技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及含有5-氨基乙酰丙酸(下文中也稱為“ALA”)或其衍生物或者它們的鹽與鐵化合物等含金屬化合物的移植器官成活促進(jìn)劑(enhancer of survival of transplanted organ)，還涉及包含該移植器官成活促進(jìn)劑的從供體摘出后的器官的保存劑等。

背景技術(shù)：

器官移植中，原本用于保護(hù)生物體抵擋細(xì)菌、病毒等的免疫機構(gòu)由于將移植器官識別為“異物”從而產(chǎn)生排斥反應(yīng)?？梢院敛贿^分地說，對移植醫(yī)療而言，其成功與否取決于排斥反應(yīng)能被控制為何種程度。作為調(diào)節(jié)排斥反應(yīng)的方法，有局部控制移植器官的排斥反應(yīng)的方法和調(diào)節(jié)全身的排斥應(yīng)答其自身的方法，現(xiàn)在主要進(jìn)行的方法為后者，已知給予環(huán)孢霉素(cyclosporin)、他克莫司(tacrolimus)等鈣調(diào)磷酸酶抑制劑或類固醇類藥物能抑制移植后的排除反應(yīng)，因此它們被廣泛使用，但副作用也較多。

近年來，為了減少給予的藥物量，作為人工誘導(dǎo)免疫耐受的方法，開發(fā)了從供體·受體提取T細(xì)胞、與特殊的抗體混合培養(yǎng)再返回至體內(nèi)的方法。例如，提出了下述這些：在抗CD80抗體或其抗原結(jié)合性片段與CD86抗體或其抗原結(jié)合性片段存在下、通過用腎臟的供體的同種抗原刺激從經(jīng)受腎移植的受體采集的T細(xì)胞而得到的、含有上述來源于受體的T細(xì)胞作為有效成分的腎移植排斥反應(yīng)抑制劑(例如參見專利文獻(xiàn)1)；用于使移植物抗宿主病的影響降低的方法，所述方法包括從人供體提取包含含有CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的末梢血單核細(xì)胞的試樣的步驟、通過濃縮所述試樣中的所述CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞而生成濃縮CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的步驟、使所述經(jīng)濃縮的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的組增殖的步驟、和將所述經(jīng)增殖的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的一部分給予人而治療移植物抗宿主病的步驟(例如參見專利文獻(xiàn)2)；誘導(dǎo)受體細(xì)胞以降低移植排斥反應(yīng)的方法，所述方法包括a)從受體及供體分離末梢血單核細(xì)胞、b)將供體及受體的細(xì)胞在體外混合、c)用調(diào)控性組合物處理該細(xì)胞、d)增加該細(xì)胞、和e)將該細(xì)胞導(dǎo)入該受體(例如參見專利文獻(xiàn)3)。

另外，已知包含類黃酮的器官保存液(例如參見專利文獻(xiàn)4)、含有1,5-脫水果糖或其衍生物的器官保存劑(例如參見專利文獻(xiàn)5)、含有富勒烯類的器官保存劑(例如參見專利文獻(xiàn)6)、含有肝細(xì)胞增殖因子(HGF)的器官保存液(例如參見專利文獻(xiàn)7)、含有卵磷脂化的超氧化物歧化酶的器官保存液(例如參見專利文獻(xiàn)8)、含有葡糖基-L-抗壞血酸或其鹽的器官保存液(例如參見專利文獻(xiàn)9)等。

另一方面，ALA作為動物、植物、菌類中廣泛存在的四吡咯生物合成途徑的中間體而為人所知，其通常利用5-氨基乙酰丙酸的合成酶從琥珀酰CoA和甘氨酸被生物合成。也開發(fā)了使用ALA的光線力學(xué)療法或光動力學(xué)治療(下文中也稱為“ALA-PDT”)，其作為侵襲性較低、能保持QOL的治療法而被關(guān)注，還報道了使用ALA等的腫瘤診斷·治療劑等。另外，已知ALA作為成人病、癌癥、男性不育的預(yù)防改善劑·治療劑而有用(例如參見專利文獻(xiàn)10～12)。

專利文獻(xiàn)1：日本特開2007-131598號公報

專利文獻(xiàn)2：日本特表2011-505378號公報

專利文獻(xiàn)3：日本特表2003-530101號公報

專利文獻(xiàn)4：日本特開2009-221128號公報

專利文獻(xiàn)5：日本特開2008-115089號公報

專利文獻(xiàn)6：日本特開2006-316000號公報

專利文獻(xiàn)7：日本特開2005-306749號公報

專利文獻(xiàn)8：日本特開2002-60301號公報

專利文獻(xiàn)9：日本特開2000-191401號公報

專利文獻(xiàn)10：國際公開WO2010/050179

專利文獻(xiàn)11：日本特開2011-16753號公報

專利文獻(xiàn)12：國際公開WO2009/139156

技術(shù)實現(xiàn)要素：

排斥反應(yīng)是移植后的移植器官功能廢棄的最大原因，為了防止排斥反應(yīng)，必須要長期服用免疫抑制劑。但是，長期給予免疫抑制劑，有可能引起感染癥、腎損傷、糖尿病、淋巴組織增生、惡性腫瘤、心血管類并發(fā)癥等嚴(yán)重副作用，需要嚴(yán)格的管理。上述提取T細(xì)胞、與特殊的抗體混合培養(yǎng)再返回至體內(nèi)的方法等人工的免疫耐受誘導(dǎo)方法雖然有可能減少免疫抑制劑的用量，但細(xì)胞培養(yǎng)時間需要數(shù)周、步驟繁雜，并且可見脫毛等副作用，因此未能得到普及。另外實驗性地還在開發(fā)各種耐受誘導(dǎo)系統(tǒng)，但是基本上都沒有被臨床應(yīng)用。

本發(fā)明的課題是提供安全、且與以往的藥物作用機制不同、能夠促進(jìn)器官移植中的移植器官的成活的移植器官成活促進(jìn)劑以及能維持從供體摘出后的器官的新鮮度的器官保存液等。

