一種天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，它包括原料控制、制備方法控制、鑒別方法和含量測(cè)定方法。將現(xiàn)代藥品生產(chǎn)管理融入到質(zhì)量控制中，本發(fā)明從源頭抓起，生產(chǎn)中使用的藥材、溶劑皆進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，建立生產(chǎn)過(guò)程中的產(chǎn)品質(zhì)量控制，建立完善的產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，薄層色譜檢測(cè)比例高于國(guó)家要求，并大幅度提高天麻素的含量，提升幅度達(dá)到了28.3%，保證了藥品的質(zhì)量和療效。
【專利說(shuō)明】一種天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種具有滋補(bǔ)肝腎，平肝息風(fēng)，通絡(luò)止痛 功效，用于治療肝腎不足，肝風(fēng)上擾所致頭痛、頭暈、記憶力減退、失眠、反應(yīng)遲鈍、耳鳴、腰 酸以及血管性癡呆等的天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 天麻醒腦膠囊是一種獲得國(guó)家批準(zhǔn)生產(chǎn)的民族藥。為國(guó)藥準(zhǔn)字Z20027062,質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)為WS-11293(ZD-1293)-2002,并于2005年，我公司獲得其發(fā)明專利，申請(qǐng)?zhí)枮?200410022700. 7。
[0003] 隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，國(guó)家要求的不斷提高，我們對(duì)天麻醒腦膠囊進(jìn)行了再研究， 發(fā)現(xiàn)了天麻醒腦膠囊在促智防治血管性癡呆（VD)的功能，發(fā)表論文十余篇。隨著應(yīng)用范圍 的擴(kuò)大，產(chǎn)量增加，知名度提高，產(chǎn)品的質(zhì)量尤為顯得重要。嚴(yán)格的質(zhì)量控制也因此被提上 了日程。
[0004] 中國(guó)專利200610138595. 2公開(kāi)了一種天麻醒腦制劑及其制法和控制方法，其采 用三氯甲烷作溶劑，毒性較大，不利于檢測(cè)人員的健康及檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；而且其中三氯 甲烷和乙酸乙酯均且易產(chǎn)生乳化，嚴(yán)重影響檢測(cè)結(jié)果。對(duì)于制備方法，其用水量過(guò)多，在提 取時(shí)，大量無(wú)效成分被提出，使得產(chǎn)品成分雜，嚴(yán)重影響天麻醒腦膠囊制劑及藥效。同時(shí)，該 專利的質(zhì)量控制不全面，藥物的質(zhì)量監(jiān)控是貫穿于整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程中的，而該專利只提供了 生產(chǎn)所得產(chǎn)品的部分質(zhì)控方法，沒(méi)有對(duì)原材料、溶劑以及臣藥地龍藥材進(jìn)行監(jiān)控，所以該片 面的質(zhì)控方法無(wú)法滿足目前藥品的嚴(yán)格的質(zhì)量控制的要求。因此如何克服現(xiàn)有技術(shù)的不足 是目前生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】亟需解決的問(wèn)題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方 法，全面的對(duì)天麻醒腦膠囊進(jìn)行了檢測(cè)與監(jiān)控，符合目前嚴(yán)格質(zhì)控的要求。
[0006] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0007]-種天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，包括原料控制、制備方法控制及含量檢驗(yàn)控 制，具體如下：
[0008] 第一，原料控制：
[0009] 所述的1000個(gè)單劑量天麻醒腦膠囊由以下活性成分重量配比原料制備：
[0010] 天麻300g、地龍200g、石菖蒲300g、遠(yuǎn)志200g、熟地黃100、肉灰蓉IOOg ;以上六味 藥應(yīng)符合藥典中相應(yīng)的藥材標(biāo)準(zhǔn)，且各味藥在進(jìn)入加工之前都需凈制（撿、洗、切、干燥）粉 碎，生產(chǎn)中使用的水、乙醇也要符合飲用標(biāo)準(zhǔn)；
[0011] 第二，制備方法控制：
[0012] (1)地龍粗粉用質(zhì)量為6倍量60%的乙醇溶液冷浸72小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用；
[0013] (2)石菖蒲、遠(yuǎn)志、熟地黃和肉蓯蓉四味藥的粗粉，加水煎煮二次，每次加水質(zhì)量是 其4味藥總質(zhì)量的6倍量，第一次I. 5小時(shí)，第二次1小時(shí)，分次濾過(guò)，合并濾液，于潔凈區(qū) 濃縮至90°C下相對(duì)密度1. 10-1. 15的清膏，冷卻，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置48小時(shí)，濾 過(guò)，濾液與步驟（1)濾液合并，回收乙醇，于潔凈區(qū)濃縮至90°C下相對(duì)密度1. 10-1. 15的清 膏；
[0014] (3)天麻于潔凈區(qū)粉碎成細(xì)粉，然后于< 80°C下干燥，并進(jìn)行微生物檢測(cè)及粒度 檢測(cè)，過(guò)篩后在潔凈區(qū)與步驟（2)最后得到的清膏，充分混勻，80°C以下烘干，粉碎成細(xì)粉 或制成顆粒，即得到內(nèi)容物，將內(nèi)容物裝入膠囊，得到1000粒膠囊，控制崩解時(shí)限< 30分 鐘，裝量差異為±10% ;
[0015] 其中，步驟（3)烘干后粉碎成細(xì)粉后，水份< 9%，且需經(jīng)微生物檢測(cè)；
[0016] 微生物檢測(cè)：細(xì)菌< 10000cfu/g，霉菌、酵母菌< 100cfu/g，大腸菌群< 100個(gè)/ g，大腸埃希菌不得檢出/g，沙門菌不得檢出/l〇g，活螨不得檢出；
[0017] 所得到的膠囊為硬膠囊，內(nèi)容物為淡黃色至棕黃色的粉末或顆粒；氣腥，味辛、 咸；
[0018] 第三，鑒別方法：
[0019] A.地龍的薄層色譜檢測(cè)
[0020] 取內(nèi)容物3g，置于瓶中，加二氯甲烷30ml，振搖20秒，再超聲處理30分鐘，濾過(guò)， 濾液蒸干，藥渣備用用于天麻素的檢測(cè)，殘?jiān)萤?5ml二氯甲烷使其溶解，作為供試品溶 液；另取地龍對(duì)照藥材〇. 5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶 液各5-10 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為9 :1的甲苯與丙酮為展開(kāi)劑，展 開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈，365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置 上,顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；
[0021] B?石菖蒲的薄層色譜檢測(cè)
