本發(fā)明涉及藍(lán)玉簪龍膽有效部位及其制備方法和應(yīng)用，屬于植物提取物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

藍(lán)玉簪龍膽Corydalis melanochlora Maxim.為罌粟科紫堇屬植物， 無毛草本 [參見：中國植物志.第三十二卷.北京：科學(xué)出版社，1999：266 ]。別名又稱“麥強(qiáng)日、爾瓦、銀周色爾瓦”，分布于甘肅（肅南、天祝、岷縣、迭部）、青海東部（祁連、大通、貴南、澤庫、同德、河南）、四川等地， 生于海拔（2850~5500）米的高山草甸或流石灘。藍(lán)玉簪龍膽是一種常用中藥，為歷代本草記載， 清熱利膽、清熱解毒。治心血管系統(tǒng)的疾病、敗血癥，外用于創(chuàng)傷感染，治少陽膽經(jīng)有熱、口干苦、兩脅不舒、心煩、熱毒病證，如瘡癰腫毒、創(chuàng)傷感染等。 藍(lán)玉簪龍膽植物主要含有生物堿類、多糖、黃酮化合物等多種化學(xué)成分，主要有清熱利膽、清熱解毒。治心血管系統(tǒng)的疾病、敗血癥，外用于創(chuàng)傷感染 ，治少陽膽經(jīng)有熱、口干苦、兩脅不舒、心煩、熱毒病證，如瘡癰腫毒、創(chuàng)傷感染。

癌癥是危害人類健康的重大疾病之一，惡性癌細(xì)胞的防治已成為醫(yī)學(xué)界所關(guān)注的重要課題。癌癥作為目前人類死亡的首要原因，對其治療仍局限于癌癥疾病的多樣性及反復(fù)性。然而，盡管不同的癌癥的致癌原因可能不盡相同，但其組織觀察均表現(xiàn)出相似的細(xì)胞周期紊亂以及迅速不可控制的細(xì)胞生長及轉(zhuǎn)移。因此，對參與細(xì)胞周期調(diào)控的一些家族蛋白的研究在推動癌癥治療中成為重要因素。其中，細(xì)胞分裂周期激酶（Cdk/cyclins）作為真核細(xì)胞周期的主要調(diào)控蛋白，負(fù)責(zé)推動相應(yīng)階段的細(xì)胞分裂。CDC25 磷酸蛋白酶（CDC25 phosphatases）作為細(xì)胞分裂周期蛋白激酶家族（Cdk/cyclins）的活化蛋白酶，在真核細(xì)胞的分裂周期中起了十分重要的調(diào)節(jié)作用。目前臨床研究表明，這一家族的蛋白酶在多種癌癥組織中均表現(xiàn)出過量的表達(dá)，且往往與較差的癌癥早期預(yù)測有關(guān)，這些均使CDC25磷酸蛋白酶成為具有巨大潛力的癌癥治療藥物靶標(biāo)。在過去的幾十年中，許多關(guān)于CDC25磷酸蛋白酶家族的酶學(xué)研究為相關(guān)抑制劑及癌癥藥物的研發(fā)提供了相當(dāng)重要的信息。

現(xiàn)有技術(shù)中，藍(lán)玉簪龍膽植物主要含有多酚類、黃酮、三萜酸、鞣質(zhì)化合物等多種化學(xué)成分，主要有利水滲濕，理氣消脹，活血調(diào)經(jīng)之功，全草調(diào)經(jīng)活血，消腫止痛，治療月經(jīng)不調(diào)，骨折，關(guān)節(jié)扭傷。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供藍(lán)玉簪龍膽有效部位及其制備方法和應(yīng)用，該藍(lán)玉簪龍膽有效部位能有效抑制CDC25A和CDC25B酶的活性，用于制備抑制CDC25酶藥物，具有較好的抗腫瘤作用。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：該藍(lán)玉簪龍膽有效部位，其特征在于：選自藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位、藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位中的一種或兩種以上的任意質(zhì)量比混合物。

