一種仔豬用抗應(yīng)激劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種仔豬用抗應(yīng)激劑及其制備方法，是將丁酸梭狀芽孢桿菌菌粉、乳酸菌菌粉、納豆芽孢桿菌菌粉、維生素C和/或維生素E磷酸酯、有機(jī)酸、鉀鹽混合、攪拌均勻制得。所述各菌粉是在固體培養(yǎng)基中接入各菌種液體種子，經(jīng)發(fā)酵、干燥、粉碎制得。本發(fā)明的抗應(yīng)激劑不僅能幫助豬腸道快速建立微生態(tài)平衡，而且能提高斷乳仔豬免疫力，預(yù)防由于仔豬在斷奶、轉(zhuǎn)群、運(yùn)輸?shù)冗^程中出現(xiàn)的應(yīng)激綜合癥，具有抗應(yīng)激效果好、原料來源廣泛、生產(chǎn)工藝簡單、成本低廉、無“三廢”排放等特點(diǎn)。
【專利說明】一種仔豬用抗應(yīng)激劑及其制備方法
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明屬于動(dòng)物養(yǎng)殖中的生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種仔豬用復(fù)合微生態(tài)抗應(yīng)激 劑及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0003] 豬的應(yīng)激綜合癥是指豬體受到各種應(yīng)激因素的強(qiáng)烈刺激后，處于緊張或戒備狀態(tài) 時(shí)，所產(chǎn)生的一系列神經(jīng)內(nèi)分泌的非特異性全身性反應(yīng)，以及由此而引起的機(jī)體各種機(jī)能 和代謝功能的變化。例如生長受損，抗病力下降，繁殖障礙，甚至死亡等。近年來，由于我國 養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展迅速，國外瘦肉型豬種引進(jìn)并普及，以及集約化、規(guī)?；B(yǎng)豬業(yè)的興起，長途運(yùn) 輸多，飼養(yǎng)密度大，人為千擾頻繁，使生豬應(yīng)激反應(yīng)綜合癥的發(fā)生率大幅度上升，給養(yǎng)豬業(yè) 造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。應(yīng)激首先是機(jī)體的正常生理活動(dòng)發(fā)生變化，例如配種繁殖，分娩泌 乳，精神緊張等都可作為應(yīng)激原引起應(yīng)激反應(yīng)。斷奶、轉(zhuǎn)群、去勢、捕捉、驅(qū)趕、驚嚇、擁擠、打 斗、保定、運(yùn)輸、高溫、噪音、空氣污染，免疫注射、環(huán)境突變等一系列異常刺激，當(dāng)強(qiáng)度和作 用時(shí)間達(dá)到一定量時(shí)，均可引起應(yīng)激反應(yīng)綜合癥的發(fā)生。另外，應(yīng)激的發(fā)生還與遺傳因素 (攜帶氟烷基因)、內(nèi)分泌失調(diào)、硒缺乏、蛋白質(zhì)缺乏等有一定關(guān)系。應(yīng)激對豬的的健康和生 產(chǎn)力、繁殖力、肉品質(zhì)等都有不良影響，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致各種疾病的流行，甚至引起豬的死亡。 特別是斷奶仔豬，由于早期斷奶導(dǎo)致斷乳應(yīng)激、產(chǎn)房到保育舍環(huán)境變化的應(yīng)激、哺乳管理轉(zhuǎn) 為保育管理的應(yīng)激等，造成仔豬精神狀態(tài)不佳，呼吸不暢，腹瀉，食欲不旺或拒食，生長發(fā)育 不良或停滯(甚至負(fù)增長)，出現(xiàn)僵豬，甚至死亡，使得保育仔豬的育成率降低。
[0004] 國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，常用的抗應(yīng)激藥物包括糖類（如葡萄糖、活性多糖、幾丁聚糖 等）、維生素類、氨基酸類（賴氨酸、蛋氨酸、色氨酸、?；撬帷⒐劝滨０钡龋?、電解質(zhì)礦物元 索類（碳酸氫鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化銨、有機(jī)鎂、砸、鋅、鉻）、有機(jī)酸類（檸檬酸、蘋果酸、 腐植酸、甜菜堿等）、抗生素類、化學(xué)約物、中草藥、微生物等。近些年來，許多國內(nèi)外研究 工作者研究了抗應(yīng)激免疫增強(qiáng)劑來提高動(dòng)物機(jī)體的抵抗力，并取得了一定的研究成果，開 發(fā)出了一系列新型高效的抗應(yīng)激免疫增強(qiáng)劑。