[0022] 取A項(xiàng)中的供試品溶液作為供試品溶液；另取石菖蒲對(duì)照藥材0. 3g，加二氯甲烷 25ml，振搖20秒，再超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?. 5ml二氯甲烷使其溶解，作 為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5-10 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以體積比為8 :2的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草 醛硫酸溶液，于l〇5°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置 上,顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
[0023] C.天麻素的薄層色譜檢測(cè)
[0024] 取A項(xiàng)中二氯甲烷提取過(guò)的藥渣，加水飽和的正丁醇30ml，振搖15秒鐘，再超聲處 理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?ml使其溶解，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，用濃度為10 % 的乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?. 5ml使溶解，作為供試品溶液；另取天 麻素對(duì)照品，加甲醇制成每Iml溶液中含Img天麻素的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜 法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6-10 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為8 :1 :3 : 0. 1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開(kāi)劑,展開(kāi)至12cm，取出，晾干，噴以10%磷 鑰酸乙醇溶液，于105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0025] D.肉蓯蓉和熟地黃中的毛蕊花糖苷的薄層色譜檢測(cè)
[0026] 取內(nèi)容物2g，置于瓶中，加80%甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?加水5ml使溶解，然后用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次IOml，合并正丁醇液并蒸干，殘 渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取毛蕊花糖苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml溶液中 含Img毛蕊花糖苷的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5 yl、對(duì) 照品溶液2 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上（可使成條狀），以體積比為16 :0. 5 :2的乙 酸乙酯一甲醇一甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，用0. 1%的2, 2-二苯基-1-苦肼基無(wú)水乙 醇溶液浸漬，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0027] E.肉蓯蓉中的松果菊苷的薄層色譜檢測(cè)
[0028] 取D項(xiàng)下的供試品溶液，作為供試品溶液；另取松果菊苷對(duì)照品，加甲醇制成每每 Iml溶液中含Img松果菊苷的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶 液各2iU，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄層板上，以體積比為2:2:6的甲醇一醋酸一水為展開(kāi)劑， 展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈，365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
[0029] 第四，含量測(cè)定方法：
[0030] 含量測(cè)定照高效液相色譜法，按照《中國(guó)藥典》一部附錄VI D測(cè)定，
[0031] a.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積 比為2 :98的乙腈一0. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm ;理論板數(shù)按天麻素峰計(jì) 算應(yīng)不低于4000 ;
[0032] b.對(duì)照品溶液的制備：精密稱取天麻素對(duì)照品適量，加體積比為2:98的乙腈一水 混合溶液制成每Iml含50 y g天麻素的溶液，即得；
[0033] c.供試品溶液的制備：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取lg，精密稱定，置 于瓶中，精密加入體積比為2:98的乙腈一水混合溶液50ml，密塞，稱定重量，充分搖散后超 聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用體積比為2:98的乙腈一水混合溶液補(bǔ)足減失的重量， 搖勻，傾出溶液適量置離心管中，加塞，離心10分鐘，取上清液，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾 液，即得；
[0034] d.測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10 ill與供試品溶液5-10 iil，注入液相色 譜儀，測(cè)定，即得。每粒含天麻以天麻素（C13H18O 7)計(jì)，不得少于0.60mg。
[0035] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是A項(xiàng)、D項(xiàng)及含量測(cè)定方法中所述的置于瓶中均為置具塞錐形瓶 中。
[0036] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是B項(xiàng)中所述的石油醚的沸程為60-90°C。
[0037] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，其特 征在于C項(xiàng)大孔吸附樹(shù)脂柱為DlOl型大孔吸附樹(shù)脂柱。
[0038] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是所述的DlOl型大孔吸附樹(shù)脂柱內(nèi)徑為1cm，柱內(nèi)樹(shù)脂高度為 15cm〇
[0039] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是所述的DlOl型大孔吸附樹(shù)脂柱內(nèi)徑為1cm，柱內(nèi)樹(shù)脂高度為 15cm〇
[0040] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是所述的含量測(cè)定方法供試品溶液的制備中超聲處理的功率為 250W，頻率為 50kHz。