本發(fā)明的發(fā)明人等針對ALA在醫(yī)療中的應(yīng)用持續(xù)進(jìn)行了各種各樣的研究，在研究器官移植的排斥反應(yīng)的抑制時，發(fā)現(xiàn)ALA具有移植器官的成活促進(jìn)作用。此外，偶然發(fā)現(xiàn)，與以往的器官移植免疫抑制劑僅給予受體不同，通過將ALA單獨或?qū)⒑蠥LA類與鐵化合物的組合物在移植手術(shù)前給予供體、并且向移植了從所述供體摘出的器官的受體也給予，移植器官的成活率顯著上升。并且還發(fā)現(xiàn)，在將所述器官移植后的受體的脾細(xì)胞給予其它受體的同時移植了從供體摘出的器官的情況下，即使不給予ALA，也將產(chǎn)生促進(jìn)移植器官成活的所謂二次免疫耐受誘導(dǎo)作用。另外還發(fā)現(xiàn)ALA作為從供體摘出后的器官的保存劑有效。

此外還發(fā)現(xiàn)，鐵化合物與ALA協(xié)作，能增強移植器官的成活促進(jìn)作用、二次免疫耐受誘導(dǎo)作用、從供體摘出后的器官的新鮮度保持作用。鐵化合物充分存在的情況下或另外攝取鐵化合物的情況下，有時不存在單獨給予ALA時的問題。對紅肉攝入量比其他各國少的日本人而言，礦物質(zhì)中的鐵經(jīng)常不足。因此，在采用日本人進(jìn)行的部分實施例中同時添加鐵，但以貯藏鐵充足的人為對象的情況則沒有必要。此外，雖然ALA被代謝為卟啉、在光照射下顯示PDT、PDD活性已廣為人知，但對本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑而言光不是必需的。

本發(fā)明的發(fā)明人等進(jìn)而對給予方法和給予量進(jìn)行了深入研究，確立了以ALA類單獨或者以ALA類和鐵化合物作為有效成分的移植器官成活促進(jìn)劑，從而完成了本發(fā)明。

即，本發(fā)明涉及：

(1)移植器官成活促進(jìn)劑，其含有下式(I)表示的化合物或其鹽，

式中，R¹表示氫原子或?；?，R²表示氫原子、直鏈或支鏈的烷基、環(huán)烷基、芳烷基或芳基。

(2)如上述(1)所述的移植器官成活促進(jìn)劑，其特征在于，R¹和R²為氫原子。

(3)如上述(1)或(2)所述的移植器官成活促進(jìn)劑，其特征在于，還含有鐵化合物。

(4)如上述(3)所述的移植器官成活促進(jìn)劑，其特征在于，鐵化合物為選自氯化鐵、三氧化二鐵、硫酸鐵、焦磷酸亞鐵、檸檬酸亞鐵、檸檬酸鐵鈉、檸檬酸亞鐵鈉、檸檬酸鐵銨、焦磷酸鐵、乳酸鐵、葡糖酸亞鐵、二亞乙基三胺五乙酸鐵鈉、二亞乙基三胺五乙酸鐵銨、亞乙基二胺四乙酸鐵鈉、亞乙基二胺四乙酸鐵銨、二羧基甲基谷氨酸鐵鈉、二羧基甲基谷氨酸鐵銨、富馬酸亞鐵、乙酸鐵、草酸鐵、琥珀酸亞鐵、琥珀酸檸檬酸鐵鈉、血紅素鐵、右旋糖酐鐵、三亞乙基四胺鐵、乳鐵蛋白鐵、轉(zhuǎn)鐵蛋白鐵、葉綠素鐵鈉、鐵蛋白鐵、含糖氧化鐵及硫酸甘氨酸鐵中的一種或兩種以上的化合物。

(5)如上述(3)所述的移植器官成活促進(jìn)劑，其特征在于，鐵化合物為檸檬酸亞鐵鈉。

(6)器官移植中的移植器官成活促進(jìn)方法，其特征在于，向器官移植前和/或器官移植后的受體給予上述(1)～(5)中任一項所述的移植器官成活促進(jìn)劑。

(7)器官移植中的移植器官成活促進(jìn)方法，其特征在于，向器官移植前的供體、以及器官移植前和/或器官移植后的受體給予上述(1)～(5)中任一項所述的移植器官成活促進(jìn)劑。

(8)移植器官成活促進(jìn)試劑盒，其包含：

a)上式(I)表示的化合物或其鹽，和

b)鐵化合物。

(9)移植器官成活促進(jìn)方法，其特征在于，同時或先后向?qū)ο蠼o予：

a)上式(I)表示的化合物或其鹽，和

b)鐵化合物。

(10)移植器官成活促進(jìn)劑的組合，其包含：

a)上式(I)表示的化合物或其鹽，

b)鐵化合物，和

c)器官移植免疫抑制藥。

(11)移植器官成活促進(jìn)劑的組合，其包含：

a)上述(1)～(5)中任一項所述的移植器官成活促進(jìn)劑，和

b)器官移植免疫抑制藥。

(12)一種經(jīng)分離的免疫細(xì)胞，其特征在于，來源于下述受體，所述受體是向器官移植前和/或器官移植后的受體給予了上述(1)～(5)中任一項所述的移植器官成活促進(jìn)劑而形成的。

(13)一種經(jīng)分離的免疫細(xì)胞，其特征在于，來源于下述受體，所述受體是向器官移植前的供體、以及器官移植前和/或器官移植后的受體給予了上述(1)～(5)中任一項所述的移植器官成活促進(jìn)劑而形成的。

(14)如上述(12)或(13)所述的經(jīng)分離的免疫細(xì)胞，其為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。

(15)二次免疫耐受的誘導(dǎo)方法，其特征在于，將上述(12)～(14)中任一項所述的免疫細(xì)胞給予從其中采集過該細(xì)胞的同一受體和/或其他受體。

(16)移植用器官的保存方法，其特征在于，對從供體摘出后的器官或者該器官的保存液給予上述(1)～(5)中任一項所述的移植器官成活促進(jìn)劑。

(17)如上述(16)所述的保存方法，其特征在于，所述器官為來源于下述供體的器官，所述供體是向器官移植前的供體預(yù)先給予了上述(1)～(5)中任一項所述的移植器官成活促進(jìn)劑而形成的。