國內(nèi)專利 CN1〇2987169A公開了一種斷奶 仔豬核苷酸飼料添加劑、制備方法及應(yīng)用，該發(fā)明通過加入核苷酸作為營養(yǎng)劑以緩解仔豬 斷奶的應(yīng)激反應(yīng)，但是該反應(yīng)加入的核苷酸只能作為營養(yǎng)補(bǔ)充劑，無法從根本上減少仔豬 應(yīng)激反應(yīng)問題的出現(xiàn)；CNl〇 3355545A公開了一種發(fā)酵型植物性斷奶仔豬飼料添加劑，主要 由中草藥、牛至草提取物和蘆薈多糖混合配制而成。該發(fā)明使用了多種植物混合進(jìn)行發(fā)酵 f后加入到仔豬的飼料中，對于14日齡早期隔離斷奶的仔豬而言，過多的混雜添加劑，可 能會(huì)使仔豬的消化負(fù)擔(dān)加重；專利201310104364. X公開了了一種仔豬抗應(yīng)激合生元中藥 組合物及其制備方法，主要由中草藥及產(chǎn)乳酸枯草芽孢桿菌組成；專利201310031200. 9、 200510〇317〇8· 4公開了由各種維生素、氨基酸、微量元素等組成的仔豬抗應(yīng)激劑；專利 2〇m〇310298. 7、2〇〇9?〇220085· 3、201310729176· 6分別公開了由中草藥或其提取物組成 的斷奶仔豬抗應(yīng)激、抗腹瀉、促生長飼料添加劑。盡管這些專利產(chǎn)品在仔豬抗應(yīng)激方面有 一定的效果，但許多產(chǎn)品僅限于中草藥或其提取物、維生素等組合物，存在抗應(yīng)激作用不穩(wěn) 定、效果不突出等缺點(diǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是：針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種斷乳仔豬用復(fù)合微生態(tài)抗 應(yīng)激劑及其制備方法，該抗應(yīng)激劑能有效改善仔豬腸道生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)腸道益害微生物平 衡，提高仔豬的免疫力和抗應(yīng)激能力，解決目前市場上仔豬抗應(yīng)激劑存在的抗應(yīng)激作用不 穩(wěn)定、效果不突出等問題。
[0006] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：本發(fā)明的仔豬用抗應(yīng)激劑， 包括按重量百分比計(jì)的下述成分：丁酸梭狀芽孢桿菌菌粉30%-35%、乳酸菌菌粉30%-40%、 納豆芽孢桿菌菌粉14%-20%、維生素 C和/或維生素 E磷酸酯6· 5%-11%、調(diào)節(jié)腸道pH值的 有機(jī)酸4. 5%-10. 5%、和鉀鹽5%-8%，合計(jì)100%。
[0007] 所述有機(jī)酸優(yōu)選為檸檬酸和蘋果酸，所述鉀鹽優(yōu)選為KC1。
[0008] 本發(fā)明的仔豬用抗應(yīng)激劑優(yōu)選重量百分比為：丁酸梭狀芽孢桿菌菌粉 30%-33· 5%、乳酸菌菌粉31%-32· 5%、納豆芽孢桿菌菌粉14%-16%、維生素 C 3. 5%-5%、維生素 E 磷酸酯 3%-4%、檸檬酸 2. 5%-3· 5%、蘋果酸 3. 5%-5%、和 KC1 5%-7%。
[0009] 所述仔豬為斷乳仔豬，所述乳酸菌為乳酸片球菌。
[0010] 該抗應(yīng)激劑中有效活菌數(shù)含量1. 5X 101Q-2· 5X 101° cfu/g。
[0011] 上述仔豬用抗應(yīng)激劑的制備方法，包括以下步驟： (a) 按20-25%接種重量在固體培養(yǎng)基中接入納豆芽孢桿菌液體種子，在30-37?的無 菌環(huán)境中培養(yǎng)至95%以上的菌體形成芽孢； (b) 按15-20%接種重量在固體培養(yǎng)基中接入乳酸菌液體種子，于35-37?無菌環(huán)境中 發(fā)酵4_5d ; (c) 按15-20%接種重量在固體培養(yǎng)基中接入丁酸梭狀芽孢桿菌液體種子，于35-37°C 的無菌環(huán)境中發(fā)酵4-5d; (d) 分別在上述培養(yǎng)好的固體發(fā)酵培養(yǎng)中加入保護(hù)劑，干燥、粉碎得到納豆芽孢桿菌菌 粉、乳酸菌菌粉和丁酸梭狀芽孢桿菌菌粉； (e) 將所得各菌粉與維生素 C和/或維生素 E磷酸酯、有機(jī)酸、鉀鹽按所述配比混合均 勻，制得抗應(yīng)激劑。