[0041] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是所述的含量測(cè)定方法供試品溶液的制備中離心轉(zhuǎn)速為每分鐘 4000 轉(zhuǎn)。
[0042] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是所述的含量測(cè)定方法供試品溶液的制備中微孔濾膜的孔徑為 0? 45 u m〇
[0043] 本發(fā)明天麻醒腦膠囊功能與主治：滋補(bǔ)肝腎，平肝息風(fēng)，通絡(luò)止痛。用于肝腎不足， 肝風(fēng)上擾所致頭痛、頭暈、記憶力減退、失眠、反應(yīng)遲鈍、耳鳴、腰酸等癥。
[0044] 用法與用量：口服，一次2粒，一日3次。
[0045] 規(guī)格：每粒裝0. 4g。
[0046] 貯藏：密封。
[0047] 有效期：2年。
[0048] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果為：
[0049] (1)薄層色譜法鑒別處方中地龍。原方法供試液制備過(guò)程中采用三氯甲烷作溶劑， 毒性較大，且易產(chǎn)生乳化，現(xiàn)改用二氯甲烷直接提取，不僅避免了上述問(wèn)題，陰性樣品同法 操作無(wú)干擾，所以該鑒別具有專屬性，見(jiàn)附圖1。
[0050] (2)薄層色譜法鑒別處方中石菖蒲。石菖蒲的鑒別在原標(biāo)準(zhǔn)中與地龍同板進(jìn)行薄 層鑒別，但此次研究中發(fā)現(xiàn)，原方法中用對(duì)照藥材水煎煮后以三氯甲烷萃取制成對(duì)照藥材 溶液，結(jié)果對(duì)照藥材色譜中斑點(diǎn)很弱，現(xiàn)改為對(duì)照藥材直接用二氯甲烷超聲提取，結(jié)果以體 積比為8 :2的石油醚（60-90°C )_乙酸乙酯混合溶劑為展開(kāi)劑薄層效果較好，且陰性無(wú)干 擾，見(jiàn)附圖2。
[0051] (3)薄層色譜法鑒別處方中天麻。在對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證中發(fā)現(xiàn)陰性樣品有一定干 擾，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)以體積比為8 :1 :3 :0. 1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合溶劑較好， 陰性無(wú)干擾，見(jiàn)附圖3和附圖4。
[0052] (4)薄層色譜法鑒別處方中肉蓯蓉及熟地黃。肉蓯蓉及熟地黃中均含有毛蕊花糖 苷成分，供試品溶液的制備參照《中國(guó)藥典》2010年版一部熟地黃藥材鑒別方法，薄層色譜 條件中發(fā)現(xiàn)展開(kāi)劑為體積比為16 :0. 5 :2的乙酸乙酯一甲醇一甲酸混合溶劑，點(diǎn)于硅膠G 薄層板上，用〇. 1%的2, 2 -二苯基一 1 一苦肼基無(wú)水乙醇溶液浸漬顯色，薄層效果較好。 肉蓯蓉及熟地黃雙陰性樣品無(wú)干擾，見(jiàn)附圖5。
[0053] (5)鑒別肉蓯蓉中的松果菊苷為新增項(xiàng)目，以肉蓯蓉中含有的松果菊苷為對(duì)照，供 試品溶液的制備參照《中國(guó)藥典》2010年版一部肉蓯蓉藥材的鑒別方法，并同時(shí)用鑒別D的 供試品溶液進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果表明鑒別D的供試品溶液較好；展開(kāi)劑以體積比為2 :2 :6 的甲醇一醋酸一水的混合溶劑效果較好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，鑒別具有專屬性，見(jiàn)附圖6。
[0054] (6)將現(xiàn)代藥品生產(chǎn)管理融入到質(zhì)量控制中，本發(fā)明從源頭抓起，生產(chǎn)中使用的 藥材、溶劑皆進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，不僅建立生產(chǎn)過(guò)程中的產(chǎn)品質(zhì)量控制，建立完善的產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)，薄層色譜檢測(cè)監(jiān)控均高于國(guó)家要求，并從嚴(yán)大幅度提高天麻素的含量，提升幅度達(dá)到了 28. 3%，保證了藥品的質(zhì)量和療效。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0055] 圖1為地龍的薄層鑒別圖；
[0056] 圖2為石菖蒲的薄層鑒別圖；
[0057] 圖3為天麻的薄層鑒別圖；展開(kāi)劑為體積比為8 :1 :3 :0. 1的三氯甲烷-乙酸乙 酯一甲醇一甲酸的混合溶劑；
[0058] 圖4為天麻的薄層鑒別圖；展開(kāi)劑為體積比為9 :1 :0. 2的乙酸乙酯-甲醇-水的 混合溶劑；
[0059] 圖5為肉蓯蓉、熟地黃中毛蕊花糖苷的薄層鑒別圖；
[0060] 圖6為肉蓯蓉中松果菊苷薄層鑒別圖；
[0061] 圖7為天麻素紫外吸收光譜圖；
[0062] 圖8為天麻素對(duì)照品HPLC色譜圖；
[0063] 圖9為天麻醒腦膠囊樣品HPLC色譜圖；
[0064] 圖10為陰性樣品HPLC色譜圖；
[0065] 圖11為天麻素線性關(guān)系圖；
[0066] 其中，1為地龍對(duì)照藥材，2為地龍陰性樣品，3為20130524批號(hào)天麻醒腦膠囊樣 品；4為20130525批號(hào)天麻醒腦膠囊樣品，5為20130545批號(hào)天麻醒腦膠囊樣品，6為石菖 蒲陰性樣品，7為石菖蒲對(duì)照藥材，8為天麻素對(duì)照品，9為天麻陰性樣品，10為肉蓯蓉及熟 地黃雙陰性樣品，11為肉蓯蓉陰性樣品（熟地黃含量?jī)H為〇. 02% )，12為熟地黃陰性樣品， 13為毛蕊花糖苷對(duì)照品，14為松果菊苷對(duì)照品。

【具體實(shí)施方式】
[0067] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0068](一）儀器及試藥
[0069] 儀器：島津LC-20AD-HPLC液相色譜儀，Agilent-1100液相色譜儀。
[0070] 天麻素：中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)110807-200205,供含量測(cè)定用，其 紫外吸收光譜如圖7所示。
[0071] 天麻醒腦膠囊樣品：云南永孜堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20130524、20130525、 20130545。
[0072] 乙腈為色譜純；水為超純水；磷酸為分析純。
[0073] 標(biāo)準(zhǔn)研究中用對(duì)照品說(shuō)明：天麻素對(duì)照品，批號(hào)110807-200205,供含量測(cè)定用； 石菖蒲對(duì)照藥材，批號(hào)121098- 201105,供鑒別用；地龍對(duì)照藥材，批號(hào)120987 - 201107， 供鑒別用；毛蕊花糖苷對(duì)照品，批號(hào)111530-200706,供含量測(cè)定用；松果菊苷對(duì)照品，批號(hào) 111670-200503,供含量測(cè)定用；全部均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。
[0074](二）高效液相色譜條件
[0075] 色譜柱：TYPE MG II CAPCELL PAK-C18 柱，4. 6 X 250mm ;Waters SunFire C18 柱，4. 6 X 250mm ;Waters Symmetry C18 柱，4. 6 X 250mm.