(18)從供體摘出后的器官的保存劑，其特征在于，包含上述(1)～(5)中任一項所述的移植器官成活促進(jìn)劑。

(19)用于提高移植器官的成活率的上式(I)表示的化合物或其鹽。

(20)用于提高移植器官的成活率的上式(I)表示的化合物或其鹽、以及鐵化合物。

(21)上式(I)表示的化合物或其鹽在移植器官成活促進(jìn)劑的制造中的應(yīng)用。

(22)上式(I)表示的化合物或其鹽、以及鐵化合物在移植器官成活促進(jìn)劑的制造中的應(yīng)用。

(23)用于從供體摘出后的器官的保存劑的上式(I)表示的化合物或其鹽。

(24)用于從供體摘出后的器官的保存劑的上式(I)表示的化合物或其鹽、以及鐵化合物。

(25)上式(I)表示的化合物或其鹽在從供體摘出后的器官的保存劑的制造中的應(yīng)用。

(26)上式(I)表示的化合物或其鹽、以及鐵化合物在從供體摘出后的器官的保存劑的制造中的應(yīng)用。

通過本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑，能夠保護(hù)移植器官抵擋應(yīng)激、維持其新鮮度、抑制伴隨器官移植的排斥反應(yīng)、提高移植器官的成活率。本發(fā)明與已有的免疫抑制劑、或提取T細(xì)胞與特殊的抗體混合培養(yǎng)再返回至體內(nèi)的方法等人工免疫耐受誘導(dǎo)方法機制完全不同，基本沒有副作用，不需要長期服用藥物，作為器官移植中的移植器官成活促進(jìn)劑極為有效。另外，因為與以往的免疫抑制劑等作用機制不同，所以也期待通過與已有的藥物聯(lián)用能夠進(jìn)一步提高效果。另外，本發(fā)明的器官保存劑能夠保持從供體摘出后的器官的新鮮度。

附圖說明

圖1顯示了不同系統(tǒng)小鼠心臟移植實驗的示意圖的例子。

圖2為表示使用了本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑的、不同系統(tǒng)小鼠心臟移植以及移植后的經(jīng)過的概要的圖?？v軸表示心臟跳動率。

圖3為表示使用了本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑的、另一形式的不同系統(tǒng)小鼠心臟移植以及移植后的經(jīng)過的概要的圖?？v軸表示心臟跳動率。

圖4為表示移植心臟的成活率的結(jié)果的圖，表示向器官移植前的供體小鼠及受體小鼠和器官移植后的受體小鼠給予本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑、將來源于受體的脾細(xì)胞移植給相同系統(tǒng)受體小鼠、對該相同系統(tǒng)受體小鼠進(jìn)行了不同系統(tǒng)小鼠心臟移植時移植心臟的成活率。

圖5為表示向器官移植前的供體小鼠及受體小鼠和器官移植后的受體小鼠給予本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑、將來源于受體的脾細(xì)胞移植給相同系統(tǒng)受體小鼠、對該相同系統(tǒng)受體小鼠進(jìn)行了不同系統(tǒng)小鼠皮膚移植時的照片的圖。

圖6為表示向器官移植前的供體小鼠及受體小鼠和器官移植后的受體小鼠給予本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑、對來源于受體的脾細(xì)胞中的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)的測定結(jié)果的圖。

圖7為表示含有ALA的保存劑對從供體摘出后的器官的有效性的調(diào)查結(jié)果的圖，所述有效性是通過保存中跳動停止的心臟通過移植直至再度開始跳動所需的時間(秒)來調(diào)查的。

具體實施方式

作為本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑，包含上式(I)表示的化合物或其鹽(下文中有時也將它們統(tǒng)稱為“ALA類”)作為有效成分即可，沒有特別限制，但優(yōu)選除含有ALA類之外還含有鐵化合物。通過將上述本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑、特別是含有ALA類和鐵化合物的移植器官成活促進(jìn)劑給予人、以及家畜·家禽類、寵物等對象，能夠進(jìn)行器官移植中的移植器官成活促進(jìn)。另外，本發(fā)明中，移植器官的成活促進(jìn)，是指抑制器官移植(包括組織移植)中的排斥反應(yīng)、提高成活率(其為移植的器官(組織)在生物體中繼續(xù)發(fā)揮功能的比例)。

作為本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)試劑盒，只要是以ALA類和鐵化合物為有效成分且以單個藥物的形式包含的試劑盒即可，沒有特別限制，使用所述移植器官成活促進(jìn)試劑盒時，能夠?qū)θ?、以及家畜·家禽類、寵物等對象進(jìn)行器官移植中的移植器官成活促進(jìn)。上述移植器官成活促進(jìn)試劑盒中可包含操作說明書等附件。

作為上述被移植的器官，為能夠進(jìn)行移植的器官即可，沒有特別限制，不限于從供體摘出的器官，還可以是體外制作的移植物·細(xì)胞、通過再生醫(yī)療技術(shù)人工構(gòu)建的組織·器官、以及從萬能細(xì)胞制作的器官等。此外，作為器官的種類，可示例腎、肝、心臟、胰腺、肺、小腸、眼球、角膜、毛發(fā)、皮膚等，其中可以優(yōu)選地示例腎、肝、心臟、胰腺、肺、小腸。

作為本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑的組合，為上述本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑與器官移植免疫抑制藥的組合、ALA類與鐵化合物與器官移植免疫抑制藥的組合即可，沒有特別限制，通過給予這些物質(zhì)的組合，能夠進(jìn)行移植器官的成活促進(jìn)。作為上述器官移植免疫抑制藥，可以舉例咪唑巰嘌呤(Azathioprine)、巰嘌呤、甲氨喋呤、霉酚酸(mycophenolic acid)、來氟米特(Leflunomide)等代謝拮抗劑，環(huán)磷酰胺等烷基化劑，環(huán)孢霉素、他克莫司等鈣調(diào)磷酸酶抑制劑、類固醇劑等醫(yī)藥品。本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑和移植器官成活促進(jìn)試劑盒與已有的器官移植免疫抑制藥作用機制不同，因此使用本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑的組合時，能夠期待疊加效果，根據(jù)情況可期待協(xié)同效果。

