和低位腦干，剩余部分在4℃下冠狀切成5片。迅速將腦片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％TTC1.5ml，1M K2HPO40.1ml)，37℃避光溫孵30min，再取出置于10％甲醛液中避光保存。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細(xì)挖下稱重，以梗塞組織重量占右側(cè)半腦重量的百分比作為腦梗塞范圍。結(jié)果進(jìn)行組間比較，t檢驗(yàn)，結(jié)果見表2。
表1 Friedolanostanes對MCAO大鼠腦梗塞范圍及神經(jīng)癥狀的影響(n＝10)
注：與模型組相比*p<0.05，**p<0.01。
表2 Friedolanostanes對光化學(xué)誘導(dǎo)腦血栓形成大鼠腦梗塞的影響(n＝10)
注：與模型組相比*p<0.05，**p<0.01。
結(jié)果顯示，除假手術(shù)未見行為異常改變，MCAO模型組大鼠在術(shù)后6h、24h均出現(xiàn)偏癱樣癥狀。給藥組與天保寧組的大鼠在術(shù)后6h、24h其神經(jīng)癥狀均有不同程度的改善(P<0.01，P<0.05)。術(shù)后24h，除假手術(shù)組未見腦組織異常改變外，模型組相比具有顯著差異(P<0.01，P<0.05)。Friedolanostanes可減輕梗塞灶，結(jié)果顯示出一定的量效關(guān)系。
實(shí)驗(yàn)例2：Friedolanostanes對大鼠局部腦缺血/再灌注損傷的影響
(1)實(shí)驗(yàn)材料：SD大鼠，雌雄兼用，體重190～210g。MDA，SOD，蛋白定量(考馬斯亮藍(lán))試劑盒(南京建成生物工程研究所)。
(2)方法與結(jié)果
1)實(shí)驗(yàn)方法：120只大鼠隨機(jī)分為5組，即假手術(shù)組、模型組、3個(gè)給藥組，每組25只。除假手術(shù)組不插線外，其余4組造模(MCAO)。給藥組各劑量組ig每天1次，連續(xù)13d。術(shù)前1h ig再給藥1次。6％水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉，頸部正中切開，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)、頸外動(dòng)脈(ECA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)。結(jié)扎頸總動(dòng)脈近心端、頸外動(dòng)脈起始端后，在頸總動(dòng)脈處剪一“V”形小口，沿頸總動(dòng)脈插入線栓(線栓采用直徑為0.235mm的魚線，頭端燒成球狀，并于距線球18.5mm處作標(biāo)記)經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈向顱內(nèi)插至大腦中動(dòng)脈分支叉處，插入深度為18～20mm，將線與頸內(nèi)動(dòng)脈一起結(jié)扎。術(shù)中維持體溫(37±015)℃。在灌注時(shí)外拉線使球端回至ECA，拔除插線，結(jié)扎ECA即可。假手術(shù)組除不插線外，其余步驟同上。大腦中動(dòng)脈栓塞后2h恢復(fù)血供，神經(jīng)行為學(xué)評分參照ZeaLonga5分制標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)后出現(xiàn)左前肢屈曲，行走時(shí)向左側(cè)轉(zhuǎn)圈即視為造模成功，然后保溫常規(guī)飼養(yǎng)，至24h斷頭處死取材。實(shí)驗(yàn)過程中，因麻醉意外、MCAO手術(shù)失敗、造模不成功及24h內(nèi)死亡的均棄去不用。
腦組織含水量的測定：大鼠造模24h后斷頭取腦，稱量兩側(cè)半腦濕重。再置于烘箱中，100℃烘烤24h至恒重，精確稱量干重，計(jì)算含水量。腦組織含水量＝(濕重-干重)/濕重×100％。
腦梗塞體積測定：斷頭取腦，將大腦作連續(xù)2mm冠狀切片，共5片，然后將腦片放入2％TTC磷酸鹽緩沖液中37℃恒溫孵育30min，正常腦組織染為紅色，梗死灶呈白死。濾紙吸去表面液體后用刀片小心刻取未著色部分的質(zhì)量百分比，以此反應(yīng)梗死體積比。腦組織勻漿SOD活力、MDA含量的檢測：右側(cè)半腦稱重后按1：10加入冰生理鹽水制成勻漿，參照SOD、MDA試劑盒說明書，檢測腦組織中SOD、MDA含量。應(yīng)用SPSS 13.0 for windows軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理；計(jì)量數(shù)據(jù)以x±s表示，各組間比較采用單因素方差分析。
2)結(jié)果
腦組織含水量：左腦組織含水量各組間相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型組右腦組織含水量明顯高于各組(P<0.05)，高于假手術(shù)組(P<0.05)，給藥組各劑量組可降低模型腦組織含水量(P<0.05)(表3)。
表3 Friedolanostanes對腦組織含水量、梗死體積、SOD、MDA含量的影響(n＝8)
與模型組相比*p<0.05,**p<0.01
腦梗塞體積：模型組腦組織腦梗塞體積高于各組(P<0.05)，給藥組各劑量組可降低模型腦組織梗死體積(P<0.05)。
結(jié)論：Friedolanostanes可減少腦缺血后腦組織水腫，縮小梗死體積，提高SOD活性，降低MDA含量，減輕自由基反應(yīng)對腦組織的損害，對缺血腦組織具有明顯的保護(hù)作用。Friedolanostanes可以用于制備治療缺血性腦損傷藥物。