該藍(lán)玉簪龍膽有效部位的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：將藍(lán)玉簪龍膽全草粉碎，加入質(zhì)量百分濃度65%~95%乙醇溶液提取，將所得提取液濃縮、干燥，得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，分別揮發(fā)去除溶劑后得藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位和藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位；將萃取后的浸膏分散液濃縮、干燥，得藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位。

優(yōu)選的，所述的提取為超聲波輔助回流提??；超聲波輔助回流提取的具體操作為：將粉碎后的藍(lán)玉簪龍膽全草加入質(zhì)量百分濃度65%~95%乙醇溶液超聲波提取1~3小時，過濾并回流提取1~3次，合并提取液，即得。

該藍(lán)玉簪龍膽有效部位的應(yīng)用，其特征在于：在制備抑制CDC25酶藥物方面的應(yīng)用。

所述抑制CDC25酶藥物是藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位、藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位中的一種或兩種以上的任意質(zhì)量比混合物，與藥用輔料混合制成的口服制劑或注射制劑。

所述的注射制劑為脂質(zhì)體注射劑、納米粒注射劑或微球注射劑。

所述的口服制劑為散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑或溶液劑。

申請人對于本發(fā)明說明如下：現(xiàn)有技術(shù)中，藍(lán)玉簪龍膽常規(guī)用途為清熱利膽、解毒的功效，未見其有抗腫瘤功效的相關(guān)報道。申請人通過大量研究發(fā)現(xiàn)：藍(lán)玉簪龍膽中的部分提取物還具有抗腫瘤的作用，但是其功效不明顯，不能確定其具體的有效部位。因此通過怎樣的溶劑、采用怎樣制備方法，才能獲得抑制CDC25酶活性效果最好的有效部位，是必須要解決的問題。

制備方法中，加入質(zhì)量百分濃度65%~95%乙醇溶液提取可以為浸提、回流提取或所述的超聲波輔助回流提取。優(yōu)選采用超聲波輔助回流提取，該方法具有較高的收率和提取效率。具體的，超聲波提取后，過濾獲得超聲波提取液和濾渣，向?yàn)V渣中加質(zhì)量百分比濃度65%~95%乙醇溶液回流提取1~3次，合并超聲波提取液和回流提取所得提取液。回流提取1~3次是指：向回流加熱裝置中加入粉碎后的藥材和乙醇溶液，加熱、回流提取，放冷過濾得一次提取液和藥渣；向藥渣中加入乙醇溶液，加熱、進(jìn)行第二次回流提取，放冷過濾得二次提取液和藥渣；合并多次提取液，即得回流提取的提取液。優(yōu)選的，每次回流提取0.5~2小時；每次回流提取時所加乙醇溶液沒過藥材表面1cm~2cm?；亓魈崛〉臏囟葹橐掖蓟亓魈崛〉某Ｒ?guī)溫度，需高于乙醇的沸點(diǎn)，優(yōu)選為80℃~100℃。

制備方法中，浸膏為粗提取物，采用不同的溶劑萃取浸膏分散液，指的是依次將石油醚加入浸膏分散液萃取分離獲得石油醚萃取液、將乙酸乙酯加入浸膏分散液萃取分離獲得乙酸乙酯萃取液、將正丁醇加入浸膏分散液萃取分離獲得正丁醇萃取液；取乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液分別揮發(fā)去除溶劑后，所得即為藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位和藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位；將萃取后剩余的浸膏分散液（溶劑為水），揮發(fā)去除溶劑即得藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位。水相萃取部位也可以稱作水相萃取物，水相萃取部位易溶于水；而相對的，石油醚、乙酸乙酯和正丁醇為有機(jī)相。其中，藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位主要含有游離脂肪酸類化合物；藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位主要含有游離生物堿、黃酮類化合物；藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位主要含有苷類和酚類化合物；矮紫堇水相萃取部位主要含有多糖和有機(jī)酸類化合物。揮發(fā)去除溶劑可以采用常壓加熱使溶劑（石油醚、乙酸乙酯和正丁醇）揮發(fā)。優(yōu)選的，揮發(fā)去除溶劑采用減壓濃縮，該方法效率高，并且能避免熱敏性成分因高溫喪失藥性。

