本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及植物藥黃花草木樨的活性提取物。本發(fā)明還涉及該活性提取物的制備方法、含有所述提取物的藥物組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：消腫是臨床醫(yī)生經(jīng)常處理的問題，尤其是外科腫脹極為常見。例如各種創(chuàng)傷、扭傷、挫傷、骨折、燒傷等，腫脹是其主要臨床表現(xiàn)之一；下肢靜脈曲張等血管疾病，腫脹也是常見的癥狀；輕微的腫脹可以引起疼痛不適，影響創(chuàng)面愈合，嚴(yán)重的腫脹甚至可以威脅生命，因此，腫脹的危害不能忽視。有效且使用方便的消腫藥物對于解除患者病痛，促進患者早日健康，降低醫(yī)療費用起著重要的作用，是臨床上十分需要的。痔瘡是臨床上最常見的肛腸疾病，腫脹是其主要臨床表現(xiàn)之一。痔瘡的發(fā)病率約為總?cè)丝诘?5％～40％。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計資料表明，肛門直腸疾病的發(fā)病率為59.1％，痔占所有肛腸疾病的87.25％，而其中又以內(nèi)痔最為常見，占所有肛腸疾病的52.19％。男女均可得病，女性的發(fā)病率為67％，男性的發(fā)病率為53.9％；任何年齡都可發(fā)病，其中20-40歲的人較為多見，并隨著年齡的增長而逐漸加重。近幾年由于環(huán)境因素，人們生活、飲食習(xí)慣的改變，喜吃辛辣刺激性食物等均使得痔瘡發(fā)病率日益上升，其中辦公室人員、司機、營業(yè)員、教師等久坐久站的職業(yè)人士更是痔瘡的高發(fā)群體。由于痔瘡本身很難根治，有較高的復(fù)發(fā)比例，給市場帶來較大的空間。值得一提的是治療痔瘡的藥物中，無論是進口藥或是國產(chǎn)藥，其中大部分有效成分都是由植物提取物或中藥提取物組成，中藥或中成藥在痔瘡的治療中占據(jù)了絕對優(yōu)勢。黃花草木樨為豆科植物黃花草木樨Melilotusofficinalis(L.)Lam.全草或割下的干燥的地上部分。《山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)(2002)》收載其性辛，味苦，涼。歸肝、腎、脾經(jīng)，具有清熱解毒，疏肝利膽，化瘀，利濕，殺蟲 的功效。主治濕熱型黃疸性肝炎，暑熱胸悶，瘧疾，淋巴水腫，皮膚瘡瘍等癥。技術(shù)實現(xiàn)要素：因此，本發(fā)明的一個目的在于提供一種具有消腫抗炎作用的黃花草木樨提取物。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種黃花草木樨提取物的制備方法。本發(fā)明的又一個目的在于提供包含所述黃花草木樨提取物的藥物組合物。本發(fā)明的再一個目的在于提供所述黃花草木樨提取物的應(yīng)用。本發(fā)明采用大孔吸附樹脂等現(xiàn)代提取方法與手段，獲取黃花草木樨中的香豆素類化合物與黃酮苷類化合物，將其共同作為黃花草木樨提取物消除腫脹的藥效物質(zhì)。黃花草木樨主要含有香豆素、黃酮、酚酸、皂苷等成分。經(jīng)測定，本發(fā)明的黃花草木樨提取物中的香豆素類化合物主要為簡單香豆素類，包括香豆素、鄰-香豆素、傘形花內(nèi)酯、二氫香豆素、4-奧昔香豆素、7-甲基香豆素、4-甲氧基香豆素、東莨菪內(nèi)酯、二甲基七葉內(nèi)酯等。香豆素類化合物是黃花草木樨治療痔瘡的主要藥效成分，藥理研究顯示，香豆素類化合物能夠減輕由于各種原因造成的毛細血管壁通透性增加，阻止血清蛋白喪失，維持正常的膠體滲透壓，起到抗水腫作用；能夠抑制炎性介質(zhì)合成和釋放，減輕炎癥反應(yīng)程度，具有強力消炎鎮(zhèn)痛作用；能夠賦活網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，增加新生肉芽組織生成，促進創(chuàng)面愈合。黃酮類成分也是黃花草木樨治療痔瘡的有效成分之一。經(jīng)測定，本發(fā)明的黃花草木樨提取物中的黃酮類成分主要為黃酮苷類成分，包括山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、芹菜素-7-O-β-D-蘆丁糖苷、robinin、clovin、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、異槲皮苷、美迪紫檀素-3-O-β-葡萄糖吡喃糖苷等。