一種基于hcpt-peg的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種基于新型穩(wěn)定劑HCPT-PEG的喜樹堿類藥物高載藥納米混懸劑及其制備方法。所述的納米混懸劑采用溶劑沉淀聯(lián)合高壓均質(zhì)法制備，其處方組成：喜樹堿類藥物與穩(wěn)定劑HCPT-PEG的組合比例為1∶0.02～10(重量比)。制備的喜樹堿類藥物的納米混懸劑，載藥量最高達(dá)98％，粒徑最小可達(dá)92.90nm，無需保護(hù)劑或者只需少量?jī)龈杀Ｗo(hù)劑的加入便可凍干。凍干品儲(chǔ)存穩(wěn)定性良好，加水振蕩即可重建為納米混懸劑。制備的羥基喜樹堿納米混懸劑，能顯著增強(qiáng)藥物在體內(nèi)各組織中的分布，尤其是肝臟和腫瘤，抗腫瘤藥效顯著(可將給藥劑量降低至市售羥基喜樹堿注射液的1/4)，對(duì)骨髓等器官的毒副作用顯著降低，具有廣闊的開發(fā)前景。
【專利說明】-種基于HCPT-PEG的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑 及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種用HCPT-PEG穩(wěn)定的羥基喜樹堿納米混 懸劑、其制備方法及應(yīng)用。
[0002] 喜樹堿類藥物包括喜樹堿、10-羥基喜樹堿、7-乙基喜樹堿、7-乙基-10-羥基喜樹 堿、9-硝基喜樹堿等，均為難溶性藥物，均具有內(nèi)酯環(huán)和較好的抗腫瘤活性，其中10-羥基 喜樹堿（10-HCPT)臨床應(yīng)用最為廣泛。10-HCPT(也簡(jiǎn)稱為HCPT)是臨床治療癌癥的一線 藥物之一，分子式為C 2tlH16N2O5，分子量為364. 35,具有廣譜抗癌活性，腎毒性小，廣泛用于肝 癌、胃癌、頭頸部腫瘤、白血病、膀胱癌等的治療。
[0003] HCPT水溶性差，臨床常將其活性內(nèi)酯環(huán)打開制成鈉鹽注射劑來使用，療效差、毒性 強(qiáng)、半衰期短，需多次給藥，病人耐受性差；同時(shí)結(jié)構(gòu)中的酚羥基暴露在空氣中易被氧化。已 有的有關(guān)羥基喜樹堿的制劑的報(bào)道，載藥量大多較低（通常< 15%，少有> 25% )，且體外 釋放多存在突釋現(xiàn)象。
[0004] 納米粒是將藥物通過不同的方法制備成納米大小的顆粒，包括膠束、聚合物納米 粒、納米混懸劑等。由于具有較大的表面積，藥物溶出速度和程度均較高，納米粒已成為解 決難溶性藥物的給藥問題的主要方法之一。同時(shí)，藥物多包封在納米粒內(nèi)部，進(jìn)入體內(nèi)之后 可以在一定時(shí)間內(nèi)與外界環(huán)境隔離，從而在一定程度上保護(hù)不穩(wěn)定的藥物，延緩代謝。表面 具有PEG鏈的納米粒，入血后還能避開血漿蛋白的調(diào)理，進(jìn)而有效較少被吞噬系統(tǒng)的清除， 起到長(zhǎng)循環(huán)作用，包封的藥物也從而能夠延長(zhǎng)半衰期在一定程度上實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)效作用。如果納 米粒的粒徑較小（如 300nm 以內(nèi)），還可由于 EPR(enhanced permeation and retention) 效應(yīng)而被動(dòng)靶向腫瘤。因此，納米給藥系統(tǒng)是解決難溶性藥物，尤其是難溶性抗腫瘤藥物的 臨床應(yīng)用的有效手段。
[0005] 納米混懸劑是納米給藥系統(tǒng)的重要分支，是用合適的技術(shù)將藥物直接制備成納米 大小的微粒，并借助于穩(wěn)定劑對(duì)其進(jìn)行穩(wěn)定而得到的給藥系統(tǒng)，是納米粒的一種。和使用 了大量輔料的其他納米給藥系統(tǒng)相比，納米混懸劑具有許多優(yōu)點(diǎn)：（1)理論上，納米混懸劑 是近乎純藥物的納米粒，具有最大限度的載藥量和藥物傳輸效率，特別適合大劑量難溶性 藥物的口服和注射給藥；(2)適用范圍廣，無論是難溶于水的藥物，還是水、油都難溶的藥 物，都可利用一定的方法制得相應(yīng)的納米混懸劑，且可通過相應(yīng)技術(shù)實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)。納 米混懸劑處方組成簡(jiǎn)單、工藝簡(jiǎn)單、制備快速，干燥后所得粉末作為中間體進(jìn)一步制備成口 月艮、注射、外用等不同的劑型，方便攜帶，提高病人順應(yīng)性。