優(yōu)選的劑型為口服制劑或注射制劑?？诜苿┖妥⑸鋭樽罴呀o藥途徑，此處所述口服制劑為經(jīng)腸胃道給藥制劑，優(yōu)選的，口服制劑為緩釋、控釋型口服制劑。也可以為非腸胃給藥的其他，如呼吸道給藥制劑（噴霧劑、氣霧劑、粉霧劑）；皮膚給藥制劑（外用溶液劑、洗劑、搽劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、貼劑）；膜給藥制劑（滴眼劑、 滴鼻劑、眼用軟膏、含漱劑、舌下片劑）；腔道給藥制劑（栓劑）。注射制劑可以為常規(guī)注射制劑。根據(jù)藥物傳遞系統(tǒng)進(jìn)行分類，優(yōu)選的，本發(fā)明的注射制劑為脂質(zhì)體注射劑、納米粒注射劑或微球注射劑；其他的，本發(fā)明的注射劑還可以為微囊注射劑、聚合物膠束注射劑、微乳注射劑、亞微乳注射劑、亞微粒注射劑或凝膠注射劑，以上藥物傳遞系統(tǒng)的注射劑能延長藥物載體在體內(nèi)的循環(huán)時間、延長載藥微粒在吸收部位的停留時間、控制藥物在釋放初期的突釋效應(yīng)。藥用輔料包括藥物載體、以及溶劑、增溶劑、助溶劑、乳化劑、助懸劑、潤濕劑、澄清劑、反絮凝劑、矯味劑、著色劑、防腐劑、化學(xué)滅菌劑、吸附劑、助濾劑、抗氧劑、pH調(diào)節(jié)劑、等滲調(diào)節(jié)劑、稀釋劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、抗粘著劑、緩釋劑、控釋劑、包衣材料、成膜材料、膠囊材料中的一種或多種。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的藍(lán)玉簪龍膽有效部位及其制備方法和應(yīng)用所具有的有益效果是：

1、該藍(lán)玉簪龍膽有效部位能有效抑制CDC25A和CDC25B酶的活性，用于制備抑制CDC25酶藥物，具有較好的抗腫瘤作用。申請人經(jīng)大量研究確定現(xiàn)有技術(shù)中具有清熱解毒之功的藍(lán)玉簪龍膽，還具有抗腫瘤的功效。并且申請人首次在CDC25A和CDC25B酶上進(jìn)行藥效篩選，通過大量研究確定藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位、藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位中的一種或兩種以上的任意質(zhì)量比混合物均具有較好的抑制CDC25A酶和CDC25B酶活性，適宜開發(fā)成抗腫瘤藏藥新藥。進(jìn)一步的，申請人研究發(fā)現(xiàn)藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位和藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位CDC25A酶存活率5%~8.3%、CDC25B酶存活率36.3%~48.2%，對于CDC25A酶的抑制效果明顯優(yōu)于對CDC25B酶的抑制效果，適用于與其他抑制CDC25B酶效果較好的提取物聯(lián)用，制成復(fù)合藥劑使用。

2、該藍(lán)玉簪龍膽有效部位的制備方法提取方便，提取效率高。制備方法中，申請人設(shè)計加入質(zhì)量百分濃度65%~95%乙醇溶液進(jìn)行超聲波輔助回流提取，提高了提取效率；依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，采用以上溶劑萃取順序所得的藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位、藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位均具有較好的抑制CDC25酶的效果。

3、本發(fā)明拓展了抑制CDC25A和CDC25B酶藥物的原料渠道，擴(kuò)大了藍(lán)玉簪龍膽的用途，使藍(lán)玉簪龍膽發(fā)展成為抑制CDC25A和CDC25B酶藥物的新原料，可顯著提高藍(lán)玉簪龍膽的附加值。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1~3是本發(fā)明的藍(lán)玉簪龍膽有效部位及其制備方法的具體實(shí)施方式，其中實(shí)施例1為最佳實(shí)施例。

實(shí)施例1

制備方法，包括下述步驟：將藍(lán)玉簪龍膽全草粉碎，采用質(zhì)量百分濃度75%~85%乙醇溶液超聲波提取1小時，過濾得超聲波提取液和濾渣，濾渣加入質(zhì)量百分比濃度75%~85%乙醇溶液回流提取3次，每次0.5~1小時，得回流提取液，合并聲波提取液和回流提取液、濃縮干燥得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，揮發(fā)去除溶劑后得到藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位；將浸膏分散液萃取后剩余液體濃縮、干燥，得藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位。