作為可作為本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑的有效成分使用的化合物，能夠作為式(I)所示的化合物或其鹽(下文中有時也統(tǒng)稱為“ALA類”)而舉例。也被稱為δ-氨基乙酰丙酸的ALA是氨基酸之一，其為式(I)的R¹及R²均為氫原子的情況。作為ALA衍生物，可舉例式(I)的R¹為氫原子或?；⑹?I)的R²為氫原子、直鏈或支鏈的烷基、環(huán)烷基、芳基或芳烷基的、ALA以外的化合物。

上述ALA類中，可以優(yōu)選舉例式(I)的R¹和R²均為氫原子時的ALA或其鹽。ALA為一種氨基酸，也被稱為δ-氨基乙酰丙酸。另外，作為ALA衍生物，可舉例式(I)的R¹為氫原子或?；⑹?I)的R²為氫原子、直鏈或支鏈的烷基、環(huán)烷基、芳基或芳烷基的、ALA以外的化合物。

作為式(I)中的酰基，可以舉出甲?；⒁阴；⒈；?、丁?；?、異丁酰基、戊?；愇祯；⑿挛祯；⒓乎；?、辛酰基、芐羰基等直鏈或支鏈的碳原子數(shù)1～8的烷?；?，芐?；?-萘?；?、2-萘酰基等碳原子數(shù)7～14的芳?；?。

作為式(I)中的烷基，可以舉出甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等直鏈或支鏈的碳原子數(shù)1～8的烷基。

作為式(I)中的環(huán)烷基，可以舉出環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)十二烷基、1-環(huán)己烯基等飽和的或可存在一部分不飽和鍵的碳原子數(shù)3～8的環(huán)烷基。

作為式(I)中的芳基，可以舉出苯基、萘基、蒽基、菲基等碳原子數(shù)6～14的芳基。

作為式(I)中的芳烷基，芳基部分可以與上述芳基同樣地示例，烷基部分可以與上述烷基相同的示例，具體而言，可以舉出芐基、苯乙基、苯基丙基、苯基丁基、二苯甲基、三苯甲基、萘甲基、萘乙基等碳原子數(shù)7～15的芳烷基。

作為上述ALA衍生物，優(yōu)選R¹為甲酰基、乙?；⒈；⒍□；鹊幕衔?、上述R²為甲基、乙基、丙基、丁基、戊基等的化合物，上述R¹和R²的組合能夠優(yōu)選示例甲酰基與甲基、乙?；c甲基、丙酰基與甲基、丁?；c甲基、甲?；c乙基、乙?；c乙基、丙?；c乙基、丁?；c乙基的組合等。

關(guān)于ALA類，在生物體內(nèi)以式(I)的ALA或其衍生物的狀態(tài)作為有效成分發(fā)揮作用即可，與給予形態(tài)相應(yīng)，為了提高溶解性，可以作為各種鹽、酯或可被生物體內(nèi)的酶分解的前藥(前體)給予。例如，作為ANA或其衍生物的鹽，可以舉出藥理學(xué)上可允許的酸加成鹽、金屬鹽、銨鹽、有機胺加成鹽等。作為酸加成鹽，可以舉出例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽等各無機酸鹽，甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、甲基苯磺酸鹽、琥珀酸鹽、草酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、乙醇酸鹽、甲磺酸鹽、丁酸鹽、戊酸鹽、檸檬酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽等各有機酸加成鹽。作為金屬鹽，可示例鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等各堿金屬鹽，鎂鹽、鈣鹽等各堿土金屬鹽，鋁鹽、鋅鹽等各金屬鹽。作為銨鹽，可示例銨鹽、四甲基銨鹽等烷基銨鹽等。作為有機胺鹽，可以舉出三乙胺鹽、哌啶鹽、嗎啉鹽、甲苯胺鹽等各鹽。需要說明的是，這些鹽也可以在使用時以溶液的形式使用。

以上的ALA類中，優(yōu)選ALA和ALA甲酯、ALA乙酯、ALA丙酯、ALA丁酯、ALA戊酯等各種酯類以及它們的鹽酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽，可特別優(yōu)選示例ALA鹽酸鹽、ALA磷酸鹽。

上述ALA類可通過化學(xué)合成、利用微生物的生產(chǎn)、利用酶的生產(chǎn)中的任何的公知方法來制造。另外，上述ALA類可形成水合物或溶劑合物，另外，可單獨使用任一種或適當(dāng)?shù)亟M合使用兩種以上。

作為上述鐵化合物，可以為有機鹽或無機鹽，作為無機鹽，可舉出氯化鐵、三氧化二鐵、硫酸鐵、焦磷酸亞鐵，作為有機鹽，可舉出作為羧酸鹽例如羥基羧酸鹽的檸檬酸亞鐵、檸檬酸鐵鈉、檸檬酸亞鐵鈉、檸檬酸鐵銨等檸檬酸鹽，焦磷酸鐵、乳酸鐵、葡糖酸亞鐵、二亞乙基三胺五乙酸鐵鈉、二亞乙基三胺五乙酸鐵銨、亞乙基二胺四乙酸鐵鈉、亞乙基二胺四乙酸鐵銨、二羧基甲基谷氨酸鐵鈉、二羧基甲基谷氨酸鐵銨、富馬酸亞鐵、乙酸鐵、草酸鐵、琥珀酸亞鐵、琥珀酸檸檬酸鐵鈉等有機酸鹽，血紅素鐵、右旋糖酐鐵、三亞乙基四胺鐵、乳鐵蛋白鐵、轉(zhuǎn)鐵蛋白鐵、葉綠素鐵鈉、鐵蛋白鐵、含糖氧化鐵、硫酸甘氨酸鐵，其中優(yōu)選檸檬酸亞鐵鈉和檸檬酸鐵鈉。

上述鐵化合物可以分別單獨使用，也可以兩種以上混合使用。鐵化合物的給予量相對于ALA類的給予量(換算為ALA)而言摩爾比為0.01～100倍即可，優(yōu)選0.05倍～10倍，更優(yōu)選0.1倍～8倍。