黃酮苷類化合物同樣具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛和止血作用。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：一方面，本發(fā)明提供一種黃花草木樨提取物，其包含香豆素類化合物和黃酮苷類化合物中的一種或多種，其中，所述香豆素類化合物和黃酮苷類化合物中的一種或多種的重量之和占所述黃花草木樨提取物重量的 50％～95％，優(yōu)選50％～80％。優(yōu)選地，在所述黃花草木樨提取物中，以黃花草木樨提取物總重量計，香豆素類化合物的含量為10％～50％，黃酮苷類化合物的含量為10％～50％。優(yōu)選地，所述香豆素類化合物包括香豆素、鄰-香豆素、傘形花內(nèi)酯、二氫香豆素、4-奧昔香豆素、7-甲基香豆素、4-甲氧基香豆素、東莨菪內(nèi)酯和二甲基七葉內(nèi)酯中的一種或多種。優(yōu)選地，所述黃酮苷類化合物包括山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、芹菜素-7-O-β-D-蘆丁糖苷、robinin、clovin、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、異槲皮苷和美迪紫檀素-3-O-β-葡萄糖吡喃糖苷中的一種或多種。另一方面，本發(fā)明提供所述黃花草木樨提取物的制備方法，包括以下步驟：(1)取黃花草木樨的干燥地上部分或全草，粉碎，相對于每1kg藥材加入5～20L的40～95體積％的有機溶劑提取1～3次，每次60～120分鐘，合并提取液；(2)將步驟(1)獲得的提取液減壓濃縮至無醇味后加1～5倍藥材重量的水進行溶解；(3)將步驟(2)獲得的水溶解液通過大孔吸附樹脂，依次用水和濃度為5～10體積％的乙醇水溶液洗脫，棄去洗脫液；(4)用濃度為10～45體積％，優(yōu)選15～45體積％的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，回收溶劑并干燥，即得黃花草木樨提取物。優(yōu)選地，所述步驟(1)中的有機溶劑為甲醇和/或乙醇。優(yōu)選地，所述步驟(1)中的提取方法為熱回流和/或滲漉。優(yōu)選地，所述步驟(2)中在50～60℃下進行減壓濃縮。優(yōu)選地，步驟(3)中所述大孔吸附樹脂為：非極性大孔吸附樹脂，例如HPD-300大孔吸附樹脂、HPD-100大孔吸附樹脂、D101大孔吸附樹脂、X-5大孔吸附樹脂、H103大孔吸附樹脂、H107大孔吸附樹脂等；弱極性大孔吸附樹脂，例如AB-8大孔吸附樹脂、DA-201大孔吸附樹脂等；中極性大孔吸附樹脂，例如HPD-400大孔吸附樹脂、ML-8大孔吸附樹脂等；或極性大孔吸附樹脂，例如NKA-9大孔吸附樹脂、NKA-Ⅱ大孔吸附樹脂、S-8大孔吸附樹脂、HPD-500大孔吸附樹脂、HPD-600大孔吸附樹脂等。又一方面，本發(fā)明提供包含上述黃花草木樨提取物的藥物組合物，其中，所述藥物組合物為口服制劑或外用制劑；優(yōu)選地，所述口服制劑選自片劑(如緩釋片、控釋片、分散片)、膠囊劑(如軟膠囊劑)、顆粒劑和滴丸；所述外用制劑選自栓劑、膏劑(如軟膏劑)和凝膠劑。可以采用常規(guī)方法將黃花草木樨提取物與任何一種或一種以上藥用輔料，如淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素、羥丙甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚維酮、羧甲基淀粉鈉、聚乙二醇、硬脂酸鎂、微粉硅膠、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、甘氨酸等混合制成上述劑型。再一方面，本發(fā)明提供所述黃花草木樨提取物在制備用于治療腫脹疾病的藥物中的應(yīng)用，所述腫脹疾病為痔瘡、軟組織損傷或靜脈曲張等疾病的腫脹。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：(1)本發(fā)明首次對黃花草木樨中的香豆素類化合物和黃酮苷類化合物同時進行富集純化研究，并將其共同作為黃花草木樨消除腫脹的有效部位，經(jīng)藥效學(xué)試驗證明其療效顯著；(2)本發(fā)明的黃花草木樨提取物不僅可以使有效成分更加富集，并且成本低廉；(3)本發(fā)明的原料藥來源豐富(原作為一種動物食用的牧草)，制備方法簡單易行、提取效果好、易于工業(yè)推廣應(yīng)用。