[0012] 所述步驟（a)_ (c)所述的固體培養(yǎng)基由下述方法得到：按重量百分比取麥 麩 30%-40%、玉米粉 15%-25%、大米粉 15%_2〇%、沸石粉 2〇%-3〇%、葡萄糖 1%_2%、（NH4)2S04 1. 5%-2%、ΚΗ2Ρ04 0. 1-0 . 3%、MgS04 · 7H20 0. 05-0. 15%,合計(jì) 100%,混合均勻，調(diào)節(jié)含水重量為 50%-55%,滅菌。
[0013] 所述納豆芽孢桿菌液體種子是將納豆芽孢桿菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于液 體肉湯營養(yǎng)培養(yǎng)基中，在35Γ -37°C，160r/min-180r/min條件下，搖床振蕩培養(yǎng)20-24h，使 該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到4. 5_6. 7X 108_109cfu/mL ;所述乳酸菌液體種子是將乳酸片 球菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于液體MRS培養(yǎng)基中，在37-40°C條件下靜置培養(yǎng) 24-48h， 使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到3· 1-4·2X i〇7_ 1〇8cfu/mL ;所述丁酸梭狀芽孢桿菌液體 種子是將丁酸梭狀芽孢桿菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于丁酸梭狀芽孢桿菌液體種子培 養(yǎng)基中，3〇-35°C條件下于厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)96-l2〇h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到 2. 5-3. 5X 107-108cfu/mL。
[0014] 作為改進(jìn)，步驟（b)和（c)中是將菌種液體種子裝入用95%乙醇滅菌的內(nèi)襯塑料編 織袋中并壓實(shí)，扎緊袋口后發(fā)酵。
[0015] 作為改進(jìn)，步驟（d)所述保護(hù)劑為海藻糖、甘油和輕質(zhì)碳酸鈣中的兩種或三種混合 物，以固體培養(yǎng)基干重計(jì)加入15%-18%的保護(hù)劑；所述干燥為40-45°C干燥6-8h。
[0016] 本發(fā)明的"接種重量"指菌種液體種子體積（L)與固體培養(yǎng)基質(zhì)量（kg)的比值，例 如"20%的接種重量"指20L/100kg。
[0017] 本發(fā)明同時(shí)應(yīng)用三種不同類型的菌種(好氧菌、嚴(yán)格厭氧菌和兼性厭氧菌)，能及 時(shí)消耗腸道中的氧氣，保持腸道內(nèi)優(yōu)勢種群的穩(wěn)定性和整個(gè)腸道微生態(tài)環(huán)境的相對穩(wěn)定。 其中采用的丁酸梭狀芽孢桿菌，可抑制腸道有害菌，促進(jìn)有益菌生長；減少腸內(nèi)氨、胺含量 (這兩種物質(zhì)會(huì)損害肝功能）；產(chǎn)生多種維生素，如維生素 K等；產(chǎn)生多種酶類，提高飼料利 用率，促進(jìn)動(dòng)物生長。此外，本發(fā)明同時(shí)結(jié)合能提高動(dòng)物肌體免疫力和促生長作用等的維生 素，補(bǔ)充肌體因應(yīng)激造成的體液酸堿不平衡的有機(jī)酸，從而提高斷奶仔豬機(jī)體對外來刺激 的代償能力。
[0018] 因此，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的復(fù)合微生態(tài)抗應(yīng)激劑不僅能快速、有效地建立和 修復(fù)斷奶仔豬的微生態(tài)平衡，清除機(jī)體內(nèi)自由基，而且能提高斷乳仔豬免疫力，預(yù)防由于仔 豬在斷奶、轉(zhuǎn)群、去勢、捕捉、驅(qū)趕、運(yùn)輸?shù)冗^程中出現(xiàn)的應(yīng)激綜合癥，降低應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)度，具 有抗應(yīng)激效果好。同時(shí)，本發(fā)明方法具有原料來源廣泛、生產(chǎn)工藝簡單、易于規(guī)?；a(chǎn)、成 本低廉、生產(chǎn)能耗低、無"三廢"排放等特點(diǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0019] 本發(fā)明中用到的菌種均為現(xiàn)有技術(shù)，可購自各保藏機(jī)構(gòu)，例如保藏號分別為：丁酸 梭狀芽孢桿菌（Clostridium butyricum):JSMCB 或 ATCC 25755 ;乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici) :CGMCC1. 2696、CICC10146 或 CICC10346 ;納豆芽孢桿菌（Bacillus natto): CCTCC M207147、CGMCC 0724 或ATCC 6051。
