相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)根據(jù)35u.s.c.§119(e)要求于2014年9月16日提交的美國(guó)申請(qǐng)?zhí)?2/051,182的優(yōu)先權(quán)，該申請(qǐng)以引用的方式整體并入本文中。關(guān)于序列表的陳述與本申請(qǐng)相關(guān)的序列表是以文本格式代替紙質(zhì)副本提供，且在此以引用的方式并入本說(shuō)明書中。含有序列表的文本文件的名稱為pola_005_01wo_seqlist_st25.txt。該本文件為約97kb，創(chuàng)建于2015年9月15日，且經(jīng)由efs-web以電子方式呈交。背景本發(fā)明大體上涉及精氨酸脫亞氨酶(adi)蛋白，包括與adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的adi蛋白。此類adi蛋白可用于治療精氨酸依賴性或相關(guān)疾病諸如癌癥。相關(guān)技術(shù)的描述氨基酸剝奪療法可為某些形式的癌癥的有效治療方法。迄今為止，存在一個(gè)已知的與此方法有關(guān)的臨床實(shí)例，其利用天冬酰胺酶來(lái)降低天冬酰胺的循環(huán)水平且抑制蛋白質(zhì)合成。此治療方法對(duì)急性淋巴母細(xì)胞性白血病尤為有效(avramis2005,vierapinheiro2004)。急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞需要氨基酸天冬酰胺以供生長(zhǎng)和增殖。相比之下，大多數(shù)正常人細(xì)胞能夠合成天冬酰胺且不受天冬酰胺耗盡的影響。因此，用天冬酰胺酶減少血清天冬酰胺可選擇性殺死癌細(xì)胞，而不會(huì)損害正常細(xì)胞、組織和宿主。大腸桿菌(e.coli)衍生形式的天冬酰胺酶已被批準(zhǔn)供人使用。然而，天冬酰胺酶僅發(fā)現(xiàn)于微生物中；此使得其在人體內(nèi)具高度免疫原性且在注射之后還具有短血清半衰期(avramis2005)。為了使天冬酰胺酶成為更有效的藥物，通過(guò)將大腸桿菌衍生的天冬酰胺酶與聚乙二醇(peg)一起配制以降低此種酶的免疫原性和相關(guān)變態(tài)反應(yīng)來(lái)將這些缺點(diǎn)減至最低程度。此外，peg極大地延長(zhǎng)了天冬酰胺酶的循環(huán)半衰期，從而使治療頻率與該療法的總成本均降低。peg配制的天冬酰胺酶被批準(zhǔn)使用且以商標(biāo)名(2011、avramis2005、vierapinheiro2004、fu2007、zeidan2008)出售。精氨酸為人和小鼠的另一非必需氨基酸(關(guān)于評(píng)述參見rogers1994)。在人體內(nèi)，精氨酸可由瓜氨酸以兩個(gè)步驟經(jīng)由克雷布斯(尿素)循環(huán)酶精氨基琥珀酸鹽合成酶(ass，l-瓜氨酸:l-天冬氨酸連接酶[形成amp]，ec6.3.4.5)和精氨基琥珀酸鹽裂解酶(asl，l-精氨基琥珀酸鹽精氨酸-裂解酶，ec4.3.2.)來(lái)合成(haines2011、wu2009、morris2006、husson2003、tapiero2002、rogers1994)。ass催化瓜氨酸和天冬氨酸轉(zhuǎn)化成精氨基琥珀酸鹽，其然后通過(guò)asl轉(zhuǎn)化成精氨酸和富馬酸。精氨酸缺乏型膳食在人體中不引起高氨血癥、乳清酸尿，還不改變成年人體內(nèi)全身一氧化氮(no)合成的速率(tapiero2002、castillo1995、rogers1994、carey1987、barbul1986、snyderman1959、rose1949)。雖然早產(chǎn)嬰兒似乎需要精氨酸(wu2004)，但精氨酸水平不與嬰兒、兒童和年輕成年人間的年齡相關(guān)(lücke2007)。在1992年，takaku和sugimura分別報(bào)導(dǎo)人黑素瘤和肝細(xì)胞癌(hcc)細(xì)胞株似乎需要精氨酸以供生長(zhǎng)。其它研究表明聚乙二醇化adi有效治療黑素瘤和肝細(xì)胞瘤，而幾乎沒(méi)有有害作用。adi-peg20治療在一段時(shí)間內(nèi)需要多個(gè)劑量。在許多次治療之后，可產(chǎn)生可限制其持久有效性的抗adi-peg20抗體。因此，本領(lǐng)域中對(duì)用于治療中的與抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性以改進(jìn)和延伸精氨酸耗盡療法的功效的adi存在需要。本發(fā)明提供此優(yōu)點(diǎn)和關(guān)于治療癌癥的其它優(yōu)點(diǎn)。參考文獻(xiàn)：avramisvi,panosyaneh.2005.clinpharmacokinet44:367-393；barbula.1986.jparenteralenteralnutr10:227-238；careygp等人1987.jnutr117:1734-1739；castillol等人1995.amjphysiol268(endocrinolmetab31):e360-367；fuch,sakamotokm.2007.expertopinpharmacother8:1977-1984；hainesrj等人2011.intjbiochemmolbiol2:8-23；hussona等人2003.eurjbiochem270:1887-1899；lücket等人2007.clinchemlabmed45:1525-1530；morrissmjr.2006.amjclinnutr83(增):598s-512s；rogersqr.1994.inproceedingsfromasymposiumhonoringwillardj.visek-fromammoniatocancerandgeneexpression.專業(yè)出版物86-1994年4月,agricultureexperimentstation,universityofillinois,211mumfordhall,urbana,il61801,第9-21頁(yè)；tapieroh等人2002.biomedpharmacother56:439-445,2002；vierapinheirojp,boosj.2004.brjhaematol125:117-127；wug等人2009.aminoacids37:153-168；wug等人2004.jnutrbiochem15:442-451；zeidana等人2008.expertopinbiolther9:111-119)。發(fā)明概要某些實(shí)施方案涉及一種分離的精氨酸脫亞氨酶，其中所述分離的精氨酸脫亞氨酶與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性。還包括治療性組合物或藥學(xué)組合物，其包含分離的精氨酸脫亞氨酶或其具有adi活性的片段以及藥學(xué)上可接受的載體。在某些實(shí)施方案中，組合物為無(wú)菌的和/或大體上不含熱原質(zhì)，諸如內(nèi)毒素。在一些實(shí)施方案中，與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的分離的精氨酸脫亞氨酶不來(lái)自人型支原體。在一些實(shí)施方案中，與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的分離的精氨酸脫亞氨酶來(lái)自列于表1中的生物體。在某些實(shí)施方案中，與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的分離的精氨酸脫亞氨酶具有一種或多種類似于或優(yōu)于adi-peg20的性質(zhì)。就此而言，所述一種或多種性質(zhì)包括但不限于kcat、km、最佳ph值、穩(wěn)定性、體內(nèi)蛋白水解穩(wěn)定性或不需要尚未存在于血液中的離子或輔因子或其任何組合。在一些實(shí)施方案中，與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的分離的精氨酸脫亞氨酶與人型支原體精氨酸脫亞氨酶相比具有至少5、10、15或20個(gè)表面殘基變化。在某些實(shí)施方案中，與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的分離的精氨酸脫亞氨酶與人型支原體精氨酸脫亞氨酶相比具有約20至135個(gè)表面殘基變化、約40至100個(gè)表面殘基變化、約30至60個(gè)表面殘基變化、約80至100個(gè)表面殘基變化或約100至120個(gè)表面殘基變化。在某些實(shí)施方案中，與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的分離的精氨酸脫亞氨酶來(lái)自唾液支原體(mycoplasmasalivarium)、泡沫支原體(mycoplasmaspumans)、加拿大支原體(mycoplasmacanadense)、耳支原體(mycoplasmaauris)、豬滑液支原體(mycoplasmahyosynoviae)、泄殖腔支原體(mycoplasmacloacale)、鵝支原體(mycoplasmaanseris)、產(chǎn)堿支原體(mycoplasmaalkalescens)、口腔支原體(mycoplasmaorale)、惰性支原體(mycoplasmainers)、火雞支原體(mycoplasmameleagridis)、蜂房支原體(mycoplasmaalvi)、穿透支原體(mycoplasmapenetrans)、雞支原體(mycoplasmagallinarum)、梨支原體(mycoplasmapirum)、靈長(zhǎng)類支原體(mycoplasmaprimatum)、發(fā)酵支原體(mycoplasmafermentans)、產(chǎn)脂支原體(mycoplasmalipofaciens)、氣管支原體(mycoplasmafelifaucium)、模仿支原體(mycoplasmaimitans)、乳白色支原體(mycoplasmaopalescens)、毛氏支原體(mycoplasmamoatsii)、象支原體(mycoplasmaelephantis)、肺炎支原體(mycoplasmapneumoniae)、龜支原體(mycoplasmatestudinis)、支原體屬某種(mycoplasmasp.)cag:877或支原體屬某種cag:472。與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的說(shuō)明性精氨酸脫亞氨酶包含seqidno:2至seqidno:28中所列的氨基酸序列中的任何一個(gè)或多個(gè)。在一些實(shí)施方案中，與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的分離的精氨酸脫亞氨酶已經(jīng)修飾以移除至少一個(gè)聚乙二醇化位點(diǎn)。在與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的精氨酸脫亞氨酶的某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)賴氨酸殘基已通過(guò)氨基酸取代進(jìn)行修飾。就此而言，在某些實(shí)施方案中，至少約5個(gè)賴氨酸殘基、至少約10個(gè)賴氨酸殘基或至少約20個(gè)賴氨酸殘基已通過(guò)氨基酸取代進(jìn)行修飾。在一些實(shí)施方案中，與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的精氨酸脫亞氨酶是經(jīng)由接頭共價(jià)鍵結(jié)至peg分子。就此而言，與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的精氨酸脫亞氨酶可共價(jià)鍵結(jié)至一個(gè)或多個(gè)peg分子，諸如共價(jià)鍵結(jié)至約1至約10或約2至約8個(gè)peg分子。peg分子可為直鏈或支鏈peg分子且總重均分子量可為約1,000至約40,000或總重均分子量為約10,000至約30,000。在一些實(shí)施方案中，在peg經(jīng)由接頭共價(jià)鍵結(jié)至本文所描述的adir的情況下，接頭可包含琥珀?；?、酰胺基、酰亞胺基、氨基甲酸酯基、酯基、環(huán)氧基、羧基、羥基、碳水化合物、酪氨酸基團(tuán)、半胱氨酸基團(tuán)、組氨酸基團(tuán)、亞甲基或其任何組合。在具體實(shí)施方案中，琥珀?；膩?lái)源為琥珀酸琥珀酰亞胺酯。還包括編碼本文所描述的分離的精氨酸脫亞氨酶的多核苷酸、包含所述多核苷酸的載體和包含所述載體的分離的宿主細(xì)胞。某些實(shí)施方案涉及組合物，其包含如本文所描述與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的分離的精氨酸脫亞氨酶和生理學(xué)上可接受的載體。在某些實(shí)施方案中，組合物還包含化學(xué)治療劑。示例性化學(xué)治療劑包括但不限于多西他賽(docetaxel)、卡鉑(carboplatin)、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、吉西他濱(gemcitabine)、順鉑(cisplatin)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)和依維莫司(everolimus)。還包括治療癌癥、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展的方法，其包括向有需要的患者施用治療有效量的包含如本文所描述與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的分離的精氨酸脫亞氨酶和生理學(xué)上可接受的載體的組合物，由此治療癌癥、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展。在某些實(shí)施方案中，有需要的患者已確定具有抗adi-peg20抗體。在一些實(shí)施方案中，癌癥選自由以下組成的組：肝細(xì)胞癌、黑素瘤(包括轉(zhuǎn)移性黑素瘤)、胰腺癌、前列腺癌、小細(xì)胞肺癌、間皮瘤、淋巴細(xì)胞性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴瘤、肝細(xì)胞瘤、肉瘤、白血病、急性髓樣白血病、復(fù)發(fā)性急性髓樣白血病、乳癌、卵巢癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、多形性神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、腎癌、膀胱癌、子宮癌、食道癌、腦部癌癥、頭頸癌、宮頸癌、睪丸癌和胃癌。一些實(shí)施方案包括治療癌癥、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展的方法，其包括向有需要的患者施用治療有效量的包含adi-peg20的組合物，且在一段時(shí)間之后，向患者施用包含如本文所描述與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的分離的精氨酸脫亞氨酶和生理學(xué)上可接受的載體的組合物，由此治療癌癥、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展。所述時(shí)間段可例如通過(guò)檢測(cè)患者中預(yù)定水平的抗adi-peg20抗體和/或測(cè)量或以其它方式觀測(cè)患者中的adi活性來(lái)確定，其中包含與患者抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的分離的精氨酸脫亞氨酶的組合物是在于患者中檢測(cè)到預(yù)定水平的所述抗adi-peg20抗體和/或測(cè)量或觀測(cè)到預(yù)定水平的adi活性之后施用。還包括本文所描述的分離的精氨酸脫亞氨酶蛋白，其用于制備或制造用于治療癌癥、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展的藥劑。附圖簡(jiǎn)述圖1a-1d說(shuō)明可綴合至本文所描述的adir酶的多種半胱氨酸反應(yīng)性peg分子。發(fā)明詳述本發(fā)明的實(shí)施方案涉及所選adi酶，其在一些實(shí)施方案中經(jīng)由例如穩(wěn)定接頭的接頭與peg綴合。在一些實(shí)施方案中，adi酶經(jīng)工程改造或選擇以例如相對(duì)于野生型序列或參考序列(參見例如表1)具有少量或以其它方式降低數(shù)目的表面賴氨酸殘基。所選adi酶選自來(lái)自不同生物體的大量adi酶，此是基于其有益性質(zhì)而進(jìn)行。這些性質(zhì)包括酶在人血液中經(jīng)由精氨酸adi轉(zhuǎn)化成瓜氨酸和氨水而形成低精氨酸濃度并維持的能力。在一些實(shí)施方案中，所選adi分子與adi-peg20相比對(duì)抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性，此類抗體可能因患者先前使用adi-peg20進(jìn)行的治療而產(chǎn)生。在某些實(shí)施方案中，adi酶經(jīng)聚乙二醇化以提供針對(duì)腎清除和蛋白水解的保護(hù)，以及降低的免疫原性或抗原性。為增加聚乙二醇化的有效性，對(duì)酶進(jìn)行修飾可工程改造至降低數(shù)目的表面賴氨酸殘基并且因此限制可用peg連接位點(diǎn)的數(shù)目。在一些情況下，降低賴氨酸殘基的數(shù)目提供在剩余的賴氨酸連接殘基處的更完全且均勻的聚乙二醇化。在一些實(shí)施方案中，經(jīng)選擇以將甲氧基-peg連接至adi的peg接頭提供化學(xué)穩(wěn)定鍵聯(lián)。預(yù)期穩(wěn)定接頭將增加分子的生物活性壽命?；瘜W(xué)上穩(wěn)定的接頭還將消除水解且減少附著于酶表面的去聚乙二醇化接頭可能發(fā)生的免疫反應(yīng)。這些累積規(guī)格產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)分子，其從患者的血液中有效移除精氨酸且不由來(lái)自先前精氨酸耗盡療法的抗adi-peg20抗體中和或清除。分子為聚乙二醇化的，以便延遲因其自身免疫原性產(chǎn)生的中和以及清除。這些因素將允許其替代adi-peg20或除adi-peg20之外(例如作為后繼藥物)進(jìn)行使用，以延長(zhǎng)精氨酸耗盡療法并且因此作為抗癌治療劑增加精氨酸耗盡治療的有效性。正常細(xì)胞不需要精氨酸來(lái)用于生長(zhǎng)，因?yàn)槠淇捎晒习彼嵬ㄟ^(guò)ass和asl以兩步法合成精氨酸。相比之下，某些癌癥不表達(dá)ass。某些癌癥不表達(dá)asl，而其它癌癥可能對(duì)ass和/或asl具有降低的表達(dá)，或可能不表達(dá)ass和/或asl。因此，這些癌癥對(duì)于精氨酸而言為營(yíng)養(yǎng)缺陷型的。