實(shí)施例2

制備方法，包括下述步驟：將藍(lán)玉簪龍膽全草粉碎，采用質(zhì)量百分濃度85%~95%乙醇溶液超聲波提取3小時，過濾得超聲波提取液和濾渣，濾渣加入質(zhì)量百分比濃度85%~95%乙醇溶液回流提取2次，每次1.5~2小時，得回流提取液，合并聲波提取液和回流提取液、濃縮干燥得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，揮發(fā)去除溶劑后得到藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位；將浸膏分散液萃取后剩余液體濃縮、干燥，得藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位。

實(shí)施例3

制備方法，包括下述步驟：將藍(lán)玉簪龍膽全草粉碎，采用質(zhì)量百分濃度65%~75%乙醇溶液超聲波提取2小時，過濾得超聲波提取液和濾渣，濾渣加入質(zhì)量百分比濃度65%~75%乙醇溶液回流提取2次，每次1~1.5小時，得回流提取液，合并聲波提取液和回流提取液、濃縮干燥得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，揮發(fā)去除溶劑后得到藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位；將浸膏分散液萃取后剩余液體濃縮、干燥，得藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位。

性能測試

分別各取0.4mg干燥后的藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位、藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位，各自溶解于100μL的二甲基亞砜（DMSO）中形成DMSO溶液，超聲5分鐘。再分別取1μL溶解樣品的DMSO溶液，分別加入99μL的Tris-HCl緩沖液，分別得到用于檢測藍(lán)玉簪龍膽抑制CDC25酶的藍(lán)玉簪龍膽石油醚有效提取物、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯有效提取物、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇有效提取物和藍(lán)玉簪龍膽水溶性有效提取物。緩沖液的配方為：50mM/L的Tris-HCl、0.137mM/L的NaCl、2.7mM/L的KCl、1mM/L的 MgCl₂、質(zhì)量百分比0.01%吐溫20，緩沖液pH 8.4。

一、抑制CDC25A和CDC25B酶實(shí)驗(yàn)。

以實(shí)施例1得到的藍(lán)玉簪龍膽石油醚有效提取物、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯有效提取物、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇有效提取物和藍(lán)玉簪龍膽水溶性有效提取物作為測試物，檢測藍(lán)玉簪龍膽不同有效部位抑制CDC25A和CDC25B酶的活性。其方法是：分別取2.7μL 330μmol/L FDP、1.8μL 100μmol/L測試物、2μL 0.1μmol/L CDC25A/CDC25B、11.5μL FDP buffer組成18μL體系的實(shí)驗(yàn)組；然后取2.7μL 330μmol/L FDP、2μL 0.1μmol/L CDC25A/CDC25B、13.3μL FDP buffer組成18μL體系的對照組1；再取2.7μL 330μmol/L FDP、1.8μL 100μmol/L測試物、13.5μL FDP buffer組成18μL體系的對照組2；將需要加CDC25A/CDC25B酶的體系于37℃條件下孵育60min，之后加酶，于同樣條件下反應(yīng)60min，待反應(yīng)完全，檢測在485nm激發(fā)光作用下反應(yīng)產(chǎn)物于520 nm處的熒光強(qiáng)度。對照組在不加入測試物在同樣條件下進(jìn)行：酶存活效率（%）= 實(shí)驗(yàn)組測定值/對照組1測定值×100%；其中酶存活效率越低，說明測試樣品對組蛋白磷酸化酶CDC25A/CDC25B的抑制效果越強(qiáng)。

表1 藍(lán)玉簪龍膽有效部位抑制CDC25A和CDC25B的活性測試結(jié)果

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通過表1可以看出：藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位、藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位對于CDC25A酶CDC25B酶均存在較好的抑制效果。