關(guān)于本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑，在不產(chǎn)生過量癥狀的范圍內(nèi)，代替鐵化合物、或除了鐵化合物之外，還可以含有其他金屬化合物。作為所述金屬化合物，可舉出鎂化合物、鋅化合物、鎳化合物、釩化合物、鈷化合物、銅化合物、鉻化合物、鉬化合物等。

本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)方法中，優(yōu)選聯(lián)合給予ALA類和鐵化合物。這種情況下，可以以包含ALA類和鐵化合物的組合物形式給予，或者可以各自單獨地、同時或先后給予。各自單獨地給予的情況下，優(yōu)選同時給予，各自單獨地先后給予的情況下，優(yōu)選以使得ALA類與鐵化合物的給予產(chǎn)生疊加效果、優(yōu)選產(chǎn)生協(xié)同效果的方式給予。

本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑可以僅給予移植了下述器官的受體，所述器官為：從供體摘出的器官、將從供體摘出的器官暫時在保存液中保管后的器官、使用再生醫(yī)療技術(shù)用于自體移植而制作的器官、將這些器官在ALA類中浸漬之后的器官等，從提高成活率的方面來看優(yōu)選還給予摘出器官之前的供體。由此，通過向器官移植前的供體以及器官移植后或移植前后的受體給予本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑或移植器官成活促進(jìn)試劑盒，能夠提高成活率，這是本發(fā)明的一大特征。

根據(jù)需要使來源于受體(該受體是向器官移植前和/或器官移植后的受體給予了本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑或移植器官成活促進(jìn)試劑盒而形成的受體)的經(jīng)分離的免疫細(xì)胞，或者來源于受體(該受體是向器官移植前的供體、以及器官移植前和/或器官移植后的受體給予了本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑或移植器官成活促進(jìn)試劑盒而形成的受體)的經(jīng)分離的免疫細(xì)胞增殖，給予從其中采集了該免疫細(xì)胞的同一受體或者其他受體，由此對被給予了該免疫細(xì)胞的受體，即使不給予本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑或移植器官成活促進(jìn)試劑盒，個體水平上的免疫耐受也被誘導(dǎo)促進(jìn)(二次免疫耐受的誘導(dǎo)促進(jìn))。這種二次免疫耐受的誘導(dǎo)促進(jìn)，顯示出通過免疫耐受誘導(dǎo)而實現(xiàn)了移植器官成活促進(jìn)，其能夠適用于細(xì)胞過繼性免疫療法。例如，如果從一度被誘導(dǎo)出了免疫耐受的人取出免疫細(xì)胞并保管，則免疫耐受被解除時(例如移植器官沒有被接受時)，即使不給予本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑，通過移植該細(xì)胞，也能使得免疫耐受的狀態(tài)恢復(fù)。該二次免疫耐受的誘導(dǎo)促進(jìn)為本發(fā)明的特別大的特征。

作為上述免疫細(xì)胞，除脾細(xì)胞外，可以舉出巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、髓樣來源抑制性細(xì)胞(MDSC)等，優(yōu)選調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、脾細(xì)胞。

作為本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑、移植器官成活促進(jìn)試劑盒的各成分的給予途徑，可以舉出包括舌下給予在內(nèi)的口服給予，或者滴鼻給予、吸入給予、包括輸液在內(nèi)的靜脈內(nèi)給予、利用巴布劑等的經(jīng)皮給予、栓劑、或者利用使用經(jīng)鼻胃管、經(jīng)鼻腸管、胃瘺管或腸瘺管的強制性經(jīng)腸營養(yǎng)法的給予等非口服給予等，但優(yōu)選口服給予。

作為本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑、移植器官成活促進(jìn)試劑盒的各成分的劑型，可根據(jù)上述給予途徑適當(dāng)?shù)卮_定，可舉出注射劑、滴鼻劑、輸液劑、片劑、膠囊劑、細(xì)粒劑、散劑、液劑、糖漿劑等溶解的水性劑、巴布劑、栓劑等。本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑、移植器官成活促進(jìn)試劑盒的各成分在醫(yī)藥用途之外，還可以以片劑或膠囊劑的補充劑的形式給予。另外，特別地，對于吞咽困難的高齡者或嬰幼兒，優(yōu)選在口中顯示出快速崩解性的崩解劑的形式、適合經(jīng)鼻胃管給予的液劑的形式。

為了制備本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑、移植器官成活促進(jìn)試劑盒，根據(jù)需要可添加藥理學(xué)上允許的載體、賦形劑、稀釋劑、添加劑、崩解劑、粘合劑、涂覆劑、潤滑劑、滑走劑、潤滑劑、調(diào)味劑、甜味劑、增溶劑、溶劑、膠凝劑、營養(yǎng)劑等，具體而言，可舉例水、生理鹽水、動物性脂肪和油、植物油、乳糖、淀粉、明膠、結(jié)晶性纖維素、膠質(zhì)(gum)、滑石、硬脂酸鎂、羥丙基纖維素、聚烷基二醇、聚乙烯醇、甘油。需要說明的是，本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑、移植器官成活促進(jìn)試劑盒作為水溶液制備的情況下，為了防止ALA類的分解，必須要注意不要使水溶液成為堿性，成為堿性的情況下也可通過除去氧來防止分解。

本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑在以下方面是有用的：能夠抑制在將摘出的供體器官移植給受體的情況下所引發(fā)的受體側(cè)的免疫應(yīng)答；抑制伴隨器官移植的排斥反應(yīng)；提高移植器官的成活率。其除了能夠作為從供體摘出后的器官的保存劑使用之外，還可添加在現(xiàn)有的器官保存液中，增強器官移植中的移植器官成活促進(jìn)效果。作為所述排斥反應(yīng)，可舉出器官移植后的超急性排斥反應(yīng)、急性排斥反應(yīng)、慢性排斥反應(yīng)。