此代謝差異可用于發(fā)展安全且有效的療法，以治療這些形式的癌癥。adi催化精氨酸經(jīng)由精氨酸雙水解酶途徑轉(zhuǎn)化成瓜氨酸，且因此可用于消除精氨酸。除非具體指出為相反的，否則本發(fā)明的實(shí)踐將使用病毒學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、分子生物學(xué)和該領(lǐng)域技術(shù)內(nèi)的重組dna技術(shù)的常規(guī)方法，下文出于說(shuō)明目的描述其中的許多方法。此類技術(shù)充分解釋于文獻(xiàn)中。參見例如currentprotocolsinproteinscience,currentprotocolsinmolecularbiologyorcurrentprotocolsinimmunology,johnwiley&sons,newyork,n.y.(2009)；ausubel等人,shortprotocolsinmolecularbiology,第3版,wiley&sons,1995；sambrook和russell,molecularcloning:alaboratorymanual(第3版,2001)；maniatis等人molecularcloning:alaboratorymanual(1982)；dnacloning:apracticalapproach,第i卷和第ii卷(d.glover編)；oligonucleotidesynthesis(n.gait編,1984)；nucleicacidhybridization(b.hames和s.higgins編,1985)；transcriptionandtranslation(b.hames和s.higgins編,1984)；animalcellculture(r.freshney編,1986)；perbal,apracticalguidetomolecularcloning(1984)和其它類似文獻(xiàn)。在重組dna、寡核苷酸合成和組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化(例如電穿孔、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染)中可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。酶促反應(yīng)和純化技術(shù)可根據(jù)制造商的規(guī)范或如本領(lǐng)域中通常所實(shí)現(xiàn)或如本文所描述來(lái)進(jìn)行。這些和相關(guān)技術(shù)和程序通?？筛鶕?jù)本領(lǐng)域中熟知的常規(guī)方法且如在本說(shuō)明書通篇中所引用和討論的各種通用和更具體的參考文獻(xiàn)中所描述來(lái)進(jìn)行。除非提供具體定義，否則本文所描述的結(jié)合分子生物學(xué)、分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)和醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)使用的命名法以及分子生物學(xué)、分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)和醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)的實(shí)驗(yàn)程序和技術(shù)為本領(lǐng)域中熟知且常用的。在重組技術(shù)、分子生物合成、微生物學(xué)合成、化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、配制和遞送以及患者的治療中可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。除非內(nèi)容另外明確規(guī)定，否則如本說(shuō)明書和隨附權(quán)利要求中所用，單數(shù)形式“一個(gè)/一種(a/an)”和“所述”包括多個(gè)參考物?！凹s”意謂量、水平、值、數(shù)目、頻率、百分比、尺寸、大小、量、重量或長(zhǎng)度相對(duì)于參考量、水平、值、數(shù)目、頻率、百分比、尺寸、大小、量、重量或長(zhǎng)度變化多達(dá)30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“氨基酸”包括天然存在的氨基酸和非天然氨基酸以及氨基酸類似物和模擬物。舉例來(lái)說(shuō)，天然存在的氨基酸包括在蛋白質(zhì)生物合成期間所用的20種(l)-氨基酸以及其它氨基酸，諸如4-羥基脯氨酸、羥基賴氨酸、鎖鏈素、異鎖鏈素、高半胱氨酸、瓜氨酸和鳥氨酸。非天然氨基酸包括例如正亮氨酸、正纈氨酸、對(duì)氟苯丙氨酸、乙硫氨酸及其類似物，其為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。氨基酸類似物包括天然和非天然氨基酸的修飾形式。此類修飾可包括例如氨基酸上的化學(xué)基團(tuán)和部分的取代或置換或通過(guò)氨基酸的衍生化進(jìn)行。氨基酸模擬物包括例如展現(xiàn)功能類似性質(zhì)(諸如參考氨基酸的電荷與電荷間隔特征)的有機(jī)結(jié)構(gòu)。舉例來(lái)說(shuō)，模擬精氨酸(arg或r)的有機(jī)結(jié)構(gòu)將具有以類似分子間隔定位的正電荷部分且與天然存在的arg氨基酸的側(cè)鏈的e-氨基具有相同程度的可移動(dòng)性。模擬物還包括受約束結(jié)構(gòu)，從而維持氨基酸或氨基酸官能團(tuán)的最佳間隔和電荷相互作用。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知或可確定什么結(jié)構(gòu)構(gòu)成功能等效氨基酸類似物和氨基酸模擬物。在本說(shuō)明書通篇中，除非上下文另外要求，否則字語(yǔ)“包含(comprise)”或諸如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”的變化形式應(yīng)理解為意味包括所陳述的要素或整數(shù)或要素或整數(shù)組，但不排除任何其它要素或整數(shù)或要素或整數(shù)組。“生物相容”是指材料或化合物通常對(duì)生物功能無(wú)害并且將不產(chǎn)生任何程度的不可接受的毒性，包括變應(yīng)原性和疾病病況。術(shù)語(yǔ)“不含內(nèi)毒素”和“大體上不含內(nèi)毒素”大體上涉及至多含有痕量(例如臨床上對(duì)受試者沒(méi)有有害生理作用的量)的內(nèi)毒素并且優(yōu)選不可檢測(cè)量的內(nèi)毒素的組合物、溶劑和/或容器。內(nèi)毒素為與某些細(xì)菌、典型地革蘭氏陰性細(xì)菌相關(guān)的毒素，不過(guò)內(nèi)毒素可發(fā)現(xiàn)于諸如單核細(xì)胞增多性李斯特菌(listeriamonocytogenes)的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌中。最常見內(nèi)毒素為發(fā)現(xiàn)于各種革蘭氏陰性細(xì)菌的外部膜中的脂多糖(lps)或脂寡糖(los)，且其代表這些細(xì)菌引起疾病的能力中的中心病原特征。在人體內(nèi)少量?jī)?nèi)毒素可引起發(fā)熱、血壓降低和炎癥和凝結(jié)活化以及其它有害生理作用。因此，在藥物制備中，往往需要從藥物產(chǎn)品和/或藥物容器中移除大多數(shù)或所有痕量的內(nèi)毒素，因?yàn)樯踔辽倭考纯稍谌梭w內(nèi)引起有害作用。去熱原烘箱可用于此目的，因?yàn)榈湫偷匦枰^(guò)300℃的溫度來(lái)分解大多數(shù)內(nèi)毒素。舉例來(lái)說(shuō)，基于諸如注射器或小瓶的主要包裝材料，250℃的玻璃化溫度與30分鐘的保留時(shí)間的組合往往足以達(dá)成內(nèi)毒素水平的3log降低。涵蓋其它移除內(nèi)毒素的方法，包括例如如本文所描述且本領(lǐng)域中已知的色譜法和過(guò)濾方法。還包括在諸如哺乳動(dòng)物細(xì)胞的真核細(xì)胞中產(chǎn)生多肽且將其從真核細(xì)胞中分離以降低(如果不消除)內(nèi)毒素存在于本發(fā)明組合物中的風(fēng)險(xiǎn)的方法。包括在不含血清細(xì)胞中產(chǎn)生多肽且將其從不含血清細(xì)胞中分離的方法。內(nèi)毒素可使用本領(lǐng)域中已知的常規(guī)技術(shù)來(lái)檢測(cè)。舉例來(lái)說(shuō)，使用來(lái)自馬蹄蟹的血液的鱟變形細(xì)胞溶解產(chǎn)物測(cè)定為一種用于檢測(cè)內(nèi)毒素存在的高度敏感的測(cè)定。在此測(cè)試中，非常低的lps水平可引起鱟溶解產(chǎn)物的可檢測(cè)凝結(jié)，其歸因于增強(qiáng)此反應(yīng)的強(qiáng)大酶促級(jí)聯(lián)。內(nèi)毒素還可通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)定量。要大體上不含內(nèi)毒素，內(nèi)毒素水平可小于約0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.08、0.09、0.1、0.5、1.0、1.5、2、2.5、3、4、5、6、7、8、9或10eu/ml。典型地，1ng脂多糖(lps)對(duì)應(yīng)于約1-10eu。多肽的“半衰期”可指多肽的藥理學(xué)、生理或其它活性相對(duì)于在向生物體的血清或組織中施用時(shí)或相對(duì)于任何其它規(guī)定時(shí)間點(diǎn)的此類活性損失一半所耗費(fèi)的時(shí)間?！鞍胨テ凇边€可指多肽的量或濃度相對(duì)于在向生物體的血清或組織中施用時(shí)或相對(duì)于任何其它規(guī)定時(shí)間點(diǎn)的此類量或濃度降低向生物體的血清或組織中施用的起始量的一半所耗費(fèi)的時(shí)間。半衰期可在血清和/或任何一種或多種所選組織中測(cè)量?！巴葱浴笔侵赶嗤驑?gòu)成保守取代的氨基酸的數(shù)目百分比。同源性可使用諸如gap序列比較程序來(lái)確定(deveraux等人,nucleicacidsresearch.12,387-395,1984)，其以引用的方式并入本文中。以此方式，類似或大體上長(zhǎng)度不同于本文所列舉的那些的序列可通過(guò)將空位插入比對(duì)中來(lái)比較，此類空位是例如通過(guò)gap所用的比較算法來(lái)確定。術(shù)語(yǔ)“調(diào)節(jié)”和“改變”包括典型地呈相對(duì)于對(duì)照的統(tǒng)計(jì)顯著或生理學(xué)顯著量或程度的“增加”、“提高”或“刺激”以及“降低”或“減少”?！霸黾印?、“刺激”或“提高”的量典型地為“統(tǒng)計(jì)顯著”量，且可包括由沒(méi)有組合物(例如不存在試劑)或?qū)φ战M合物所產(chǎn)生的量的1.1、1.2、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30或更多倍(例如500、1000倍)的增加(包括其間的所有整數(shù)和范圍，例如1.5、1.6、1.7、1.8等)。“降低”或“減少”的量典型地為“統(tǒng)計(jì)顯著”量，且可包括由沒(méi)有組合物(例如不存在試劑)或?qū)φ战M合物產(chǎn)生的量中的1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％降低(包括其間的所有整數(shù)和范圍)。本文描述了比較值和“統(tǒng)計(jì)顯著”量的實(shí)例。“患者”或“受試者”是指動(dòng)物，在某些實(shí)施方案中指哺乳動(dòng)物，且在具體實(shí)施方案中指人。在某些實(shí)施方案中，可具體規(guī)定組合物中任何給定試劑(例如adir、adir-peg)的“純度”。舉例來(lái)說(shuō)，某些組合物所包含的試劑如例如且決不限于通過(guò)高效液相色譜法(hplc)(生物化學(xué)和分析化學(xué)中經(jīng)常用于分離、識(shí)別和定量化合物的管柱色譜法的熟知形式)所測(cè)量可為至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％純，包括其間的所有小數(shù)和范圍。術(shù)語(yǔ)“參考序列”通常涉及編碼序列的核酸或正在與另一序列比較的氨基酸序列。本文所描述的所有多肽和多核苷酸序列被包括作為參考序列，包括通過(guò)名稱描述的那些和表格和序列表中描述的那些。術(shù)語(yǔ)“序列同一性”或例如包含“與……50％相同的序列”是指在比較窗口上在核苷酸與核苷酸基礎(chǔ)上或氨基酸與氨基酸基礎(chǔ)上序列相同的程度。因此，“序列同一性百分比”可通過(guò)在比較窗口上比較兩個(gè)最佳比對(duì)序列來(lái)計(jì)算，從而確定在兩個(gè)序列中均存在的相同核酸堿基(例如a、t、c、g、i)或相同氨基酸殘基(例如ala、pro、ser、thr、gly、val、leu、ile、phe、tyr、trp、lys、arg、his、asp、glu、asn、gln、cys和met)的位置的數(shù)目，以產(chǎn)生匹配位置的數(shù)目，將匹配位置的數(shù)目除以比較窗口中的位置的總數(shù)目(即窗口尺寸)，且將結(jié)果乘以100，從而產(chǎn)生序列同一性百分比。用于描述兩種或兩種以上多肽之間的序列關(guān)系的術(shù)語(yǔ)包括“參考序列”、“比較窗口”、“序列同一性”、“序列同一性百分比”和“大體同一性”?！皡⒖夹蛄小钡拈L(zhǎng)度可為至少12個(gè)但經(jīng)常為15至18個(gè)且往往至少25個(gè)單體單元，包括核苷酸和氨基酸殘基。由于兩種多肽可各包含(1)兩種多肽之間類似的序列(即僅完全多肽序列的一部分)和(2)兩種多肽之間有分歧的序列，故兩種(或更多種)多肽之間的序列比較是典型地通過(guò)在“比較窗口”上比較兩種多肽的序列以識(shí)別且比較具有序列相似性的局部區(qū)域來(lái)進(jìn)行?！氨容^窗口”是指具有至少6個(gè)、通常約50至約100個(gè)、更通常約100至約150個(gè)連續(xù)位置的概念片段，其中在一序列與具有相同數(shù)目的連續(xù)位置的參考序列最佳比對(duì)之后將兩個(gè)序列相比較。對(duì)于兩個(gè)序列的最佳比對(duì)，比較窗口可與參考序列(其不包含添加或缺失)相比包含約20％或更少的添加或缺失(即空位)。用于比對(duì)比較窗口的序列的最佳比對(duì)可通過(guò)算法的電腦化實(shí)現(xiàn)方式(wisconsingeneticssoftwarepackagerelease7.0中的gap、bestfit、fasta和tfasta,geneticscomputergroup,575sciencedrivemadison,wi,usa)或通過(guò)檢查并且通過(guò)所選的各種方法中的任一種產(chǎn)生的最佳比對(duì)(即在比較窗口上產(chǎn)生最高百分比同源性)來(lái)進(jìn)行。還可參考如例如由altschul等人所公開的blast家族的程序(nucl.acidsres.25:3389,1997)。序列分析的細(xì)節(jié)討論可見于ausubel等人的單元19.3(“currentprotocolsinmolecularbiology”,johnwiley&sonsinc,1994-1998,第15章)。序列之間的序列相似性或序列同一性(這些術(shù)語(yǔ)在本文中可互換使用)的計(jì)算可如下進(jìn)行。為確定兩個(gè)氨基酸序列或兩個(gè)核酸序列的同一性百分比，可出于最佳比較目的比對(duì)序列(例如為獲得最佳比對(duì)可在第一與第二氨基酸或核酸序列中的一者或兩者中引入空位且出于比較目的可將非同源序列忽略)。在某些實(shí)施方案中，參考序列中出于比較目的而比對(duì)的長(zhǎng)度為參考序列的長(zhǎng)度的至少30％、優(yōu)選至少40％、更優(yōu)選至少50％、60％且甚至更優(yōu)選至少70％、80％、90％或100％。然后，比較相應(yīng)氨基酸位置或核苷酸位置處的氨基酸殘基或核苷酸。當(dāng)?shù)谝恍蛄兄械奈恢糜膳c第二序列中相應(yīng)位置相同的氨基酸殘基或核苷酸占據(jù)時(shí)，則在該位置處分子為相同的。兩個(gè)序列之間的同一性百分比隨序列所共有的相同位置的數(shù)目而變化，將為進(jìn)行兩個(gè)序列的最佳比對(duì)而需要引入的空位的數(shù)目以及各空位的長(zhǎng)度考慮在內(nèi)。序列的比較和兩個(gè)序列之間的同一性百分比的確定可使用數(shù)學(xué)算法來(lái)實(shí)現(xiàn)。在一些實(shí)施方案中，兩個(gè)氨基酸序列之間的同一性百分比是使用needleman和wunsch算法(j.mol.biol.48:444-453,1970)來(lái)確定，其已并入gcg軟件包中的gap程序，使用blossum62矩陣或pam250矩陣，且空位權(quán)重為16、14、12、10、8、6或4且長(zhǎng)度權(quán)重為1、2、3、4、5或6。在一些實(shí)施方案中，兩個(gè)核苷酸序列之間的同一性百分比是使用gcg軟件包中的gap程序來(lái)確定，其nwsgapdna.cmp矩陣和40、50、60、70或80的空位權(quán)重和1、2、3、4、5或6的長(zhǎng)度權(quán)重。另一示例性參數(shù)組(和除非另作說(shuō)明，否則應(yīng)使用者)包括blossum62打分矩陣，其中空位罰分為12、空位擴(kuò)展罰分為4且移碼空位罰分為5。兩個(gè)氨基酸或核苷酸序列之間的同一性百分比還可使用e.meyers和w.miller(cabios.4:11-17,1989)的算法來(lái)確定，其已并入align程序(版本2.0)，使用pam120權(quán)重殘基表，間位長(zhǎng)度罰分為12且空位罰分為4。術(shù)語(yǔ)“溶解度”是指本文所提供的adir酶溶解于液體溶劑中且形成均勻溶液的性質(zhì)。溶解度典型地通過(guò)每單位體積溶劑的溶質(zhì)質(zhì)量(每公斤溶劑的溶質(zhì)克數(shù)、g/dl(100ml)、mg/ml等)、摩爾濃度、重量摩爾濃度、摩爾分?jǐn)?shù)或?qū)舛鹊钠渌愃泼枋鲆詽舛缺硎?。單位量的溶劑可溶解的溶質(zhì)的最大平衡量為在指定條件(包括溫度、壓力、ph值和溶劑性質(zhì))下所述溶質(zhì)在所述溶劑中的溶解度。在某些實(shí)施方案中，溶解度是在生理ph值或其它ph值下、例如在ph5.0、ph6.0、ph7.0、ph7.2、ph7.4、ph7.6、ph7.8或ph8.0下測(cè)量。在某些實(shí)施方案中，溶解度是在水或生理緩沖液(諸如pbs或nacl)(在存在或不存在nap的情況下)或本文所描述的其它緩沖液/組合物中測(cè)量。