[0020] 本發(fā)明所用菌種的液體種子培養(yǎng)基均為現(xiàn)有技術(shù)，例如可以按下述方法制備： 液體肉湯營養(yǎng)培養(yǎng)基可以按1000mL水加10-20g葡萄糖、5_10g蛋白胨、3_ 5g牛肉 膏、及3-5g氯化鈉的比例，于水中加入葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、及氯化鈉，攪勻，在O.IMPa 壓力下滅菌25min，冷卻至30°C而成。
[0021] 液體MRS培養(yǎng)基可以按下述方法制成：將蛋白胨10. 0g、牛肉膏10. 0g、酵母膏 5. 0g、葡萄糖20. 0g、乙酸鈉5. 0g、檸檬酸二胺2. 0g、吐溫-80 1· 0g、磷酸氫二鉀0· 4g、硫 酸鎂〇· 58g、硫酸錳〇. 29g、碳酸鈣20. 0g、瓊脂15. 0g依次加入蒸餾水并將蒸餾水補(bǔ)充到 1000mL，pH 調(diào)至 6. 3,在 12Γ(：、0· IMpa 下滅菌 30min。
[0022] 丁酸梭狀芽孢桿菌液體培養(yǎng)基可以按1000mL水加入2〇-40g葡萄糖、l 5_2〇g胰 蛋白胨、1.0-1. 5g硫酸銨、2.0-2. 5g氯化鈉、1.0-1. 5g碳酸氫鈉、3.0-4· 0g磷酸氫二鉀、 0· 5-0. 8g七水硫酸鎂、1. 0-2. 〇g碳酸鈣的比例，于水中加入葡萄糖、胰蛋白胨、硫酸銨、氯 化鈉、碳酸氫鈉、磷酸氫二鉀、七水硫酸鎂、碳酸鈣，攪勻，在〇· IMPa壓力下滅菌25min,冷 卻至30°C而成。
[0023] 本發(fā)明中用到的維生素 C、維生素 E磷酸酯、檸檬酸、蘋果酸、鉀鹽等均為現(xiàn)有產(chǎn) 品，市場有售。下面以具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。
[0024] 實(shí)施例1 : 本實(shí)施例所用的菌種為丁酸梭狀芽孢桿菌、乳酸片球菌、納豆芽孢桿菌。其步驟為： (1)制備液體菌種：將納豆芽孢桿菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于液體擴(kuò)大肉湯營養(yǎng) 培養(yǎng)基中，在36°C, 160r/min條件下，搖床振蕩培養(yǎng)22h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到 5. 8 X 108cfu/mL ； 將乳酸片球菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于液體MRS培養(yǎng)基中，在37°C條件下靜置培 養(yǎng)36h,使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到3. 7X 108cfu/mL ; 將丁酸梭狀芽孢桿菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于丁酸梭狀芽孢桿菌液體種子培養(yǎng) 基中，35?條件下于厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)％h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到2. 6X107cfu/ mL〇
[0025] (2)制備固體培養(yǎng)基：按重量百分比取麥麩35%、玉米粉21. 2%、大米粉15%、沸石粉 25. 5%、葡萄糖 1. 5%、（NH4) 2S04 1. 5%、KH2P04 0. 15%、MgS04 · 7H20 0. 15%，混合均勻，調(diào)節(jié)含水 重量為52%,于121°C條件下滅菌60min,冷卻至室溫后，得到固體培養(yǎng)基。
[0026] (3)制備菌粉：于上述固體培養(yǎng)基中按20%接種重量接入納豆芽孢桿菌液體種子， 充分混合，置于發(fā)酵淺盤中，于35°C無菌發(fā)酵室中培養(yǎng)至 95%以上的菌體形成芽孢； 分別按18%接種重量接入乳酸片球菌和丁酸梭狀芽孢桿菌液體種子，裝入用95%乙醇 滅菌的內(nèi)襯塑料編織袋中并壓實(shí)，扎緊袋口后于37°C發(fā)酵4d ; 以固體培養(yǎng)基干重加入8%海藻糖、8%甘油作為保護(hù)劑，充分拌勻； 將上述培養(yǎng)好的固體發(fā)酵培養(yǎng)基于42°C干燥6. 5h，粉碎得各菌粉。