[0076] 流動(dòng)相：體積比為2:98的乙腈一0.1%磷酸；檢測(cè)波長(zhǎng)：22011 111;柱溫：401：
[0077] 流速：1. Oml/min
[0078] (三）薄層色譜法本發(fā)明薄層色譜法具體參見(jiàn)《中國(guó)藥典》一部附錄VI B。
[0079] (四）檢查本發(fā)明產(chǎn)品應(yīng)符合膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定，具體參見(jiàn)《中國(guó)藥典》 一部附錄IL。
[0080] 實(shí)施例1
[0081] 一種天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，包括原料控制、制備方法控制、鑒別方法及含 量測(cè)定方法，具體如下：
[0082] 第一，原料控制：
[0083] 所述的10000粒天麻醒腦膠囊（批號(hào)20130524)由以下活性成分重量配比原料制 備：
[0084] 天麻3000g、地龍2000g、石菖蒲3000g、遠(yuǎn)志2000g、熟地黃1000g、肉蓯蓉IOOOg ; 以上六味藥應(yīng)符合藥典中相應(yīng)的藥材標(biāo)準(zhǔn)，且所有的中藥均需凈制粉碎；
[0085] 第二，制備方法控制：
[0086] (1)地龍粗粉用質(zhì)量為6倍量60%的乙醇溶液冷浸72小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用；
[0087] (2)石菖蒲、遠(yuǎn)志、熟地黃和肉蓯蓉四味藥的粗粉，加水煎煮二次，每次加水質(zhì)量是 其4味藥總質(zhì)量的6倍量，第一次1. 5小時(shí)，第二次1小時(shí)，分次濾過(guò)，合并濾液，于潔凈區(qū) 濃縮至90°C下相對(duì)密度1. 15的清膏，冷卻，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，濾 液與步驟（1)濾液合并，回收乙醇，于潔凈區(qū)濃縮至90°C下相對(duì)密度1. 15的清膏；
[0088] (3)天麻于潔凈區(qū)粉碎成細(xì)粉，然后于< 80°C下干燥，并進(jìn)行微生物檢測(cè)及粒度 檢測(cè)，過(guò)篩后在潔凈區(qū)與步驟（2)最后得到的清膏，充分混勻，80°C以下烘干，粉碎成細(xì)粉 或制成顆粒，即得到內(nèi)容物，將內(nèi)容物裝入膠囊，得到9952粒膠囊，收率為99. 52% ;標(biāo)準(zhǔn)崩 解時(shí)限為< 30分鐘，實(shí)測(cè)值為20分鐘；標(biāo)準(zhǔn)裝量差異為±10%，實(shí)測(cè)值8% ;
[0089] 其中，步驟（3)烘干后粉碎成細(xì)粉后，標(biāo)準(zhǔn)水份< 9%，實(shí)測(cè)值6% ;且需經(jīng)微生物 檢測(cè)；
[0090] 微生物檢測(cè)：標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌彡10000cfu/g，實(shí)測(cè)值500cfu/g ;標(biāo)準(zhǔn)霉菌、酵母菌 < 100cfu/g，實(shí)測(cè)值30cfu/g ;標(biāo)準(zhǔn)大腸菌群< 100個(gè)/g，實(shí)測(cè)值10個(gè)/g ;標(biāo)準(zhǔn)大腸埃希菌 不得檢出/g，實(shí)測(cè)值〇個(gè)/g ;標(biāo)準(zhǔn)沙門菌不得檢出/l〇g，實(shí)測(cè)值〇個(gè)/IOg ;標(biāo)準(zhǔn)活螨不得檢 出，實(shí)測(cè)值〇 ;
[0091] 所得到的膠囊為硬膠囊，內(nèi)容物為淡黃色至棕黃色的粉末或顆粒；氣腥，味辛、 咸；
[0092] 第三，鑒別方法：
[0093] A.地龍的薄層色譜檢測(cè)
[0094] 取內(nèi)容物3g，置具塞錐形瓶中，加二氯甲烷30ml，振搖20秒，再超聲處理30分鐘， 濾過(guò)，濾液蒸干，藥渣備用用于天麻素的檢測(cè)，殘?jiān)萤? 5ml二氯甲烷使其溶解，作為供試 品溶液；另取地龍對(duì)照藥材〇. 5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩 種溶液各5 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為9 :1的甲苯與丙酮為展開(kāi)劑，展 開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈，365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置 上,顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；
[0095] B?石菖蒲的薄層色譜檢測(cè)
[0096] 取A項(xiàng)中的供試品溶液作為供試品溶液；另取石菖蒲對(duì)照藥材0. 3g，加二氯甲烷 25ml，振搖20秒，再超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?. 5ml二氯甲烷使其溶解，作 為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層 板上，以體積比為8 :2的石油醚（60-90°C )-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5% 香草醛硫酸溶液，于105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的 位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
[0097] C.天麻素的薄層色譜檢測(cè)
[0098] 取A項(xiàng)中二氯甲烷提取過(guò)的藥渣，加水飽和的正丁醇30ml，振搖15秒鐘，再超聲處 理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?ml使其溶解，通過(guò)DlOl型大孔吸附樹(shù)脂柱，該大孔 吸附樹(shù)脂柱內(nèi)徑lcm，柱內(nèi)樹(shù)脂高度15cm，用濃度為10%的乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸 干，殘?jiān)蛹状?. 5ml使溶解，作為供試品溶液；另取天麻素對(duì)照品，加甲醇制成每Iml溶液 中含Img天麻素的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6 yl， 分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為8 :1 :3 :0. 1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲 酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)至12cm，取出，晾干，噴以10%磷鑰酸乙醇溶液，于105°C加熱至斑點(diǎn)顯色 清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0099] D.肉蓯蓉和熟地黃中的毛蕊花糖苷的薄層色譜檢測(cè)
[0100] 取內(nèi)容物2g，置具塞錐形瓶中，加80%甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸 干，殘?jiān)铀?ml使溶解，然后用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次IOml，合并正丁醇液并 蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取毛蕊花糖苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml 溶液中含Img毛蕊花糖苷的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液 5 yl、對(duì)照品溶液2 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上（可使成條狀），以體積比為16 :0. 5 : 2的乙酸乙酯一甲醇一甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，用0. 1 %的2, 2 -二苯基一1 -苦 肼基無(wú)水乙醇溶液浸漬，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色 的斑點(diǎn)；
[0101] E.肉蓯蓉中的松果菊苷的薄層色譜檢測(cè)
[0102] 取D項(xiàng)下的供試品溶液，作為供試品溶液；另取松果菊苷對(duì)照品，加甲醇制成每每 Iml溶液中含Img松果菊苷的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶 液各2iU，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄層板上，以體積比為2:2:6的甲醇一醋酸一水為展開(kāi)劑， 展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈，365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
