本公開涉及D-半乳糖在抑制群體感應，和/或抑制和/或治療口腔細菌性疾病中的應用。具體地，本公開提供了一種用于抑制群體感應的組合物，和一種用于預防和/或治療口腔細菌性疾病的組合物，上述組合物包括D-半乳糖。
背景技術：
：齲齒和牙周病是典型的口腔疾病，并且是導致拔牙的主要原因。已經對有效預防和治療這些疾病進行了很多嘗試，但仍然存在許多局限性?？股仄鸬街苯尤コ毦鸬凝x齒和牙周病的作用，但也會殺死有益細菌，并且抗生素因為耐藥性等問題而難以長期使用。如在一些國家用作牙周病治療劑的谷物不皂化部分提取物等材料對中度至重度牙周病具有的實質效果是難以預期的，而且它們的功效仍然是有爭議的。與抗生素類似，在世界范圍內使用的洗口液具有非特異性抗菌作用并且還含有醇，因此存在引起口腔癌和口干燥的風險。最近的實驗結果報道了齲齒以及牙周病不是由單一種類的微生物引起的，而是由多種微生物之間的信號轉導系統(tǒng)介導的。當細菌分泌的信號傳導分子的數量達到臨界值即法定數量(Quorum)時，細菌覺察到誘導生物膜形成和毒性的群體感應(QuorumSensing,QS)分子。目前已知的群體感應分子是自體誘導物-1(AI-1)、自體誘導物-2(AI-2)和寡肽。AI-1用于種內的信息交流，而AI-2是種間信息交流的通用信號，在生物膜形成和毒性因子表達中起到重要作用。當利用毒性細菌的這些特征時，可開發(fā)出口腔疾病的治療劑，以有效控制齲齒和牙周病。換句話說，開發(fā)出能有效抑制誘導生物膜形成和毒性的群體感應、而不直接殺死細菌的藥物，以提供對目前的治療藥劑沒有損害的預防藥劑或治療藥劑。因為群體感應抑制劑不直接殺死細菌，因此不會出現耐藥性，從而使它們的長期使用是可能的。此外，因為群體感應抑制劑不作用于特定細菌，而是干擾細菌之間的信息交流，因此示出了廣泛的應用。當群體感應抑制劑與抗生素一起使用時，它們有助于抗生素發(fā)揮作用。因此，盡管抗生素使用量少，但能獲得極好的效果。由于群體感應抑制劑的這些優(yōu)點，它們可能是能有效控制牙周病的下一代預防藥劑或治療藥劑。目前可用的群體感應抑制劑可選自：使用如呋喃酮或高絲氨酸內酯等先導化合物合成的化學品，肽樣模擬物和一類糖(D-核糖)。但是，在醫(yī)用藥物或產品中還沒有用作群體感應抑制劑的材料。對于群體感應抑制劑的工業(yè)化，盡管群體感應抑制劑能長期使用，但仍必須證明它們基本抑制人體中的群體感應的功效和對人體無害的安全性。合成的化學品顯示出對群體感應優(yōu)異的抑制功效，但在一些情況中，它們的安全性在毒性測試、動物測試和臨床測試中還沒有得到保證。一類糖D-核糖沒有安全問題，因為D-核糖已經經過了長時間使用，但它的抑制功效比合成化學品的抑制功效低很多。因此，需要開發(fā)出對群體感應具有優(yōu)異的抑制功效且還確保安全性的群體感應抑制劑。技術實現要素：技術問題本發(fā)明提供了D-半乳糖的與群體感應抑制活性有關的應用。具體地，實施方式提供了一種用于抑制細菌群體感應的組合物，所述組合物包括藥學上有效量的D-半乳糖。另一實施方式提供了一種用于抑制細菌群體感應的方法，所述方法包括向需要抑制細菌群體感應的對象給藥藥學上有效量的D-半乳糖。又一實施方式提供了D-半乳糖在抑制細菌群體感應中的應用。又一實施方式提供了D-半乳糖在生產細菌群體感應抑制劑中的應用。又一實施方式提供了一種用于抑制細菌生物膜形成的組合物，所述組合物包括藥學上有效量的D-半乳糖。又一實施方式提供了一種用于抑制細菌生物膜形成的方法，所述方法包括向需要抑制細菌生物膜形成的對象給藥藥學上有效量的D-半乳糖。又一實施方式提供了D-半乳糖在抑制細菌生物膜形成中的應用。又一實施方式提供了D-半乳糖在生產細菌生物膜形成抑制劑中的應用。又一實施方式提供了一種用于預防和/或治療口腔細菌性疾病的藥物組合物，所述組合物包括藥學上有效量的D-半乳糖。又一實施方式提供了一種用于預防和/或改善口腔細菌性疾病的食物組合物，所述組合物包括D-半乳糖。又一實施方式提供了一種用于預防和/或治療和/或改善口腔細菌性疾病的方法，所述方法包括向需要預防和/或治療或改善口腔細菌性疾病的對象給藥藥學上有效量的D-半乳糖。又一實施方式提供了D-半乳糖在預防和/或治療和/或改善口腔細菌性疾病中的應用。又一實施方式提供了D-半乳糖在制備預防和/或治療和/或改善口腔細菌性疾病的組合物中的應用。在用于預防和/或治療的上述組合物、方法和/或應用中，所述口腔細菌性疾病可以是齲齒或牙周病(例如牙周炎、齒齦炎等)。技術方案D-半乳糖是在奶中發(fā)現的一種糖。乳糖構成約奶的2～8％，并且分解成單糖，葡萄糖和D-半乳糖。D-半乳糖是已經過長時間使用的天然物質，一旦證明了它的功效，則它的工業(yè)化是可能的。本說明書證明了D-半乳糖的群體感應抑制功效比已知具有群體感應抑制功效的D-核糖高兩倍，從而提出了D-半乳糖作為群體感應抑制劑的應用。群體感應(QS)是細菌細胞與細胞的信息交流過程，這一過程不僅誘導生物膜形成，還增加毒性。群體感應抑制劑是克服了目前抗生素的局限性，并且有效控制如齲齒、牙周感染等口腔疾病的有希望的下一代抗生素。因此，本說明書提出了D-半乳糖作為口腔細菌性疾病(或口腔炎癥性疾病)的治療藥劑的應用，其中D-半乳糖具有群體感應抑制劑的效果，從而克服了抗生素的局限性。首先，一個方面提供了一種用于抑制細菌群體感應的組合物，所述組合物包括藥學上有效量的D-半乳糖。另一方面提供了一種用于抑制細菌群體感應的方法，所述方法包括向需要抑制細菌群體感應的對象給藥藥學上有效量的D-半乳糖。又一方面提供了D-半乳糖在抑制細菌群體感應中的應用。又一方面提供了D-半乳糖在生產細菌群體感應抑制劑中的應用。所述細菌可以是口腔致病細菌。