在具體實(shí)施方案中，溶解度是在相對(duì)較低ph值(例如ph6.0)和相對(duì)較高鹽(例如500mmnacl和10mmnap)下測(cè)量。在某些實(shí)施方案中，溶解度是在諸如血液或血清的生物流體(溶劑)中測(cè)量。在某些實(shí)施方案中，溫度可為約室溫(例如約20、21、22、23、24、25℃)或約體溫(37℃)。在某些實(shí)施方案中，adir酶的溶解度在室溫下或在37℃下為至少約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25或30mg/ml?！按篌w上”或“基本上”意謂幾乎全部或完全，例如某一給定量的95％、96％、97％、98％、99％或更大?！敖y(tǒng)計(jì)顯著”意謂結(jié)果不可能偶然出現(xiàn)。統(tǒng)計(jì)顯著性可通過(guò)本領(lǐng)域中已知的任何方法來(lái)確定。顯著性的常用度量包括p值，如果無(wú)效假設(shè)為真的，則其為所觀測(cè)的事件會(huì)發(fā)生的頻率或概率。如果所獲得的p值小于顯著性水平，則排除無(wú)效假設(shè)。在簡(jiǎn)單情況下，顯著性水平經(jīng)定義是在0.05或更小的p值下。除非另外明確陳述，否則本說(shuō)明書中的各實(shí)施方案加以必要的變更即適用于每個(gè)其它實(shí)施方案。在本公開通篇中，可使用以下縮寫：peg，聚乙二醇；adi，精氨酸脫亞氨酶；ss，琥珀酸琥珀酰亞胺酯；ssa，琥珀酰亞胺基琥珀酰亞胺；spa，丙酸琥珀酰亞胺酯；nhs，n-羥基-琥珀酰亞胺；ass1或ass，精氨基琥珀酸鹽合成酶；asl，精氨基琥珀酸鹽裂解酶。編碼adi酶的多核苷酸可衍生、克隆、分離、合成或產(chǎn)生自任何來(lái)源，包括例如微生物、重組生物技術(shù)或其任何組合。舉例來(lái)說(shuō)，精氨酸脫亞氨酶可克隆自支原體屬微生物。在某些實(shí)施方案中，精氨酸脫亞氨酶是克隆自唾液支原體、泡沫支原體、加拿大支原體、耳支原體、豬滑液支原體、泄殖腔支原體、鵝支原體、產(chǎn)堿支原體、口腔支原體、惰性支原體、火雞支原體、蜂房支原體、穿透支原體、雞支原體、梨支原體、靈長(zhǎng)類支原體、發(fā)酵支原體、產(chǎn)脂支原體、氣管支原體、模仿支原體、乳白色支原體、毛氏支原體、象支原體、肺炎支原體、龜支原體、支原體屬某種cag:877或支原體屬某種cag:472或其任何組合。在一些實(shí)施方案中，精氨酸脫亞氨酶克隆自列于表1中的物種。在特定實(shí)施方案中，adi包含seqidno:2至seqidno:28中任一者的氨基酸序列或其具有adi活性(例如能夠?qū)⒕彼岽x成瓜氨酸和氨水)的變體或片段或延伸。此類adi酶可使用已知技術(shù)制備或合成。在某些實(shí)施方案中，如本文所描述的adi酶是與衍生自人型支原體的基準(zhǔn)adi-peg20分子相比較。如本文所用，“adi-peg20”是指本領(lǐng)域中已知的adi分子且描述于例如美國(guó)專利第6,183,738號(hào)和第6,635,462號(hào)中；另參見ascierto等人,2005.pegylatedargininedeiminasetreatmentofpatientswithmetastaticmelanoma:resultsfromphaseiandiistudies.jclinoncol23(30):7660-7668；izzof等人(2004)pegylatedargininedeiminasetreatmentofpatientswithunresectablehepatocellularcarcinoma:resultsfromphasei/iistudies.jclinoncol22(10):1815-1822；holtsbergfw等人(2002),poly(ethyleneglycol)(peg)conjugatedargininedeiminase:effectsofpegformulationsonitspharmacologicalproperties.jcontrolrelease80(1-3):259-271；kelly等人,(2012)britishjournalofcancer106,324-332。如熟練技術(shù)人員將認(rèn)可，此分子為衍生自人型支原體的聚乙二醇化(peg20,000)adi酶，且相對(duì)于野生型人型支原體adi酶具有兩個(gè)取代(k112e；p210s)。如本文所描述的精氨酸脫亞氨酶篩選自大量adi酶且被認(rèn)為與患者的抗adi-peg20抗體具有降低水平的反應(yīng)性且/或具有其它有益性質(zhì)?？筧di-peg20抗體可出現(xiàn)在用adi-peg20治療的受試者中且可使用已知方法測(cè)量。與抗adi-peg20抗體的反應(yīng)性可例如使用elisa或熟練技術(shù)人員已知的其它類似測(cè)定來(lái)確定。就此而言，adi-peg20可用作比較來(lái)評(píng)估與患者抗adi-peg20抗體的交叉反應(yīng)性水平。與adi-peg20與患者抗adi-peg20抗體的交叉反應(yīng)性水平相比統(tǒng)計(jì)顯著更低的交叉反應(yīng)性水平可適用本文中。在某些實(shí)施方案中，如本文所描述的精氨酸脫亞氨酶與抗adi-peg20抗體具有低交叉反應(yīng)性或沒(méi)有交叉反應(yīng)性。在某些實(shí)施方案中，同與adi-peg20的反應(yīng)性相比與抗adi-peg20抗體的反應(yīng)性的任何降低均可為有益的，因此adi酶將改進(jìn)用于需要精氨酸耗盡療法的患者的處理選擇。因此，在一些實(shí)施方案中，如本文所描述的精氨酸脫亞氨酶與患者抗adi-peg20抗體具有與adi-peg20與此類抗體的反應(yīng)性相比降低的交叉反應(yīng)性?！癮dir”在本文中用于指本發(fā)明的與抗adi-peg20抗體具有與adi-peg20與此類抗體的反應(yīng)性相比降低的交叉反應(yīng)性的adi酶?！癮dir”名稱用于將本文所識(shí)別的分子與如本領(lǐng)域中已知的adi和adi-peg20區(qū)分開。adir酶的實(shí)例包括seqidno:2至seqidno:28及其氨基酸序列不同于seqidno:1或adi-peg20的變體。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的adir酶具有類似于或優(yōu)于adi-peg20的特性或性質(zhì)，以降低并維持低血液精氨酸水平以有效治療癌癥。此類性質(zhì)的實(shí)例包括kcat、km、最佳ph值、穩(wěn)定性、體內(nèi)蛋白水解穩(wěn)定性和缺乏對(duì)尚未存在于血液中的離子或輔因子的需要或其任何組合。在某些實(shí)施方案中，如本文所描述的adir的性質(zhì)與adi-peg20的類似性質(zhì)相比為約或至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高。在一些實(shí)施方案中，本文所描述的adir的性質(zhì)與所比較的adi-peg20的具體性質(zhì)相比為約或至少約100％、105％、110％、120％、140％、150％、160％、180％、200％、220％、240％、250％、260％、280％、300％、320％、340、350％、360％、400％、420％、450％、460％、500％、520％、550％或更高。因此，在某些實(shí)施方案中，adir的kcat為adi-peg20的kcat的約或至少約20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更佳。在某些實(shí)施方案中，adir的kcat為adi-peg20kcat的約或至少約100％、105％、110％、120％、125％、140％、150％、160％、180％、200％、220％、240％、250％、260％、280％、300％、320％、340％、350％、360％、400％、420％、450％、460％、500％、520％、550％或更高倍。在某些實(shí)施方案中，本文所描述的adir酶或包含其的組合物的kcat為約0.5秒-1至約15秒-1、約1秒-1至約12秒-1、約1秒-1至約10秒-1、約1.5秒-1至約9秒-1、約2秒-1至約8秒-1或約2.5秒-1至約7秒-1。在某些實(shí)施方案中，組合物中的adir或adir-peg的kcat為約2.5秒-1至約7.5秒-1。在一些實(shí)施方案中，組合物中的adir或adir-peg的kcat為約2.5秒-1、約3秒-1、約3.5秒-1、約4秒-1、約4.5秒-1、約5秒-1、約5.5秒-1、約6秒-1、約6.5秒-1、約7秒-1、約7.2秒-1、約7.5秒-1、約8秒-1、約10秒-1、約15秒-1、約20秒-1、約25秒-1、約30秒-1、約35秒-1、約40秒-1、約45秒-1、約50秒-1、約55秒-1、約60秒-1、約65秒-1、約70秒-1、約75秒-1、約80秒-1、約85秒-1、約90秒-1、約95秒-1或約100秒-1。在某些實(shí)施方案中，adir的km為adi-peg20的km的約或至少約5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更佳。在某些實(shí)施方案中，adir的km為adi-peg20的km的約或至少約100％、105％、110％、120％、130％、140％、150％、160％、180％、200％、220％、240％或250％。在特定實(shí)施方案中，adir或其聚乙二醇化配制物的km為約0.5μm至約50μm或約1.6μm至約48μm或約0.5μm至約15μm、約1μm至約12μm、約1μm至約10μm、約1.5μm至約9μm、約1.5μm至約8μm或約1.5μm至約7μm。在某些實(shí)施方案中，組合物中的adir或adir-peg的km為約1.5μm至約6.5μm。在一些實(shí)施方案中，adir或其聚乙二醇化配制物的km為約1.5μm、約1.6μm、約2μm、約2.5μm、約3μm、約3.5μm、約4μm、約4.5μm、約5μm、約5.5μm、約6μm、約6.5μm、約7μm、約8μm、約9μm、約10μm、約12μm、約14μm、約15μm、約16μm、約18μm、約20μm、約22μm、約24μm、約25μm、約26μm、約28μm、約30μm、約32μm、約34μm、約35μm、約36μm、約38μm、約40μm、約42μm、約44μm、約45μm、約46μm、約48μm或約50μm。在某些實(shí)施方案中，adir官能團(tuán)處于接近于人血液的生理ph值的ph值下。因此，在一些實(shí)施方案中，adir官能團(tuán)處于約4至約10.8或約6至約8或約6.5至約7.5的ph值下。在某些實(shí)施方案中，adir在約ph7.4下具有良好酶活性。在某些實(shí)施方案中，adir在長(zhǎng)期儲(chǔ)存期間具有穩(wěn)定性，且在人體中處理期間具有溫度和蛋白水解穩(wěn)定性。在一些實(shí)施方案中，adir不需要尚未存在于血液中的離子或輔因子來(lái)獲得活性。在某些實(shí)施方案中，本文所描述的adir通常具有十分不同于人型支原體的氨基酸序列，使得存在表面殘基變化，其將減少或消除抗adi-peg20抗體的抗原位點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，在所選adir分子與受試者中的現(xiàn)有抗adi-peg20抗體之間將不存在交叉反應(yīng)性(例如沒(méi)有統(tǒng)計(jì)顯著性交叉反應(yīng)性)，且在受試者中將產(chǎn)生全新的免疫反應(yīng)而不是現(xiàn)有對(duì)人型支原體adi的反應(yīng)的成熟。因此，在一些實(shí)施方案中，如本文所描述的adir與如seqidno:1中所列的人型支原體adi具有20％-85％序列同一性。在某些實(shí)施方案中，如本文所描述的adir與人型支原體adi具有甚至更低的序列同一性百分比，諸如10％或15％同一性。在某些實(shí)施方案中，如本文所描述的adir與人型支原體adi具有20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％或甚至83％同一性，且仍對(duì)抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性。在某些實(shí)施方案中，如本文所描述的adir與人型支原體adi相比具有約10-140、15-140或25-140個(gè)表面殘基變化。表面殘基可由人型支原體adi的晶體結(jié)構(gòu)識(shí)別，且其它生物體的adi的表面殘基可通過(guò)序列同源性來(lái)確定。如本文所描述的adir與人型支原體adi(參見seqidno:1)相比可具有約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或約140個(gè)表面殘基變化。在一些實(shí)施方案中，如本文所描述的adir與人型支原體adi相比具有約10-140、15-140或25-140個(gè)表面殘基變化。此類殘基變化不僅需要表面氨基酸殘基。此類殘基變化(或添加或缺失)可在分子的任一末端或可在adi的任何殘基處，使得經(jīng)修飾adi具有如本文所描述的所需adi活性。要改變的殘基可由人型支原體adi的晶體結(jié)構(gòu)識(shí)別，且其它生物體的adi的殘基可通過(guò)序列同源性來(lái)確定。如本文所描述的adir與人型支原體adi(參見seqidno:1)相比可具有約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或約140個(gè)氨基酸殘基變化。從大量adi酶中，表1列舉了27種adir酶及其相對(duì)于人型支原體adi的序列同一性百分比。在某些實(shí)施方案中，本文從許多所選物種中識(shí)別的adir酶具有規(guī)定數(shù)目的表面賴氨酸殘基(在某些實(shí)施方案中，例如多至30個(gè)或更多)。本文識(shí)別的與抗adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的adir酶中的某些具有約、至少約或不超過(guò)約0、1、2、3、4、5、10、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60個(gè)表面賴氨酸殘基，包括其間的所有范圍。術(shù)語(yǔ)“多肽”、“蛋白質(zhì)”和“肽”可互換使用且意謂不限于任何特定長(zhǎng)度的氨基酸聚合物。術(shù)語(yǔ)“酶”包括多肽或蛋白質(zhì)催化劑，且關(guān)于adir可與蛋白質(zhì)、多肽或肽互換使用。術(shù)語(yǔ)包括修飾，諸如豆蔻?；⒘蛩猁}化、糖基化、磷?；托盘?hào)序列的添加或缺失。術(shù)語(yǔ)“多肽”或“蛋白”意謂氨基酸的一個(gè)或多個(gè)鏈，其中各鏈包含通過(guò)肽鍵共價(jià)鍵聯(lián)的氨基酸，且其中所述多肽或蛋白質(zhì)可包含多個(gè)通過(guò)肽鍵非共價(jià)和/或共價(jià)鍵聯(lián)在一起的鏈，其具有天然蛋白質(zhì)(即由天然存在和具體來(lái)說(shuō)非重組細(xì)胞或基因工程改造或重組細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì))的序列，且包含具有天然蛋白質(zhì)的氨基酸序列的分子或具有天然序列的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的缺失、添加和/或取代的分子。術(shù)語(yǔ)“多肽”和“蛋白質(zhì)”具體來(lái)說(shuō)涵蓋本文所描述的adir酶/蛋白質(zhì)，或具有adir蛋白質(zhì)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的缺失、添加和/或取代的序列。在某些實(shí)施方案中，多肽為由重組細(xì)胞產(chǎn)生的“重組”多肽，所述重組細(xì)胞包含一個(gè)或多個(gè)重組dna分子，其典型地由以其它方式將不存在于細(xì)胞中的異源多核苷酸序列或多核苷酸序列的組合構(gòu)成。本文提及的術(shù)語(yǔ)“分離蛋白”意謂目標(biāo)蛋白質(zhì)(1)不含將典型地與其一起發(fā)現(xiàn)于自然界中的至少另外一些蛋白質(zhì)，(2)基本上不含來(lái)自相同來(lái)源(例如來(lái)自相同物種)的其它蛋白質(zhì)，(3)由來(lái)自不同物種的細(xì)胞表達(dá)，(4)已與至少約50％的在自然界中與其締合的多核苷酸、脂質(zhì)、碳水化合物或其它材料分離，(5)不與在自然界中與“分離蛋白”締合的蛋白質(zhì)的部分締合(通過(guò)共價(jià)或非共價(jià)相互作用)，(6)可操作地與在自然界中不與其締合的多肽締合(通過(guò)共價(jià)或非共價(jià)相互作用)，或(7)不存在于自然界中。此類分離蛋白可由基因組dna、cdna、mrna或可能具有合成來(lái)源的其它rna或其任何組合編碼。在某些實(shí)施方案中，分離蛋白大體上擺脫了在其自然環(huán)境中發(fā)現(xiàn)的會(huì)妨礙其用途(治療、診斷、預(yù)防、研究或其它)的蛋白質(zhì)或多肽或其它污染物。術(shù)語(yǔ)“變體”包括因一個(gè)或多個(gè)取代、缺失、添加和/或插入而不同于本文具體公開的參考多肽(例如seqidno:1至seqidno:28)的多肽。變體多肽為生物活性的，即其持續(xù)具有參考多肽的酶促或結(jié)合活性。此類變體可由例如遺傳多態(tài)性產(chǎn)生和/或來(lái)自人操縱。在許多情況下，生物活性變體將含有一個(gè)或多個(gè)保守取代。“保守取代”為氨基酸取代具有類似性質(zhì)的另一氨基酸，使得肽化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員將預(yù)期多肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)和親水性質(zhì)大體上不變的取代。如上文所描述，可在本文所描述的多核苷酸和多肽的結(jié)構(gòu)中進(jìn)行修飾且仍獲得編碼具有所需特性的變體或衍生多肽的功能分子。舉例來(lái)說(shuō)，某些氨基酸可取代蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的其它氨基酸，而沒(méi)有明顯損失與諸如抗體的抗原結(jié)合區(qū)或底物分子上的結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)的相互作用結(jié)合能力。由于是蛋白質(zhì)的相互作用能力和性質(zhì)限定了蛋白質(zhì)的生物功能活性，故可在蛋白質(zhì)序列和當(dāng)然其基礎(chǔ)dna編碼序列中進(jìn)行某些氨基酸序列取代，且仍然獲得具有相似性質(zhì)的蛋白質(zhì)。因此，預(yù)期可在所公開組合物的肽序列或編碼所述肽的相應(yīng)dna序列中進(jìn)行各種變化，而不明顯損失其功效。