本發(fā)明的黃花草木樨提取物可根據(jù)需要制成各種劑型，為臨床提供了更加方便、有效和質(zhì)量可控的現(xiàn)代中藥。對本發(fā)明的黃花草木樨提取物進行了藥效學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)其具有顯著的消腫和抗炎活性。具體實施方式下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。實施例1本發(fā)明黃花草木樨提取物的制備取適當(dāng)粉碎后的黃花草木樨全草1kg，裝入滲漉桶壓實，加入20L70％(體積)乙醇浸泡過夜后進行滲漉提取，滲漉液進行低溫減壓濃縮至無醇味后加3L水進行溶解。水液過HPD300型大孔吸附樹脂，先用3BV(BV：BedVolume縮寫，樹脂床體積)水和3BV10％(體積)乙醇洗脫至無色， 除去糖等大分子雜質(zhì)，棄去，再用5BV40％(體積)的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液低溫減壓干燥，即得本發(fā)明的黃花草木樨提取物15g。采用高效液相色譜(HPLC)法同時測定黃花草木樨提取物中香豆素類化合物和黃酮苷類化合物的含量。方法：色譜柱UltimateXB-C18(250×4.6mm，5μm)；流動相洗脫梯度見表1；流速：1mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：254nm。表1流動相梯度洗脫程序經(jīng)HPLC檢測后，上述黃花草木樨提取物中，香豆素類化合物主要為簡單香豆素，其中包括香豆素、鄰-香豆素、傘形花內(nèi)酯、二氫香豆素、4-奧昔香豆素、7-甲基香豆素、4-甲氧基香豆素、東莨菪內(nèi)酯和二甲基七葉內(nèi)酯，以提取物總重量計，香豆素類化合物的含量約為25％；黃酮苷類化合物包括山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、芹菜素-7-O-β-D-蘆丁糖苷、robinin、clovin、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、異槲皮苷和美迪紫檀素-3-O-β-葡萄糖吡喃糖苷，以蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷和clovin為指標(biāo)成分，以提取物總重量計，黃酮苷類化合物總含量約為40％。實施例2本發(fā)明黃花草木樨提取物的制備取適當(dāng)粉碎后的黃花草木樨全草1kg，用15L70％(體積)甲醇加熱 回流提取3次(2h、1h、1h)，收集提取液；低溫減壓濃縮至無醇味，加入2.5L的水進行溶解。水液過AB-8型大孔吸附樹脂，先用3BV水和3BV10％(體積)乙醇洗脫至無色，除去糖等大分子雜質(zhì)，棄去，再用5BV45％(體積)乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液低溫減壓干燥，即得本發(fā)明的黃花草木樨提取物19g。按照實施例1中的方法采用高效液相色譜(HPLC)法同時測定黃花草木樨提取物中香豆素類化合物和黃酮苷類化合物的含量。經(jīng)HPLC檢測后，上述黃花草木樨提取物中，香豆素類化合物主要為簡單香豆素，其中包括香豆素、鄰-香豆素、傘形花內(nèi)酯、二氫香豆素、4-奧昔香豆素、7-甲基香豆素、4-甲氧基香豆素、東莨菪內(nèi)酯和二甲基七葉內(nèi)酯，以提取物總重量計，香豆素類化合物的含量約為20％；黃酮苷類化合物包括山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、芹菜素-7-O-β-D-蘆丁糖苷、robinin、clovin、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、異槲皮苷和美迪紫檀素-3-O-β-葡萄糖吡喃糖苷，以蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷和clovin為指標(biāo)成分，以提取物總重量計，黃酮苷類化合物總含量約為45％。實施例3本發(fā)明黃花草木樨提取物的制備取適當(dāng)粉碎后的黃花草木樨全草1kg，用20L60％(體積)乙醇熱回流提取3次(2h、1h、1h)，收集提取液；低溫減壓濃縮至無醇味，加入4L的水進行溶解。