所述口腔致病細菌可以是選自由以下細菌組成的組中的一種或多種，例如一種、兩種或更多種，或三種或更多種：引起牙周病的細菌，如屬于梭形桿菌Fusobacterium屬的細菌(例如核粒梭形桿菌Fusobacteriumnucleatum等)，屬于卟啉單胞菌Porphyromonas屬的細菌(例如牙齦卟啉單胞菌Porphyromonasgingivalis等)，屬于坦納菌Tannerella屬的細菌(例如福賽斯坦納菌Tannerellaforsythia等)，屬于凝聚桿菌Aggregatibacter屬的細菌(例如伴放線菌凝聚桿菌Aggregatibacteractinomycetemcomitans等)，屬于密螺旋體Treponema屬的細菌(例如牙垢密螺旋體Treponemadenticola等)，屬于普氏菌Prevotella屬的細菌(例如中間普氏菌Prevotellaintermedia等)；和，致齲菌，如屬于鏈球菌Streptococcus屬的細菌(例如變異鏈球菌Streptococcusmutans、表兄鏈球菌Streptococcussobrinus等)。如上所述，當細菌分泌的信號傳導分子的數量達到臨界值，即細菌感應到(群體感應，QS)的法定數量(Quorum)時，細菌分泌并檢測群體感應自體誘導物(AI)，從而形成生物膜并產生毒性。因此，當抑制群體感應自體誘導物時，可抑制群體感應，從而抑制生物膜形成和毒性。群體感應自體誘導物可選自用于種內信息交流的自體誘導物-1(AI-1)，用于種間信息交流(即，作用于不同物種)以及種內信息交流(即，作用于同一物種)的自體誘導物-2(AI-2)，肽類群體感應自體誘導物，等等。在這些群體感應自體誘導物中，AI-2是作用于種間信息交流以及種內信息交流的通用信號，在生物膜形成和毒性因子表達中起到重要作用。如在本說明書實施例7中所證明的，D-半乳糖對AI-2活性具有優(yōu)異的抑制效果。因此，又一方面提供了一種用于抑制細菌群體感應自體誘導物的組合物，所述組合物包括藥學上有效量的D-半乳糖。又一方面提供了一種用于抑制細菌群體感應自體誘導物的方法，所述方法包括向需要抑制細菌群體感應自體誘導物的對象給藥藥學上有效量的D-半乳糖。又一方面提供了D-半乳糖在抑制細菌群體感應自體誘導物中的應用。又一方面提供了D-半乳糖在生產細菌群體感應自體誘導物抑制劑中的應用。所述群體感應自體誘導物可以是自體誘導物-1(AI-1)、自體誘導物-2(AI-2)或它們的混合物，例如可以是AI-2。所述群體感應自體誘導物可來源(分離)于口腔致病菌。例如，所述群體感應自體誘導物可來源(分離)于選自由以下細菌組成的組中的一種或多種，例如一種、兩種或更多種，或三種或更多種：引起牙周病的細菌，如屬于梭形桿菌Fusobacterium屬的細菌(例如核粒梭形桿菌Fusobacteriumnucleatum等)，屬于卟啉單胞菌Porphyromonas屬的細菌(例如牙齦卟啉單胞菌Porphyromonasgingivalis等)，屬于坦納菌Tannerella屬的細菌(例如福賽斯坦納菌Tannerellaforsythia等)，屬于凝聚桿菌Aggregatibacter屬的細菌(例如伴放線菌凝聚桿菌Aggregatibacteractinomycetemcomitans等)，屬于密螺旋體Treponema屬的細菌(例如牙垢密螺旋體Treponemadenticola等)，屬于普氏菌Prevotella屬的細菌(例如中間普氏菌Prevotellaintermedia等)；和，致齲菌，如屬于鏈球菌Streptococcus屬的細菌(例如變異鏈球菌Streptococcusmutans、表兄鏈球菌Streptococcussobrinus等)。在一個實施方式中，所述群體感應自體誘導物可以是來源于核粒梭形桿菌Fusobacteriumnucleatum的AI-2，但并不限于此。如上所述，可通過抑制群體感應自體誘導物來抑制細菌生物膜形成。因此，又一方面提供了一種用于抑制細菌生物膜形成的組合物，所述組合物包括藥學上有效量的D-半乳糖。又一方面提供了一種用于抑制細菌生物膜形成的方法，所述方法包括向需要抑制細菌生物膜形成的對象給藥藥學上有效量的D-半乳糖。又一方面提供了D-半乳糖在抑制細菌生物膜形成中的應用。又一方面提供了D-半乳糖在生產細菌生物膜形成抑制劑中的應用。所述生物膜可由選自由以下細菌組成的組中的一種或多種，例如一種、兩種或更多種，或三種或更多種形成：引起牙周病的細菌，如屬于梭形桿菌Fusobacterium屬的細菌(例如核粒梭形桿菌Fusobacteriumnucleatum等)，屬于卟啉單胞菌Porphyromonas屬的細菌(例如牙齦卟啉單胞菌Porphyromonasgingivalis等)，屬于坦納菌Tannerella屬的細菌(例如福賽斯坦納菌Tannerellaforsythia等)，屬于凝聚桿菌Aggregatibacter屬的細菌(例如伴放線菌凝聚桿菌Aggregatibacteractinomycetemcomitans等)，屬于密螺旋體Treponema屬的細菌(例如牙垢密螺旋體Treponemadenticola等)，屬于普氏菌Prevotella屬的細菌(例如中間普氏菌Prevotellaintermedia等)；和，致齲菌，如屬于鏈球菌Streptococcus屬的細菌(例如變異鏈球菌Streptococcusmutans、表兄鏈球菌Streptococcussobrinus等)。因為細菌的生物膜形成與毒性有關，因此可通過對生物膜形成的抑制效果來降低病原性細菌的毒性，并且可預防和/或治療與病原性細菌相關的口腔細菌性疾病。因此，又一方面提供了一種用于預防和/或治療口腔細菌性疾病的藥物組合物，所述組合物包括藥學上有效量的D-半乳糖。又一方面提供了一種用于預防和/或改善口腔細菌性疾病的食物組合物，所述組合物包括D-半乳糖。所述食物組合物可以是選自由各種食物、飲品、食物添加劑等組成的組中的一種或多種。又一方面提供了一種用于抑制引起口腔細菌性疾病的細菌的方法，所述方法包括向需要抑制引起口腔細菌性疾病的細菌的對象給藥藥學上有效量的D-半乳糖。所述對象可以是需要降低引起口腔細菌性疾病的細菌的毒性的對象，并且所述抑制方法可以是降低引起口腔細菌性疾病的細菌的毒性的方法。又一方面提供了一種用于預防和/或治療和/或改善口腔細菌性疾病的方法，所述方法包括向需要預防和/或治療和/或改善口腔細菌性疾病的對象給藥藥學上有效量的D-半乳糖。又一方面提供了D-半乳糖在預防和/或治療和/或改善口腔細菌性疾病中的應用。又一方面提供了D-半乳糖在制備預防和/或治療和/或改善口腔細菌性疾病的組合物中的應用。