所述超急性排斥反應(yīng)多見于異種器官移植，其為在剛移植后到移植后24小時以內(nèi)產(chǎn)生的強烈的排斥反應(yīng)，可以將縫合血管、血流恢復(fù)之后的數(shù)分鐘至數(shù)小時內(nèi)例如移植器官的動脈中是否形成血栓作為有無超急性排斥反應(yīng)的判斷標(biāo)準(zhǔn)，在心臟移植的情況下，可以以剛移植后到移植后24小時內(nèi)的心跳停止為判斷標(biāo)準(zhǔn)。所述急性排斥反應(yīng)為移植后三天至一周左右的期間產(chǎn)生的排斥反應(yīng)，在心臟移植的情況下，可以以移植后24小時以后的心跳停止作為有無急性排斥反應(yīng)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。所述慢性排斥反應(yīng)為移植后3個月以后產(chǎn)生的排斥反應(yīng)，其詳細(xì)機理不明，在心臟移植的情況下，也可以以心跳停止作為有無慢性排斥反應(yīng)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

作為本發(fā)明中的供體和/或受體，可舉出人、狒狒、牛、豬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠等哺乳動物，作為使用本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑進(jìn)行的器官移植的方式，為使得能夠從供體向受體進(jìn)行器官移植的方式即可，沒有特別限制，可舉出從小鼠到小鼠、從大鼠到大鼠、從兔到兔、從狗到狗、從貓到貓、從豬到豬、從猴到猴、從狒狒到狒狒、從人到人等的同種器官移植，或從豬到人、從牛到人、從猴到人、從狒狒到人等的異種器官移植。

使用本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑的器官移植可按照通常的方法進(jìn)行，可以是從受體去除與從供體等提供的器官對應(yīng)的器官、將從供體等提供的器官移植到受體中的相同部位的同部位器官移植，也可以是將從供體等提供的器官在受體器官保持殘留的情況下移植到受體其他部位的異部位器官移植。

本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑必須給予器官移植后的受體，作為具體的給予時期，例如可舉出移植當(dāng)天的翌日～10天后，優(yōu)選為移植當(dāng)天的翌日～15天后，更優(yōu)選為移植當(dāng)天的翌日～1個月后，特別優(yōu)選為移植當(dāng)天的翌日～充分確認(rèn)了移植器官的成活之日，但根據(jù)需要可持續(xù)長期給予，還可以從移植當(dāng)天之前就開始給予。

如前文所述，為了提高成活率，優(yōu)選預(yù)先將本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑給予從中摘出器官的供體。但是，特別是腦死亡移植等時等沒有寬裕的時間以給予供體足夠的量的情況下，通過直接向從供體摘出的器官給予、或者將該器官浸漬于含有本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑的液體中、或者向保管該器官的保管液中添加本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑等的向摘出后的器官的給予，也能獲得同樣的效果。使用利用再生醫(yī)療技術(shù)制作用于自體移植的器官的情況下，也可采用向該器官的保管液中添加的手段。由此，本發(fā)明的從供體摘出后的器官的保存劑包含移植器官成活促進(jìn)劑，可以以粉末、顆粒、片劑等固體形式或液體形式的形式構(gòu)成。固體形式的情況下，根據(jù)需要，可預(yù)先配合分散劑、溶解劑、pH調(diào)節(jié)劑。液體形式的情況下，優(yōu)選具有緩沖能力。另外，液體形式的情況下，還可以制成濃縮保存液，使用時用生理鹽水等稀釋進(jìn)行使用。

向本發(fā)明中的供體給予本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑的情況下，必須在摘出器官前的規(guī)定期間給予，作為具體的給予時期，可以舉出器官的摘出手術(shù)當(dāng)日的一周前～摘出當(dāng)日，優(yōu)選5天前～摘出當(dāng)日，更優(yōu)選3天前～摘出當(dāng)日，進(jìn)一步更優(yōu)選2天前～摘出當(dāng)日，器官的摘出手術(shù)后，必須運送器官的情況下，優(yōu)選采取將本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑保管于保存液中等措施。

本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑、移植器官成活促進(jìn)試劑盒，如前文所述，除用于人以外，還可用于家畜·家禽類、寵物等獸醫(yī)領(lǐng)域。作為所述移植器官成活促進(jìn)劑等的給予的量、頻率、期間，在對象為人的情況下，隨年齡、體重、癥狀等而不同，作為ALA類的給予量，以ALA摩爾量換算，可舉例為成年人每人0.1～12mmol/日，優(yōu)選0.2～9mmol/日，更優(yōu)選0.3～6mmol/日，進(jìn)一步更優(yōu)選0.35mmol/日～4mmol/日，作為給予頻率，可示例為一日一次～數(shù)次的給予或者利用輸液等的連續(xù)給予。關(guān)于給予期間，也可由該技術(shù)領(lǐng)域的藥理學(xué)者或臨床醫(yī)師根據(jù)已知方法來確定。

作為將本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑以器官保存液的形式使用的情況下的ALA類的濃度，可舉出0.1μM～100mM，優(yōu)選1μM～10mM，更優(yōu)選5μM～5mM，最優(yōu)選10μM～1mM。

本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑也可與其他已有的器官移植免疫抑制方法組合使用。作為已有的器官移植免疫抑制方法，可舉出利用CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、CD45、B7等抗體的免疫抑制性單克隆抗體的免疫耐受誘導(dǎo)方法。因為認(rèn)為這些藥物、方法與有關(guān)于ALA的器官移植免疫抑制效果的機制各自在根本上不同，故而可以期待疊加的效果，根據(jù)情況可以期待協(xié)同的效果。另外，還可期待不減少已有的器官移植免疫抑制劑的給予量、但減少副作用的效果。

以下，通過實施例更具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明的技術(shù)范圍不被這些例示所限定。

實施例1

[異部位同種心臟移植模型小鼠的制作]

作為提供移植的心臟的供體小鼠，使用了B10小鼠(雄性、平均10周齡、體重20～25g)。作為移植從供體取出的心臟的受體小鼠，使用了CBA小鼠(雄性、平均10周齡、體重20～25g)。小鼠異部位同種心臟移植的步驟按照《器官移植實驗手冊》(秀潤社)第1章第2部2-1-5“小鼠異部位心臟移植”的記載進(jìn)行。以下示出概要。

對供體小鼠麻醉后開胸，使用1mL冷的添加了肝素的生理鹽水進(jìn)行充分的灌流后，摘出心臟，將摘出的心臟保存于冷的添加了肝素的生理鹽水中。對受體小鼠麻醉后開腹，將從供體小鼠摘出的心臟移植于腹部大靜脈處，制作了異部位心臟移植模型小鼠。