[0027] (4)取丁酸梭狀芽孢桿菌菌粉30%、乳酸片球菌菌粉32%、納豆芽孢桿菌菌粉16%、 維生素 C 5%、維生素 E磷酸酯4%、檸檬酸2. 5%、蘋果酸4. 5%、KC1 6%，充分混合均勻，過6〇 目篩，包裝后即得成品。
[0028] 實(shí)施例2 : 本實(shí)施例所用的菌種為丁酸梭狀芽孢桿菌、乳酸片球菌、納豆芽孢桿菌。其步驟為： (1)將納豆芽孢桿菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于液體擴(kuò)大肉湯營養(yǎng)培養(yǎng)基中，在 37?，170r/min條件下，搖床振蕩培養(yǎng)20h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到6. 5X 108cfu/ mL ;將乳酸片球菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于液體MRS培養(yǎng)基中，在40°C條件下靜置培 養(yǎng)48h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到4· 05X 108cfu/mL ;將丁酸梭狀芽孢桿菌1株接種 一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于丁酸梭狀芽孢桿菌液體種子培養(yǎng)基中，32°C條件下于厭氧培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)104h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到2· 2X 108cfu/mL。
[0029] (2)按重量百分比取麥麩31. 5%、玉米粉24%、大米粉I8· 2%、沸石粉23%、葡萄糖1%、 (NH4) 2S04 2%、KH2P04 0. 25%、MgS04 ·7Η20 0. 05%,混合均勻，調(diào)節(jié)含水重量為 55%,于 121°C條 件下滅菌60min，冷卻至室溫后，得到固體培養(yǎng)基。
[0030] (3)于上述固體培養(yǎng)基中按25%接種重量接入納豆芽孢桿菌液體種子，充分混合， 置于發(fā)酵淺盤中，于32°C無菌發(fā)酵室中培養(yǎng)至95%以上的菌體形成芽孢；分別按15%接種 重量接入乳酸片球菌和丁酸梭狀芽孢桿菌液體種子，裝入用95%乙醇滅菌的內(nèi)襯塑料編織 袋中并壓實(shí)，扎緊袋口后于35?C發(fā)酵5d ; 以固體培養(yǎng)基干重加入6%海藻糖、4%甘油和8%輕質(zhì)碳酸鈣作為保護(hù)劑，充分拌勻；將 上述培養(yǎng)好的固體發(fā)酵培養(yǎng)基于4(TC千燥7h，粉碎得各菌粉。
[0031] (4)取丁酸梭狀芽孢桿菌菌粉32%、乳酸片球菌菌粉31%、納豆芽孢桿菌菌粉 15. 5%、維生素 C 4. 5%、維生素 E磷酸酯3. 5%、檸檬酸3%、蘋果酸3. 5%、KC1 7%，充分混合均 勻，過60目篩，包裝后即得成品。
[0032] 實(shí)施例3 : 本實(shí)施例所用的菌種為丁酸梭狀芽孢桿菌、乳酸片球菌、納豆芽孢桿菌。其步驟為： (1)將納豆芽孢桿菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于液體擴(kuò)大肉湯營養(yǎng)培養(yǎng)基中，在 35°C，l8〇r/min條件下，搖床振蕩培養(yǎng)24h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到4. 2X 109cfu/ mL ;將乳酸片球菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于液體MRS培養(yǎng)基中，在38°C條件下靜置培 養(yǎng)40h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到3. 93X 107cfu/mL ;將丁酸梭狀芽孢桿菌1株接種 一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于丁酸梭狀芽孢桿菌液體種子培養(yǎng)基中，30°C條件下于厭氧培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)l 2〇h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到3. 12X107cfu/mL。