所述口腔細菌性疾病可以是如齲齒或牙周病(例如牙周炎、齒齦炎等)等口腔細菌性疾病。所述引起口腔細菌性疾病的細菌可以是選自由以下細菌組成的組中的一種或多種，例如一種、兩種或更多種，或三種或更多種：引起牙周病的細菌，如屬于梭形桿菌Fusobacterium屬的細菌(例如核粒梭形桿菌Fusobacteriumnucleatum等)，屬于卟啉單胞菌Porphyromonas屬的細菌(例如牙齦卟啉單胞菌Porphyromonasgingivalis等)，屬于坦納菌Tannerella屬的細菌(例如福賽斯坦納菌Tannerellaforsythia等)，屬于凝聚桿菌Aggregatibacter屬的細菌(例如伴放線菌凝聚桿菌Aggregatibacteractinomycetemcomitans等)，屬于密螺旋體Treponema屬的細菌(例如牙垢密螺旋體Treponemadenticola等)，屬于普氏菌Prevotella屬的細菌(例如中間普氏菌Prevotellaintermedia等)；和，致齲菌，如屬于鏈球菌Streptococcus屬的細菌(例如變異鏈球菌Streptococcusmutans、表兄鏈球菌Streptococcussobrinus等)。在本說明書提出的組合物、方法和/或應用中，活性成分D-半乳糖的特征在于，它對(非病原性)正?？谇痪翰槐憩F出抑制效果，如不表現出群體感應抑制、群體感應自體誘導物抑制和生物膜形成抑制。所述正常口腔菌群通常存在于口腔中，但是是非病原性的，并且在一些情況下參與口腔免疫。因此，在本說明書提出的組合物、方法和/或應用中，D-半乳糖用作活性成分來選擇性抑制上述口腔致病細菌，而不抑制正常口腔菌群，從而保持口腔健康并且表現出預防和/或治療口腔疾病的效果。所述正?？谇痪嚎梢允沁x自由口腔鏈球菌Streptococcusoralis、唾液鏈球菌Streptococcussalivarius和緩癥鏈球菌Streotpcoccusmitis組成的組中的一種或多種。在本說明書提出的組合物、方法和/或應用中，可依賴于可用形式、使用目的、應用對象的健康狀況以及癥狀的類型和嚴重程度，來調節(jié)活性成分D-半乳糖的量(含量)。例如，所述組合物中的D-半乳糖的含量可以是0.001重量％～50重量％，0.001重量％～30重量％，0.001重量％～10重量％，0.001重量％～5重量％，或0.001重量％～1重量％，但并不限于此。此外，活性成分的足夠給藥劑量可隨對象的年齡、體重或性別，給藥形式、健康狀況和疾病嚴重程度的不同而不同。而且，根據醫(yī)師或藥劑師的判斷，可一天給藥一次或一天給藥數次。例如，所述活性成分可以0.0001～100mg/kg或0.0005～50mg/kg的劑量使用。該使用劑量僅是平均劑量的示例，其可依賴于對象而增加或減少。如本文所使用的，術語“藥學上有效量”指顯示出期望藥理學效果的活性成分的含量或給藥量，其可依賴于各種因素，如配制方法，給藥方式，對象的年齡、體重和性別，病理狀況，飲食，給藥時間，給藥頻率，給藥途徑，排泄率和響應靈敏度來確定。待給藥活性成分D-半乳糖的對象可以是如人等哺乳動物，并且它可經由各種途徑來給藥。活性成分的給藥方式可以是通常使用的任意給藥方式，例如可以是口服給藥、頰給藥或非口服給藥，如局部給藥至損害處(例如，用于口腔如頰粘膜、牙齒、齒齦、舌等的外部給藥)。根據通用方法，所述藥物組合物可被配制成：口服配制劑，如粉劑、粒劑、片劑、膠囊、懸浮液、乳劑、糖漿、氣霧劑等；腸胃外配制劑，如經皮制劑和可注射的無菌溶液；或，用于如頰粘膜、牙齒、齒齦、舌等口腔的外部配制劑，如溶液、懸浮液、乳劑、糊劑、貼劑、氣霧劑、軟膏、噴霧劑等。除了所述活性成分之外，所述組合物可進一步包括輔助物質，如藥學上可接受的和/或營養(yǎng)學上可接受的和/或生理學上可接受的載劑、賦形劑和稀釋劑。所述組合物所含的載劑、賦形劑和稀釋劑可包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯膠、藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油中的至少一種。在配制時，可使用通用的稀釋劑或賦形劑，如填充劑、增量劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、表面活性劑等。用于口服給藥的固體制劑包括片劑、丸劑、粉劑、粒劑、膠囊等，這樣的固體制劑可通過將所述活性成分與至少一種賦形劑(例如，淀粉、碳酸鈣、蔗糖、乳糖、明膠等)混合來制備。另外，除了賦形劑之外，還可使用潤滑劑，如硬脂酸鎂和滑石。用于口服給藥的制劑可以是懸浮液、內服的液體、乳劑、糖漿、軟膏等，除了常用的簡單稀釋劑，如水、液體石蠟等之外，該制劑還可包括各種賦形劑，例如潤濕劑、甜味劑、芳香劑、防腐劑等。用于腸胃外給藥或口腔外部給藥的制劑可包括無菌水溶液、非水溶劑、懸浮液、乳劑、凍干的配制劑和經皮制劑中的至少一種。作為所述非水溶劑和懸浮液，可使用丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄欖油)、可注射酯(如油酸乙酯)等。作為包含在健康功能性食物中的活性成分，D-半乳糖的含量根據食物的類型、期望用途等而沒有特殊限制，例如，基于食物的總重量，添加的D-半乳糖的量可以為0.01～15重量％，并且基于100ml健康飲品組合物，添加的D-半乳糖的量可以為0.02～10g，優(yōu)選0.3～1g。又一方面提供了一種包括D-半乳糖的口服產品。所述口服產品可具有預防和/或改善口腔細菌性疾病，例如齲齒、牙周病等的效果。所述口服產品可以是選自由牙膏、漱口水、口腔噴霧劑、口香糖、口腔軟膏和口腔貼片組成的組成中的一種或多種。所述口服產品可以與適當量的添加劑混合，該添加劑選自由按照應用的類型和目的通常使用的研磨劑、潤濕劑、粘合劑、發(fā)泡劑、甜味劑、防腐劑、藥劑、調味劑、酸度調節(jié)劑、增亮劑組成的組。例如，研磨劑可以是選自由磷酸一氫鈣、沉淀的氧化硅、碳酸鈣、水合氧化鋁、高嶺土和碳酸氫鈉(NaHCO3)組成的組中的一種或多種，并且研磨劑的含量可以是20～60重量％(基于產品的總重量，下文，同上)，但并不限于此。