本發(fā)明涉及一種地榆皂苷ii聚合物膠束及其制備方法，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
骨髓抑制是臨床上常見(jiàn)的造血系統(tǒng)疾病，各系統(tǒng)腫瘤性疾病的放射治療和/或化學(xué)治療、電離輻射引起的放射損傷、病毒性肝炎、微小病毒感染或藥物等因素均可引起骨髓抑制。骨髓抑制主要表現(xiàn)為骨髓微環(huán)境、造血干細(xì)胞、造血細(xì)胞生長(zhǎng)因子等的損傷，粒、紅、巨核細(xì)胞系統(tǒng)一系、二系或三系細(xì)胞受抑制；其中，粒細(xì)胞缺乏會(huì)引起嚴(yán)重感染，紅細(xì)胞明顯減少會(huì)引起嚴(yán)重貧血，血小板明顯下降引起嚴(yán)重出血，甚至導(dǎo)致死亡。由于骨髓抑制嚴(yán)重威脅著患者的生命健康，尤其對(duì)進(jìn)行放化療的腫瘤患者的生活質(zhì)量帶來(lái)不利影響，因此目前許多研究小組都致力于尋找有效的藥物來(lái)防治骨髓抑制。
地榆皂苷ⅱ，化學(xué)名：3-o-α-l-阿拉伯糖基-19α-羥基烏索-12烯-28-羧酸(ziyu-glycosideii)，是從薔薇科地榆屬植物地榆(sanguisorbaofficinalisl.)或長(zhǎng)葉地榆[s.officinalisl.var.longifolia(bertol.)yuetli]的根中提取得到的一種有效成分。cn101119740a公開(kāi)了地榆皂苷ⅱ在制備升高紅細(xì)胞和血紅蛋白的藥物中的用途。然而，地榆皂苷ii在水中溶解度低，口服胃腸吸收率小，造成該藥物口服生物利用度低，大大限制了在臨床上的應(yīng)用。
聚合物膠束作為藥用載體可使難溶藥物增溶，且具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、優(yōu)良的組織滲透性、體內(nèi)滯留時(shí)間長(zhǎng)、能使藥物有效地到達(dá)靶點(diǎn)等特點(diǎn)，對(duì)難溶性藥物來(lái)說(shuō)是一種優(yōu)良的載體。目前，用于制備聚合物膠束的載體材料種類繁多，通常采用兩親性嵌段共聚物，親水段可選用聚乙二醇、聚氧乙烯、聚維酮、殼聚糖等，疏水段材料主要有聚丙烯、聚苯乙烯、聚氨基酸、聚乳酸、精胺或短鏈磷脂等等。根據(jù)主藥理化性質(zhì)選擇合適的聚合物材料，從而制備得到制劑質(zhì)量符合要求的膠束，并使藥物能夠從中有效地釋放進(jìn)而在生物體內(nèi)發(fā)揮藥效，是設(shè)計(jì)聚合物膠束面臨的主要難題之一。
因此，開(kāi)發(fā)一種制劑質(zhì)量較好且藥效明確的地榆皂苷ⅱ聚合物膠束，用于治療和/或預(yù)防骨髓抑制，成為了一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種地榆皂苷ii聚合物膠束及其制備方法。
本發(fā)明提供了一種聚合物膠束，它是包含下述重量配比的原輔料制備而成：地榆皂苷ii20份、mpeg-pla-phe(boc)100份～5000份。
進(jìn)一步的，它是由下述重量配比的原輔料制備而成：地榆皂苷ii20份、mpeg-pla-phe(boc)100份～5000份。
優(yōu)選的，它是由下述重量配比的原輔料制備而成：地榆皂苷ii20份、mpeg-pla-phe(boc)400份～5000份。
進(jìn)一步優(yōu)選的，它是由下述重量配比的原輔料制備而成：地榆皂苷ii20份、mpeg-pla-phe(boc)4000份。
其中，所述的聚合物膠束還包含糖0～5份，所述的糖選自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、果糖、甘露醇或乳糖中的一種或幾種。
其中，所述的mpeg-pla-phe(boc)中mpeg數(shù)均分子量在1000～5000之間，pla數(shù)均分子量在1000～50000之間。
進(jìn)一步的，所述的mpeg-pla-phe(boc)中mpeg數(shù)均分子量為2000，pla數(shù)均分子量為4000。
本發(fā)明提供了一種所述聚合物膠束的制備方法，包括如下步驟：取各重量配比的地榆皂苷ii、mpeg-pla-phe(boc)，溶解于12～125倍體積量的乙醇中，再將乙醇蒸發(fā)除去，即得聚合物膠束。
進(jìn)一步的，所述的制備方法還包括如下步驟：取0～5份糖，與所述的聚合物膠束一并溶解于水中，使地榆皂苷ii的濃度為0.01mg/ml～20mg/ml，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，冷凍干燥，即得聚合物膠束凍干粉。
本發(fā)明提供了所述聚合物膠束在制備治療和/或預(yù)防骨髓抑制的藥物中的用途。
進(jìn)一步的，所述的藥物是治療和/或預(yù)防化學(xué)物質(zhì)所致骨髓抑制的藥物。
更進(jìn)一步的，所述的藥物是升高外周血白細(xì)胞(wbc)、中性粒細(xì)(neut)、紅細(xì)胞(rbc)、血小板(plt)或血紅蛋白(hgb)中一種或幾種的數(shù)量的藥物。