[0033] (2)按重量百分比取麥麩38. 5%、玉米粉20. 5%、大米粉16. 7%、沸石粉20. 6%、葡萄 糖 1. 87%、（NH4) 2S〇4 1. 7%、KH2P04 0. l%、MgS04 ·7Η20 0· 13%,混合均勻，調(diào)節(jié)含水重量為 50%, 于121°C條件下滅菌60min,冷卻至室溫后，得到固體培養(yǎng)基。
[0034] (3)于上述固體培養(yǎng)基中按18%接種重量接入納豆芽孢桿菌液體種子，充分混合， 置于發(fā)酵淺盤中，于37°C無菌發(fā)酵室中培養(yǎng)至95%以上的菌體形成芽孢；分別按20%接種 重量接入乳酸片球菌和丁酸梭狀芽孢桿菌液體種子，裝入用95%乙醇滅菌的內(nèi)襯塑料編織 袋中并壓實(shí),扎緊袋口后于36?發(fā)酵4. 5d ; 以固體培養(yǎng)基干重加入11%甘油和7%輕質(zhì)碳酸鈣作為保護(hù)劑，充分拌勻；將上述培養(yǎng) 好的固體發(fā)酵培養(yǎng)基于45°C干燥6h，粉碎得各菌粉。
[0035] (4)取丁酸梭狀芽孢桿菌菌粉33. 5%、乳酸片球菌菌粉32. 5%、納豆芽孢桿菌菌粉 14%、維生素 C 3. 5%、維生素 E磷酸酯3%、檸檬酸3. 5%、蘋果酸5%、KC1 5%，充分混合均勻，過 60目篩，包裝后即得成品。
[0036] 本發(fā)明的抗應(yīng)激劑在湖南桃江、安化等地的許多大中小養(yǎng)豬場進(jìn)行了大量的應(yīng)用 試驗(yàn)，證明具有促生長、抗應(yīng)激、提高免疫力和預(yù)防疾病等作用。應(yīng)用效果舉例如下： (1)仔豬的選擇和分組 選擇同批次體重相近的長白二元雜交斷乳仔豬45頭，按性別、窩別和體重隨機(jī)分成 I、II、111 3組，每組IS頭，公母各半，初始重組內(nèi)和組間差異均不顯著（p >〇· 〇5)，基礎(chǔ)日 糧為大北農(nóng)公司生產(chǎn)的仔豬料。其中I組為對照組，Π、ΙΠ 兩組為試驗(yàn)組，II組在基礎(chǔ)日糧 中添加1. 5%的實(shí)施例1產(chǎn)品，ΙΠ 組在基礎(chǔ)日糧中添加2. 〇%的實(shí)施例1產(chǎn)品，對照組不添加 任何其它物質(zhì)。
[0037] (2)試驗(yàn)時(shí)間 試驗(yàn)時(shí)間自2013年9月5日開始至2013年11月5日結(jié)束。
[0038] (3)飼養(yǎng)管理 各今分欄飼喂，欄舍為水泥地板，其它環(huán)境條件一致。試驗(yàn)前進(jìn)行防疫、去勢和驅(qū)蟲。采 用自由采食和自由飲水，飼料為粉料，以吃飽不剩料為準(zhǔn)。
[0039] (4)測定項(xiàng)目 每天記錄每欄飼料的消耗量和豬只的健康狀況、用藥量、次數(shù)及價(jià)格。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)空腹 I6小時(shí)稱豬只終重，計(jì)算平均日增重、料重比、腹瀉率等，并用EXCELL軟件進(jìn)行分析比較。
[0040] (5)試驗(yàn)結(jié)果 各組試驗(yàn)結(jié)果見表1。
[0041] 表1試驗(yàn)組與對照組斷乳仔豬飼喂效果統(tǒng)計(jì)表

【權(quán)利要求】
1. 一種仔豬用抗應(yīng)激劑，其特征在于包括按重量百分比計(jì)的下述成分：丁酸梭狀芽孢 桿菌菌粉 3〇%-35%、乳酸菌菌粉30%-40%、納豆芽孢桿菌菌粉14%-20%、維生素 C和/或維生 素 Ε磷酸酯6. 5%-11%、調(diào)節(jié)腸道pH值的有機(jī)酸4. 5%-10· 5%、和鉀鹽5%-8%，合計(jì)100%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的仔豬用抗應(yīng)激劑，其特征在于所述有機(jī)酸為檸檬酸和蘋果 酸，所述鉀鹽為KC1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的仔豬用抗應(yīng)激劑，其特征在于重量百分比為：丁酸梭狀芽 孢桿菌菌粉30%-33. 5%、乳酸菌菌粉31%-32. 5%、納豆芽孢桿菌菌粉14%_16%、維生素 C 3. 5%_5%、維生素 E 磷酸酯 3%-4%、檸檬酸 2. 5%-3. 5%、蘋果酸 3. 5%-5%、和 KC1 5%-7%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的仔豬用抗應(yīng)激劑，其特征在于所述仔豬為斷乳仔豬， 所述乳酸菌為乳酸片球菌。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的仔豬用抗應(yīng)激劑，其特征在于該抗應(yīng)激劑中有效活菌數(shù)含量 1. 5Χ1010-2· 5X1010 cfu/g。