潤濕劑可以是選自由甘油、山梨醇、非結晶山梨醇溶液、丙二醇、聚乙二醇和木糖醇組成的組中的一種或多種，并且基于組合物的總重量，以20～60重量％的量來使用，但并不限于此。粘合劑可以是選自由角叉菜膠、黃原膠、羧甲基纖維素鈉、聚羧乙烯、海藻酸鈉和合成鋰皂石組成的組中的一種或多種，并且以0.1～3.0重量％，例如0.5～2.0重量％的量來使用，但并不限于此。作為發(fā)泡劑，可以使用選自由陰離子表面活性劑(如月桂基硫酸鈉、月桂酰肌氨酸鈉等)和山梨醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油和聚氧乙烯-聚氧丙烯縮合聚合物組成的組中的一種或多種，并且發(fā)泡劑的含量可以是0.5～5.0重量％，例如0.5～3.5重量％，但并不限于此。作為甜味劑，可單獨或以兩種或更多種組合使用糖精鈉、阿斯巴甜和甘草酸，并且甜味劑的含量可以是0.05～0.5重量％，但并不限于此。作為防腐劑，可單獨或以兩種或更多種組合使用對-羥基苯甲酸酯和苯甲酸鈉。作為藥劑，可混合氟化鈉、單氟磷酸鈉、氟化亞錫、氟化胺、氯己定、氨甲環(huán)酸、尿囊素、己酸、多聚磷酸鹽、酶、草本提取物等。作為調味劑，可以適當比例混合薄荷油、留蘭香油、薄荷醇、碳等。作為酸度調節(jié)劑，可使用磷酸、磷酸鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、琥珀酸、琥珀酸鈉、酒石酸、酒石酸鈉等，并且優(yōu)選pH值是5～8。作為增亮劑，可以例如0.1～2重量％的量使用氧化鈦，但并不限于此。有益效果如上所述，暗示了D-半乳糖具有比D-核糖更優(yōu)異的功效，已知在糖中，D-核糖作為群體感應抑制劑具有最優(yōu)異的活性。D-半乳糖能有效阻止通過引起兩種典型口腔疾病(牙周炎和齲齒)的細菌群體感應來形成生物膜。附圖說明圖1是示出結晶紫染色結果的柱狀圖，通過結晶紫染色來檢驗群體感應抑制劑候選物對FnAI-2誘導的核粒梭形桿菌F.nucleatum(Fn)生物膜形成的抑制效果(*：示出與Fn生物膜(用‘Fn’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05)；#：示出與通過向Fn添加AI-2形成的生物膜(用‘Fn/AI-2’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05))；圖2是示出熒光染色結果的熒光圖像，通過熒光染色來檢驗群體感應抑制劑候選物對FnAI-2誘導的核粒梭形桿菌F.nucleatum(Fn)生物膜形成的抑制效果，其中活的細菌顯示為淺灰色(橫線：10μm)；圖3是對圖2的熒光圖像的熒光密度進行量化的柱狀圖(*：示出與單一Fn生物膜(用‘Fn’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05)；#：示出與通過向Fn添加AI-2形成的生物膜(用‘Fn/AI-2’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05))；圖4是示出結晶紫染色結果的柱狀圖，通過結晶紫染色來檢驗群體感應抑制劑候選物對FnAI-2誘導的牙齦卟啉單胞菌P.gingivalis(Pg)生物膜形成的抑制效果(*：示出與單一Pg生物膜(用‘Pg’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05)；#：示出與通過向Pg添加AI-2形成的生物膜(用‘Pg/AI-2’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05))；圖5是示出熒光染色結果的熒光圖像，通過熒光染色來檢驗群體感應抑制劑候選物對FnAI-2誘導的牙齦卟啉單胞菌P.gingivalis(Pg)生物膜形成的抑制效果，其中活的細菌顯示為淺灰色(橫線：10μm)；圖6是對圖5的熒光圖像的熒光密度進行量化的柱狀圖(*：示出與單一Pg生物膜(用‘Pg’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05)；#：示出與通過向Pg添加AI-2形成的生物膜(用‘Pg.FnAI-2’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05))；圖7是示出結晶紫染色結果的柱狀圖，通過結晶紫染色來檢驗群體感應抑制劑候選物對FnAI-2誘導的福賽斯坦納菌T.forsythia(Tf)生物膜形成的抑制效果(*：示出與單一Tf生物膜(用‘Tf’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05)；#：示出與通過向Tf添加AI-2形成的生物膜(用‘Tf/AI-2’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05))；圖8是示出熒光染色結果的熒光圖像，通過熒光染色來檢驗群體感應抑制劑候選物對FnAI-2誘導的福賽斯坦納菌T.forsythia(Tf)生物膜形成的抑制效果(橫線：10μm)；圖9是對圖8的熒光圖像的熒光密度進行量化的柱狀圖(*：示出與Tf生物膜(用‘Tf’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05)；#：示出與通過向Tf添加AI-2形成的生物膜(用‘Tf.FnAI-2’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05))；圖10是示出結晶紫染色結果的柱狀圖，通過結晶紫染色來檢驗群體感應抑制劑候選物對Fn分泌物質誘導的牙齦卟啉單胞菌P.gingivalis(Pg)生物膜形成的抑制效果(*：示出與單一Pg生物膜(用‘僅Pg’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05)；#：示出與通過向Pg添加Fn分泌物質形成的生物膜(用‘Fn/Pg/AI-2’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