[0006] 穩(wěn)定劑是納米混懸劑的關(guān)鍵，雖然納米混懸劑的理論載藥量可以達(dá)到很高，然而 迄今為止，在有藥-載比數(shù)據(jù)的文獻(xiàn)中，載藥量超過60%的并不多，加上凍干保護(hù)劑等輔 料，總體載藥量有不少更在10%以下；且在不同程度上存在粒徑偏大（200nm以內(nèi)為宜）和 穩(wěn)定性問題。上述納米混懸劑載藥量低，除部分原因可能是處方工藝非最佳化外，主要的原 因是現(xiàn)有的穩(wěn)定劑并非很適合所研究的藥物，即這些穩(wěn)定劑的效率并不高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的之一在于提供一種納米混懸劑的新型穩(wěn)定劑，能實(shí)現(xiàn)羥基喜樹堿納 米混懸劑的制備簡(jiǎn)單、高載藥量、高穩(wěn)定性，能實(shí)現(xiàn)喜樹堿類藥物的的體外緩釋、改善其體 內(nèi)分布、增強(qiáng)抗癌療效。
[0008] -種喜樹堿類藥物的納米混懸劑，由喜樹堿類藥物和穩(wěn)定劑組成，藥物與穩(wěn)定劑 的質(zhì)量比為1 : 0.01?10。
[0009] -種喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，選用的穩(wěn)定劑為PEG修飾的羥基喜樹 堿，即 HCPT-PEG。
[0010] 本發(fā)明目的之二在于提供一種喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑的制備方法，本 發(fā)明采用的是溶劑沉淀或溶劑沉淀聯(lián)合高壓均質(zhì)的方法制備納米混懸劑，技術(shù)方案如下： [0011] (1)喜樹堿類藥物和穩(wěn)定劑溶于能與水混溶的有機(jī)溶劑中；
[0012] (2)超聲或攪拌條件下將含有藥物和穩(wěn)定劑的有機(jī)溶劑加入到水中；
[0013] (3)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或透析法除去有機(jī)溶劑，或高速離心（至上清檢測(cè)不到納米粒 存在）收集沉淀后在加水懸??；
[0014] (4)必要時(shí)高壓均質(zhì)進(jìn)一步減小粒徑。
[0015] 上述制備方法，其特征在于：步驟（1)所述的有機(jī)溶劑選自DMS0、DMF、甲醇、乙醇、 丙醇、乙腈、異丙醇、PEG400、PEG600中的一種或兩種或多種的混合體系；或者以上溶劑與 乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷等于水不相混溶的有機(jī)溶劑的混合體系，只要混合體系能和 水混溶同時(shí)能很好滴溶解藥物和輔料即可。藥物在有機(jī)溶劑中的濃度為0. 001 %?20% (w/v)，穩(wěn)定劑的濃度為0.001%?50% (w/v);步驟（2)中有機(jī)溶劑與水相的體積比為 1 : 2?100 (v/v);步驟（3)中高速離心條件為2000?60000rpm離心1?60min，棄去上 清，沉淀加水超聲復(fù)溶；步驟（4)高壓均質(zhì)條件為溫度0?80°C，壓力500-4000bar，其中理 想均質(zhì)條件為25°C、2000?2500bar、> 10次循環(huán)。
[0016] 步驟（3)和步驟⑷還可以通過冷凍干燥、噴霧冷凍干燥或噴霧干燥等進(jìn)一步固 化，所用凍干保護(hù)劑可以是PVP、葡萄糖、海藻糖、麥芽糖、半乳糖、甘露醇中的一種或兩種及 兩種以上的組合，優(yōu)選PVP為凍干保護(hù)劑；凍干保護(hù)劑的用量為納米粒重量的10-200%，優(yōu) 選納米粒重量的20-50%的凍干保護(hù)劑。
[0017] 步驟（3)和步驟⑷通過冷凍干燥、噴霧冷凍干燥固化時(shí)，在某些時(shí)候（如 Ch〇leSter〇l-PEG600、合適的藥載比），甚至可以不用任何凍干保護(hù)劑，直接凍干，加水后即 可重建為原來的納米分散體系。