本發(fā)明提供了一種地榆皂苷ii聚合物膠束及其制備方法。質(zhì)量評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)表明，僅有在使用本發(fā)明mpeg-pla-phe(boc)作為載體材料時(shí)，制備得到的地榆皂苷ii聚合物膠束質(zhì)量最佳，采用其他材料則會(huì)導(dǎo)致制劑質(zhì)量的下降。藥效實(shí)驗(yàn)中，與模型組比較，本發(fā)明地榆皂苷ii膠束能顯著升高外周血wbc、rbc、plt、neut和hgb數(shù)量，且藥效明顯優(yōu)于地榆皂苷ii原藥，表明本發(fā)明地榆皂苷ii聚合物膠束對(duì)骨髓抑制有較好的治療和/或預(yù)防作用，能提高 難溶性藥物地榆皂苷ii的生物利用度。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明具體實(shí)施方式中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過(guò)購(gòu)買(mǎi)市售產(chǎn)品獲得。
實(shí)施例1本發(fā)明聚合物膠束的制備
取20mg地榆皂苷ii、100mgmpeg1000-pla1000-phe(boc)，溶解于15ml乙醇，55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑。
加入50ml注射用糖水(含5mg葡萄糖)溶解藥膜，所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過(guò)濾后凍干，得地榆皂苷ii膠束凍干粉。
實(shí)施例2本發(fā)明聚合物膠束的制備
取20mg地榆皂苷ii、400mgmpeg2000-pla4000-phe(boc)，溶解于15ml乙醇，55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑。
加入50ml注射用糖水(含5mg蔗糖)溶解藥膜，所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過(guò)濾后凍干，得地榆皂苷ii膠束凍干粉。
上述地榆皂苷ii膠束凍干粉復(fù)溶性好，復(fù)溶前后粒徑分布變化較小。其主藥含量達(dá)0.4mg/ml，包封率>99％，粒徑<100nm，pdi<0.3。
實(shí)施例3本發(fā)明聚合物膠束的制備
取20mg地榆皂苷ii、2000mgmpeg5000-pla3000-phe(boc)，溶解于50ml乙醇，55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑。
加入50ml注射用糖水(含5mg海藻糖)溶解藥膜，所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過(guò)濾后凍干，得地榆皂苷ii膠束凍干粉。
實(shí)施例4本發(fā)明聚合物膠束的制備
取20mg地榆皂苷ii、4000mgmpeg2000-pla5000-phe(boc)，溶解于50ml乙醇，55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑。
加入50ml注射用糖水(含5mg果糖)溶解藥膜，所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過(guò)濾后凍干，得地榆皂苷ii膠束凍干粉。
以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)例證明本發(fā)明的有益效果。
含量測(cè)定：
儀器：高效液相色譜儀waterse2695
色譜條件：色譜柱：十八烷基鍵合硅膠(4.6×250mm，5μm)
檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm
流動(dòng)相：甲醇：0.1％甲酸＝80:20
流速：1ml/min
柱溫：25℃
進(jìn)樣量：20μl
樣品配制：取地榆皂苷膠束溶液以甲醇稀釋適當(dāng)倍數(shù)，注入高效液相色譜儀中測(cè)量粒徑及分布。
粒徑及分布測(cè)定：
儀器：馬爾文zs90
樣品配制：取地榆皂苷膠束溶液以超純水稀釋適當(dāng)倍數(shù)，注入粒度儀中測(cè)量粒徑及分布。
實(shí)驗(yàn)例1采用不同載體材料制備的聚合物膠束的質(zhì)量評(píng)價(jià)
本研究前期根據(jù)地榆皂苷ii的性質(zhì)考察了多種親水段、疏水段材料組成的兩親性嵌段共聚物，以下列出所得聚合物膠束質(zhì)量較好的五種材料。
1、mpeg-pla-phe(boc)：為叔丁氧基苯丙氨酸封端的甲氧基聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物，其親水鏈為數(shù)均分子量為1000～5000的mpeg，親酯鏈為數(shù)均分子量為1000～5000的pla，結(jié)構(gòu)如式i：
該高分子聚合物合成方法見(jiàn)文獻(xiàn)：[1]陳雪冬，楊世林，馮育林，劉珂等，牛蒡子苷元mpeg-pdlla聚合物膠束的制備及表征[j].醫(yī)藥，2015，18(8)：153；[2]陳雪冬，一種新型載多西他賽mpeg-pdlla-phe(boc)膠束的制備及 評(píng)價(jià)，江西中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文，2016.6。