05))；圖11是示出結晶紫染色結果的柱狀圖，通過結晶紫染色來檢驗群體感應抑制劑候選物對Fn分泌物質誘導的福賽斯坦納菌T.forsythia(Tf)生物膜形成的抑制效果(*：示出與單一Tf生物膜(用‘僅Tf’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05)；#：示出與通過向Tf添加Fn分泌物質形成的生物膜(用‘Fn/Tf/AI-2’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05))；圖12是示出在經FnAI-2和群體感應抑制劑候選物處理哈維弧菌V.harveyiBB170之后測量的生物發(fā)光的柱狀圖，其中較低的生物發(fā)光指示FnAI-2較高的抑制活性；圖13是經D-gal處理或未經D-gal處理的核粒梭形桿菌F.nucleatum的生長曲線；圖14是示出結晶紫染色結果的柱狀圖，通過結晶紫染色來檢驗D-gal對變異鏈球菌S.mutans(Sm)生物膜形成的抑制效果(*：示出與單一Sm生物膜(用‘Sm’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05))；圖15是示出熒光染色結果的熒光圖像，通過熒光染色來檢驗D-gal對變異鏈球菌S.mutans(Sm)生物膜形成的抑制效果(橫線：10μm)；圖16是對圖15的熒光圖像的熒光密度進行量化的柱狀圖(#：示出與變異鏈球菌S.mutans(Sm)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05))；和圖17是示出結晶紫染色結果的柱狀圖，通過結晶紫染色來檢驗D-gal對口腔鏈球菌S.oralis(So)生物膜形成的抑制效果(*：示出與單一So生物膜(用‘So’表示)相比具有統(tǒng)計學顯著性(p<0.05))。具體實施方式實施例下面，將通過實施例對本發(fā)明進行詳細描述。以下實施例僅用于說明本發(fā)明，而不構成對本發(fā)明的限制。實施例1：細菌培養(yǎng)將群體感應測試中待使用的引起牙周病的細菌核粒梭形桿菌F.nucleatum(ATCC25586)培養(yǎng)在消化培養(yǎng)基(6g胃消化的動物組織、6g脫水牛肉膏、5g氯化鈉、14.5g胰腺消化酪蛋白、2.5g磷酸鈉)中，將牙齦卟啉單胞菌P.gingivalis(ATCC33277)培養(yǎng)在補充了血紅素(10mg/ml)和維生素K(0.2mg/ml)的腦心浸液培養(yǎng)基中，并且將福賽斯坦納菌T.forsythia(ATCC43037)培養(yǎng)在補充了維生素K(0.2mg/ml)和N-乙酰胞壁酸(0.01mg/ml)的新口螺旋體(NOS)肉湯(ATCCMedium1494)中。細菌在厭氧條件(5％H2、10％CO2和85％N2)下，37℃孵育2～4天。將AI-2報告株哈維弧菌VibrioharveyiBB170(ATCCBAA-1117)和產生AI-2的菌株哈維弧菌V.harveyiBB152(ATCCBAA-1119)培養(yǎng)在30℃自體誘導物生物測定(AB)培養(yǎng)基(ATCCMedium2746)中，直至OD660nm＝0.7。在37℃，有氧條件下，將致齲菌變異鏈球菌Streptococcusmutans(ATCC25175)和正?？谇痪褐豢谇绘溓蚓鶶treptococcusoralis(ATCC9811)在胰蛋白酶大豆肉湯(TSB)培養(yǎng)基(17g胰腺消化酪蛋白、3g豆粕酶消化物、2.5g右旋糖、5g氯化鈉、2.5g磷酸氫二鉀)中培養(yǎng)24小時。實施例2：群體感應(QS)抑制劑候選物的制備準備作為自體誘導物-2(AI-2)群體感應(QS)抑制劑(AI-2QuorumSensingInhibitor，QSI)候選物的D-核糖(D-rib)、D-半乳糖(D-gal)、D-葡萄糖(D-Glu)、D-甘露糖(D-Man)和D-阿拉伯糖(D-ara)。D-核糖購自TokyoChemicalIndustryCo.(日本東京)，其它抑制劑候選物購自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO,USA)。此外，合成化合物(5Z)-4-溴-5-(溴亞甲基)-2(5H)-呋喃酮(呋喃酮化合物；Fur)購自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO,USA)，準備作為QSI候選物(陽性對照)。實施例3：測試對核粒梭形桿菌F.nucleatum(Fn)生物膜形成的抑制效果核粒梭形桿菌F.nucleatum(Fn)是主要的牙周病原菌，在牙周病原菌生物膜形成中起到介體的作用并且在牙周病中起到重要作用。為了測試Fn的生物膜形成，將Fn發(fā)酵液(2ml；陰性對照組，細菌數量：2×107/ml)，Fn發(fā)酵液(2ml)和核粒梭形桿菌F.nucleatumAI-2(使用C18Sep-Pak反相柱(WatersCo.,Milford,MA)純化來自核粒梭形桿菌F.nucleatum發(fā)酵液的核粒梭形桿菌F.nucleatum的分泌物質；下文稱為‘FnAI-2’；相對于與Fn發(fā)酵液的混合物的總體積為10％(v/v))的混合物，或Fn發(fā)酵液(2ml)和FnAI-2(相對于與Fn發(fā)酵液的混合物的總體積為10％(v/v))和各QSI候選物的混合物，添加到有蓋玻片(圓形，12mm半徑)的24孔板上，并且在厭氧條件下培養(yǎng)48～72小時。作為QSI候選物，使用量為2μM的糖(D-rib、D-gal、D-Glu、D-Man或D-ara)，并且使用量為2μM的呋喃酮化合物[(5Z)-4-溴-5-(溴亞甲基)-2(5H)-呋喃酮]。使用10％結晶紫[三(4-(二甲氨基)苯基)甲基氯化物]對蓋玻片上形成的生物膜染色10分鐘，用PBS洗滌三次，使用1ml丙酮-醇(20:80，vol/vol)脫色。