本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

鼻炎為臨床常見病和多發(fā)病，鼻炎的發(fā)生主要與過敏反應(yīng)有關(guān)，屬于免疫性炎癥的范疇。目前，治療鼻炎主要采用特非那丁等抗組胺藥物或曲尼司特、酮替芬等抗過敏藥物，這些藥物對鼻炎的慢性化和反復(fù)發(fā)作療效較差或無效。因此，成分明確、質(zhì)量可控且安全高效的小分子化合物在研制鼻炎治療藥物方面，具有潛在的價值。

從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最有重要價值。

本發(fā)明涉及的化合物I是一個2009年發(fā)表(Pei Tang et al.,2009.Atropurpuran,a novel diterpene with an unprecedented pentacyclic cage skeleton,from Aconitum hemsleyanum var.atropurpureum.Tetrahedron Letters 50(2009)460–462)的化合物，我們對化合物I進行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物，并對該組合物抗鼻炎活性進行了評價，其具有抗鼻炎活性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為85％和15％。

本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。

藥效學(xué)實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗鼻炎作用。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽具有同樣的藥效。

組合物10mg/kg口服給藥，對抗原(卵白蛋白)和組胺所致大鼠搔抓鼻部、打噴嚏反應(yīng)及鼻腔血管通透性升高具有抑制作用，因此，可用于制備治療鼻炎的藥物。

以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

具體實施方式

實施例1化合物Atropurpuran的制備

化合物Atropurpuran(I)的制備方法參照Pei Tang等人發(fā)表的文獻(Pei Tang et al.,2009.Atropurpuran,a novel diterpene with an unprecedented pentacyclic cage skeleton,from Aconitum hemsleyanum var.atropurpureum.Tetrahedron Letters 50(2009)460–462)的方法。

實施例2Atropurpuran的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(312mg，1.00mmol)溶于10mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌6h。6h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的黃色粉末(309mg，74％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.86(s,1H),5.23(s,1H),4.87(s,1H),4.83(s,1H),4.39(s,1H),4.00(s,2H),3.91(s,1H),3.58(s,2H),3.01(s,1H),2.27(s,1H),2.15(d,J＝6.3Hz,2H),2.09–2.00(m,5H),1.78(dd,J＝35.2,19.2Hz,2H),1.71–1.65(m,1H),1.41(s,2H),0.99(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.55(s),203.16(s),150.94(s),125.16(s),111.66(s),78.63(s),71.39(s),57.77(s),47.73(s),40.79(s),34.58(s),33.01(s),32.69(s),29.25(s),29.34(s),26.52(s),24.23(s),22.30(s),20.64(s).

HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd for C₂₂H₂₈BrO₃:419.1222；found 419.1226.

實施例3Atropurpuran的O-(四氫吡咯基)乙基衍生物(III)的合成

將化合物II(209mg，0.5mmol)溶于18mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和吡咯烷(1420mg，20mmol)，混合物加熱回流2h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集棕色集中洗脫帶，濃縮即得到化合物III的棕色固體(125mg,61％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.78(s,1H),5.15(s,1H),4.61(d,J＝10.5Hz,2H),4.45(s,1H),3.83(s,1H),3.53(s,2H),2.94(s,1H),2.62(s,2H),2.46(s,4H),2.20(s,1H),2.08(d,J＝6.0Hz,2H),2.00–1.91(m,3H),1.75(d,J＝2.1Hz,2H),1.69(s,2H),1.62(d,J＝5.5Hz,5H),1.30(s,2H),0.91(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.65(s),203.36(s),151.04(s),125.36(s),111.76(s),78.83(s),67.20(s),57.97(s),54.33(d,J＝17.1Hz),47.82(s),41.00(s),34.67(s),32.79(s),29.45(s),29.22(s),26.61(s),25.14(s),24.43(s),22.40(s),20.84(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₃₆NO₃:410.2695；found:410.2699。

實施例4Atropurpuran的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物的合成

將化合物II(209mg，0.5mmol)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和1H-四氮唑(1401mg，20mmol)，混合物加熱回流4h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。因為互變異構(gòu)作用，在反應(yīng)條件下會生成1H-四氮唑基和2H-四氮唑基兩種取代產(chǎn)物。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:0.8，v/v)，收集黃色集中洗脫帶，再將洗脫帶濃縮，用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:0.4，v/v)，依次收集兩個淡黃色的洗脫帶，濃縮前1個洗脫帶即得到化合物IV的黃色粉末(83.6mg,41％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.74(s,1H),5.05(s,1H),4.61–4.48(m,3H),4.19(s,1H),4.12(s,1H),3.80(s,2H),3.75(s,1H),2.86(s,1H),2.08(s,1H),1.97(d,J＝2.9Hz,2H),1.90–1.81(m,3H),1.69–1.57(m,4H),1.54(s,1H),1.25(s,2H),0.80(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.46(s),203.17(s),150.83(s),144.83(s),125.18(s),111.56(s),78.65(s),66.57(s),57.79(s),47.63(s),46.37(s),40.80(s),34.49(s),32.59(s),29.27(s),29.02(s),26.43(s),24.24(s),22.21(s),20.67(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₃H₂₉N₄O₃:409.2240；found:409.2244。