二、抗腫瘤活性測試。

利用MTT法測定藍(lán)玉簪龍膽有效部位對人腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。取實(shí)施例1所得藍(lán)玉簪龍膽各部位（作為受試化合物）適量，DMSO溶解后，利用MTT法分別測定對人結(jié)腸癌HCT-8、人肝癌Bel-7402細(xì)胞、人胃癌BGC803細(xì)胞、人肺腺癌A549細(xì)胞和人卵巢癌A2780細(xì)胞生長的抑制率。

實(shí)驗(yàn)方法：將對數(shù)生長期的細(xì)胞，用0.25%胰酶-EDTA消化后，配制成一定濃度的單細(xì)胞懸液，根據(jù)細(xì)胞生長速度的差異，按800~2000個/孔接種于96孔板，每孔加入細(xì)胞懸液100μL。24h后，加入含不同濃度受試化合物及相應(yīng)溶劑對照的新鮮培養(yǎng)基，每孔加100μL（DMSO終濃度<0.1%），每種受試化合物設(shè)5~7個劑量組，每組至少設(shè)3個平行孔，于37℃繼續(xù)培養(yǎng)72h后，棄上清液，每孔加入100μL新鮮配制的含0.5mg/mL MTT的無血清培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄上清液后，每孔加入200μL DMSO溶解MTT甲簪沉淀，微型振蕩器振蕩混勻，用酶標(biāo)儀在參考波長450nm，檢測波長570nm條件下測定光密度值(OD)，以溶劑對照處理的腫瘤細(xì)胞為對照組，用以下公式計算受試化合物對腫瘤細(xì)胞的抑制率，并按中效方程計算IC₅₀：抑制率=（對照組平均OD值－給藥組平均OD值）÷對照組平均OD值×100%。將制備方法中的浸膏、以及所得的藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位、藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位進(jìn)行體外腫瘤細(xì)胞毒活性篩選，結(jié)果見表2。

表2 體外腫瘤細(xì)胞毒活性篩選結(jié)果

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注：1）、HCT-8為人結(jié)腸癌細(xì)胞，Bel-7402為人肝癌細(xì)胞，BGC823為人胃癌細(xì)胞，A549為人肺癌細(xì)胞，A2780為人卵巢癌細(xì)胞。2）、>50表明不具有抗細(xì)胞毒活性。通過表2可看出：藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位、藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位確實(shí)有較好的抗腫瘤的效果。

三、體外S₁₈₀荷瘤小鼠抗腫瘤實(shí)驗(yàn)。

1、實(shí)施例1各部位的S₁₈₀荷瘤小鼠抗腫瘤實(shí)驗(yàn)方法如下：

a）5~6周齡昆明小鼠，隨機(jī)選鼠分組，每組30只，每組雌雄各半（分籠飼養(yǎng)）；分組名稱為：空白對照組，環(huán)磷酰胺組，給藥組；給藥組包括：藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位低、中、高劑量組，藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位低、中、高劑量組，藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位低、中、高劑量組，藍(lán)玉簪龍膽水相部位低、中、高劑量組；對每只小鼠進(jìn)行皮膚消毒；

b）于右前肢皮下接種S₁₈₀瘤液0.2ml（S₁₈₀瘤細(xì)胞數(shù)在2.0×10⁶~2.2×10⁶范圍內(nèi)）；

c）步驟b）接種24小時后給藥；空白對照組灌胃給藥10mL/kg注射用生理鹽水；環(huán)磷酰胺組腹腔注射環(huán)磷酰胺20mg/kg；給藥組采用灌胃給藥實(shí)施例1制得的藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位、藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位、藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位和藍(lán)玉簪龍膽水相部位；首次給藥后，隔日稱小鼠首次體重；每組每天給藥1次，每次給藥劑量詳見下表，連續(xù)給藥14天；

d）末次給藥1小時后，處死小鼠，稱小鼠末次體重，剝瘤塊稱重，計算抑瘤率。抑瘤率=（空白對照組平均瘤重－給藥組平均瘤重）÷空白對照組平均瘤重×100%，將抑瘤率計算結(jié)果錄入表3。

表3 實(shí)施例1各部位對小鼠S₁₈₀實(shí)體瘤的影響

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2、實(shí)施例2各部位的S₁₈₀荷瘤小鼠方法同實(shí)施例1，數(shù)據(jù)錄入表4。