使用酶標儀(WallacVictor3microtiter,PerkinElmerLifeSciences,Waltham,MA)，測量含結晶紫的脫色液在590nm處的光密度。在590nm處測量的較小的光密度(OD590)表示對生物膜形成具有更強的抑制，即所使用的QSI候選物具有更高的群體感應抑制效果。下面表1和圖1中給出了Fn生物膜形成的結果。[表1]樣品OD590nm無0Fn0.46Fn/AI-2(陰性對照)1.5Fn/AI-2/Fur2μM0.49Fn/AI-2/D-gal2mM0.57Fn/AI-2/D-rib2mM0.77Fn/AI-2/D-glu2mM1.15Fn/AI-2/D-man2mM1.16Fn/AI-2/D-ara2mM1.37如表1和圖1所示，當僅向Fn添加AI-2時，生物膜形成是增強的。但是，在添加了如D-gal等QSI候選物之后，生物膜形成受到了抑制。該結果表明與陰性對照組相比，作為QSI候選物的所有糖都具有顯著的QSI抑制效果，具體地，D-gal具有與呋喃酮化合物相等的優(yōu)異的QSI抑制效果(對生物膜形成的抑制效果)。此外，通過熒光染色檢驗了各QSI候選物對FnAI-2誘導的Fn生物膜形成的抑制效果。使用2mlFn發(fā)酵液(細菌數量：2×107/ml)，FnAI-2以相對于與Fn發(fā)酵液的混合物的總體積相比為10％(v/v)的體積來使用。作為QSI候選物，使用200mMD-rib或D-gal，并且使用20μM呋喃酮化合物。使用live/dead-BacLight存活力試劑盒(Invitrogen,GrandIsland,NY,USA)，用熒光染料對蓋玻片上形成的生物膜進行染色，并且使用共聚焦顯微鏡(CarlZeiss,LSM700)觀察。獲得的熒光圖像示于圖2中。在熒光圖像中，活的細菌經SYTOGreen染色發(fā)出綠色熒光(在圖2中顯示為淺灰色)，死的細菌經碘化丙啶(PI)染色顯示出紅色熒光。獲得的各熒光圖像的熒光強度使用共聚焦顯微鏡的ZEN2010程序進行量化，并且示于圖3中。如圖2和圖3所示，形成的Fn生物膜經熒光染色，然后通過共聚焦顯微鏡進行分析。獲得的結果與結晶紫染色的結果一致，當僅向Fn添加AI-2時，Fn生物膜形成是增強的，但是在向Fn添加如D-gal或D-rib等QSI候選物時，Fn生物膜形成受到了抑制。具體地，D-gal示出對Fn生物膜形成有非常優(yōu)異的抑制效果。實施例4：測試對牙齦卟啉單胞菌P.gingivalis(Pg)生物膜形成的抑制效果已知牙齦卟啉單胞菌P.gingivalis(Pg)是與如牙槽骨質丟失等牙周炎以及如動脈硬化等系統(tǒng)性疾病高度相關的細菌。為了測試Pg的生物膜形成，以與實施例3相同的方式進行了測試。即，將Pg發(fā)酵液(2ml；陰性對照組，細菌數量：4×108/ml)，Pg發(fā)酵液(2ml)和FnAI-2(相對于與Pg發(fā)酵液的混合物的總體積為10％(v/v))的混合物，或Pg發(fā)酵液(2ml)和FnAI-2(相對于與Pg發(fā)酵液的混合物的總體積為10％(v/v))和D-gal(2mM)的混合物，添加到有蓋玻片(圓形，12mm半徑)的24孔板上，并且在厭氧條件下培養(yǎng)48～72小時。作為對比，使用2μM呋喃酮化合物[(5Z)-4-溴-5-(溴亞甲基)-2(5H)-呋喃酮]取代D-gal(2mM)進行了相同的測試。使用10％結晶紫[三(4-(二甲氨基)苯基)甲基氯化物]對蓋玻片上形成的生物膜染色10分鐘，用PBS洗滌三次，使用1ml丙酮-醇(20:80，vol/vol)脫色。使用酶標儀(WallacVictor3microtiter,PerkinElmerLifeSciences,Waltham,MA)，測量含結晶紫的脫色液在590nm處的光密度。在590nm處測量的較小的光密度(OD590)表示對生物膜形成具有更強的抑制，即所使用的QSI候選物具有更高的群體感應抑制效果。下面表2和圖4中給出了Pg生物膜形成的結果。[表2]樣品OD590nm無0Pg0.66Pg/AI-2(陰性對照)2.00Pg/AI-2/Fur2μM0.98Pg/AI-2/D-gal2mM1.24如表2和圖4所示，D-gal對Pg生物膜形成具有與呋喃酮化合物相等的抑制效果。此外，通過熒光染色檢驗了D-gal對FnAI-2誘導的Pg生物膜形成的抑制效果。使用2mlPg發(fā)酵液(細菌數量：4×108/ml)，FnAI-2以相對于與Pg發(fā)酵液的混合物的總體積相比為10％(v/v)的體積來使用。使用200mMD-gal，并且作為對比，使用20μM呋喃酮化合物(而不是D-gal)進行相同的測試。使用live/dead-BacLight存活力試劑盒(Invitrogen,GrandIsland,NY,USA)，用熒光染料對蓋玻片上形成的生物膜進行染色，并且使用共聚焦顯微鏡(CarlZeiss,LSM700)觀察。獲得的熒光圖像示于圖5中。在熒光圖像中，活的細菌經SYTOGreen染色發(fā)出綠色熒光(在圖5中顯示為淺灰色)，死的細菌經碘化丙啶(PI)染色發(fā)出紅色熒光。獲得的各熒光圖像的熒光強度使用共聚焦顯微鏡的ZEN2010程序進行量化，并且示于圖6中。如圖5和圖6所示，形成的Pg生物膜經熒光染色，然后通過共聚焦顯微鏡進行分析。獲得的結果與結晶紫染色的結果一致，當僅向Pg添加AI-2時，Pg生物膜形成是增強的，但是在向Pg添加如D-gal等QSI候選物時，Pg生物膜形成受到了抑制。發(fā)現D-gal對Pg生物膜形成具有與呋喃酮化合物相等的抑制效果。實施例5：測試對福賽斯坦納菌T.forsythia(Tf)生物膜形成的抑制效果福賽斯坦納菌T.forsythia(Tf)是在牙周組織中示出最高病原性的紅色復合(red-complex)菌之一。為了測試Tf的生物膜形成，以與實施例3相同的方式進行了測試。即，將Tf發(fā)酵液(2ml；陰性對照組，細菌數量：2×108/ml)，Tf發(fā)酵液(2ml)和FnAI-2(相對于與Tf發(fā)酵液的混合物的總體積為10％(v/v))的混合物，或Tf發(fā)酵液(2ml)和FnAI-2(相對于與Tf發(fā)酵液的混合物的總體積為10％(v/v))和D-gal(2mM)的混合物，添加到有蓋玻片(圓形，12mm半徑)的24孔板上，并且在厭氧條件下培養(yǎng)48～72小時。