2、mpeg-pla：為甲氧基聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物，其親水鏈為數(shù)均分子量為1000～5000的mpeg，親酯鏈為數(shù)均分子量為1000～5000的pla，結(jié)構(gòu)如式ii：
該高分子聚合物合成方法見(jiàn)上述文獻(xiàn)。
3、poloxamerf68即泊洛沙姆，為聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物。
4、solutolhs15為聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯。
5、聚氧乙烯蓖麻油el35。
poloxamerf68，solutolhs15，聚氧乙烯蓖麻油el35均購(gòu)于德國(guó)basf公司。
實(shí)驗(yàn)方法
1、分別稱取20mg地榆皂苷ii及400mg的不同高分子材料mpeg2000-pla4000-phe(boc)，mpeg2000-pla4000，poloxamerf68，solutolhs15及聚氧乙烯蓖麻油el35溶解于15ml乙醇，55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑后加入50ml注射用水溶解藥膜，所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過(guò)濾后，測(cè)定膠束中地榆皂苷ii含量及粒徑分布，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1采用不同載體材料制備的聚合物膠束的質(zhì)量評(píng)價(jià)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：采用本發(fā)明載體材料mpeg-pla-phe(boc)制備的聚合物膠束 中地榆皂苷ii含量最高(達(dá)到0.391mg/ml)，平均粒徑較小(87nm)，且分散指數(shù)(pdi)僅0.16，表明所得膠束的粒徑非常均勻。另兩種材料mpeg-pla、poloxamerf68會(huì)導(dǎo)致藥物含量及粒徑均勻度的明顯降低，而且采用mpeg-pla得到的膠束平均粒徑較大，不適于注射。使用solutolhs15、聚氧乙烯蓖麻油el35同樣存在藥物含量下降的問(wèn)題。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：僅有在使用本發(fā)明mpeg-pla-phe(boc)作為載體材料時(shí)，制備得到的地榆皂苷ii聚合物膠束質(zhì)量最佳，采用其他材料則會(huì)導(dǎo)致制劑質(zhì)量的下降。
2、分別稱取20mg地榆皂苷ii及400mg的不同數(shù)均分子量的mpeg-pla-phe(boc)溶解于15ml乙醇，55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑后加入50ml注射用水溶解藥膜，所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過(guò)濾后，測(cè)定膠束中地榆皂苷ii含量及粒徑分布，結(jié)果見(jiàn)表2。
表2采用不同分子量mpeg-pla-phe(boc)制備的聚合物膠束的質(zhì)量評(píng)價(jià)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：采用本發(fā)明數(shù)均分子量范圍內(nèi)的mpeg-pla-phe(boc)作為載體材料，均能制備得到地榆皂苷ii聚合物膠束；其中，采用mpeg2000-pla4000-phe(boc)制備的聚合物膠束中地榆皂苷ii含量最高(達(dá)到0.391mg/ml)，平均粒徑較小(87nm)，且分散指數(shù)(pdi)僅0.16，表明所得膠束的質(zhì)量最佳。
實(shí)驗(yàn)例2根據(jù)不同載體材料用量制備的聚合物膠束的質(zhì)量評(píng)價(jià)
按照質(zhì)量比1:3-1:250的比例稱取地榆皂苷ii及mpeg-pla-phe(boc)(固定地榆皂苷ii質(zhì)量為20mg，mpeg-pla-phe(boc)質(zhì)量隨比例變化)，溶解于50ml乙醇，55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑后加入50ml注射用水溶解藥膜，所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過(guò)濾后，測(cè)定膠束中地榆皂苷ii含量及粒徑分布，結(jié)果見(jiàn)表3。