實施例5本發(fā)明組合物對卵白蛋白引起大鼠過敏性鼻炎的影響

雄性SD大鼠，體重180～220g，腹腔注射卵白蛋白1mg及氫氧化鋁凝膠10mg，其后隔日注射1次，共7次。從第14天始，每日在大鼠兩側(cè)鼻腔內(nèi)滴入1mg/ml卵白蛋白生理鹽水溶液10ul，共7次。末次滴注后立刻觀察30分鐘內(nèi)大鼠打噴嚏及擦鼻的次數(shù)，試驗藥物于卵白蛋白末次滴注前1小時口服給予。

組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的85mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網(wǎng)的15mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

由表1可見，組合物(10mg/kg)明顯抑制卵白蛋白所致過敏性鼻炎大鼠的噴嚏和搔抓鼻部反應(yīng)?；衔颕II和化合物IV無此作用。

表1本發(fā)明組合物對卵白蛋白引起大鼠過敏性鼻炎的影響

*p<0.05，與對照組比較

實施例6本發(fā)明組合物對組胺引起的大鼠鼻炎的影響

雄性SD大鼠，體重180～220g，口服給予試驗藥物后1小時，兩側(cè)鼻腔內(nèi)滴入1M組胺生理鹽水溶液10ul，觀察30分鐘內(nèi)大鼠打噴嚏及擦鼻的次數(shù)。

由表2可見，本發(fā)明組合物(10mg/kg)明顯減少組胺所致鼻炎大鼠的噴嚏次數(shù)，對搔抓鼻部反應(yīng)呈抑制趨勢。化合物III和化合物IV無此作用。

表2本發(fā)明組合物對組胺引起大鼠鼻炎的影響

*p<0.05，與對照組比較

實施例7本發(fā)明組合物對卵白蛋白、組胺引起大鼠鼻腔血管通透性升高的影響

雄性SD大鼠，體重180～220g，分別以主動致敏大鼠和正常大鼠觀察卵白蛋白及組胺引起的鼻腔血管通透性升高，大鼠的致敏方法同過敏性鼻炎試驗，在初次免疫后第14天，大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40mg/kg，麻醉后自氣管向鼻腔插管，固定后將此插管與恒流泵相連(0.25ml/min)，以37℃生理鹽水沖洗鼻腔10分鐘，其后大鼠尾靜脈注射1％Evans藍生理鹽水溶液5ml/kg，3分鐘后收集灌流液10分鐘。在致敏大鼠和正常大鼠，灌流液中分別含卵白蛋白1mg/ml和組胺40ug/ml，自鼻腔收集的灌流液經(jīng)1200×g離心10分鐘，620nm處比色測定上清液中的Evans藍濃度，受試藥物與抗原或組胺灌流前1小時口服給藥。

由表3可見，本發(fā)明組合物(10mg/kg)明顯抑制卵白蛋白所致過敏性鼻炎大鼠的鼻腔血管通透性?；衔颕II和化合物IV無此作用。

表3本發(fā)明組合物對卵白蛋白引起大鼠鼻腔血管通透性升高的影響

**p<0.01，與對照組比較

由表4可見，本發(fā)明組合物10mg/kg明顯降低組胺所致大鼠的鼻腔血管通透性。化合物III和化合物IV無此作用。

表4本發(fā)明組合物對組胺引起大鼠鼻腔血流通透性升高的影響

**p<0.01，與對照組比較

結(jié)論：組合物口服給藥，對抗原(卵白蛋白)和組胺所致大鼠搔抓鼻部、打噴嚏反應(yīng)及鼻腔血管通透性升高具有顯著抑制作用，因此，可用于制備治療鼻炎的藥物?；衔颕II和化合物IV對抗原(卵白蛋白)和組胺所致大鼠搔抓鼻部、打噴嚏反應(yīng)及鼻腔血管通透性升高沒有顯著抑制作用，因此，不可用于制備治療鼻炎的藥物。

實施例8本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。

實施例9本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。