作為對比，使用2mMD-rib或2μM呋喃酮化合物[(5Z)-4-溴-5-(溴亞甲基)-2(5H)-呋喃酮]取代D-gal進行了相同的測試。使用10％結晶紫[三(4-(二甲氨基)苯基)甲基氯化物]對蓋玻片上形成的生物膜染色10分鐘，經PBS洗滌三次，使用1ml丙酮-醇(20:80，vol/vol)脫色。使用酶標儀(WallacVictor3microtiter,PerkinElmerLifeSciences,Waltham,MA)，測量含結晶紫的脫色液在590nm處的光密度。在590nm處測量的較小的光密度(OD590)表示對生物膜形成具有更強的抑制，即所使用的QSI候選物具有更高的群體感應抑制效果。下面表3和圖7中給出了Tf的生物膜形成的結果。[表3]樣品OD590nm無0Tf0.32Tf/AI-2(陰性對照)0.48Tf/AI-2/Fur2μM0.35Tf/AI-2/D-gal2mM0.2Tf/AI-2/D-rib2mM0.41如表3和圖7所示，D-gal和D-rib示出對Tf生物膜形成具有顯著抑制效果，D-gal尤其示出對Tf生物膜形成具有優(yōu)異的抑制效果。此外，通過熒光染色檢驗了各QSI候選物對FnAI-2誘導的Tf生物膜形成的抑制效果。使用2mlTf發(fā)酵液(細菌數量：2×108/ml)，FnAI-2以相對于與Tf發(fā)酵液的混合物的總體積相比為10％(v/v)的體積來使用。作為QSI候選物，使用200mMD-rib或D-gal，并且使用20μM呋喃酮化合物。使用live/dead-BacLight存活力試劑盒(Invitrogen,GrandIsland,NY,USA)，用熒光染料對蓋玻片上形成的生物膜進行染色，并且使用共聚焦顯微鏡(CarlZeiss,LSM700)觀察。得的熒光圖像示于圖8中。在熒光圖像中，活的細菌經SYTOGreen染色發(fā)出綠色熒光，死的細菌經碘化丙啶(PI)染色顯示出紅色熒光。獲得的各熒光圖像的熒光強度使用共聚焦顯微鏡的ZEN2010程序進行量化，并且示于圖9中。如圖8和圖9所示，形成的Tf生物膜經熒光染色，然后通過共聚焦顯微鏡進行分析。獲得的結果與結晶紫染色的結果一致，當僅向Tf添加AI-2時，Tf生物膜形成是增強的，但是添加如D-gal或D-rib等QSI候選物時，Tf生物膜形成受到了抑制。具體地，發(fā)現D-gal對Tf生物膜形成具有最優(yōu)異的抑制效果。實施例6：使用遷移(Transwell)測試對核粒梭形桿菌F.nucleatum(Fn)分泌物質誘導的牙齦卟啉單胞菌P.gingivalis(Pg)或福賽斯坦納菌T.forsythia(Tf)生物膜形成的抑制效果為了檢驗群體感應抑制劑(QSI)候選物對核粒梭形桿菌F.nucleatum(Fn)分泌物質誘導的牙周病原菌生物膜形成的功效，使用transwell系統(tǒng)進行了測試。在Fn分泌物質中含有Fn天然分泌的AI-2。因此，在使用transwell系統(tǒng)的測試中，沒有向細菌直接添加FnAI-2，而是將Fn放置在上部小室中，將Pg或Tf放置在下部小室中。使用結晶紫，對存在或不存在QSI候選物的情況下培養(yǎng)和形成的生物膜進行染色，然后進行分析。這些條件是來評價Pg或Tf生物膜形成是否受非純化的AI-2，Fn天然分泌的含AI-2的分泌物質的影響，并且評價如果之后形成了生物膜，如D-gal等QSI候選物是否能抑制該生物膜的形成。更具體地，transwell系統(tǒng)(24孔)具有彼此通過0.4μm膜分離開的上部小室和下部小室。500μl核粒梭形桿菌F.nucelatum(Fn)發(fā)酵液(細菌數量：2×107CFU/ml)培養(yǎng)在上部小室中。蓋玻片放置在下部小室中，然后將相同數量的牙齦卟啉單胞菌P.gingivalis(Pg)或福賽斯坦納菌T.forsythia(Tf)接種在1ml培養(yǎng)基中并且培養(yǎng)48～72小時。將相同的QSI候選物添加到上部和下部小室中。作為QSI候選物，使用2mM糖(D-rib或D-gal)，并且使用2μM呋喃酮化合物[(5Z)-4-溴-5-(溴亞甲基)-2(5H)-呋喃酮]。為了檢驗下部腔室中的細菌的生物膜形成是否受到Fn分泌物質和QSI候選物的影響，使用結晶紫對蓋玻片上形成的生物膜進行染色，然后進行量化(參見實施例3至實施例5)。在培養(yǎng)下部腔室中的Pg之后獲得的結果示于表4和圖10中。[表4]樣品OD590nm無0僅Pg0.30Fn/Pg0.57Fn/Pg/Fur2μM0.30Fn/Pg/D-gal2mM0.45Fn/Pg/D-rib2mM0.58此外，在培養(yǎng)腔室中的Tf之后獲得的結果示于表5和圖11中。[表5]樣品OD590無0僅Tf0.17Fn/Tf0.55Fn/Tf/Fur2μM0.39Fn/Tf/D-gal2mM0.36Fn/Tf/D-rib2mM0.69如在表4和表5以及圖10和圖11中所示，Fn分泌物質增加了Pg或Tf生物膜形成，但通過D-gal的處理抑制了該Pg或Tf生物膜形成。發(fā)現D-gal具有比D-rib明顯優(yōu)異的抑制效果。實施例7：測試D-半乳糖對AI-2活性的抑制活性在本實施例中，證明了在實施例3～實施例6中示出對生物膜形成具有最優(yōu)異抑制效果的D-半乳糖不是通過殺死細菌或抑制細菌間的粘附以抑制細菌間聚集或生物膜形成來發(fā)揮效果的，而是通過抑制細菌間的群體感應來發(fā)揮效果的。群體感應自體誘導物AI-2刺激哈維弧菌V.harveyi的熒光素酶操縱子(lux基因)以誘導熒光素酶表達，最終引起發(fā)光。因此，通過測量AI-2的生物發(fā)光來證實AI-2活性的抑制。使用AI-2報告株哈維弧菌V.harveyiBB170，確定由AI-2介導的生物發(fā)光。哈維弧菌V.harveyiBB170在AB培養(yǎng)基中，在30℃培養(yǎng)過夜，直至OD600nm＝0.7。細菌經新鮮的AB培養(yǎng)基洗滌，并且稀釋至106細胞/ml的濃度。