[0103] 第四，含量測(cè)定方法：
[0104] 含量測(cè)定照高效液相色譜法，按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D測(cè)定，
[0105] a.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積 比為2 :98的乙腈一0. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm ;理論板數(shù)按天麻素峰計(jì) 算應(yīng)不低于4000 ;
[0106] b.對(duì)照品溶液的制備：精密稱取天麻素對(duì)照品適量，加體積比為2:98的乙腈一水 混合溶液制成每Iml含50 y g天麻素的溶液，即得；
[0107] c.供試品溶液的制備：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取lg，精密稱定，置 具塞錐形瓶中，精密加入體積比為2:98的乙腈一水混合溶液50ml，密塞，稱定重量，充分搖 散后超聲處理30分鐘，超聲功率250W，頻率50kHz，放冷，再稱定重量，用體積比為2:98的 乙腈一水混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，傾出溶液適量置離心管中，加塞，離心10分鐘， 其轉(zhuǎn)速為每分鐘4000轉(zhuǎn)，取上清液，用0. 45 y m微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0108] d.測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10 ill與供試品溶液5 ill，注入液相色譜 儀，測(cè)定，即得；
[0109] 每粒含天麻以天麻素（C13H18O7)計(jì)，不得少于0. 60mg，實(shí)測(cè)值I. 404mg/粒。
[0110] 實(shí)施例2
[0111] 一種天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，包括原料控制、制備方法控制、鑒別方法及含 量測(cè)定方法，具體如下：
[0112] 第一，原料控制：
[0113] 所述的10000粒天麻醒腦膠囊（批號(hào)20130525)由以下活性成分重量配比原料制 備：
[0114] 天麻3000g、地龍2000g、石菖蒲3000g、遠(yuǎn)志2000g、熟地黃1000g、肉灰蓉IOOOg ; 以上六味藥應(yīng)符合藥典中相應(yīng)的藥材標(biāo)準(zhǔn)，且所有的中藥均需凈制粉碎；
[0115] 第二，制備方法控制：
[0116] (1)地龍粗粉用質(zhì)量為6倍量60%的乙醇溶液冷浸72小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用；
[0117] (2)石菖蒲、遠(yuǎn)志、熟地黃和肉蓯蓉四味藥的粗粉，加水煎煮二次，每次加水質(zhì)量是 其4味藥總質(zhì)量的6倍量，第一次1. 5小時(shí)，第二次1小時(shí)，分次濾過(guò)，合并濾液，于潔凈區(qū) 濃縮至90°C下相對(duì)密度1. 12的清膏，冷卻，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，濾 液與步驟（1)濾液合并，回收乙醇，于潔凈區(qū)濃縮至90°C下相對(duì)密度1. 12的清膏；
[0118] (3)天麻于潔凈區(qū)粉碎成細(xì)粉，然后于< 80°C下干燥，并進(jìn)行微生物檢測(cè)及粒度 檢測(cè)，過(guò)篩后在潔凈區(qū)與步驟（2)最后得到的清膏，充分混勻，80°C以下烘干，粉碎成細(xì)粉 或制成顆粒，即得到內(nèi)容物，將內(nèi)容物裝入膠囊，得到10012粒膠囊，收率為100. 12%，標(biāo)準(zhǔn) 崩解時(shí)限為< 30分鐘，實(shí)測(cè)值為18分鐘；標(biāo)準(zhǔn)裝量差異為±10%，實(shí)測(cè)值7% ;
[0119] 其中，步驟（3)烘干后粉碎成細(xì)粉后，標(biāo)準(zhǔn)水份< 9%，實(shí)測(cè)值5%，且需經(jīng)微生物 檢測(cè)；
[0120] 微生物檢測(cè)：標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌< 10000cfu/g，實(shí)測(cè)值700cfu/g ;標(biāo)準(zhǔn)霉菌、酵母菌 < 100cfu/g，實(shí)測(cè)值21cfu/g ;標(biāo)準(zhǔn)大腸菌群< 100個(gè)/g，實(shí)測(cè)值8個(gè)/g ;標(biāo)準(zhǔn)大腸埃希菌 不得檢出/g，實(shí)測(cè)值〇個(gè)/g ;標(biāo)準(zhǔn)沙門菌不得檢出/l〇g，實(shí)測(cè)值〇個(gè)/IOg ;標(biāo)準(zhǔn)活螨不得檢 出，實(shí)測(cè)值〇 ;
[0121] 所得到的膠囊為硬膠囊，內(nèi)容物為淡黃色至棕黃色的粉末或顆粒；氣腥，味辛、 咸；
[0122] 第三，鑒別方法：
[0123] A.地龍的薄層色譜檢測(cè)
[0124] 取內(nèi)容物3g，置具塞錐形瓶中，加二氯甲烷30ml，振搖20秒，再超聲處理30分鐘， 濾過(guò)，濾液蒸干，藥渣備用用于天麻素的檢測(cè)，殘?jiān)萤? 5ml二氯甲烷使其溶解，作為供試 品溶液；另取地龍對(duì)照藥材〇. 5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩 種溶液各IOu 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為9 :1的甲苯與丙酮為展開(kāi)劑， 展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈，365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位 置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；
[0125] B.石菖蒲的薄層色譜檢測(cè)
[0126] 取A項(xiàng)中的供試品溶液作為供試品溶液；另取石菖蒲對(duì)照藥材0. 3g，加二氯甲烷 25ml，振搖20秒，再超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?. 5ml二氯甲烷使其溶解，作 為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 U 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄 層板上，以體積比為8 :2的石油醚（60-90°C )_乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以 5%香草醛硫酸溶液，于105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相 應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
[0127] C.天麻素的薄層色譜檢測(cè)
[0128] 取A項(xiàng)中二氯甲烷提取過(guò)的藥渣，加水飽和的正丁醇30ml，振搖15秒鐘，再超聲處 理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?ml使其溶解，通過(guò)DlOl型大孔吸附樹(shù)脂柱，該大孔 吸附樹(shù)脂柱內(nèi)徑lcm，柱內(nèi)樹(shù)脂高度15cm，用濃度為10%的乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸 干，殘?jiān)蛹状?. 5ml使溶解，作為供試品溶液；另取天麻素對(duì)照品，加甲醇制成每Iml溶液 中含Img天麻素的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 yl， 分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為8 :1 :3 :0. 1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲 酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)至12cm，取出，晾干，噴以10%磷鑰酸乙醇溶液，于105°C加熱至斑點(diǎn)顯色 清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0129] D.肉蓯蓉和熟地黃中的毛蕊花糖苷的薄層色譜檢測(cè)