在進(jìn)行此類變化時(shí)，可考慮氨基酸的親水指數(shù)。親水氨基酸指數(shù)在賦予蛋白質(zhì)相互作用生物功能中的重要性為本領(lǐng)域中普遍了解的(kyte和doolittle,1982，其以引用的方式并入本文中)。公認(rèn)氨基酸的相對(duì)親水特性有助于所得蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)，二級(jí)結(jié)構(gòu)又限定了蛋白質(zhì)與其它分子(例如酶、底物、受體、dna、抗體、抗原及其類似物)的相互作用。已基于各氨基酸的疏水性和電荷特征為其分配親水性指數(shù)(kyte和doolittle,1982)。這些值為：異亮氨酸(+4.5)；纈氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸(+2.5)；蛋氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；蘇氨酸(-0.7)；絲氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；組氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸鹽(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；賴氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。本領(lǐng)域中已知某些氨基酸可由具有類似親水性指數(shù)或分?jǐn)?shù)的其它氨基酸取代且仍產(chǎn)生具有類似生物活性的蛋白質(zhì)，即仍獲得生物功能等效蛋白質(zhì)。在進(jìn)行此類變化時(shí)，親水性指數(shù)在±2以內(nèi)的氨基酸取代為優(yōu)選的，±1以內(nèi)的那些為尤其優(yōu)選的，且±0.5以內(nèi)的那些為甚至尤其更優(yōu)選的。本領(lǐng)域中還了解可基于親水性有效地進(jìn)行相似氨基酸的取代。美國(guó)專利4,554,101(具體地以引用的方式整體并入本文中)陳述蛋白質(zhì)的最大局部平均親水性如由其相鄰氨基酸的親水性所控制與蛋白質(zhì)的生物學(xué)性質(zhì)相互關(guān)聯(lián)。如美國(guó)專利4,554,101中所詳述，已為氨基酸殘基分配以下親水性值：精氨酸(+3.0)；賴氨酸(+3.0)；天冬氨酸鹽(+3.0±1)；谷氨酸鹽(+3.0±1)；絲氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；蘇氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；組氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；蛋氨酸(-1.3)；纈氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；異亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。應(yīng)了解氨基酸可取代具有類似親水性值的另一者且仍獲得生物學(xué)等效物，且特定來(lái)說(shuō)，免疫等效蛋白質(zhì)。在此類變化中，親水性值在±2以內(nèi)的氨基酸的取代為優(yōu)選的，±1以內(nèi)的那些為尤其優(yōu)選的，且±0.5以內(nèi)的那些為甚至尤其更優(yōu)選的。如以上所概述，因此，氨基酸取代通常是基于氨基酸側(cè)鏈取代基的相對(duì)相似性，例如其疏水性、親水性、電荷、大小及其類似物。將各種前述特征考慮在內(nèi)的示例性取代為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，且包括：精氨酸和賴氨酸；谷氨酸鹽和天冬氨酸鹽；絲氨酸和蘇氨酸；谷氨酰胺和天冬酰胺；和纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸。氨基酸取代可進(jìn)一步基于殘基的極性、電荷、溶解度、疏水性、親水性和/或兩親性質(zhì)的相似性來(lái)進(jìn)行。舉例來(lái)說(shuō)，帶負(fù)電荷的氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；帶正電荷的氨基酸包括賴氨酸和精氨酸；且具有不帶電荷的極性頭部基團(tuán)且具有類似親水性值的氨基酸包括亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸；甘氨酸和丙氨酸；天冬酰胺和谷氨酰胺；和絲氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸?？沙尸F(xiàn)保守變化的其它氨基酸群組包括：(1)ala、pro、gly、glu、asp、gln、asn、ser、thr；(2)cys、ser、tyr、thr；(3)val、ile、leu、met、ala、phe；(4)lys、arg、his；和(5)phe、tyr、trp、his?；蛘?，變體還可含有非保守變化。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，變體多肽因取代、缺失或添加少于約10、9、8、7、6、5、4、3、2個(gè)氨基酸或甚至1個(gè)氨基酸而不同于天然序列。變體還可(或者)通過(guò)例如對(duì)多肽的免疫原性、二級(jí)結(jié)構(gòu)、酶活性和/或親水性具有最小影響的氨基酸的缺失或添加來(lái)修飾。一般來(lái)說(shuō)，變體將展示與參考多肽序列(例如seqidno:1至seqidno:28)的約或至少約30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％相似性或序列同一性或序列同源性。此外，涵蓋因添加(例如c端添加、n端添加、兩者)、缺失、截?cái)?、插入或取代約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、90、100或更多個(gè)氨基酸而不同于天然或母體序列但保留母體或參考多肽序列的性質(zhì)或活性的序列。在一些實(shí)施方案中，變體多肽有至少一個(gè)但少于50、40、30、20、15、10、8、6、5、4、3或2個(gè)氨基酸殘基不同于參考序列。在一些實(shí)施方案中，變體多肽有約或至少0.5％或1％但小于20％、15％、10％或5％的殘基不同于參考序列。(如果此比較需要比對(duì)，則應(yīng)比對(duì)序列以獲得最大相似性。因缺失或插入或失配而被“圈”出的序列視為差異)。在一些實(shí)施方案中，adir的長(zhǎng)度將為約300至約500個(gè)氨基酸，包括其間的所有整數(shù)和范圍。在具體實(shí)施方案中，adir的長(zhǎng)度將為約300、305、310、315、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、410、415、420、425、430、435、440、445、450、455、460、465、470、475、480、485、490、495或500個(gè)氨基酸，包括其間的所有整數(shù)和范圍。術(shù)語(yǔ)“多肽片段”是指天然存在或重組產(chǎn)生的多肽中具有氨基端缺失、羧基端缺失和/或內(nèi)部缺失或取代的多肽。在某些實(shí)施方案中，多肽片段可包含至少5至約400個(gè)氨基酸長(zhǎng)的氨基酸鏈。應(yīng)了解，在某些實(shí)施方案中，片段為至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、150、200、250、300、350或400個(gè)氨基酸長(zhǎng)。尤其適用的多肽片段包括功能結(jié)構(gòu)域，包括本文所描述的adir的催化性adi結(jié)構(gòu)域。在adir的情況下，適用片段包括但不限于催化結(jié)構(gòu)域和α-螺旋結(jié)構(gòu)域。許多用于綴合至adi的活化peg共價(jià)鍵結(jié)至賴氨酸殘基。通常存在與賴氨酸殘基相比少很多的peg分子附著于adi。自分子至分子連接的數(shù)目與分布均可為不均勻的。任何特定賴氨酸殘基將在僅一小部分adi分子中經(jīng)修飾。此位點(diǎn)修飾不均勻性和低peg占有率可產(chǎn)生藥物表征與在抗原位點(diǎn)處peg遮擋的有效性的問(wèn)題。因此，在某些實(shí)施方案中，如本文所描述的所選adir酶通過(guò)用其它殘基類型進(jìn)行賴氨酸置換來(lái)修飾以減少賴氨酸殘基的數(shù)目。此產(chǎn)生更均勻聚乙二醇化蛋白質(zhì)且增加剩余賴氨酸殘基處的peg占有率。選擇變成其它殘基的具體賴氨酸殘基將經(jīng)選擇以保留酶活性。此更均勻聚乙二醇化預(yù)期提供增加的針對(duì)血液中的蛋白水解的保護(hù)和增加的對(duì)抗原位點(diǎn)與患者抗體的隔離。在某些實(shí)施方案中，adir酶如美國(guó)專利第6,635,462號(hào)中所描述進(jìn)行修飾。特定來(lái)說(shuō)，adir的天然存在的氨基酸殘基中的一個(gè)或多個(gè)的修飾可提供一種酶，其更容易復(fù)性和配制，由此改進(jìn)adir和包含其的治療性組合物的制造。在一些實(shí)施方案中，adir酶經(jīng)修飾以移除一個(gè)或多個(gè)賴氨酸殘基(例如賴氨酸可經(jīng)另一氨基酸或其類似物或非天然氨基酸取代)。特定來(lái)說(shuō)，在一些實(shí)施方案中，adir酶經(jīng)修飾在等效于seqidno:1(人型支原體adi)的112、374、405或408的位置或這些位置中的一個(gè)或多個(gè)的組合處不含賴氨酸。在一些實(shí)施方案中，adir酶經(jīng)修飾不含一個(gè)或多個(gè)賴氨酸殘基，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或更多個(gè)賴氨酸殘基(如果其存在)可經(jīng)另一氨基酸或其類似物或非天然氨基酸取代。在具體實(shí)施方案中，adir酶例如在等效于seqidno:1的位置7、88、137、209和380的位置處具有5個(gè)經(jīng)取代賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，adir酶例如在等效于seqidno:1的位置7、9、59、88、115、116、137、178、209和380的位置處具有10個(gè)經(jīng)取代賴氨酸殘基。在某些實(shí)施方案中，adir酶例如在等效于seqidno:1的位置7、9、59、66、88、91、93、115、116、137、141、178、209、279和位置380的位置處具有15個(gè)經(jīng)取代賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，adir酶例如在等效于seqidno:1的位置7、9、56、59、66、88、91、93、96、115、116、137、141、178、209、254、279、325、326、380和406的位置處具有21個(gè)經(jīng)取代賴氨酸殘基。在一些情況下，天然adir可發(fā)現(xiàn)于微生物中且因此具免疫原性且在患者中從循環(huán)中快速清除。這些問(wèn)題可通過(guò)修飾adir以產(chǎn)生“經(jīng)修飾adir”酶來(lái)克服。因此，某些實(shí)施方案包括包含“修飾劑”的adir酶，所述修飾劑的實(shí)例包括但不限于大分子聚合物、蛋白質(zhì)、肽、多糖和其它化合物。adir酶和修飾劑可通過(guò)共價(jià)鍵或非共價(jià)相互作用鍵聯(lián)以形成穩(wěn)定綴合物或穩(wěn)定組合物從而達(dá)成所要效應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾adir保留相應(yīng)未修飾adir(例如具有相同或類似序列)的生物活性且具有與相應(yīng)未修飾adir相比較長(zhǎng)體內(nèi)半衰期和較低抗原性。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾adir保留相應(yīng)未修飾adir的至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的生物活性。一般來(lái)說(shuō)，經(jīng)修飾adir保留足夠用于治療用途的生物活性。在一些實(shí)施方案中，修飾劑可為生物相容的聚合物或蛋白質(zhì)或其片段且可增加adir在血液中的半衰期。修飾劑可化學(xué)偶合至adir或可適用時(shí)經(jīng)由融合蛋白表達(dá)鍵聯(lián)至adir。大分子聚合物可包括非肽大分子聚合物，其在某些實(shí)施方案中可具有其自己的生物活性。適合的聚合物包括但不限于聚烯醇化合物、聚醚化合物、聚乙烯吡咯啶酮、聚氨基酸、二乙烯基醚和順丁烯二酸酐的共聚物、n-(2-羥丙基)-甲基丙烯酰胺、多糖、聚氧乙基化多元醇、肝素或其片段、聚烷基-乙二醇及其衍生物、聚烷基-乙二醇及其衍生物的共聚物、聚(乙烯基乙醚)、a,p-聚[(2-羥乙基)-dl-天冬酰胺]、聚羧酸酯、聚氧化乙烯-甲醛、聚丙烯酰基嗎啉、氨基化合物和氧化烯烴的共聚物、聚透明質(zhì)酸、聚環(huán)氧乙烷、乙二酸和丙二酸的共聚物、聚(1,3-二氧雜環(huán)戊烷)、乙烯和順丁烯二酰肼共聚物、聚唾液酸、環(huán)糊精等。在某些實(shí)施方案中，聚合物為聚乙二醇。如本文所用的聚烯醇化合物包括但不限于聚乙二醇(包括單甲氧基聚乙二醇、單羥基聚乙二醇)、聚乙烯醇、聚烯丙醇、聚丁烯醇及其類似物，以及其衍生物，諸如脂質(zhì)。聚醚化合物包括但不限于聚烷二醇(ho((ch2)xo)nh)、聚丙二醇、聚氧化乙烯(ho((ch2)2o)nh)、聚乙烯醇((ch2choh)n)。聚氨基酸包括但不限于一種類型的氨基酸的聚合物或兩種或兩種以上類型的氨基酸的共聚物，例如聚丙氨酸或聚賴氨酸或其嵌段共聚物。多糖包括但不限于葡聚糖及其衍生物，例如硫酸右旋糖酐；纖維素及其衍生物(包括甲基纖維素和羧甲基纖維素)；淀粉及其衍生物；聚蔗糖等。在具體實(shí)施方案中，adir通過(guò)與蛋白質(zhì)或肽偶合來(lái)進(jìn)行修飾，其中一種或多種蛋白質(zhì)或肽直接或間接鍵聯(lián)至adir。蛋白質(zhì)可為天然存在的蛋白質(zhì)或其片段，包括但不限于天然存在的人血清蛋白或其片段，諸如甲狀腺素結(jié)合蛋白、甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、a1-酸性糖蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原、免疫球蛋白、igfc區(qū)、白蛋白及其片段?！捌巍币庵^蛋白質(zhì)中小于全蛋白但保留所需蛋白質(zhì)功能的任何部分。如本文所描述的adir可經(jīng)由共價(jià)鍵直接或間接鍵聯(lián)至蛋白。直接鍵聯(lián)意謂adir的一個(gè)氨基酸經(jīng)由肽鍵或二硫鍵直接鍵聯(lián)至修飾蛋白的一個(gè)氨基酸。間接鍵聯(lián)是指adir與修飾蛋白之間經(jīng)由在其之間起初存在的化學(xué)基團(tuán)或通過(guò)生物或化學(xué)手段添加的具體化學(xué)基團(tuán)或以上所提及的鍵聯(lián)的組合而鍵聯(lián)。在特定實(shí)施方案中，adir通過(guò)共價(jià)連接至一個(gè)或多個(gè)peg分子來(lái)進(jìn)行修飾。經(jīng)peg共價(jià)修飾(在存在或不存在接頭的情況下)的adir在下文中可稱為“adir-peg”。當(dāng)與未修飾adir相比時(shí)，adir-peg保留大多數(shù)其酶活性，免疫原性或抗原性低得多，具有大大延長(zhǎng)的循環(huán)半衰期，且在腫瘤治療中更有效。“聚乙二醇”或“peg”是指環(huán)氧乙烷與水的呈支鏈或直鏈形式的冷凝聚合物的混合物，其由通式h(och2ch2)noh表示，其中n至少為4。“聚乙二醇”或“peg”與數(shù)字后綴組合使用以指示其近似重均分子量。舉例來(lái)說(shuō)，peg5,000指總重均分子量為約5,000的peg；peg12,000指總重均分子量為約12,000的peg；且peg20,000指總重均分子量為約20,000的peg。在一些實(shí)施方案中，peg的總重均分子量為約1,000至約50,000；約3,000至約40,000；約5,000至約30,000；約8,000至約30,000；約11,000至約30,000；約12,000至約28,000；約16,000至約24,000；約18,000至約22,000；或約19,000至約21,000。在一些實(shí)施方案中，peg的總重均分子量為約1,000至約50,000；約3,000至約30,000；約3,000至約20,000；約4,000至約12,000；約4,000至約10,000；約4,000至約8,000；約4,000至約6,000；或約5,000。在具體實(shí)施方案中，peg的總重均分子量為約20,000。一般來(lái)說(shuō)，分子量為30,000或更大的peg難以溶解，且配制產(chǎn)物的產(chǎn)量可降低。peg可為支鏈或直鏈。一般來(lái)說(shuō)，peg的分子量增加使adir的免疫原性降低。peg可為支鏈或直鏈，且在某些實(shí)施方案中為直鏈。具有本文所描述的分子量的peg可與adir和任選存在的生物相容接頭結(jié)合使用，以治療移植物抗宿主疾病(gvhd)或癌癥，包括例如肝細(xì)胞癌、急性髓樣白血病(諸如復(fù)發(fā)性急性髓樣白血病)、乳癌、卵巢癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、多形性神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、腎癌、膀胱癌、子宮癌、食道癌、腦部癌癥、頭頸癌、宮頸癌、睪丸癌、胃癌或食道癌，以及本文所描述的其它癌癥。某些實(shí)施方案使用硫醇、硫氫基或半胱氨酸反應(yīng)性peg。在一些實(shí)施方案中，硫醇、硫氫基或半胱氨酸反應(yīng)性peg連接至一個(gè)或多個(gè)天然存在的半胱氨酸殘基、一個(gè)或多個(gè)所引入的半胱氨酸殘基(例如用半胱氨酸殘基取代一個(gè)或多個(gè)野生型殘基、插入一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基))或其任何組合(參見例如doherty等人,bioconjugchem.16:1291-98,2005)。在某些實(shí)施方案中，野生型adi半胱氨酸殘基中的某些可首先經(jīng)另一氨基酸取代以防止peg聚合物連接至野生型半胱氨酸，例如防止peg破壞以其它方式需要的生物活性。一些實(shí)施方案使用一種或多種非天然半胱氨酸衍生物(例如高半胱氨酸)替代半胱氨酸。