之后，哈維弧菌V.harveyiBB170發(fā)酵液(5ml)與部分純化的核粒梭形桿菌F.nucleatumAI-2(‘FnAI-2’)和D-gal(0或20mM)或D-rib(0或20mM)混合。使用C18Sep-Pak反相柱(WatersCo.,Milford,MA)部分純化Fn發(fā)酵液，獲得部分純化的FnAI-2。添加Fn發(fā)酵液或部分純化的FnAI-2，以便AI-2在混合物中的終濃度是10％(vol/vol)。10％(v/v)的FnAI-2對應于1.9×108的Fn細菌數量。然后，在30℃培養(yǎng)1～8小時。使用光度計(GloMax1-MultidetectionSystem,Promega,Madison,WI)測量生物發(fā)光。BB170是具有識別AI-2以示出生物發(fā)光的特征的哈維弧菌V.harveyi菌之一。因此，測量的較高的生物發(fā)光值表示較高的AI-2活性。獲得的結果示于表6和圖12中。[表6]樣品生物發(fā)光BB170856873Fn/AI-210712312Fn/AI-2D-gal20mM1138752Fn/AI-2D-rib20mM5481975如表6和圖12中所示，當添加D-gal時，明顯降低了生物發(fā)光(為添加D-rib時生物發(fā)光的約20％)，表明D-gal是抑制AI-2活性的群體感應抑制劑。群體感應是引起齲齒和牙周病的細菌的生物膜形成和毒性表達的必要過程。因此，在本實施例中，暗示了D-半乳糖是抑制AI-2活性的優(yōu)異的群體感應抑制劑，通過這種作用抑制了生物膜形成和毒性表達，而且D-半乳糖還是超越了簡單抑制Fn和幾種細菌之間聚集的限制，能廣泛控制生物膜形成和牙周病的材料。實施例8：D-半乳糖對細菌生長的效果在本實施例中，測試了D-半乳糖對細菌生長的效果，其中D-半乳糖在實施例3至實施例6中示出對生物膜形成具有最優(yōu)異的抑制效果。詳細來講，核粒梭形桿菌F.nucleatum在0mM(對照組)和100mMD-半乳糖的存在下，在37℃厭氧條件培養(yǎng)24～48小時，然后測定600nm處的光密度以測量細胞生長。獲得的結果示于圖13中。如圖13中所示，當添加D-gal時，細胞生長曲線示出與沒有添加D-gal的對照組(Cont)類似的模式，這表明D-gal不直接殺死細菌，也不影響細菌生長。實施例9：D-半乳糖對致齲菌生物膜形成的抑制功效根據最近的報道，齲齒不是由單一物種變異鏈球菌S.mutans(Sm)(是已知的典型致齲菌)引起的，而是由具有類似特性的幾種細菌(變異鏈球菌)形成的生物膜引起的。致齲菌Sm在其表面上表達促進細菌粘附至唾液薄膜包被的牙齒表面的葡萄糖轉移酶和葡聚糖結合蛋白，并且還向周圍區(qū)域分泌該葡萄糖轉移酶和葡聚糖結合蛋白。因此，更大量的細菌與粘附至牙齒的Sm結合，形成生物膜，從而積累細菌代謝物乳酸。結果導致牙齒周圍的pH降低至5.5或更低，引起蛀牙，從而產生齲齒。在本實施例中，從上述已知的事實，推測出引起齲齒的生物膜形成和高酸性物質的分泌是由AI-2介導的，因此測試了之前發(fā)現抑制牙周病原菌生物膜形成的D-gal是否顯示出它對齲齒菌的功效。分別向唾液包被的蓋玻片(圓形，12mm半徑)添加2mL(2×107/ml)典型致齲菌變異鏈球菌S.mutans(Sm)的發(fā)酵液和2mL(2×107/ml)正?？谇痪褐豢谇绘溓蚓鶶.oralis(SO)的發(fā)酵液，與0mM或2mMD-半乳糖一起培養(yǎng)以形成生物膜。使用結晶紫以與實施例3至實施例6相同的方式對形成的生物膜進行染色，以測試在D-半乳糖存在下的生物膜形成。此外，使用live/dead-BacLight存活力試劑盒(Invitrogen,GrandIsland,NY,USA)，用熒光染料對生物膜進行染色，然后進行分析。為了進行對比，使用2μM呋喃酮化合物取代D-半乳糖來進行相同的測試。Sm的生物膜形成的結果示于下面的表7和圖14中。[表7]樣品OD590nm無0Sm0.48Sm/Fur2μM0.51Sm/D-gal2mM0.37如表7和圖14所示，呋喃酮化合物幾乎不顯示出對Sm生物膜形成的抑制效果，而D-gal顯示出對Sm生物膜形成的顯著抑制效果。此外，通過熒光染色檢驗了D-gal對Sm生物膜形成的抑制效果。使用2ml(2×107/ml)Sm發(fā)酵液，使用200mMD-gal和20μM呋喃酮化合物。使用live/dead-BacLight存活力試劑盒(Invitrogen,GrandIsland,NY,USA)，用熒光染料對蓋玻片上形成的生物膜進行染色，并且使用共聚焦顯微鏡(CarlZeiss,LSM700)觀察。獲得的熒光圖像示于圖15中。在熒光圖像中，活的細菌經SYTOGreen染色發(fā)出綠色熒光，死的細菌經碘化丙啶(PI)染色發(fā)出紅色熒光。獲得的各熒光圖像的熒光強度使用共聚焦顯微鏡的ZEN2010程序進行量化，并且示于圖16中。如圖15和圖16所示，形成的Sm生物膜經熒光染色，然后通過共聚焦顯微鏡進行分析。獲得的結果與結晶紫染色的結果一致，通過D-gal處理抑制了Sm生物膜形成，D-gal對Sm生物膜形成的該抑制效果優(yōu)于呋喃酮化合物。此外，So的生物膜形成的結果示于下面的表8和圖17中。[表8]樣品OD590無0So0.59So/Fur2uM0.64So/D-gal2mM1.07So/D-rib2mM0.85如表8和圖17所示，與D-rib和呋喃酮化合物相比，D-gal不抑制反而增加了正?？谇痪褐豢谇绘溓蚓鶶treptococcusoralis(So)的生物膜形成。如表7和表8以及圖14至圖17所示，D-半乳糖顯著抑制了致齲菌Sm的生物膜形成，而它不抑制反而增加了正常口腔菌群之一口腔鏈球菌Streptococcusoralis(So)的生物膜形成。為了保持口腔健康，保持而不抑制正?？谇痪菏呛苤匾?。實施例1至實施例9的結果表明，D-半乳糖對引起兩種典型口腔疾病(牙周炎和齲齒)的細菌的生物膜形成具有優(yōu)異的抑制功效，而且它不影響正?？谇痪旱纳锬ば纬伞Ｒ虼?，D-半乳糖是能選擇性施用于牙周病原菌的優(yōu)異物質。當前第1頁1 2 3