[0130] 取內(nèi)容物2g，置具塞錐形瓶中，加80%甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸 干，殘?jiān)铀?ml使溶解，然后用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次IOml，合并正丁醇液并 蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取毛蕊花糖苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml 溶液中含Img毛蕊花糖苷的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液 5 yl、對(duì)照品溶液2 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上（可使成條狀），以體積比為16 :0. 5 : 2的乙酸乙酯一甲醇一甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，用0. 1 %的2, 2 -二苯基一1 -苦 肼基無(wú)水乙醇溶液浸漬，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色 的斑點(diǎn)；
[0131] E.肉蓯蓉中的松果菊苷的薄層色譜檢測(cè)
[0132] 取D項(xiàng)下的供試品溶液，作為供試品溶液；另取松果菊苷對(duì)照品，加甲醇制成每每 Iml溶液中含Img松果菊苷的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶 液各2iU，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄層板上，以體積比為2:2:6的甲醇一醋酸一水為展開(kāi)劑， 展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈，365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
[0133] 第四，含量測(cè)定方法：
[0134] 含量測(cè)定照高效液相色譜法，按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D測(cè)定，
[0135] a.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積 比為2 :98的乙腈一0. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm ;理論板數(shù)按天麻素峰計(jì) 算應(yīng)不低于4000 ;
[0136] b.對(duì)照品溶液的制備：精密稱取天麻素對(duì)照品適量，加體積比為2:98的乙腈一水 混合溶液制成每Iml含50 y g天麻素的溶液，即得；
[0137] c.供試品溶液的制備：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取lg，精密稱定，置 具塞錐形瓶中，精密加入體積比為2:98的乙腈一水混合溶液50ml，密塞，稱定重量，充分搖 散后超聲處理30分鐘，超聲功率250W，頻率50kHz，放冷，再稱定重量，用體積比為2:98的 乙腈一水混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，傾出溶液適量置離心管中，加塞，離心10分鐘， 其轉(zhuǎn)速為每分鐘4000轉(zhuǎn)，取上清液，用0. 45 y m微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0138] d.測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10ill與供試品溶液10ill，注入液相色譜 儀，測(cè)定，即得；
[0139] 每粒含天麻以天麻素（C13H18O 7)計(jì)，不得少于0. 60mg，實(shí)測(cè)值I. 336mg/粒。
[0140] 實(shí)施例3
[0141] 一種天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，包括原料控制、制備方法控制、鑒別方法及含 量測(cè)定方法，具體如下：
[0142] 第一，原料控制：
[0143] 所述的1500000粒天麻醒腦膠囊（批號(hào)20130545)由以下活性成分重量配比原料 制備：
[0144] 天麻450kg、地龍300kg、石菖蒲450kg、遠(yuǎn)志300kg、熟地黃150kg、肉灰蓉150kg; 以上六味藥應(yīng)符合藥典中相應(yīng)的藥材標(biāo)準(zhǔn)，且所有的中藥均需凈制粉碎；
[0145] 第二，制備方法控制：
[0146] (1)地龍粗粉用質(zhì)量為6倍量60%的乙醇溶液冷浸72小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用；
[0147] (2)石菖蒲、遠(yuǎn)志、熟地黃和肉蓯蓉四味藥的粗粉，加水煎煮二次，每次加水質(zhì)量是 其4味藥總質(zhì)量的6倍量，第一次1. 5小時(shí)，第二次1小時(shí)，分次濾過(guò)，合并濾液，于潔凈區(qū) 濃縮至90°C下相對(duì)密度1. 10的清膏，冷卻，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，濾 液與步驟（1)濾液合并，回收乙醇，于潔凈區(qū)濃縮至90°C下相對(duì)密度1. 10的清膏；
[0148] (3)天麻于潔凈區(qū)粉碎成細(xì)粉，然后于< 80°C下干燥，并進(jìn)行微生物檢測(cè)及粒度 檢測(cè)，過(guò)篩后在潔凈區(qū)與步驟（2)最后得到的清膏，充分混勻，80°C以下烘干，粉碎成細(xì)粉 或制成顆粒，即得到內(nèi)容物，將內(nèi)容物裝入膠囊，得到1518660粒膠囊，收率為101. 24%;標(biāo) 準(zhǔn)崩解時(shí)限為< 30分鐘，實(shí)測(cè)值為22分鐘；標(biāo)準(zhǔn)裝量差異為±10%，實(shí)測(cè)值5%;
[0149] 其中，步驟（3)烘干后粉碎成細(xì)粉后，標(biāo)準(zhǔn)水份< 9%，實(shí)測(cè)值7%，且需經(jīng)微生物 檢測(cè)；
[0150] 微生物檢測(cè)：標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌< 10000cfu/g，實(shí)測(cè)值430cfu/g;標(biāo)準(zhǔn)霉菌、酵母菌 < 100cfu/g，實(shí)測(cè)值25cfu/g;標(biāo)準(zhǔn)大腸菌群< 100個(gè)/g，實(shí)測(cè)值8個(gè)/g;標(biāo)準(zhǔn)大腸埃希菌 不得檢出/g，實(shí)測(cè)值〇個(gè)/g;標(biāo)準(zhǔn)沙門菌不得檢出/l〇g，實(shí)測(cè)值〇個(gè)/IOg;標(biāo)準(zhǔn)活螨不得檢 出，實(shí)測(cè)值〇 ;
[0151] 所得到的膠囊為硬膠囊，內(nèi)容物為淡黃色至棕黃色的粉末或顆粒；氣腥，味辛、 咸；
[0152] 第三，鑒別方法：
[0153] A.地龍的薄層色譜檢測(cè)
[0154] 取內(nèi)容物3g，置具塞錐形瓶中，加二氯甲烷30ml，振搖20秒，再超聲處理30分鐘， 濾過(guò)，濾液蒸干，藥渣備用用于天麻素的檢測(cè)，殘?jiān)萤? 5ml二氯甲烷使其溶解，作為供試 品溶液；另取地龍對(duì)照藥材〇. 5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩 種溶液各7 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為9:1的甲苯與丙酮為展開(kāi)劑，展 開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈，365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置 上,顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；
[0155] B.石菖蒲的薄層色譜檢測(cè)
[0156]取A項(xiàng)中的供試品溶液作為供試品溶液；另取石菖蒲對(duì)照藥材0.3g，加二氯甲烷 25ml，振搖20秒，再超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?. 5ml二氯甲烷使其溶解，作 為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各8 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層 板上，以體積比為8 :2的石油醚（60-90°C )-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5% 香草醛硫酸溶液，于105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的 位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
[0157] C.天麻素的薄層色譜檢測(cè)