硫醇、硫氫基或半胱氨酸反應(yīng)性peg的非限制性實(shí)例包括甲氧基peg順丁烯二酰亞胺(m-peg-mal)(例如mw2000、mw5000、mw10000、mw20000、mw30000、mw40000)。m-peg-mal與蛋白質(zhì)和肽中的半胱氨酸側(cè)鏈上的硫醇基反應(yīng)以產(chǎn)生穩(wěn)定3-硫代琥珀酰亞胺基醚鍵。此反應(yīng)具高度選擇性且可在溫和條件下在約ph5.0-6.5下在其它官能團(tuán)存在下進(jìn)行。市售硫醇、硫氫基或半胱氨酸反應(yīng)性peg分子的特定實(shí)例展示于圖1a-1d中。因此，在某些實(shí)施方案中，adir酶綴合至本文所描述的硫醇、硫氫基或半胱氨酸反應(yīng)性peg分子中的任何一個(gè)或多個(gè)。adir可在存在或不存在接頭的情況下共價(jià)鍵結(jié)至修飾劑，諸如peg，不過(guò)優(yōu)選實(shí)施方案使用接頭。adir可如例如以下文獻(xiàn)所描述使用本領(lǐng)域中已知的方法經(jīng)由生物相容接頭共價(jià)鍵結(jié)至peg：park等人,anticancerres.,1:373-376(1981)；以及zaplipsky和lee,polyethyleneglycolchemistry:biotechnicalandbiomedicalapplications,j.m.harris編,plenumpress,ny,第21章(1992)，其公開內(nèi)容以本文引用的方式并入本文中。在一些情況下，adir可例如通過(guò)氨基、硫氫基、羥基、羧基或其它基團(tuán)直接偶合(即不使用接頭)至諸如peg的修飾劑。用于使adir共價(jià)連接至修飾劑(例如peg)的接頭可為任何生物相容接頭。如上文所論述，“生物相容”表明化合物或基團(tuán)為無(wú)毒的且可在體外或體內(nèi)使用而不會(huì)引起損傷、疾病、疾病或死亡。諸如peg的修飾劑可例如經(jīng)由醚鍵、硫醇鍵、酰胺鍵或其它鍵鍵結(jié)至接頭。在一些實(shí)施方案中，適合的接頭的總鏈長(zhǎng)可為約1-100個(gè)原子、1-80個(gè)原子、1-60個(gè)原子、1-40個(gè)原子、1-30個(gè)原子、1-20個(gè)原子或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè)原子，例如其中鏈中的原子包含c、s、n、p和/或o。在某些實(shí)施方案中，接頭為任選存在的，例如peg綴合的adir酶不包含接頭。在一些情況下，接頭基團(tuán)包括例如琥珀?；?、酰胺基、酰亞胺基、氨基甲酸酯基、酯基、環(huán)氧基、羧基、羥基、碳水化合物、酪氨酸基團(tuán)、半胱氨酸基團(tuán)、組氨酸基團(tuán)、亞甲基及其組合。穩(wěn)定接頭的特定實(shí)例包括琥珀酰亞胺、丙酸、羧基甲醇化物鍵聯(lián)、醚、氨基甲酸酯、酰胺、胺、尿素、酰亞胺、脂族c-c鍵和硫醚。在某些實(shí)施方案中，生物相容接頭為琥珀酸琥珀酰亞胺酯(ss)基團(tuán)。其它適合的接頭包括氧基羰基咪唑基團(tuán)(包括例如羰基咪唑(cdi))、硝基苯基(包括例如碳酸硝基苯酯(ncp)或碳酸三氯苯酯(tcp))、甲苯磺酸酯(trysylate)基團(tuán)、醛基、異氰酸酯基、乙烯基砜基或伯胺。在某些實(shí)施方案中，接頭衍生自ss、spa、scm或nhs；在某些實(shí)施方案中，使用ss、spa或nhs，且在一些實(shí)施方案中，使用ss或spa。因此，在某些實(shí)施方案中，可能的接頭可由以下各項(xiàng)形成：甲氧基-peg琥珀酸琥珀酰亞胺酯(ss)、甲氧基-peg戊二酸琥珀酰亞胺酯(sg)、甲氧基-peg碳酸琥珀酰亞胺酯(sc)、甲氧基-peg琥珀酰亞胺基羧甲基醚(scm)、甲氧基-peg2n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)、甲氧基-peg丁酸琥珀酰亞胺酯(sba)、甲氧基-peg丙酸琥珀酰亞胺酯(spa)、甲氧基-peg琥珀酰亞胺基戊二酸酰胺和/或甲氧基-peg琥珀酰亞胺基琥珀酰亞胺。接頭的其它實(shí)例包括但不限于以下中的一者或多者：-o-、-nh-、-s-、-c(o)-、c(o)-nh、nh-c(o)-nh、o-c(o)-nh、-c(s)-、-ch2-、-ch2-ch2-、-ch2-ch2-ch2-、-ch2-ch2-ch2-ch2-、-o-ch2-、-ch2-o-、-o-ch2-ch2-、-ch2-o-ch2-、-ch2-ch2-o-、-o-ch2-ch2-ch2-、-ch2-o-ch2-ch2-、-ch2-ch2-o-ch2-、-ch2-ch2-ch2-o-、-o-ch2-ch2-ch2-ch2-、-ch2-o-ch2-ch2-ch2-、-ch2-ch2-o-ch2-ch2-、-ch2-ch2-ch2-o-ch2-、-ch2-ch2-ch2-ch2-o-、-c(o)-nh-ch2-、-c(o)-nh-ch2-ch2-、-ch2-c(o)-nh-ch2-、-ch2-ch2-c(o)-nh-、-c(o)-nh-ch2-ch2-ch2-、-ch2-c(o)-nh-ch2-ch2-、-ch2-ch2-c(o)-nh-ch2-、-ch2-ch2-ch2-c(o)-nh-、-c(o)-nh-ch2-ch2-ch2-ch2-、-ch2-c(o)-nh-ch2-ch2-ch2-、-ch2-ch2-c(o)-nh-ch2-ch2-、-ch2-ch2-ch2-c(o)-nh-ch2-、-ch2-ch2-ch2-c(o)-nh-ch2-ch2-、-ch2-ch2-ch2-ch2-c(o)-nh-、-nh-c(o)-ch2-、-ch2-nh-c(o)-ch2-、-ch2-ch2-nh-c(o)-ch2-、-nh-c(o)-ch2-ch2-、-ch2-nh-c(o)-ch2-ch2、-ch2-ch2-nh-c(o)-ch2-ch2、-c(o)-nh-ch2-、-c(o)-nh-ch2-ch2-、-o-c(o)-nh-ch2-、-o-c(o)-nh-ch2-ch2-、-nh-ch2-、-nh-ch2-ch2-、-ch2-nh-ch2-、-ch2-ch2-nh-ch2-、-c(o)-ch2-、-c(o)-ch2-ch2-、-ch2-c(o)-ch2-、-ch2-ch2-c(o)-ch2-、-ch2-ch2-c(o)-ch2-ch2-、-ch2-ch2-c(o)-、-ch2-ch2-ch2-c(o)-nh-ch2-ch2-nh-、-ch2-ch2-ch2-c(o)-nh-ch2-ch2-nh-c(o)-、-ch2-ch2-ch2-c(o)-nh-ch2-ch2-nh-c(o)-ch2-、二價(jià)環(huán)烷基、-n(r6)-，r6為h或選自由以下組成的組的有機(jī)基團(tuán)：烷基、經(jīng)取代烷基、烯基、經(jīng)取代烯基、炔基、經(jīng)取代炔基、芳基和經(jīng)取代芳基。另外，本文所描述的接頭部分中的任一者可進(jìn)一步包括包含1至20個(gè)環(huán)氧乙烷單體單元[即-(ch2ch2o)1-20-]的環(huán)氧乙烷寡聚物鏈。即，環(huán)氧乙烷寡聚物鏈可存在于在接頭之前或之后且任選在包含兩個(gè)或兩個(gè)以上原子的接頭部分的任何兩個(gè)原子之間。另外，如果寡聚物鄰近聚合物片段，則寡聚物鏈將不被視為接頭部分的一部分，而僅僅表示聚合物片段的延伸部分。具體示例性peg分子和接頭描述于下表a中。在某些實(shí)施方案中，adir酶包含一個(gè)或多個(gè)peg分子和/或如本文所描述(例如表a中)的接頭。peg連接至adir增加adir的循環(huán)半衰期。一般來(lái)說(shuō)，peg連接至adir的伯胺。如熟練技術(shù)人員將已知，在adir上peg或其它修飾劑的連接位點(diǎn)的選擇是通過(guò)蛋白質(zhì)的活性結(jié)構(gòu)域內(nèi)的各個(gè)位點(diǎn)的作用來(lái)確定。peg可連接至adir的伯胺，而不會(huì)產(chǎn)生酶活性的實(shí)質(zhì)性損失。舉例來(lái)說(shuō)，存在于adir中的賴氨酸殘基全部是如本文所描述的adir可經(jīng)由生物相容接頭(諸如ss、spa、scm、ssa和/或nhs)連接至peg的可能點(diǎn)。如本領(lǐng)域技術(shù)人員鑒于本公開將顯而易知，peg還可連接至adir上的其它位點(diǎn)。1至約30個(gè)peg分子可共價(jià)鍵結(jié)至adir。在某些實(shí)施方案中，adir經(jīng)一個(gè)peg分子修飾(即包含一個(gè)peg分子)。在一些實(shí)施方案中，adir經(jīng)超過(guò)一個(gè)peg分子修飾。在特定實(shí)施方案中，adir經(jīng)約1至約10或約7至約15個(gè)peg分子或約2至約8或約9至約12個(gè)peg分子修飾。在一些實(shí)施方案中，adir經(jīng)約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個(gè)peg分子修飾。在具體實(shí)施方案中，adir經(jīng)每個(gè)adir4.5-5.5個(gè)peg分子修飾。在一些實(shí)施方案中，adir經(jīng)5±1.5個(gè)peg分子修飾。在某些實(shí)施方案中，adir中約15％至約70％的伯氨基經(jīng)peg修飾，在一些實(shí)施方案中，精氨酸脫亞氨酶中的約20％至約65％、約25％至約60％，或在某些實(shí)施方案中，約30％至約55％或45％至約50％，或在一些實(shí)施方案中，約50％的伯氨基經(jīng)peg修飾。當(dāng)peg共價(jià)鍵結(jié)至adir的末端時(shí)，可能需要僅使用1個(gè)peg分子。adir上peg單元的數(shù)目增加使酶的循環(huán)半衰期增加。然而，adir上peg單元的數(shù)目增加使酶的比活性降低。因此，如本領(lǐng)域技術(shù)人員鑒于本公開將顯而易知，需要在兩者之間達(dá)成平衡。在一些實(shí)施方案中，生物相容接頭的共同特征在于其經(jīng)由琥珀酰亞胺基連接至精氨酸脫亞氨酶的伯胺。一旦與adir偶合，ss-peg具有緊挨著peg的酯鍵，其可賦予此位點(diǎn)血清酯酶敏感性，該血清酯酶可在體內(nèi)從adir釋放peg。spa-peg和peg2-nhs不具有酯鍵，因此其不對(duì)血清酯酶敏感。連接至蛋白質(zhì)的peg可為直鏈，如在ss-peg、spa-peg和sc-peg情況下，或可使用peg的支鏈，如在peg2-nhs情況下。在某些實(shí)施方案中，位于或鄰近酶的催化區(qū)域的與adir締合的聚乙二醇化位點(diǎn)經(jīng)修飾。在某些實(shí)施方案中，詞組“聚乙二醇化位點(diǎn)”定義為adi或adir中可經(jīng)聚乙二醇共價(jià)修飾的任何位點(diǎn)或位置?！熬垡叶蓟稽c(diǎn)”可視為位于或鄰近酶的催化區(qū)域，其中位點(diǎn)的聚乙二醇化使得酶的催化活性顯著降低。此類位點(diǎn)的聚乙二醇化傳統(tǒng)上引起酶的鈍化。舉例來(lái)說(shuō)，來(lái)自人型支原體的adi在可視為位于或鄰近酶的催化區(qū)域的112位置處具有賴氨酸。peg連接至112位置處的此賴氨酸可使酶失活。此外，來(lái)自人型支原體的adi在可視為位于或鄰近酶的催化區(qū)域的397位置處具有半胱氨酸。397位置處的半胱氨酸的氨基酸取代可使酶失活。特定來(lái)說(shuō)，丙氨酸、組氨酸、精氨酸、絲氨酸、賴氨酸或酪氨酸取代397位置處的半胱氨酸可引起所有可檢測(cè)酶活性的損失。來(lái)自人型支原體的adi具有三個(gè)接近此保守半胱氨酸定位的賴氨酸殘基，具體來(lái)說(shuō)為lys374、lys405和lys408。peg連接至lys374、lys405、lys408或其組合可使酶失活。應(yīng)了解，衍生自其它生物體的adir還可具有對(duì)應(yīng)于來(lái)自人型支原體的adi的112位置的聚乙二醇化位點(diǎn)。此外，來(lái)自一些生物體的adi可具有對(duì)應(yīng)于與來(lái)自人型支原體的adi的112位置相同的總體位置的賴氨酸殘基。來(lái)自此類生物體的adi中的賴氨酸的位置為熟練人員已知的且描述于美國(guó)專利第6,635,462號(hào)中。因此，一些實(shí)施方案提供adir的多肽鏈中的某些氨基酸取代。這些氨基酸取代提供經(jīng)修飾adir，其在由修飾劑例如在聚乙二醇化后修飾時(shí)損失較少活性。通過(guò)消除位于或鄰近酶的催化區(qū)域的聚乙二醇化位點(diǎn)或其它已知修飾位點(diǎn)，可達(dá)成最佳修飾(例如聚乙二醇化)，而不損失活性。在一些實(shí)施方案中，舉例來(lái)說(shuō)，如上文所說(shuō)明，氨基酸取代使用非天然氨基酸來(lái)綴合至peg或其它修飾劑(參見例如degraaf等人,bioconjugchem.20:1281-95,2009)。因此，某些實(shí)施方案包括經(jīng)由一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸綴合至一個(gè)或多個(gè)peg的adir酶。在一些實(shí)施方案中，非天然氨基酸包含具有選自由以下組成的組的官能團(tuán)的側(cè)鏈：烷基、芳基、芳基鹵化物、乙烯基鹵化物、烷基鹵化物、乙?；?、酮、氮丙啶、腈、硝基、鹵化物、?；⑼?、疊氮基、羥基、肼、氰基、鹵基、酰肼、烯基、炔基、醚、硫醚、環(huán)氧化物、砜、硼酸、硼酸酯(boronateester)、硼烷、苯基硼酸、硫醇、硒基、磺?；?、硼酸酯(borate)、硼酸酯(boronate)、磷酸基、膦?；?、膦、雜環(huán)-、吡啶基、萘基、二苯甲酮、約束環(huán)(諸如環(huán)辛炔)、硫酯、烯酮、亞胺、醛、酯、硫代酸、羥胺、氨基、羧酸、α-酮基甲酸、α或β不飽和酸和酰胺、乙醛?；０泛陀袡C(jī)硅烷基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，非天然氨基酸選自由以下組成的組：對(duì)乙?；?l-苯丙氨酸、o-甲基-l-酪氨酸、l-3-(2-萘基)丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、o-4-烯丙基-l-酪氨酸、高半胱氨酸、4-丙基-l-酪氨酸、三-o-乙?；?glcnacβ-絲氨酸、β-o-glcnac-l-絲氨酸、三-o-乙?；?galnac-α-蘇氨酸、α-galnac-l-蘇氨酸、左旋多巴、氟化苯丙氨酸、異丙基-l-苯丙氨酸、對(duì)疊氮基-l-苯丙氨酸、對(duì)?；?l-苯丙氨酸、對(duì)苯甲?；?l-苯丙氨酸、l-磷酸絲氨酸、膦?；z氨酸、膦?；野彼?、對(duì)碘-苯丙氨酸、對(duì)溴苯丙氨酸、對(duì)氨基-l-苯丙氨酸和異丙基-l-苯丙氨酸。雖然adir-peg為本文所描述的說(shuō)明性經(jīng)修飾adir，但如熟練人員將認(rèn)可，adir可經(jīng)其它聚合物或適當(dāng)分子修飾以獲得所要效應(yīng)，尤其是降低抗原性和增加血清半衰期。應(yīng)了解，一些實(shí)施方案是基于以下理解：當(dāng)經(jīng)由重組技術(shù)制備時(shí)，精氨酸脫亞氨酶的某些結(jié)構(gòu)特征可阻止或妨礙適當(dāng)和快速?gòu)?fù)性。特定來(lái)說(shuō)，這些結(jié)構(gòu)特征妨礙或阻止酶在重組制備期間呈現(xiàn)活性構(gòu)象。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“活性構(gòu)象”定義為允許由未修飾或經(jīng)修飾精氨酸脫亞氨酶產(chǎn)生的酶活性的三維結(jié)構(gòu)?；钚詷?gòu)象可尤其為催化精氨酸轉(zhuǎn)化成瓜氨酸所必需的。術(shù)語(yǔ)“結(jié)構(gòu)特征”可定義為由特定氨基酸或氨基酸組合產(chǎn)生的多肽鏈的任何特性、質(zhì)量或性質(zhì)。舉例來(lái)說(shuō)，精氨酸脫亞氨酶可含有在正常肽鏈中產(chǎn)生彎曲或扭折且因此防礙酶在酶的復(fù)性期間呈現(xiàn)活性構(gòu)象的氨基酸。特定來(lái)說(shuō)，來(lái)自人型支原體的精氨酸脫亞氨酶在210位置處具有脯氨酸，其可在肽鏈中產(chǎn)生彎曲或扭折，從而使得酶在重組制備期間更難以復(fù)性。應(yīng)了解，衍生自其它生物體的精氨酸脫亞氨酶還可具有對(duì)應(yīng)于來(lái)自人型支原體的精氨酸脫亞氨酶的210位置的位點(diǎn)。因此，提供關(guān)于野生型精氨酸脫亞氨酶的多肽鏈中的某些氨基酸取代的一些實(shí)施方案。實(shí)例包括消除精氨酸脫亞氨酶的肽鏈中的問(wèn)題結(jié)構(gòu)特征的取代。還包括提供經(jīng)修飾精氨酸脫亞氨酶的改進(jìn)的復(fù)性的取代。這些氨基酸取代使得可能使用降低量的緩沖液使經(jīng)修飾精氨酸脫亞氨酶快速?gòu)?fù)性。這些氨基酸取代還可提供增加產(chǎn)量的復(fù)性經(jīng)修飾精氨酸脫亞氨酶。在一些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾精氨酸脫亞氨酶在p210或等效殘基處具有氨基酸取代。如上文所提及，衍生自人型支原體的精氨酸脫亞氨酶具有位于210位置處的氨基酸脯氨酸。雖然不限制本發(fā)明，但認(rèn)為在位置210處氨基酸脯氨酸的存在在正常多肽鏈中產(chǎn)生彎曲或扭折，從而增加使某些精氨酸脫亞氨酶復(fù)性(即再折疊)的難度。取代位置210處的脯氨酸使得可能使用降低量的緩沖液使經(jīng)修飾精氨酸脫亞氨酶快速?gòu)?fù)性。取代位置210(或等效殘基)處的脯氨酸還可提供增加產(chǎn)量的復(fù)性經(jīng)修飾精氨酸脫亞氨酶。在一些實(shí)施方案中，位置210(或等效殘基)處的脯氨酸經(jīng)絲氨酸取代。其它取代的非限制性實(shí)例包括pro210至thr210、pro210至arg210、pro210至asn210、pro210至gln210或pro210至met210。通過(guò)消除那些與野生型精氨酸脫亞氨酶的位置210的氨基酸相關(guān)的結(jié)構(gòu)特征，可達(dá)成酶的最佳再折疊。本文所提供的方法可涉及體外或體內(nèi)應(yīng)用。在體外應(yīng)用(包括細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用)的情況下，可添加本文所描述的化合物至培養(yǎng)物中的細(xì)胞中且然后孵育。本文所描述的化合物還可用于促進(jìn)使用本領(lǐng)域中熟知的抗體制備技術(shù)制備單株和/或多株抗體。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將顯而易知，單株和/或多株抗體可然后用于多種診斷應(yīng)用。施用本文所描述的化合物或組合物的體內(nèi)手段將視預(yù)期應(yīng)用而不同。以純形式或以適當(dāng)藥學(xué)組合物形式施用本文所描述的adir組合物可經(jīng)由接受的用于提供類似功效的藥劑投藥模式中的任一種來(lái)進(jìn)行。