[0018] 本發(fā)明的目的之三在于提供一種喜樹堿類藥物高載藥納米混懸劑在制備注射劑 中的應(yīng)用，所述的注射劑包括注射液和無菌粉針。本發(fā)明的喜樹堿類藥物納米混懸劑的水 相分散介質(zhì)可用高濃度的葡萄糖水溶液調(diào)成5 %葡萄糖生理等滲體系，適應(yīng)臨床應(yīng)用。本發(fā) 明的喜樹堿類藥物納米混懸劑凍干粉可加入適量的無菌藥用5%葡萄糖水溶液稀釋，重建 成供靜脈給藥用的分散體系，適應(yīng)臨床使用。
[0019] 本發(fā)明的納米粒的優(yōu)點(diǎn)在于：（1)處方簡(jiǎn)單，最少可以只含有藥物和穩(wěn)定劑 HCPT-PEG ; (2)載藥量可高達(dá)98%同時(shí)平均粒徑可小于200nm，具有非常高的藥物傳輸效 率，同時(shí)易實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的被動(dòng)靶向；（3)體外釋放沒有突釋，即便在90%以上的高載藥量也 觀察不到明顯的突釋現(xiàn)象；(4)凍干保護(hù)劑用量少，即便在高達(dá)90%的載藥量下，僅藥物重 量的25%的凍干保護(hù)劑即可實(shí)現(xiàn)凍干后的加水重建；（5)載藥量可根據(jù)需要再很寬的范圍 內(nèi)（10-98% )調(diào)整。
[0020] 本發(fā)明的納米粒經(jīng)大鼠藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，長(zhǎng)循環(huán)和緩釋效果明顯，血漿AUC較注 射液顯著提高，表觀半衰期顯著延長(zhǎng)。
[0021] 本發(fā)明的納米混懸劑經(jīng)H22荷瘤小鼠實(shí)驗(yàn)證明，給藥后在各組織中的AUCV24h及 MRT明顯高于常用的市售注射劑組，以肝臟和腫瘤中最顯著，一定程度上實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤組織 的被動(dòng)靶向。
[0022] 本發(fā)明的納米混懸劑經(jīng)H22荷瘤小鼠藥效實(shí)驗(yàn)證明，表現(xiàn)出卓越的抗腫瘤治療， 相同劑量下，納米混懸劑較市售注射液有更強(qiáng)的抗腫瘤活性，在1/4劑量時(shí)即可實(shí)現(xiàn)市售 注射液相同的抗腫瘤效果。
[0023] 本發(fā)明的納米混懸劑經(jīng)荷瘤小鼠藥效實(shí)驗(yàn)的病理報(bào)告分析顯示，納米混懸劑混懸 劑組對(duì)骨髓無明顯抑制作用，無明顯肝腎毒性，安全性較高；相同劑量的市售注射劑則對(duì)肝 臟有明顯毒性，對(duì)骨髓有明顯抑制。該納米混懸劑，在提高抗腫瘤藥效的同時(shí)能降低毒副作 用。
[0024] 本發(fā)明的納米混懸劑處方單純新穎，工藝簡(jiǎn)單，易于控制，較市售注射液相比，具 有顯著的增效減毒作用，有廣闊的產(chǎn)業(yè)化前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0025] 圖 1 為實(shí)施例 1 中合成的 mPEG1(l(l(l-HCPT 和 mPEGlOOO 的 M0ADI-T0F 譜圖
[0026] 圖2為實(shí)施例1中合成的mPEG_-HCPT的HPLC譜圖
[0027] 圖3為實(shí)施例8中透射電鏡照片（X 19000)
[0028] 圖4為實(shí)施例9中X-粉末衍射圖譜（從上到下依次為羥基喜樹堿納米混懸劑、羥 基喜樹堿原藥與穩(wěn)定劑IiiPEG icicici-HCPT的物理混合物、羥基喜樹堿原藥）
[0029] 圖5為實(shí)施例10中羥基喜樹堿在PBS中的體外釋放曲線（η = 3)
[0030] 圖6為實(shí)施例10中羥基喜樹堿在水中的體外釋放曲線（η = 3)
[0031] 圖7為實(shí)施例11中納米混懸劑在荷瘤小鼠腫瘤中的分布（η = 8)
[0032] 圖8為實(shí)施例12中納米混懸劑的肝腎及骨髓病理切片照片（Χ40)

【具體實(shí)施方式】 [0033]
[0034] 下面將描述本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施例，但本發(fā)明的內(nèi)容完全不局限于此。
[0035] 實(shí)施例1
[0036] IiiPEGicicici-HCPT 的合成