[0158] 取A項(xiàng)中二氯甲烷提取過(guò)的藥渣，加水飽和的正丁醇30ml，振搖15秒鐘，再超聲處 理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?ml使其溶解，通過(guò)DlOl型大孔吸附樹(shù)脂柱，該大孔 吸附樹(shù)脂柱內(nèi)徑lcm，柱內(nèi)樹(shù)脂高度15cm，用濃度為10%的乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸 干，殘?jiān)蛹状?. 5ml使溶解，作為供試品溶液；另取天麻素對(duì)照品，加甲醇制成每Iml溶液 中含Img天麻素的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各9 yl， 分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為8 :1 :3 :0. 1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲 酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)至12cm，取出，晾干，噴以10%磷鑰酸乙醇溶液，于105°C加熱至斑點(diǎn)顯色 清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0159] D.肉蓯蓉和熟地黃中的毛蕊花糖苷的薄層色譜檢測(cè)
[0160] 取內(nèi)容物2g，置具塞錐形瓶中，加80%甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸 干，殘?jiān)铀?ml使溶解，然后用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次IOml，合并正丁醇液并 蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取毛蕊花糖苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml 溶液中含Img毛蕊花糖苷的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液 5 yl、對(duì)照品溶液2 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上（可使成條狀），以體積比為16 :0. 5 : 2的乙酸乙酯一甲醇一甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，用0. 1 %的2, 2 -二苯基一1 -苦 肼基無(wú)水乙醇溶液浸漬，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色 的斑點(diǎn)；
[0161] E.肉蓯蓉中的松果菊苷的薄層色譜檢測(cè)
[0162] 取D項(xiàng)下的供試品溶液，作為供試品溶液；另取松果菊苷對(duì)照品，加甲醇制成每每 Iml溶液中含Img松果菊苷的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶 液各2iU，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄層板上，以體積比為2:2:6的甲醇一醋酸一水為展開(kāi)劑， 展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈，365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
[0163] 第四，含量測(cè)定方法：
[0164] 含量測(cè)定照高效液相色譜法，按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D測(cè)定，
[0165] a.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積 比為2 :98的乙腈一0. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm ;理論板數(shù)按天麻素峰計(jì) 算應(yīng)不低于4000 ;
[0166] b.對(duì)照品溶液的制備：精密稱取天麻素對(duì)照品適量，加體積比為2:98的乙腈一水 混合溶液制成每Iml含50 y g天麻素的溶液，即得；
[0167] c.供試品溶液的制備：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取lg，精密稱定，置 具塞錐形瓶中，精密加入體積比為2:98的乙腈一水混合溶液50ml，密塞，稱定重量，充分搖 散后超聲處理30分鐘，超聲功率250W，頻率50kHz，放冷，再稱定重量，用體積比為2:98的 乙腈一水混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，傾出溶液適量置離心管中，加塞，離心10分鐘， 其轉(zhuǎn)速為每分鐘4000轉(zhuǎn)，取上清液，用0. 45 y m微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0168] d.測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液IOiU與供試品溶液8 iU，注入液相色譜 儀，測(cè)定，即得；
[0169] 每粒含天麻以天麻素（C13H18O7)計(jì)，不得少于0. 60mg，實(shí)測(cè)值I. 193mg/粒。
[0170] 對(duì)于含量測(cè)定方法的方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容
[0171] 1.專屬性
[0172] 取除天麻外的其余5味藥材，按處方量及工藝要求制備缺天麻的陰性供試品，照 含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性供試品溶液，同法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果在與天麻 素對(duì)照品相同保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明陰性無(wú)干擾，方法具有專屬性，見(jiàn)附圖8-10。
[0173] 2.耐用性
[0174] 2. 1供試品溶液制備方法的選擇
[0175] 方法⑴取樣后加體積比為2 :98乙腈-水的混合溶劑50ml超聲處理20、30、40、 50、60分鐘，離心10分鐘，濾過(guò)。
[0176] 方法（2)取樣后加95%乙醇50ml，加熱回流lh，放冷補(bǔ)重，離心10分鐘，精密取上 清液IOml蒸干，用體積比為2 :98乙腈-水的混合溶劑溶解至IOml量瓶中。
[0177] 結(jié)果：方法⑴體積比為2 :98乙腈-水的混合溶劑超聲處理30分鐘即能提取完 全，而⑵法提取率較⑴法低，見(jiàn)表1。
[0178] 表1同一樣品不同提取溶劑、提取方法及時(shí)間的比較試驗(yàn)
[0179]

【權(quán)利要求】
1. 一種天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括原料控制、制備方法控制、鑒別 方法及含量測(cè)定方法，具體如下： 第一，原料控制： 所述的1000個(gè)單劑量天麻醒腦膠囊由以下活性成分重量配比原料制備： 天麻300g、地龍200g、石菖蒲300g、遠(yuǎn)志200g、熟地黃100、肉灰蓉IOOg ;以上六味藥 應(yīng)符合《藥典》中相應(yīng)的藥材標(biāo)準(zhǔn)，且各味藥在進(jìn)入加工之前均需凈制粉碎； 第二，制備方法控制： (1)地龍粗粉用質(zhì)量6倍量60%的乙醇溶液冷浸72小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用； (2 )石菖蒲、遠(yuǎn)志、熟地黃和肉蓯蓉四味藥的粗粉混合均勻，加水煎煮二次，每次加水質(zhì) 量是其4味藥總質(zhì)量的6倍量，第一次1. 5小時(shí)，第二次1小時(shí)，分次濾過(guò)，合并濾液，于潔凈 區(qū)濃縮至90°C下相對(duì)密度1. 10-1. 15的清膏，冷卻，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置48小時(shí)， 濾過(guò)，濾液與步驟（1)濾液合并，回收乙醇，于潔凈區(qū)濃縮至90°C下相對(duì)密度1. 10-1. 15的 清膏； (3)天麻于潔凈區(qū)粉碎成細(xì)粉，然后于< 80°C下干燥，并進(jìn)行微生物檢測(cè)及粒度檢測(cè)， 過(guò)篩后在潔凈區(qū)與步驟（2)最后得到的清膏，充分混勻，80°C以下烘干，粉碎成細(xì)粉或制成 顆粒，即得到內(nèi)容物，將內(nèi)容物裝入膠囊，得到1000粒膠囊，控制崩解時(shí)限< 30分鐘，裝量 差異為±10% ; 其中，步驟（3 )烘干后粉碎成細(xì)粉后，水份< 9%，且需經(jīng)微生物檢測(cè)； 微生物檢測(cè)：細(xì)菌< l〇〇〇〇cfu/g，霉菌、酵母菌< 100 cfu/g，大腸菌群< 100個(gè)/g，大 腸埃希菌不得檢出/g，沙門菌不得檢出/l〇g，活螨不得檢出； 所得到的膠囊為硬膠囊，內(nèi)容物為淡黃色至棕黃色的粉末或顆粒；氣腥，味辛、咸； 第三，鑒別方法： A. 