藥學(xué)組合物可將adir(例如adir-peg、adir-peg20)與適當(dāng)?shù)纳韺W(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑組合來(lái)制備，且可配制成諸如以下的呈固體、半固體、液體或氣態(tài)形式的制劑：片劑、膠囊、粉末、顆粒、軟膏、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠、微球和氣霧劑。此外，其它藥物活性成分(包括如本文其它地方所描述的其它抗癌劑)和/或適合的賦形劑(諸如鹽、緩沖液和穩(wěn)定劑)可(但不需要)存在于組合物內(nèi)。投藥可通過(guò)包括以下的多種不同途徑來(lái)達(dá)成：口服、腸胃外、鼻內(nèi)、靜脈內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下或局部。投藥模式取決于所要治療或預(yù)防的病狀的性質(zhì)。因此，adir酶(例如adir-peg、adir-peg20)可經(jīng)口、鼻內(nèi)、腹膜內(nèi)、腸胃外、靜脈內(nèi)、淋巴內(nèi)、瘤內(nèi)、肌肉內(nèi)、經(jīng)間質(zhì)、動(dòng)脈內(nèi)、皮下、眼內(nèi)、滑膜內(nèi)、經(jīng)上皮和經(jīng)皮施用。在投藥之后，減輕、抑制、預(yù)防癌癥或延遲其進(jìn)展和/或轉(zhuǎn)移的量視為有效量。在某些實(shí)施方案中，本文的adir組合物使患者的中值存活時(shí)間增加統(tǒng)計(jì)顯著量。在一些實(shí)施方案中，本文所描述的adir治療使患者的中值存活時(shí)間增加4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、15周、20周、25周、30周、40周或更久。在某些實(shí)施方案中，adir治療使患者的中值存活時(shí)間增加1年、2年、3年或更久。在一些實(shí)施方案中，本文所描述的adir治療使無(wú)進(jìn)展存活增加2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周或更久。在某些實(shí)施方案中，本文所描述的adir治療使無(wú)進(jìn)展存活增加1年、2年、3年或更久。在某些實(shí)施方案中，施用的量足以使腫瘤消退，正如由有活力腫瘤的量的統(tǒng)計(jì)顯著性降低，例如至少10％、20％、30％、40％、50％或腫瘤質(zhì)量的更大降低；或由掃描尺寸改變(例如具有統(tǒng)計(jì)顯著性的減小)所指示。在某些實(shí)施方案中，施用的量足以使得疾病穩(wěn)定。在某些實(shí)施方案中，施用的量足以產(chǎn)生具有熟練臨床醫(yī)師已知的特定疾病征象的癥狀的臨床相關(guān)減輕。在某些實(shí)施方案中，施用的量足以抑制no合成、抑制血管生成和或足以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡或其任何組合。no合成、血管生成和凋亡可使用本領(lǐng)域中已知的方法來(lái)測(cè)量，參見例如currentprotocolsinimmunologyorcurrentprotocolsinmolecularbiology,johnwiley&sons,newyork,n.y.(2009及其更新)；ausubel等人,shortprotocolsinmolecularbiology,第3版,wiley&sons,1995；和其它相似參考文獻(xiàn)。在一些實(shí)施方案中，施用的量抑制no合成且抑制黑素瘤生長(zhǎng)，且補(bǔ)充、增加或協(xié)同加強(qiáng)如本文所描述的其它化學(xué)治療劑，諸如順鉑。因此，一些實(shí)施方案提供一種通過(guò)與順鉑組合施用adir-peg20來(lái)治療黑素瘤的方法，其中該治療耗盡內(nèi)源性一氧化氮(no)。治療的精確劑量和持續(xù)時(shí)間隨正在治療的疾病而變且可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)使用已知測(cè)驗(yàn)程序或通過(guò)在本領(lǐng)域中已知的模型系統(tǒng)中測(cè)試組合物并由其推斷來(lái)確定。還可進(jìn)行控制臨床試驗(yàn)。劑量還可隨所要緩解的病狀的嚴(yán)重性而變化。通常配制并施用藥學(xué)組合物以發(fā)揮治療有效作用，同時(shí)將不需要的副作用減至最少。組合物可一次性施用，或可分成要按多個(gè)時(shí)間間隔施用的許多較小劑量。對(duì)于任何特定受試者，具體給藥方案可根據(jù)個(gè)體需要隨時(shí)間推移進(jìn)行調(diào)節(jié)。adir(例如adir-peg)組合物可單獨(dú)或與諸如以下的其它已知癌癥治療組合施用：放射療法、化學(xué)療法、移植、免疫療法、激素療法、光動(dòng)力療法等。組合物還可與抗生素組合施用。adir組合物還可單獨(dú)或與adi-peg20治療組合施用。在某些實(shí)施方案中，如本文所描述的adir是用于已經(jīng)adi-peg20療法和已產(chǎn)生抗adi-peg20抗體的患者中。此類患者不再受益于adi-peg20治療，因?yàn)槊赣煽贵w中和。因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種治療癌癥、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展的方法，其包括向有需要的患者施用治療有效量的包含adi-peg20的組合物，且在一段時(shí)間之后，向患者施用包含如本文所描述的adir的組合物，由此治療癌癥、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展。在所述方法的一些實(shí)施方案中，所述時(shí)間段是通過(guò)檢測(cè)患者中的預(yù)定水平的抗adi-peg20抗體來(lái)確定，其中包含adir的組合物是在檢測(cè)到預(yù)定水平的所述抗adi-peg20抗體之后施用。在某些實(shí)施方案中，可確定要用adi-peg20和本文所描述的adir酶治療的患者中的抗adi-peg20抗體的閾值水平或預(yù)定水平?？筧di-peg20抗體的“預(yù)定閾值水平”(還稱為“預(yù)定水平”或“預(yù)定截止值”)或有時(shí)稱為預(yù)定截止值可使用本領(lǐng)域中已知的方法來(lái)確定，例如使用接受者操作特性曲線(receiveroperatorcharacteristiccurves)或“roc”曲線來(lái)確定。在一些實(shí)施方案中，甚至非常低水平的抗adi-peg20抗體即被認(rèn)為足以成為將治療由adi-peg20轉(zhuǎn)換成本文所描述的adir-peg的根據(jù)。在某些實(shí)施方案中，將確定何時(shí)結(jié)束adi-peg20治療并開始用本文所描述的adir組合物治療的抗adi-peg20的適當(dāng)水平可由熟練臨床醫(yī)師確定。在一些實(shí)施方案中，所述時(shí)間段是通過(guò)檢測(cè)或以其它方式觀測(cè)患者中的adi活性來(lái)確定，其中組合物是在檢測(cè)或觀測(cè)到預(yù)定水平的adi活性之后施用。在特定實(shí)施方案中，組合物是在檢測(cè)或觀測(cè)到患者中的降低水平的adi活性之后施用。adi活性可直接地例如通過(guò)測(cè)定生物樣品的至少一個(gè)adi活性指示物，或間接地例如通過(guò)觀測(cè)adi-peg20治療的所需或預(yù)期效果來(lái)測(cè)量。在某些實(shí)施方案中，將確定何時(shí)結(jié)束adi-peg20治療并開始用本文所描述的adir-peg治療的adi活性的適當(dāng)水平可由熟練臨床醫(yī)師確定。因此，施用這些和相關(guān)藥學(xué)組合物的典型途徑包括但不限于口服、局部、經(jīng)皮、吸入、腸胃外、舌下、頰內(nèi)、直腸、陰道和鼻內(nèi)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)腸胃外包括皮下注射、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、胸骨內(nèi)注射或輸注技術(shù)。某些藥學(xué)組合物經(jīng)配制使得允許其中所含的活性成分在向患者施用組合物之后為生物可利用的。將向受試者或患者施用的組合物可采取一個(gè)或多個(gè)劑量單位的形式，其中例如片劑可為單一劑量單位，且本文所描述的呈氣霧劑形式的adir組合物的容器可容納多個(gè)劑量單位。制備此類劑型的實(shí)際方法為已知的，或是為本領(lǐng)域技術(shù)人員將顯而易知的；例如參見remington:thescienceandpracticeofpharmacy,第20版(philadelphiacollegeofpharmacyandscience,2000)。所要施用的組合物在任何情況下均將含有治療有效量的本文所描述的adir-peg，諸如adir-peg20，用于治療根據(jù)本文教示的相關(guān)疾病或病狀。在某些實(shí)施方案中，藥學(xué)或治療性組合物為無(wú)菌和/或無(wú)熱原的。藥學(xué)組合物可呈固體或液體形式。在一些實(shí)施方案中，載體為微粒，使得組合物例如呈片劑或粉末形式。載體可為液體，并且組合物為例如施用口服油、可注射液體或氣霧劑，其適合用于例如吸入投藥。當(dāng)旨在用于口服投藥時(shí)，藥學(xué)組合物通常呈固體或液體形式，其中半固體、半液體、懸浮液和凝膠形式包括在本文中視為固體或液體的形式內(nèi)。作為用于口服投藥的固體組合物，藥學(xué)組合物可配制成粉末、顆粒、壓制片劑、丸劑、膠囊、口嚼膠、干膠片或其類似物。此類固體組合物將典型地含有一種或多種惰性稀釋劑或可食用載體。此外，可存在以下中的一者或多者：粘合劑，諸如羧甲基纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，諸如淀粉、乳糖或糊精；崩解劑，諸如海藻酸、海藻酸鈉、primogel、玉米淀粉及其類似物；潤(rùn)滑劑，諸如硬脂酸鎂或sterotex；助流劑，諸如膠體二氧化硅；甜味劑，諸如蔗糖或糖精；調(diào)味劑，諸如薄荷、水楊酸甲酯或桔子味調(diào)味劑；和著色劑。當(dāng)藥學(xué)組合物呈膠囊(例如明膠膠囊)形式時(shí)，其除以上類型的材料之外可含有諸如聚乙二醇或油的液體載體。藥學(xué)組合物可呈液體形式，例如酏劑、糖漿、溶液、乳液或懸浮液。作為兩個(gè)實(shí)例，液體可用于口服投藥或用于通過(guò)注射遞送。當(dāng)旨在用于口服投藥時(shí)，優(yōu)選組合物除本發(fā)明化合物之外含有以下中的一者或多者：甜味劑、防腐劑、染色劑/著色劑和增味劑。在旨在通過(guò)注射施用的組合物中，可包括以下中的一者或多者：表面活性劑、防腐劑、潤(rùn)濕劑、分散劑、懸浮劑、緩沖液、穩(wěn)定劑和等滲劑。液體藥學(xué)組合物(無(wú)論其為溶液、懸浮液抑或其它類似形式)可包括以下助劑中的一者或多者：無(wú)菌稀釋劑，諸如注射用水、鹽水溶液(在某些實(shí)施方案中為生理鹽水)、林格氏溶液(ringer’ssolution)、等滲氯化鈉、不揮發(fā)性油(諸如可充當(dāng)溶劑或懸浮介質(zhì)的合成甘油單酯或甘油二酯)、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它溶劑；抗細(xì)菌劑，諸如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩沖液，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；和用于調(diào)節(jié)張力的試劑，諸如氯化鈉或右旋糖。腸胃外制劑可封閉于安瓿、拋棄式注射器或由玻璃或塑料制成的多劑量小瓶中。生理鹽水為優(yōu)選助劑。可注射藥學(xué)組合物優(yōu)選為無(wú)菌的。旨在用于腸胃外或口服投藥的液體藥學(xué)組合物應(yīng)含有一定量的如本文所公開的adir(例如adir-peg、adir-peg20)，使得將獲得適合的劑量。典型地，此量為含于組合物中的至少0.01％的adir。當(dāng)旨在用于口服投藥時(shí)，此量可在組合物重量的0.1％與約70％之間變化。某些口服藥學(xué)組合物含有約4％與約75％之間的adir。在某些實(shí)施方案中，藥學(xué)組合物和制劑經(jīng)制備使得腸胃外劑量單位在稀釋之前含有0.01重量％至10重量％之間的adir。藥學(xué)組合物可旨在用于局部投藥，在此情況下載體可適當(dāng)包含溶液、乳液、軟膏或凝膠基質(zhì)。舉例來(lái)說(shuō)，基質(zhì)可包含以下中的一者或多者：礦脂、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、諸如水和乙醇的稀釋劑以及乳化劑和穩(wěn)定劑。增稠劑可存在于用于局部投藥的藥學(xué)組合物中。如果旨在用于經(jīng)皮投藥，則組合物可包括經(jīng)皮貼片或離子透入裝置。藥學(xué)組合物可旨在用于以例如栓劑的形式直腸投藥，栓劑將在直腸中融化并釋放藥物。用于直腸投藥的組合物可含有油脂性基質(zhì)作為適合的無(wú)刺激性賦形劑。此類基質(zhì)包括但不限于羊毛脂、可可脂和聚乙二醇。藥學(xué)組合物可包括改變固體或液體劑量單位的物理形式的各種材料。舉例來(lái)說(shuō)，組合物可包括形成包圍活性成分的包衣外殼的材料。形成包衣外殼的材料典型地為惰性的，且可選自例如糖、蟲膠和其它腸溶衣劑?；蛘?，活性成分可包裹于明膠膠囊中。呈固體或液體形式的藥學(xué)組合物可包括結(jié)合于adir(例如adir-peg)且由此幫助遞送化合物的試劑?？稍诖四芰χ衅鹱饔玫倪m合的試劑包括單株或多株抗體、一種或多種蛋白質(zhì)或脂質(zhì)體。藥學(xué)組合物可基本上由可以氣霧劑形式施用的劑量單位組成。術(shù)語(yǔ)氣霧劑用于表示從具有膠體性質(zhì)的系統(tǒng)變化至由加壓包裝組成的系統(tǒng)的多種系統(tǒng)。遞送可通過(guò)液化或壓縮氣體或通過(guò)分配活性成分的適合的幫浦系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行。氣霧劑可以單相、雙相或三相系統(tǒng)形式遞送來(lái)遞送活性成分。氣霧劑的遞送包括必需容器、活化劑、閥、亞容器及其類似物，其一起可形成套組。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員不進(jìn)行過(guò)度實(shí)驗(yàn)即可確定優(yōu)選氣霧劑。藥學(xué)組合物可通過(guò)藥學(xué)技術(shù)中熟知的方法來(lái)制備。舉例來(lái)說(shuō)，旨在通過(guò)注射施用的藥學(xué)組合物可如下制備：通過(guò)將包含如本文所描述的adir(例如adir-peg)和任選存在的鹽、緩沖液和/或穩(wěn)定劑中的一個(gè)或多個(gè)的組合物與無(wú)菌蒸餾水組合以形成溶液?？商砑颖砻婊钚詣┮源龠M(jìn)形成均勻溶液或懸浮液。表面活性劑為與adir(例如adir-peg)組合物非共價(jià)相互作用以促進(jìn)adir(例如adir-peg)溶解或均勻懸浮于水性遞送系統(tǒng)中的化合物。組合物可以治療有效量施用，所述治療有效量將視包括以下的多種因素而不同：所用具體化合物(例如adir-peg)的活性；化合物的代謝穩(wěn)定性和作用時(shí)長(zhǎng)；患者的年齡、體重、總體健康、性別和膳食；投藥模式和時(shí)間；排泄速率；藥物組合；特定病癥或病狀的嚴(yán)重性；和經(jīng)受治療的受試者。本文所描述的化合物的治療有效量為有效抑制腫瘤生長(zhǎng)的量。一般來(lái)說(shuō)，以小劑量起始治療，小劑量可以小增量增加直至達(dá)成在所述情形下的最佳效果。一般來(lái)說(shuō)，化合物的治療劑量可為約1至約200mg/kg每周兩次至約每?jī)芍芤淮?。舉例來(lái)說(shuō)，劑量可為以2ml靜脈注射形式約1mg/kg每周一次至約20mg/kg每3天一次。在一些實(shí)施方案中，劑量可為約每3天一次、約每周一次、約每周兩次或約每2周一次施用約50iu/m2至約700iu/m2。在某些實(shí)施方案中，劑量可為約每3天一次、約每周一次、約每周兩次或約每2周一次施用約50iu/m2、60iu/m2、70iu/m2、80iu/m2、90iu/m2、100iu/m2、110iu/m2、120iu/m2、130iu/m2、140iu/m2、150iu/m2、160iu/m2、170iu/m2、180iu/m2、190iu/m2、200iu/m2、210iu/m2、220iu/m2、230iu/m2、240iu/m2、250iu/m2、260iu/m2、270iu/m2、280iu/m2、290iu/m2、300iu/m2、310iu/m2、約320iu/m2、約330iu/m2、340iu/m2、約350iu/m2、360iu/m2、370iu/m2、380iu/m2、390iu/m2、400iu/m2、410iu/m2、420iu/m2、430iu/m2、440iu/m2、450iu/m2、500iu/m2、550iu/m2、600iu/m2、620iu/m2、630iu/m2、640iu/m2、650iu/m2、660iu/m2、670iu/m2、680iu/m2、690iu/m2或約700iu/m2。在某些實(shí)施方案中，劑量可由熟練臨床醫(yī)師按需要進(jìn)行修改。在一些情況下，adir-ss-peg5,000情況下的最佳劑量可為約每周兩次，而adir-ss-peg20,000情況下的最佳劑量可為約每周一次至約每?jī)芍芤淮巍Ｔ谀承?shí)施方案中，adir-ss-peg20,000情況下的最佳劑量可為約每周兩次。adir(例如adir-peg)在注射之前可與磷酸鹽緩沖鹽水溶液或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何其它適當(dāng)?shù)娜芤夯旌稀Ｔ谝恍?shí)施方案中，包含adir-peg的液體組合物包含約10至約12mg的adir；約20至約40mg的聚乙二醇；約1.27mg±5％磷酸二氫鈉，usp；約3mg±5％磷酸氫二鈉，usp；約7.6mg±5％氯化鈉，usp；在約6.6至約7的ph值下；含于適當(dāng)量的注射用水(例如約1ml或約2ml)中。在一些實(shí)施方案中，包含adir-peg的液體組合物包含組氨酸-hcl，且在某些實(shí)施方案中，組合物緩沖液為約0.0035m組氨酸-hcl至約0.35m組氨酸-hcl。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，組合物是于包含ph6.8下的0.035m組氨酸-hcl的緩沖液中在0.13m氯化鈉存在下進(jìn)行配制。