水液過ML-8型大孔吸附樹脂，先用3BV水和3BV10％(體積)乙醇洗脫至無色，除去糖等大分子雜質(zhì)，棄去，再用5BV30％(體積)乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液低溫減壓干燥，即得本發(fā)明的黃花草木樨提取物12g。按照實施例1中的方法采用高效液相色譜(HPLC)法同時測定黃花草木樨提取物中香豆素類化合物和黃酮苷類化合物的含量。經(jīng)HPLC檢測后，上述黃花草木樨提取物中，香豆素類化合物主要為簡單香豆素，其中包括香豆素、鄰-香豆素、傘形花內(nèi)酯、二氫香豆素、4-奧昔香豆素、7-甲基香豆素、4-甲氧基香豆素、東莨菪內(nèi)酯和二甲基七葉內(nèi)酯，以提取物總重量計，香豆素類化合物的含量約為23％；黃酮苷類化合物包括山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、芹菜素-7-O-β-D-蘆丁糖苷、robinin、clovin、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、異槲皮苷和美迪紫檀素-3-O- β-葡萄糖吡喃糖苷，以蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷和clovin為指標(biāo)成分，以提取物總重量計，黃酮苷類化合物總含量約為38％。實施例4本發(fā)明黃花草木樨提取物的制備取適當(dāng)粉碎后的黃花草木樨全草1kg，用5L95％(體積)乙醇熱回流提取2次(2h、2h)，收集提取液；低溫減壓濃縮至無醇味，加入5L的水進行溶解。水液過S-8型大孔吸附樹脂，先用3BV水和3BV10％(體積)乙醇洗脫至無色，除去糖等大分子雜質(zhì)，棄去，再用5BV25％(體積)乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液低溫減壓干燥，即得本發(fā)明的黃花草木樨提取物14g。按照實施例1中的方法采用高效液相色譜(HPLC)法同時測定黃花草木樨提取物中香豆素類化合物和黃酮苷類化合物的含量。經(jīng)HPLC檢測后，上述黃花草木樨提取物中，香豆素類化合物主要為簡單香豆素，其中包括香豆素、鄰-香豆素、傘形花內(nèi)酯、二氫香豆素、4-奧昔香豆素、7-甲基香豆素、4-甲氧基香豆素、東莨菪內(nèi)酯和二甲基七葉內(nèi)酯，以提取物總重量計，香豆素類化合物的含量約為50％；黃酮苷類化合物包括山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、芹菜素-7-O-β-D-蘆丁糖苷、robinin、clovin、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、異槲皮苷和美迪紫檀素-3-O-β-葡萄糖吡喃糖苷，以蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷和clovin為指標(biāo)成分，以提取物總重量計，黃酮苷類化合物總含量約為45％。實施例5本發(fā)明黃花草木樨提取物的制備取適當(dāng)粉碎后的黃花草木樨全草1kg，用20L40％(體積)乙醇熱回流提取3次(1h、1h、1h)，收集提取液；低溫減壓濃縮至無醇味，加入1L的水進行溶解。水液過S-8型大孔吸附樹脂，先用3BV水和3BV5％(體積)乙醇洗脫至無色，除去糖等大分子雜質(zhì)，棄去，再用5BV15％(體積)乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液低溫減壓干燥，即得本發(fā)明的黃花草木樨提取物14g。按照實施例1中的方法采用高效液相色譜(HPLC)法同時測定黃花草木樨提取物中香豆素類化合物和黃酮苷類化合物的含量。經(jīng)HPLC檢測 后，上述黃花草木樨提取物中，香豆素類化合物主要為簡單香豆素，其中包括香豆素、鄰-香豆素、傘形花內(nèi)酯、二氫香豆素、4-奧昔香豆素、7-甲基香豆素、4-甲氧基香豆素、東莨菪內(nèi)酯和二甲基七葉內(nèi)酯，以提取物總重量計，香豆素類化合物的含量約為10％；黃酮苷類化合物包括山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、芹菜素-7-O-β-D-蘆丁糖苷、robinin、clovin、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、異槲皮苷和美迪紫檀素-3-O-β-葡萄糖吡喃糖苷，以蘆丁、芹菜素-7-O-蕓香糖苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷和clovin為指標(biāo)成分，以提取物總重量計，黃酮苷類化合物總含量約為40％。