地龍的薄層色譜檢測(cè) 取內(nèi)容物3g，置中，加二氯甲烷30ml，振搖20秒，再超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸 干，藥渣備用用于天麻素的檢測(cè)，殘?jiān)?. 5ml二氯甲烷使其溶解，作為供試品溶液；另 取地龍對(duì)照藥材0. 5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各 5-10 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為9:1的甲苯與丙酮為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取 出，晾干，置紫外光燈，365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同顏色的熒光主斑點(diǎn)； B. 石菖蒲的薄層色譜檢測(cè) 取A項(xiàng)中的供試品溶液作為供試品溶液；另取石菖蒲對(duì)照藥材0. 3g，加二氯甲烷25ml， 振搖20秒，再超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?. 5ml二氯甲烷使其溶解，作為對(duì) 照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5-10 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層 板上，以體積比為8 :2的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸 溶液，于105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同顏色的主斑點(diǎn)； C. 天麻素的薄層色譜檢測(cè) 取A項(xiàng)中二氯甲烷提取過(guò)的藥渣，加水飽和的正丁醇30ml，振搖15秒鐘，再超聲處理 20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?ml使其溶解，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，用濃度為10%的乙 醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?. 5ml使溶解，作為供試品溶液；另取天麻素對(duì) 照品，加甲醇制成每Iml溶液中含Img天麻素的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)， 吸取上述兩種溶液各6-10 ii 1，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，以體積比為8 :1 :3 :0. 1的三 氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)至12cm，取出，晾干，噴以10%磷鑰酸乙醇溶 液，于105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同 顏色的斑點(diǎn)； D. 肉蓯蓉和熟地黃中的毛蕊花糖苷的薄層色譜檢測(cè) 取內(nèi)容物2g，置中，加80%甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次IOml，合并正丁醇液并蒸干，殘?jiān)蛹状?2ml使溶解，作為供試品溶液；另取毛蕊花糖苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml溶液中含Img毛 蕊花糖苷的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5 yl、對(duì)照品溶液 2 Ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為16 :0. 5 :2的乙酸乙酯一甲醇一甲酸為展 開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，用0. 1 %的2, 2-二苯基-1-苦肼基無(wú)水乙醇溶液浸漬，晾干；供試 品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； E. 肉蓯蓉中的松果菊苷的薄層色譜檢測(cè) 取D項(xiàng)下的供試品溶液，作為供試品溶液；另取松果菊苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml溶 液中含Img松果菊苷的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各 2ul，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄層板上，以體積比為2:2:6的甲醇一醋酸一水為展開(kāi)劑，展 開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈，365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上， 顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； 第四，含量測(cè)定方法： 含量測(cè)定照高效液相色譜法，按照《中國(guó)藥典》一部附錄VI D測(cè)定， a. 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為 2 :98的乙腈一 0. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm ;理論板數(shù)按天麻素峰計(jì)算應(yīng)不 低于4000 ; b. 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取天麻素對(duì)照品適量，加體積比為2: 98的乙腈一水混 合溶液制成每Iml含50 y g天麻素的溶液，即得； c. 供試品溶液的制備：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取lg，精密稱定，置具塞 錐形瓶中，精密加入體積比為2: 98的乙腈一水混合溶液50ml，密塞，稱定重量，充分搖散 后超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用體積比為2: 98的乙腈一水混合溶液補(bǔ)足減失的 重量，搖勻，傾出溶液適量置離心管中，加塞，離心10分鐘，取上清液，用微孔濾膜濾過(guò)，取 續(xù)濾液，即得； d. 測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10 與供試品溶液5-10 iil，注入液相色譜 儀，測(cè)定，即得； 每粒含天麻以天麻素計(jì)，不得少于0. 60mg。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于A項(xiàng)、D項(xiàng)及含量 測(cè)定方法中所述的置于瓶中均為置具塞錐形瓶中。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于B項(xiàng)中所述的石 油醚的沸程為60-90°C。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于C項(xiàng)大孔吸附樹(shù) 脂柱為DlOl型大孔吸附樹(shù)脂柱。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述的DlOl型大 孔吸附樹(shù)脂柱內(nèi)徑為lcm，柱內(nèi)樹(shù)脂高度為15cm。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述的DlOl型大 孔吸附樹(shù)脂柱內(nèi)徑為lcm，柱內(nèi)樹(shù)脂高度為15cm。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述的含量測(cè)定 方法供試品溶液的制備中超聲處理的功率為250W，頻率為50kHz。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述的含量測(cè)定 方法供試品溶液的制備中離心轉(zhuǎn)速為每分鐘4000轉(zhuǎn)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天麻醒腦膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述的含量測(cè)定 方法供試品溶液的制備中微孔濾膜的孔徑為0. 45 ii m。
【文檔編號(hào)】A61P25/28GK104306745SQ201410605707
【公開(kāi)日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】鄭金丹, 朱明浩, 楊揚(yáng), 張嘉碩 申請(qǐng)人:云南永孜堂制藥有限公司