在某些實(shí)施方案中，組合物是于包含ph6.8下的0.02m磷酸鈉緩沖液的緩沖液中在0.13m氯化鈉存在下進(jìn)行配制。在一些實(shí)施方案中，包含adir-peg的液體組合物包含約10至約12mg的adir；約20至約40mg的聚乙二醇；約5.4mg±5％組氨酸，usp；約7.6mg±5％氯化鈉，usp；在約6.6至約7的ph值下；含于適當(dāng)量的注射用水(例如約1ml或約2ml)中。在一些實(shí)施方案中，包含adir(例如adir-peg)的組合物的ph值為約5至約9、約6至約8或約6.5至約7.5。在一些實(shí)施方案中，包含adir的組合物的ph值為約6.8±1.0。在一些實(shí)施方案中，包含adir(例如adir-peg)的組合物中的游離peg在1-10％之間。在一些實(shí)施方案中，其為總peg的小于7％、小于6％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％。在某些實(shí)施方案中，包含adir(例如adir-peg)的組合物中的未修飾adir小于約1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或小于0.1％。一般來(lái)說(shuō)，包含adir-peg的組合物的總雜質(zhì)小于或等于約4％、3％、2％、1.5％、1％或0.5％。在一些實(shí)施方案中，內(nèi)毒素限值滿足陳述于usp中的要求，即≤50eu/ml。在一些實(shí)施方案中，包含adir(例如adir-peg)的組合物中的游離硫氫基大于約90％。在一些實(shí)施方案中，包含adir或adir-peg的組合物中的游離硫氫基為約91％、約92％、約93％、約94％或約95％、約96％、約97％、約98％、約99％或更多。在一些實(shí)施方案中，組合物中的adir(例如adir-peg)的km為約0.1μm或0.5μm至約15μm，或?yàn)榧s1μm至約12μm、約1μm至約10μm、約1.5μm至約9μm、約1.5μm至約8μm或約1.5μm至約7μm。在某些實(shí)施方案中，組合物中的adir(例如adir-peg)的km為約1.0μm至約10μm或約1.5μm至約6.5μm。在一些實(shí)施方案中，組合物中的adir或adir-peg的km為約、至少約或小于約0.1μm、約0.5μm、約1.0μm、約1.5μm、約2μm、約2.5μm、約3μm、約3.5μm、約4μm、約4.5μm、約5μm、約5.5μm、約6μm、約6.5μm或約7μm或約8μm或約9μm或約10μm。在一些實(shí)施方案中，組合物中的adir(例如adir-peg)的kcat為約0.5秒-1至約80秒-1或約0.5秒-1至約70秒-1或約0.5秒-1至約60秒-1或約0.5秒-1至約50秒-1或約0.5秒-1至約40秒-1或約0.5秒-1至約30秒-1或約0.5秒-1至約20秒-1或約0.5秒-1至約15秒-1，或?yàn)榧s0.5秒-1至約80秒-1或約1秒-1至約80秒-1或約5秒-1至約80秒-1或約10秒-1至約80秒-1或約20秒-1至約80秒-1或約30秒-1至約80秒-1或約40秒-1至約80秒-1或約50秒-1至約80秒-1或約60秒-1至約80秒-1或約70秒-1至約80秒-1或約1秒-1至約12秒-1、約1秒-1至約10秒-1、約1.5秒-1至約9秒-1、約2秒-1至約8秒-1或約2.5秒-1至約7秒-1。在某些實(shí)施方案中，組合物中的adir(例如adir-peg)的kcat為約2.5秒-1至約7.5秒-1。在一些實(shí)施方案中，組合物中的adir或adir-peg的kcat為約或至少約2.5秒-1、約3秒-1、約3.5秒-1、約4秒-1、約4.5秒-1、約5秒-1、約5.5秒-1、約6秒-1、約6.5秒-1、約7秒-1、約7.5秒-1或約8秒-1、約10秒-1、約15秒-1、約20秒-1、約25秒-1、約30秒-1、約35秒-1、約40秒-1、約45秒-1、約50秒-1、約55秒-1、約60秒-1、約65秒-1、約70秒-1、約75秒-1、約80秒-1、約85秒-1、約90秒-1、約95秒-1或約100秒-1。在一些實(shí)施方案中，組合物中的adir(例如adir-peg)的電導(dǎo)率(本領(lǐng)域中還稱為比電導(dǎo))為約5ms/cm至約20ms/cm或約5ms/cm至約15ms/cm、約7ms/cm至約15ms/cm、約9ms/cm至約15ms/cm或約10ms/cm至約15ms/cm。在一些實(shí)施方案中，組合物中的adir(例如adir-peg)的電導(dǎo)率為約9ms/cm、約10ms/cm、約11ms/cm、約12ms/cm或約13ms/cm、約14ms/cm或約15ms/cm。在某些實(shí)施方案中，組合物中的adir(例如adir-peg)的電導(dǎo)率為約13ms/cm±1.0ms/cm。在一些實(shí)施方案中，組合物中的adir(例如adir-peg)的滲透壓為約50mosm/kg至約500mosm/kg、約100mosm/kg至約400mosm/kg、約150mosm/kg至約350mosm/kg、約200mosm/kg至約350mosm/kg或約250mosm/kg至約350mosm/kg。在某些實(shí)施方案中，組合物中的adir(例如adir-peg)的滲透壓為約300±30mosm/kg。在一些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)濃度為約11.0±1.0mg/ml。在某些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)濃度在約8與約15mg/ml之間。在某些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)濃度為約8、9、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14或15mg/ml。在一些實(shí)施方案中，酶比活性在約5.0與90iu/mg之間或約5與55iu/mg之間，其中1iu定義為在一分鐘內(nèi)在37℃下將1μmol精氨酸轉(zhuǎn)化成1μmol瓜氨酸和1μmol的氨水的酶量且效價(jià)為100±20iu/ml。在某些實(shí)施方案中，酶比活性為約5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9.0、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、35、40、45、50、55、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100±2.0iu/mg。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，酶比活性為9±2.0iu/mg。包含本文所描述的adir(例如adir-peg)的組合物可與包括adi-peg20的一種或多種其它治療劑同時(shí)、在其施用之前或在其施用之后施用。此類組合療法可包括施用含有本發(fā)明的化合物和一種或多種其它活性劑的單一藥學(xué)劑量配制物，以及施用包含含于自己?jiǎn)为?dú)的藥學(xué)劑量配制物中的本文所描述的adir(例如adir-peg)和各活性劑的組合物。舉例來(lái)說(shuō)，adir(例如adir-peg)和其它活性劑可以諸如片劑或膠囊的單一口服劑量組合物形式一起向患者施用，或各試劑以單獨(dú)的口服劑量配制物形式施用。類似地，adir(例如adir-peg)和其它活性劑可以諸如呈鹽水溶液或其它生理學(xué)可接受的溶液形式的單一腸胃外劑量組合物形式一起向患者施用，或各試劑以單獨(dú)的腸胃外劑量配制物形式通過(guò)相同或不同途徑(例如一者通過(guò)注射，一者通過(guò)口服)施用。在使用單獨(dú)的劑量配制物情況下，包含adir(例如adir-peg)和一種或多種其它活性劑的組合物可基本上同時(shí)(即并行地)或分開地錯(cuò)開時(shí)間(即連續(xù)地)和以任何順序施用；組合療法應(yīng)理解為包括所有這些方案。因此，在某些實(shí)施方案中，還涵蓋與一種或多種其它治療劑組合施用本公開的adir組合物。此類治療劑可在本領(lǐng)域中接受作為如本文所描述的特定疾病病況(諸如特定癌癥或gvhd)的標(biāo)準(zhǔn)治療。所涵蓋的示例性治療劑包括細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、類固醇、nsaid、dmard、抗炎劑、化學(xué)治療劑、放射治療劑、自噬抑制劑或其它活性劑和輔助試劑。在某些實(shí)施方案中，本文所公開的adir(例如adir-peg)組合物可與許多化學(xué)治療劑結(jié)合施用?；瘜W(xué)治療劑的實(shí)例包括烷化劑，諸如噻替派(thiotepa)和環(huán)磷酰胺(cytoxantm)；磺酸烷基酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶類，諸如苯并替哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和烏瑞替哌(uredopa)；乙烯亞胺類和甲基蜜胺類，包括六甲蜜胺(altretamine)、三亞乙基蜜胺、三亞乙基磷酰胺、三亞乙基硫代磷酰胺和三羥甲基蜜胺；氮芥類，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、膽磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、雙氯乙基甲胺氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、膽固醇苯乙酸氮芥(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、氯乙環(huán)磷酰胺、尿嘧啶氮芥；硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲霉素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素類，諸如阿克拉霉素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、氮雜絲氨酸、博來(lái)霉素(bleomycin)、放線菌素c、卡奇霉素(calicheamicin)、卡拉比星(carabicin)、洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、更生霉素(dactinomycin)、柔紅比星(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-l-正亮氨酸、阿霉素(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達(dá)比星(idarubicin)、麻西羅霉素(marcellomycin)、絲裂霉素(mitomycin)、霉酚酸(mycophenolicacid)、諾加霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結(jié)核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝產(chǎn)物，諸如氨甲蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-fu)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸、氨甲蝶呤、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達(dá)拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如環(huán)胞苷、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、脫氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷、5-fu；雄激素，諸如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、環(huán)硫雄醇(epitiostanol)、美雄酮(mepitiostane)、睪內(nèi)酯(testolactone)；抗腎上腺劑，諸如氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補(bǔ)充劑，諸如亞葉酸(frolinicacid)；乙酰葡醛酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸；安吖啶(amsacrine)；貝他布昔(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達(dá)曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鳥氨酸(elformithine)；依利醋銨(elliptiniumacetate)；依托格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼達(dá)明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達(dá)醇(mopidamol)；硝氨丙吖啶(nitracrine)；噴司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼酸；2-乙肼；丙卡巴肼(procarbazine)；psk；雷佐生(razoxane)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細(xì)交鏈孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；氨基甲酸酯；長(zhǎng)春地辛(vindesine)；達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿拉伯糖苷(“ara-c”)；環(huán)磷酰胺；噻替派；類紫杉醇，例如帕西他賽(paclitaxel)(bristol-myerssquibboncology,princeton,n.j.)和多西他賽(rhne-poulencrorer,antony,france)；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；氨甲蝶呤；鉑類似物，諸如順鉑和卡鉑；長(zhǎng)春花堿(vinblastine)；鉑；依托泊苷(etoposide)(vp-16)；異環(huán)磷酰胺；絲裂霉素c；米托蒽醌；長(zhǎng)春新堿(vincristine)；長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)；諾維本(navelbine)；雙羥蒽醌(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；道諾霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；希羅達(dá)(xeloda)；依班膦酸鹽(ibandronate)；cpt-11；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑rfs2000；二氟甲基鳥氨酸(dmfo)；視黃酸衍生物，諸如targretintm(貝沙羅汀(bexarotene))、panretintm(阿利維甲酸(alitretinoin))；ontaktm(地尼白介素2(denileukindiftitox))；埃斯波霉素(esperamicin)；卡培他濱(capecitabine)；和以上中的任一者的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。此定義中還包括發(fā)揮作用調(diào)節(jié)或抑制激素對(duì)腫瘤的作用的抗激素劑，諸如抗雌激素，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、抑制芳香酶的4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、ly117018、奧那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)(fareston)；和抗雄激素，諸如氟他米特(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)。其它化學(xué)治療劑包括索拉非尼和其它蛋白激酶抑制劑，諸如阿法替尼(afatinib)、阿西替尼(axitinib)、貝伐單抗(bevacizumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、克唑替尼(crizotinib)、達(dá)沙替尼(dasatinib)、埃羅替尼(erlotinib)、福他替尼(fostamatinib)、吉非替尼(gefitinib)、伊馬替尼(imatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、樂(lè)伐替尼(lenvatinib)、木利替尼(mubritinib)、尼羅替尼(nilotinib)、帕尼單抗(panitumumab)、帕唑帕尼(pazopanib)、哌加他尼(pegaptanib)、雷珠單抗(ranibizumab)、魯索替尼(ruxolitinib)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、凡德他尼(vandetanib)、維羅非尼(vemurafenib)和舒尼替尼；西羅莫司(sirolimus)(雷帕霉素(rapamycin))、依維莫司和其它mtor抑制劑。以上中的任一者的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物還預(yù)期用于本文中。在某些實(shí)施方案中，本文所公開的adir(例如adir-peg)組合物可與許多自噬抑制劑結(jié)合施用。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，自噬抑制劑選自由以下組成的組：氯喹、3-甲基腺嘌呤、羥氯喹(plaquenil.tm.)、巴菲霉素(bafilomycin)a1、5-氨基-4-咪唑甲酰胺核糖核苷(aicar)、岡田酸(okadaicacid)、自噬抑制性海藻毒素(其抑制2a型或1型蛋白磷酸酶)、camp的類似物和增加camp水平的藥物、腺苷、n6-巰基嘌呤核糖核苷、渥曼青霉素(wortmannin)和長(zhǎng)春花堿。此外，還可使用抑制自噬所必需的蛋白質(zhì)(諸如atg5)的表達(dá)的反義或sirna。在一些實(shí)施方案中，adir(例如adir-peg)與一種或多種治療劑的組合互補(bǔ)、相加或協(xié)同地作用。