6. -種權(quán)利要求1-5之一所述仔豬用抗應(yīng)激劑的制備方法，包括以下步驟： (a) 按20-25%接種重量在固體培養(yǎng)基中接入納豆芽孢桿菌液體種子，在30-37°C的無 菌環(huán)境中培養(yǎng)至95%以上的菌體形成芽孢； (b) 按15_2〇%接種重量在固體培養(yǎng)基中接入乳酸菌液體種子，于35_37°C無菌環(huán)境中 發(fā)酵4-5d ; (c) 按15-20%接種重量在固體培養(yǎng)基中接入丁酸梭狀芽孢桿菌液體種子，于35-37°C 的無菌環(huán)境中發(fā)酵4-5d; (d) 分別在上述培養(yǎng)好的固體發(fā)酵培養(yǎng)中加入保護(hù)劑，干燥、粉碎得到納豆芽孢桿菌菌 粉、乳酸菌菌粉和丁酸梭狀芽孢桿菌菌粉； (e) 將所得各菌粉與維生素 C和/或維生素 E磷酸酯、有機(jī)酸、鉀鹽按所述配比混合均 勻，制得抗應(yīng)激劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的仔豬用抗應(yīng)激劑的制備方法，其特征在于所述步驟（a)- (c) 所述的固體培養(yǎng)基由下述方法得到：按重量百分比取麥麩30%-40%、玉米粉15%-25%、大米 粉 15%-20%、沸石粉20%-30%、葡萄糖 1%-2%、（NH4)2S04 1. 5%-2%、KH2P04 0. 1-0 . 3%、MgS04 ·7Η20 0· 05-0· 15%，合計(jì)100%,混合均勻，調(diào)節(jié)含水重量為50%-55%，滅菌。
8·根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的仔豬用抗應(yīng)激劑的制備方法，其特征在于所述納豆芽孢 桿菌液體種子是將納豆芽孢桿菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于液體肉湯營養(yǎng)培養(yǎng)基中，在 35°C -37°C，160r/min-180r/min條件下，搖床振蕩培養(yǎng)2〇-24h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃 度達(dá)到4. 5-6. 7X 108-109cfu/mL ;所述乳酸菌液體種子是將乳酸片球菌1株接種一環(huán)斜面 菌種細(xì)胞于液體MRS培養(yǎng)基中，在37_40°C條件下靜置培養(yǎng) 24-48h,使該種子培養(yǎng)液中菌體 濃度達(dá)到3. 1-4. 2 X 107- 108cfu/mL ;所述丁酸梭狀芽孢桿菌液體種子是將丁酸梭狀芽孢 桿菌1株接種一環(huán)斜面菌種細(xì)胞于丁酸梭狀芽孢桿菌液體種子培養(yǎng)基中，30-35?條件下 于厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 96_120h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到2. 5-3. 5X 107-108cfu/mL。
9·根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的仔豬用抗應(yīng)激劑的制備方法，其特征在于（b)和（c)中 是將菌種液體種子裝入用95%乙醇滅菌的內(nèi)襯塑料編織袋中并壓實(shí)，扎緊袋口后發(fā)酵。
10.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的仔豬用抗應(yīng)激劑的制備方法，其特征在于步驟（(1)所 述保護(hù)劑為海藻糖、甘油和輕質(zhì)碳酸鈣中的兩種或三種混合物，以固體培養(yǎng)基干重計(jì)加入 15%-18%的保護(hù)劑；所述干燥為40-45°C干燥6-8h。
【文檔編號】A61P39/00GK104186971SQ201410373093
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月1日
【發(fā)明者】曾夢良, 蘭時(shí)樂 申請人:湖南丹維生物科技有限公司