表4 實(shí)施例2各部位對小鼠S₁₈₀實(shí)體瘤的影響

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3、實(shí)施例3各部位的S₁₈₀荷瘤小鼠抗腫瘤實(shí)驗(yàn)的方法同實(shí)施例1，數(shù)據(jù)錄入表5。

表5實(shí)施例3各部位對小鼠S₁₈₀實(shí)體瘤的影響

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經(jīng)申請人統(tǒng)計：給藥組與空白對照組相比，小鼠體重變化無顯著性差異（P>0.05）。表3~5中：S₁₈₀是指小鼠腹水瘤細(xì)胞，表3~5中抑瘤率數(shù)值越大表示抗腫瘤效果越好。由表3~5可以看出：首先，實(shí)施例1~3均有較好的抗腫瘤效果，實(shí)施例1~3各部位的抗腫瘤效果無明顯差別。其次，與空白對照組相比，藍(lán)玉簪龍膽石油醚部位高劑量組，藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位中、高劑量組，藍(lán)玉簪龍膽正丁醇中、高劑量組，藍(lán)玉簪龍膽水相部位中、高劑量組，環(huán)磷酰胺化療組，均可顯著抑制S₁₈₀腫瘤的生長。

實(shí)施例4

將藍(lán)玉簪龍膽有效部位制備為片劑，采用如下步驟：藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位300mg和淀粉100mg混勻，加質(zhì)量百分比濃度10%的淀粉糊40mg制成軟材，過篩得濕顆粒，干燥得干顆粒，整粒，加硬脂酸鎂4 mg混勻、壓片，即得。

實(shí)施例5

沖劑的制備方法：按重量份配比將藍(lán)玉簪龍膽水相萃取部位5份、蔗糖1份、糊精3份混勻，加入適量質(zhì)量百分比95%乙醇溶液2~5份，邊加邊攪拌，制得軟材，將軟材干燥、過16目篩，分裝即得。

實(shí)施例6

微丸膠囊由以下重量份原料組成：藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位30份、卵磷脂5份、牛黃膽酸鈉5份、微晶纖維素30份；

微丸膠囊的制備方法：按配比將藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位、卵磷脂、牛黃膽酸鈉和微晶纖維素混均，倒入乙醇水溶液攪勻獲得軟材，將軟材倒入擠出機(jī)中擠出，經(jīng)滾圓獲得顆粒，擠出轉(zhuǎn)速250r/min，滾圓轉(zhuǎn)速800r/min，滾圓時間20min，干燥、過24~30目篩獲得微丸，將微丸灌裝入膠囊殼內(nèi)，即得。

實(shí)施例7

脂質(zhì)體注射劑的制備方法：1）在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將50g膽固醇琥珀酸酯、250g二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、40g大豆卵磷脂、50g泊洛沙姆-188、和10g藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位溶解于1500ml體積比為1:1的乙醇和正丁醇的有機(jī)溶劑中，攪拌使其溶解獲得混懸液；將混懸液通過減壓濃縮揮發(fā)去除有機(jī)溶劑，獲得磷脂膜；

2）在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向磷脂膜中加入8000ml pH為6.8的磷酸鹽緩沖溶液，攪拌，使磷脂膜洗脫并充分溶脹水合，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，得藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位的脂質(zhì)體；

3）在無菌條件下，向藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位的脂質(zhì)體中，加入100g海藻糖，攪拌均勻，超聲波處理0.5~1小時，加注射用水定容，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，灌裝，即得藍(lán)玉簪龍膽正丁醇部位的脂質(zhì)體注射劑。

實(shí)施例8

納米粒注射劑的制備方法：取25g藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位和100g泊洛沙姆407用3000ml 無水乙醇溶解，加入30ml 1mol/L氯化鋅的乙醇溶液，攪拌混合，超聲波處理0.5~1小時使其溶解，獲得混合液；將混合液減壓濃縮揮發(fā)去除溶劑，放入-20℃冰箱冷凍2小時；取出加注射用水定容，超聲波處理0.5~1小時，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，灌裝，即得藍(lán)玉簪龍膽乙酸乙酯部位的納米粒注射劑。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。