就此而言，本文描述互補(bǔ)或協(xié)同加強(qiáng)劑，其包括能夠與如本文所提供的adir-peg互補(bǔ)或協(xié)同地起作用的治療劑(例如化學(xué)治療劑、自噬抑制劑、mtor抑制劑或用于治療如本文所描述的癌癥、gvhd或炎癥性腸道疾病的任何其它治療劑)，其中此類互補(bǔ)或協(xié)同作用表現(xiàn)為與當(dāng)化學(xué)治療劑存在但adir(例如adir-peg)組合物不存在時(shí)和/或當(dāng)adir(例如adir-peg)存在但化學(xué)治療劑不存在時(shí)可檢測(cè)的作用相比，量值較大的可檢測(cè)作用(即相對(duì)于適當(dāng)對(duì)照情況以統(tǒng)計(jì)顯著性方式)。用于測(cè)量協(xié)同性和互補(bǔ)性的方法為本領(lǐng)域中已知的(參見例如cancerres2010年1月15日70；440)。如本文所描述的包含adir(例如adir-peg)和任選存在的其它治療劑的組合物可用于用于治療癌癥的治療方法和用于預(yù)防癌癥轉(zhuǎn)移的方法中。因此，一些實(shí)施方案包括用于治療多種不同癌癥、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展或?qū)ζ溥M(jìn)行預(yù)防的方法。一些實(shí)施方案包括用于治療gvhd、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展的方法。特定實(shí)施方案包括用于治療患者的癌癥或gvhd、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展的方法，其包括任選在用adi-peg20治療之后，尤其在患者產(chǎn)生抗adi-peg20抗體的情況下，向患者施用治療有效量的如本文所描述的adir組合物，由此治療癌癥或gvhd、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展。因此，可向患有炎癥性腸道疾病(例如克羅恩氏病(crohn'sdisease)；潰瘍性結(jié)腸炎)、gvhd或包括但不限于以下的癌癥的個(gè)體施用本文所描述的adir組合物：肝細(xì)胞癌、白血病(例如急性髓樣白血病和復(fù)發(fā)急性髓樣白血病)、黑素瘤(包括轉(zhuǎn)移性黑素瘤)、肉瘤(包括但不限于轉(zhuǎn)移性肉瘤、子宮平滑肌肉瘤)、胰腺癌、前列腺癌(諸如但不限于激素難治性前列腺癌)、間皮瘤、淋巴細(xì)胞性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴瘤、小細(xì)胞肺癌、乳癌、卵巢癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌(包括但不限于胃腺癌)、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、多形性神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、腎癌(包括但不限于腎細(xì)胞癌)、膀胱癌、子宮癌、食道癌、腦部癌癥、頭頸癌(包括但不限于頭頸部鱗狀細(xì)胞癌；舌癌)、宮頸癌、睪丸癌、膽囊癌、膽管癌和胃癌。還包括治療患者的癌癥、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展的方法，其包括向患者施用如本文所描述包含adir(例如adir-peg)和任選存在的一種或多種其它治療劑的組合物，其中所述癌癥缺乏ass、asl或兩者。就此而言，ass或asl缺乏可為如通過(guò)mrna表達(dá)或蛋白質(zhì)表達(dá)所測(cè)量的表達(dá)降低，或可為蛋白質(zhì)活性降低，且通常包含如由熟練人員所測(cè)定的統(tǒng)計(jì)顯著性表達(dá)或活性降低。降低的ass或asl表達(dá)或活性可為與已知不具有癌癥的適當(dāng)對(duì)照樣品中的表達(dá)或活性相比，表達(dá)或活性降低約5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或更多。在某些實(shí)施方案中，ass或asl表達(dá)或活性與非癌癥對(duì)照樣品中的表達(dá)或活性相比降低至少兩倍。在某些實(shí)施方案中，ass或asl的降低的表達(dá)或活性是因ass或asl促進(jìn)劑的甲基化或ass或asl促進(jìn)劑的抑制而產(chǎn)生。在一些實(shí)施方案中，ass或asl的表達(dá)或活性降低是因dna突變(例如一個(gè)或多個(gè)點(diǎn)突變、小片段缺失、插入及其類似突變)或使得基因缺失的染色體異常而產(chǎn)生。在一些實(shí)施方案中，癌癥為ass或asl負(fù)性的，意謂未觀測(cè)到表達(dá)或活性。ass或asl表達(dá)或活性降低可使用本領(lǐng)域中已知的諸如但不限于以下的任何方法來(lái)測(cè)量：定量pcr、免疫組織化學(xué)、酶活性測(cè)定(例如用于測(cè)量瓜氨酸至精氨基琥珀酸鹽的轉(zhuǎn)化或精氨基琥珀酸鹽至精氨酸和富馬酸鹽的轉(zhuǎn)化的測(cè)定)及其類似方法。因此，某些實(shí)施方案包括用于治療患者的癌癥、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展的方法，其包括向患者施用包含如本文所描述的adir(例如adir-peg)的組合物，其中癌癥展現(xiàn)ass或asl或兩者的降低的表達(dá)或活性，其中癌癥包括但不限于肝細(xì)胞癌、白血病(例如急性髓樣白血病和復(fù)發(fā)急性髓樣白血病)、黑素瘤(包括轉(zhuǎn)移性黑素瘤)、肉瘤(包括但不限于轉(zhuǎn)移性肉瘤、子宮平滑肌肉瘤)、胰腺癌、前列腺癌(諸如但不限于激素難治性前列腺癌)、間皮瘤、淋巴細(xì)胞性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴瘤、小細(xì)胞肺癌、乳癌、卵巢癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌(包括但不限于胃腺癌)、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、多形性神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、腎癌(包括但不限于腎細(xì)胞癌)、膀胱癌、子宮癌、食道癌、腦部癌癥、頭頸癌(包括但不限于頭頸部鱗狀細(xì)胞癌；舌癌)、宮頸癌、睪丸癌、膽囊癌、膽管癌和胃癌。文獻(xiàn)中的各種研究已表明以下腫瘤中缺乏ass：急性髓性白血病(aml)、膀胱癌、乳癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、hcc、淋巴瘤、黑素瘤、間皮瘤、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、肉瘤和小細(xì)胞肺癌。因此，本文中具體地涵蓋這些ass缺乏型癌癥的治療，其使用單獨(dú)的或與其它治療組合(包括首先用adi-peg20治療)的adir-peg。還包括用于治療患者的癌癥、緩解其癥狀或抑制其進(jìn)展的方法，其包括與自噬抑制劑組合向患者施用包含如本文所描述的adir(例如adir-peg、adir-peg20)的組合物。一些實(shí)施方案包括用于治療患者的癌癥的方法，其包括與自噬抑制劑組合向患者施用治療有效量的包含如本文所描述的adir的組合物，其中癌癥為胰腺癌或小細(xì)胞肺癌。一些實(shí)施方案包括如下治療方法，其中包含本文所描述的adir的組合物的施用耗盡血漿中的精氨酸持續(xù)至少一個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月、5個(gè)月、6個(gè)月或更久。某些實(shí)施方案包括如下治療方法，其中在終止用adi-peg20治療之后，在檢測(cè)到抗adi-peg20抗體之后，包含本文所描述的adir的組合物的施用耗盡血漿中的精氨酸持續(xù)至少一個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月、5個(gè)月、6個(gè)月或更久。實(shí)施例實(shí)施例1與患者抗adi-peg20抗體具有低交叉反應(yīng)性的adi酶的篩選和選擇此實(shí)施例描述與患者抗adi-peg20抗體具有低交叉反應(yīng)性的adi酶的篩選和選擇。從大量adi酶中，表1列舉了關(guān)于相對(duì)于人型支原體adi的序列同一性百分比所選擇的27種adi酶。來(lái)自多種生物體的許多adi酶經(jīng)表征以確定哪些酶甚至在抗adi-peg20抗體存在下還預(yù)期將移除患者血液中的精氨酸并維持低濃度。如下文所詳述，這些研究表明來(lái)自基于序列同一性與人型支原體緊密相關(guān)的許多物種的adi具有在各種溫度和ph值下所測(cè)量的足夠良好的酶催化性質(zhì)，且還顯示與抗adi-peg20抗體的降低的交叉反應(yīng)性。adi制備.重組adi酶是根據(jù)如例如以下文獻(xiàn)中所描述的標(biāo)準(zhǔn)方案克隆、表達(dá)并純化以供測(cè)試：gallego等人,plosone,7(10):e47886,2012；monstadt和holldorf,biochem.j.273:739-745,1990；joonoh等人,moleculesandcells.13:137-143,2002；以及sugimura等人,infectionandimmunity.58:2510-2515,1990。人抗adi-peg20抗體純化.抗adi-peg20抗體是從在臨床研究期間已接收adi-peg20的患者的血漿樣品純化。舉例來(lái)說(shuō)，從如通過(guò)elisa測(cè)定所測(cè)定已針對(duì)adi-peg20達(dá)到高效價(jià)(效價(jià)>/＝4)的8個(gè)不同患者匯集總共60ml血漿。使用兩步法純化，進(jìn)行蛋白質(zhì)“a”色譜法(gehealthcare)繼之以adi親和色譜法。獲得約20mg純化抗體并以等分試樣儲(chǔ)存于-80℃直至需要時(shí)為止。adi酶測(cè)定.精氨酸脫亞氨酶(adi)催化l-精氨酸轉(zhuǎn)化成l-瓜氨酸和氨水。l-瓜氨酸的量可通過(guò)比色端點(diǎn)測(cè)定(參見例如knipp和vasak,analyticalbiochem.286:257-264,2000)檢測(cè)，且與已知量的l-瓜氨酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，以計(jì)算以每毫克蛋白質(zhì)的iu數(shù)表示的adi比活性。1iu的酶活性定義為在正在測(cè)試中的ph值和溫度下每分鐘產(chǎn)生1μmol瓜氨酸的酶的量。標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定條件是在37℃下在生理hepes緩沖液(phb)50mmhepes、160mmnaclph7.4(lang和zander,clinchemlabmed.37:563-571,1999)加上0.1％bsa中進(jìn)行。在條件允許的情況下，所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)品均一式兩份或三份進(jìn)行。km和kcat值是通過(guò)使用上文所描述的活性測(cè)定的變化形式來(lái)測(cè)定。如在活性測(cè)定情況下(或除非另外指出，否則所有反應(yīng)均在37℃下在phb加上0.1％bsa中進(jìn)行)。酶濃度、反應(yīng)時(shí)間和底物濃度范圍針對(duì)adi或adir構(gòu)筑體各自進(jìn)行調(diào)節(jié)以解釋其活性差異。一般來(lái)說(shuō)，使用2nm酶、5分鐘反應(yīng)時(shí)間和0-160μm精氨酸作為起動(dòng)條件。當(dāng)優(yōu)化條件時(shí)，特別注意呈占添加至反應(yīng)中的總底物的百分比形式的所消耗底物的量。典型地，檢測(cè)下限為約1μm瓜氨酸，并且定量下限為約2μm。對(duì)每個(gè)板進(jìn)行瓜氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線試驗(yàn)，且用于定量由酶促反應(yīng)產(chǎn)生的瓜氨酸。還進(jìn)行活性測(cè)定以評(píng)估在抗adi-peg20存在下的酶活性(抗體中和特征)。如上文所描述且在640nm、320nm、160nm、80nm、40nm、20nm、10nm和0nm抗adi-peg20抗體存在下進(jìn)行這些測(cè)定。計(jì)算.使用瓜氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各反應(yīng)中產(chǎn)生的瓜氨酸濃度(μm)且取平均值。然后，按μm/min/50nmadi計(jì)算各反應(yīng)的速率。通過(guò)將此值乘以“iu”因子(iu因子是由adi的分子量和反應(yīng)體積計(jì)算)來(lái)計(jì)算比活性(iu/mg或每毫克adi每分鐘的產(chǎn)物微摩爾數(shù))。數(shù)據(jù)顯示于以下表2-7中。這些數(shù)據(jù)尤其表明，與人型支原體adi高度同源(約50％-100％同一性)的天然和聚乙二醇化adi酶維持優(yōu)良催化活性(表2-4)，包括在不同ph值(表6)和溫度限定(表7)條件下。如通過(guò)(增加的)酶活性在抗adi-peg20抗體存在下(表4-5)所測(cè)量，例如相對(duì)于人型支原體，其還顯示降低的對(duì)患者抗adi-peg20抗體的親和力。因此，這些adi酶在單獨(dú)或在adi-peg20治療之后用于治療癌癥的療法中時(shí)可具有治療功效，以延長(zhǎng)和/或增加精氨酸耗盡療法的有效性。上文所描述的各個(gè)實(shí)施方案可組合以提供其它實(shí)施方案。本說(shuō)明書中所提及和/或應(yīng)用數(shù)據(jù)表中所列的所有美國(guó)專利、美國(guó)專利申請(qǐng)公開案、美國(guó)專利申請(qǐng)、國(guó)外專利、國(guó)外專利申請(qǐng)和非專利出版物以引用的方式整體并入本文中。必要時(shí)可修改實(shí)施方案的方面以使用各個(gè)專利、申請(qǐng)和出版物的概念來(lái)提供其它實(shí)施方案?？筛鶕?jù)以上詳細(xì)描述對(duì)實(shí)施方案作出這些和其它變化。一般來(lái)說(shuō)，在以下權(quán)利要求中，所用術(shù)語(yǔ)不應(yīng)理解為將權(quán)利要求限于本說(shuō)明書和權(quán)利要求中所公開的特定實(shí)施方案，而應(yīng)理解為包括所有可能的實(shí)施方案以及此類權(quán)利要求所授予等效內(nèi)容的全部范圍。因此，權(quán)利要求不受本公開限制。序列表<110>polarisgroupshowalter,richarde.almassy,robertthomson,jamesa.sisson,wesshia,wei-jongchen,li-changlee,yang<120>用于癌癥治療的對(duì)adi-peg20抗體具有降低的交叉反應(yīng)性的精氨酸脫亞氨酶<130>pola-005/01wo<150>us62,051,182<151>2014-09-16<160>28<170>patentin版本3.5<210>1<211>409<212>prt<213>人型支原體<400>1metservalpheaspserlyspheasnglyilehisvaltyrserglu151015ileglygluleugluthrvalleuvalhisgluproglyarggluile202530asptyrilethrproalaargleuaspgluleuleupheseralaile354045leugluserhisaspalaarglysgluhisglnserphevallysile505560metlysaspargglyileasnvalvalgluleuthraspleuvalala65707580gluthrtyraspleualaserlysalaalalysgluglupheileglu859095thrpheleuglugluthrvalprovalleuthrglualaasnlyslys100105110alavalargalapheleuleuserlysprothrhisglumetvalglu115120125phemetmetserglyilethrlystyrgluleuglyvalgluserglu130135140asngluleuilevalaspprometproasnleutyrphethrargasp145150155160prophealaservalglyasnglyvalthrilehisphemetargtyr165170175ilevalargargarggluthrleuphealaargphevalpheargasn180185190hisprolysleuvallysthrprotrptyrtyraspproalametlys195200205metproilegluglyglyaspvalpheiletyrasnasngluthrleu210215220valvalglyvalsergluargthraspleuaspthrilethrleuleu225230235240alalysasnilelysalaasnlysgluvalgluphelysargileval245250255alaileasnvalprolystrpthrasnleumethisleuaspthrtrp260265270leuthrmetleuasplysasnlyspheleutyrserproilealaasn275280285aspvalphelysphetrpasptyraspleuvalasnglyglyalaglu290295300proglnproglnleuasnglyleuproleuasplysleuleualaser305310315320ileileasnlysgluprovalleuileproileglyglyalaglyala325330335thrglumetgluilealaarggluthrasnpheaspglythrasntyr340345350leualailelysproglyleuvalileglytyraspargasnglulys355360365thrasnalaalaleulysalaalaglyilethrvalleuprophehis370375380glyasnglnleuserleuglymetglyasnalaargcysmetsermet385390395400proleuserarglysaspvallystrp405<210>2<211>410<212>prt<213>唾液支原體<400>2metservalpheserserlyspheasnglyilehisvaltyrserglu151015ileglyglule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