實施例2

[小鼠同種移植心臟的成活效率(1)]

將上述異部位心臟移植模型小鼠分為以下表1的(1)～(4)所示的各組的給予模式，進(jìn)行本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑的口服給予實驗。被檢小鼠除了攝取給予的組合物之外，在麻醉處理前和麻醉蘇醒后可以自由獲得餌料和水。實驗概要如圖1所示。

[表1]

組(1)～(4)的給予結(jié)果如下所示。另外，經(jīng)過天數(shù)與心臟跳動率的關(guān)系示于圖2。

向供體小鼠·受體小鼠兩者均給予滅菌水的組(1)中，至第9天，對于全部個體，移植心臟均停止，沒有長期跳動的個體。更具體而言，移植后第6天有一只、第7天有兩只、第8天有兩只、第9天有一只的移植心臟跳動停止。

僅向供體小鼠給予ALA(100mg/kg)+SFC(115mg/kg)的組(2)中，至第8天，全部個體均移植心臟停止或者個體死亡，沒有長期跳動的個體。第7天有4只、第8天有2只的移植心臟跳動停止。

僅向受體小鼠給予ALA(100mg/kg)+SFC(115mg/kg)的組(3)中，發(fā)現(xiàn)有長期跳動的個體。更詳細(xì)而言，第12天有2只的移植心臟跳動停止。在經(jīng)過66天的時間點移植心臟繼續(xù)跳動的個體有1只，經(jīng)過70天的時間點移植心臟繼續(xù)跳動的個體有1只。

向供體小鼠·受體小鼠兩者均給予ALA(100mg/kg)+SFC(115mg/kg)的組(4)中，長期持續(xù)跳動的個體數(shù)顯著地多。更詳細(xì)而言，第8天有一只的移植心臟跳動停止。在經(jīng)過66天、經(jīng)過76天的時間點移植心臟繼續(xù)跳動的個體各2只，經(jīng)過96天、經(jīng)過106天的時間點移植心臟繼續(xù)跳動的個體各1只。

本實驗?zāi)Ｐ鸵驗槭┬辛饲秩胄源蟮氖中g(shù)，所以預(yù)計一定程度上是由應(yīng)激導(dǎo)致的個體死亡，與是否給予ALA類和鐵化合物無關(guān)。但是，向移植前的供體以及移植后的受體口服給予ALA類和鐵化合物的情況下長期持續(xù)跳動的個體數(shù)較多，確認(rèn)了通過給予ALA類和鐵化合物，器官的成活率顯著提高。組(3)的小鼠也有長期跳動個體，確認(rèn)了即使僅向移植后的受體給予本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑也是有效果的。

[小鼠同種移植心臟的成活效率(2)]

將上述異部位同種心臟移植模型小鼠分為以下表2的組(a)～(e)所示的各組給予模式，針對本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑，對由鐵化合物的含量的多少導(dǎo)致的效果差異進(jìn)行了研究。被檢小鼠除了攝取給予的組合物之外，在麻醉處理前和麻醉蘇醒后可以自由獲得餌料和水。

[表2]

組(a)～(e)的給予結(jié)果如下所示。另外，經(jīng)過天數(shù)與心臟跳動率的關(guān)系示于圖3。

向供體小鼠·受體小鼠兩者均給予了滅菌水的組(a)中，至第9天，對于全部個體，移植心臟均停止，沒有長期跳動的個體。更具體而言，移植后第6天有2只、第7天有5只、第8天有2只的移植心臟跳動停止。

向供體小鼠·受體小鼠兩者均給予了ALA(100mg/kg)的組(b)中，至第8天，對于全部個體，移植心臟均停止，沒有長期跳動的個體。更具體而言，移植后第7天有2只、第8天有3只的移植心臟跳動停止。

向供體小鼠·受體小鼠二者均給予了ALA(100mg/kg)+SFC(11.5mg/kg)的組(c)中，有長期跳動的個體。更詳細(xì)而言，雖然在移植后第8天有1只、在第12天有1只的移植心臟跳動停止，但在經(jīng)過25天的時間點移植心臟繼續(xù)跳動的個體有1只，在經(jīng)過29天的時間點移植心臟繼續(xù)跳動的個體有2只。

向供體小鼠·受體小鼠二者均給予了ALA(100mg/kg)+SFC(115mg/kg)的組(d)中，長期持續(xù)跳動的個體數(shù)顯著地多，生存期間長的個體多。更詳細(xì)而言，在經(jīng)過63天、73天的時間點移植心臟繼續(xù)跳動的個體各2只。在經(jīng)過93天、103天的時間點移植心臟繼續(xù)跳動的個體各1只。

僅向受體給予ALA(100mg/kg)+SFC(115mg/kg)的組(e)中，有長期跳動的個體。更詳細(xì)而言，雖然在第15天有1只的移植心臟跳動停止，但在經(jīng)過29天的時間點移植心臟繼續(xù)跳動的個體有2只。

對組(b)和組(c)及組(d)進(jìn)行比較，確認(rèn)了：在向移植前的供體、和移植后的受體給予ALA類的情況下，較之ALA類單獨給予而言，組合給予ALA與鐵化合物的方式能顯著增大免疫抑制效果，受體生存率提高。此外，作為鐵化合物的添加量，確認(rèn)了被給予檸檬酸亞鐵鈉115mg/kg的組(d)的成績較好。另外，組(e)的小鼠也存在長期跳動個體，確認(rèn)了僅向移植后的受體給予本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑是有效果的。

實施例3

[移植器官成活的機理為免疫耐受]