實施例6本發(fā)明藥物顆粒劑和片劑的制備取黃花草木樨提取物10g，加入適量蔗糖，混合均勻，制粒，過篩，干燥，即制得黃花草木樨提取物顆粒劑型的藥物；或?qū)⒅频玫念w粒經(jīng)進一步壓片，干燥，即制得黃花草木樨提取物片劑劑型的藥物。實施例7本發(fā)明藥物膠囊劑的制備取黃花草木樨提取物10g，微粉硅膠適量，混合均勻，采用膠囊制備工藝制備，即得黃花草木樨提取物膠囊劑型的藥物。實施例8本發(fā)明藥物栓劑的制備取黃花草木樨提取物10g，加入適量的熔融混合脂肪酸甘油脂中，采用熔融法制備栓劑，即制得黃花草木樨提取物栓劑的藥物。實施例9本發(fā)明藥物軟膏劑的制備取黃花草木樨提取物10g置于研缽中，加入適量液體石蠟研成糊狀，分次加入凡士林，研勻即得黃花草木樨提取物軟膏劑的藥物。實施例10本發(fā)明黃花草木樨提取物的藥效學(xué)實驗1.試劑與儀器1.1.實驗藥物與試劑：使用實施例1制得的黃花草木樨提取物。強的松：購自浙江仙琚制藥股份有限公司，批號：100946。二甲苯：分析純，購自天津市康科德科技有限公司。角叉菜膠：購自Sigma公司。1.2.實驗動物：昆明種小鼠：雌性，購自北京華埠康生物科技股份有限公司，許可證編號SCXK(京)2009-0008。SD大鼠：雌雄各半，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，許可證編號SCX(京)2012-0001。1.3.實驗儀器：打孔器：購自廣州市捷星教學(xué)儀器有限公司，型號：J02011。游標(biāo)卡尺：購自昆山溯源測量儀器有限公司。以下實施例將用于證明本發(fā)明黃花草木樨提取物的療效：2.1、二甲苯致小鼠耳廓腫脹抗炎實驗取昆明種雌性小鼠50只，體重20±2g，隨機分成5組。即空白組；黃花草木樨提取物低劑量組(0.5克生藥/kg)；黃花草木樨中劑量組(1.0克生藥/kg)；黃花草木樨高劑量組(2.0克生藥/kg)；陽性對照組(強的松組，劑量28.8mg/kg)。實驗動物適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，開始按分組情況連續(xù)灌胃給藥7天，在第7天給藥后1小時，均勻涂抹二甲苯30μL于小鼠右耳前后兩面，1小時后處死小鼠，剪下左右耳片，6mm打孔器打孔，精密稱取左右打孔耳片重量，以左右耳片的重量之差作為腫脹度的計算依據(jù)，計算腫脹度，結(jié)果見表2。表2二甲苯致小鼠耳廓抗炎實驗結(jié)果組別耳廓腫脹度/mg空白組8.2±1.89黃花草木樨低劑量組5.01±1.34*黃花草木樨中劑量組4.26±1.89**黃花草木樨高劑量組3.27±1.15**陽性對照組2.45±1.15**由表2可見，與空白對照組相比，黃花草木樨提取物高、中、低劑量組及陽性對照組均能顯著抑制二甲苯引起小鼠耳廓腫脹的作用，表明黃花草木樨提取物具有較好的抗炎作用。2.2、角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹抗炎實驗取健康合格SD大鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，即空白組；黃花草木樨提取物低劑量組(0.5克生藥/kg)；黃花草木樨中劑量組(1.0克生藥/kg)；黃花草木樨高劑量組(2.0克生藥/kg)；陽性對照組(強的松組，劑量14.4mg/kg)。連續(xù)灌胃給藥7天。于末次給藥后45min，大鼠一側(cè)后肢足跖皮下注射1％角叉菜膠混懸液0.1mL。于注射角叉菜膠前、注射后0.5、1、2、6h分別用游標(biāo)卡尺測量大鼠足跖注射側(cè)的厚度(cm)。以各組大鼠注射角叉菜膠后各時間的足跖厚度與注射前的足跖厚度之差作為足跖腫脹度，結(jié)果見表3。表3角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹抗炎實驗結(jié)果由表3可見，與空白對照組相比，黃花草木樨提取物高、中、低劑量組及陽性對照組均能顯著抑制角叉菜引起大鼠足腫脹的作用，表明黃花草木樨提取物具有較好的抗炎作用。當(dāng)前第1頁1 2 3