表3根據(jù)不同載體材料用量制備的聚合物膠束的質(zhì)量評(píng)價(jià)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：載體材料mpeg-pla-phe(boc)用量為地榆皂苷ii5～250倍時(shí)所得聚合物膠束質(zhì)量較好：藥物含量不低于0.01mg/ml，平均粒徑在90nm以下，pdi均低于0.2；其中，mpeg-pla-phe(boc)用量在地榆皂苷ii質(zhì)量20～250倍范圍內(nèi)，制劑質(zhì)量可得到進(jìn)一步優(yōu)化，主要表現(xiàn)在藥物含量較高，可達(dá)到0.4mg/ml左右；其中，地榆皂苷ii：mpeg-pla-phe(boc)質(zhì)量比為1：200時(shí)膠束質(zhì)量最佳：藥物含量最高、粒徑分布最為均勻。
實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明地榆皂苷ii聚合物膠束的藥效實(shí)驗(yàn)
1、實(shí)驗(yàn)材料、試劑、儀器
受試藥物地榆皂苷ii膠束、地榆皂苷ii原粉。
工具藥物環(huán)磷酰胺。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物km-小鼠：18.5～22.5g。
實(shí)驗(yàn)儀器：全自動(dòng)血球分析儀；bs-600l電子天平：規(guī)格：600g/0.1g，上海友聲衡器有限公司。
2、統(tǒng)計(jì)方法
用spss17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差
3、實(shí)驗(yàn)方法
3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型制備
所有動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按體重隨機(jī)分為：空白組；模型組；地榆皂苷ii膠束樣品①～④組(分別使用實(shí)施例1～4制備的膠束)，給藥劑量2.5mg ·kg-1，臨用前配制；地榆皂苷ii組：地榆皂苷ii原藥粉末，用10％dmso-生理鹽水溶解，給藥劑量2.5mg·kg-1，臨用前配制。實(shí)驗(yàn)第1天，除空白組外，其余各組小鼠按120mg·kg-1劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺生理鹽水溶液，空白組小鼠腹腔注射等體積生理鹽水。
3.2給藥
各實(shí)驗(yàn)組自實(shí)驗(yàn)第1天開(kāi)始按劑量、給藥方式給予相應(yīng)藥物，空白組和模型組小鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水，連續(xù)6天。
3.3標(biāo)本采集
實(shí)驗(yàn)第7天，各實(shí)驗(yàn)組小鼠眼眶取血，用裝有edta抗凝劑的0.5mlep管收集待測(cè)。
3.4檢測(cè)指標(biāo)及方法
采用全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀對(duì)各實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血白細(xì)胞(wbc)、中性粒細(xì)胞(neut)紅細(xì)胞(rbc)、血小板(plt)、血紅蛋白(hgb)進(jìn)行計(jì)數(shù)。
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表4各實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血wbc、rbc和plt數(shù)量
注：與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01；注：與地榆皂苷ii組比較，△p<0.05，△△p<0.01。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與模型組比較，本發(fā)明地榆皂苷ii膠束樣品實(shí)驗(yàn)組①～④小鼠外周血wbc、rbc、plt數(shù)量均有顯著升高(p<0.05)，地榆皂苷ii組則沒(méi)有顯著性差異；與地榆皂苷ii組比較，本發(fā)明地榆皂苷ii膠束樣品實(shí)驗(yàn)組①～④小鼠外周血wbc、rbc、plt數(shù)量均有顯著升高(p<0.05)。
表5各實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血neut、hgb計(jì)數(shù)
注：與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01；與地榆皂苷ii組比較，△p<0.05，
△△p<0.01。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與模型組比較，本發(fā)明地榆皂苷ii膠束樣品實(shí)驗(yàn)組①～④小鼠外周血neut和hgb數(shù)量均有顯著升高(p<0.05)，地榆皂苷ii組無(wú)顯著性差異；與地榆皂苷ii組比較，本發(fā)明地榆皂苷ii膠束樣品實(shí)驗(yàn)組①～④小鼠外周血neut和hgb數(shù)量均有顯著升高(p<0.05)。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本發(fā)明地榆皂苷ii聚合物膠束對(duì)骨髓抑制有較好的治療和/或預(yù)防作用，藥效明顯優(yōu)于直接用地榆皂苷ii原藥給藥。