從進(jìn)行心臟移植2天前至移植日為止，向供體小鼠·受體小鼠二者給予ALA(100mg/kg)+SFC(115mg/kg)，心臟移植后僅向受體小鼠以1天1次繼續(xù)給予至第11天，將來自長期成活(>100天)的一次移植受體小鼠(CBA)的脾細(xì)胞分離，將該脾細(xì)胞以腹腔內(nèi)方式注射至其他受體系統(tǒng)小鼠(CBA)，同時將與一次移植時相同系統(tǒng)的供體小鼠(B10)的心臟移植至上述受體系統(tǒng)小鼠(CBA)。結(jié)果示于圖4。其結(jié)果，通過經(jīng)歷了有ALA+SFC給予的心臟移植的脾細(xì)胞移植，促進(jìn)了心臟二次移植的成活率(二次免疫耐受的誘導(dǎo))。即，同時移植了供體小鼠(B10)的心臟和來自進(jìn)行了一次移植的受體系統(tǒng)小鼠(CBA)的脾細(xì)胞的小鼠(耐受；n＝5)，較之同時移植了供體小鼠(B10)的心臟與來自沒有進(jìn)行一次移植的受體系統(tǒng)小鼠(CBA)的脾細(xì)胞的小鼠(原始態(tài)；n＝5)而言，心臟的成活率上升。該結(jié)果顯示，移植器官成活的機理為免疫耐受。

[移植器官成活小鼠在個體水平上的免疫耐受]

從進(jìn)行心臟移植2天前至移植日，向供體小鼠·受體小鼠二者給予ALA(100mg/kg)+SFC(115mg/kg)，心臟移植后僅向受體小鼠以1天1次繼續(xù)給予至第11天，將來自長期成活(>100天)的一次移植受體小鼠(CBA)的脾細(xì)胞分離，將該脾細(xì)胞以腹腔內(nèi)方式注射至其他受體系統(tǒng)小鼠(CBA),同時將與一次移植相同系統(tǒng)的供體小鼠(B10)的皮膚移植至上述受體系統(tǒng)小鼠(CBA)。皮膚移植30天后的結(jié)果示于圖5。其結(jié)果，觀察到通過經(jīng)歷過有ALA+SFC給予的心臟移植的脾細(xì)胞移植，皮膚移植成活。該結(jié)果顯示，移植器官成活小鼠在個體水平上產(chǎn)生了免疫耐受。

[脾中的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)]

通過流式細(xì)胞儀測定受體系統(tǒng)小鼠(CBA)的脾中的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量。分別提供下述組用于測試：1)組為僅給予滅菌水的受體系統(tǒng)小鼠(n＝6)，2)組為給予了ALA(100mg/kg)+SFC(115mg/kg)的受體系統(tǒng)小鼠(n＝6)，3)組為腹腔內(nèi)注射了來源于向供體小鼠·受體小鼠二者給予了滅菌水而得的一次心臟移植受體小鼠(CBA)的脾細(xì)胞的其他受體系統(tǒng)小鼠(n＝6)，4)組為腹腔內(nèi)注射了來源于從進(jìn)行心臟移植2天前至移植日為止向供體小鼠·受體小鼠二者給予ALA(100mg/kg)+SFC(115mg/kg)、心臟移植后僅向受體小鼠以1天1次繼續(xù)給予至第11天而得的一次心臟移植受體小鼠(CBA)的脾細(xì)胞的其他受體系統(tǒng)小鼠(n＝6)。結(jié)果示于圖6。其結(jié)果，發(fā)現(xiàn)4)組的受體系統(tǒng)小鼠中的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量比3)組中的顯著地多，脾中的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例增加。該結(jié)果顯示，給予ALA+SFC誘導(dǎo)了免疫耐受。

實施例4

[含有ALA的保存液對心臟的保存·移植效果]

針對器官的新鮮度保持，對含有ALA的保存劑對從供體摘出后的器官的有效性進(jìn)行了研究。通過保存中跳動停止的心臟經(jīng)由移植而再度開始跳動所需的時間(秒)、即再跳動時間(Re-beating time)，對器官的新鮮度保持進(jìn)行了研究。作為提供保存·移植的心臟的供體小鼠，使用B10小鼠(雄性、7～10周齡、體重20～25g)。

作為保存液，向包含氯化鉀、碳酸氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀及葡萄糖的基礎(chǔ)溶液中添加ALA至終濃度為100μM、添加硫酸鐵至終濃度為5μM，得到保存液G6(+)，以及，向上述基礎(chǔ)溶液中添加硫酸鐵至終濃度為5μM，得到保存液G6(-)，將它們用于測試。作為上述ALA，使用了ALA鹽酸鹽。這些的測試保存液的滲透壓為326～3630sm/kg。此外，作為對照，使用市售的器官保存液(Astellas制藥株式會社制“Viaspan”；保存液UW)。使這些保存液的溫度為冰冷的溫度，保存期間為24小時。

將保存液G6(+)、保存液G6(-)和保存液UW用于測試，測定再跳動時間。此外，再跳動時間的測定按照《器官移植實驗手冊》(秀潤社)第1章第2部2-1-5“小鼠異部位心臟移植”的記載以及European Heart Journal(2011)32,509-516的記載進(jìn)行。以下示出概要。

將供體小鼠麻醉后開胸，使用1mL用于測試的保存液進(jìn)行充分的灌流后，摘出心臟，將摘出的心臟保存于用于測試的保存液中。將受體小鼠麻醉后開腹，將從供體小鼠摘出·保存的心臟移植于腹部大靜脈處，制作異部位心臟移植模型小鼠。此時，計量從血液向心臟再灌注開始至心臟再跳動開始所需的時間，將其作為再跳動時間。

[利用含有ALA的保存液的再跳動時間的縮短]

將移植用小鼠的心臟在保存液G6(+)、保存液G6(-)和保存液UW中保存24小時后，進(jìn)行異部位同種心臟移植，測定再跳動時間(秒)。結(jié)果示于圖7。其結(jié)果，包含ALA(100μM)+硫酸鐵(5μM)溶液的保存液G6(+)的再跳動時間(秒)的平均值為108秒，包含硫酸鐵(5μM)溶液的保存液G6(-)的再跳動時間(秒)的平均值為145秒，對照保存液UW的再跳動時間(秒)的平均值為229秒。由此確認(rèn)了，較之使用保存液UW的情況而言，使用保存液G6(+)能夠顯著(t檢驗；p＝0.0244)縮短再跳動時間。

產(chǎn)業(yè)上的可利用性

本發(fā)明的移植器官成活促進(jìn)劑可有利地用于醫(yī)藥·醫(yī)療領(lǐng)域。