[0037] 稱取 HCPT (74mg，0· 2mmol)和 mPEG1(l〇〇-C00H(100mg，0· Immol)溶于 25mL 無水 DMF 中。0°C、氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺（69mg，0. 2mmol)和4-二 甲氨基吡啶（3. 3mg，0. 027mmol)加入到DMF溶液中，反應(yīng)體系在冰浴、氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌2h， 后室溫反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束，將反應(yīng)體系倒入100mL5% NaHCO3溶液中去除多余的HCPT，然后 用二氯甲烷（DCM)萃?。?X IOOmL)。DCM層用 5% NaHCO3溶液（3X 150mL)、水（2X 150mL)、 0· lmol/L鹽酸（2X150mL)、飽和食鹽水（2X150mL)依次洗漆，無水硫酸鈉干燥，過濾、減 壓回收溶劑。所得固體物用乙醚重結(jié)晶，濾去結(jié)晶，旋蒸去除溶劑，即得目標(biāo)產(chǎn)物，實(shí)驗(yàn)過程 TLC檢識(shí)所用展開劑均為二氯甲烷：甲醇=12 : l(v/v)。
[0038] 實(shí)施例2
[0039] 稱取 HcpTSOmgjPEG1c1c1c1-HCPTZ. 5mg 溶于 0· 5mLDMF 中，于 4°C、250Hz 超聲條件下將 DMF相緩慢滴加到5mL水中，滴加完畢，13000rpm離心20min去除DMF，沉淀加5mL水復(fù)溶， 25°C超聲2min分散，2000bar、4°C條件下高壓均質(zhì)5次改善粒徑。
[0040] 將該納米混懸劑不凍干直接4°C保存60天后復(fù)溶，粒徑為94. 03nm ;不添加其他凍 干保護(hù)劑的條件下，取適量體積的納米混懸劑凍干，4°C避光保存半年后，加等體積水振蕩 復(fù)溶，粒徑為97. 10nm，其凍干穩(wěn)定性良好。
[0041] 實(shí)施例3
[0042] 稱取羥基喜樹堿25mg、mPEG_-HCPT2. 5mg溶于ImLDMF中，加熱至80°C，迅速注入 至4°C的5mL水中，注入完畢，250Hz、4°C超聲30min，HOOOrpm離心lh，沉淀于60°C、250Hz 超聲15min重新分散至5mL水中，25°C、2000bar、12次循環(huán)高壓均質(zhì)即得納米粒，平均粒徑 為 112. Onm。
[0043] 實(shí)施例4
[0044] 稱7-乙基取羥基喜樹堿25mg、mPEG2Q(l(l-HCPT2· 5mg溶于ImL DMF中，加熱至80°C， 迅速注入至4°C的5mL水中，注入完畢，250Hz、4°C超聲30min，HOOOrpm離心lh，棄上清（去 除DMF)，沉淀于60°C、250Hz超聲15min重新分散至5mL水中，25°C、2000bar、12次循環(huán)高 壓均質(zhì)即得納米粒，平均粒徑為151. Onm。
[0045] 實(shí)施例5
[0046] 稱取9-硝基輕基喜樹堿12. 5mg、喜樹堿12. 5mg、mPEG5(l(IQ-HCPT10mg溶于 lmLDMF-EtOH(4 : l，v/v)中，加熱至 50°C，注入至 4°C 的 5mL 水中，250Hz、4°C超聲 30min， HOOOrpm離心lh，棄上清（去除DMF)，沉淀于60°C、250Hz超聲15min重新分散至5mL水 中，平均粒徑為186. Onm。
[0047] 實(shí)施例6
[0048] 稱取喜樹堿5mg、輕基喜樹堿10mg、7-乙基-10-輕基喜樹堿10mg、mPEG1(l(l(l-HCPT 15mg溶于ImL DMF-丙酮（4 : 1)中，加熱至40°C，滴加至4°C的5mL水中，注入完畢，250Hz、 4°C超聲30min，HOOOrpm離心lh，棄上清（去除DMF)，沉淀于60°C、250Hz超聲15min重新 分散至5mL水中，平均粒徑為167. Onm。
[0049] 實(shí)施例7
[0050] 稱取輕基喜樹堿10mg、7-乙基-10-輕基喜樹堿10mg、紫衫醇5mg、 mPEG2_-HCPT10mg溶于ImL DMF-二氯甲烷（5 : 1)中，滴加至4°C的5mL水中，注入完畢， 250Hz、4°C超聲30min，HOOOrpm離心lh，棄上清，沉淀于60°C、250Hz超聲15min重新分散 至5mL水中，平均粒徑為189. Onm。
[0051] 實(shí)施例8
[0052] 制備5mg/mL濃度的混懸劑，吸取6 μ L滴到300目的銅網(wǎng)上，空氣中自然晾干，后 用0. 1 %磷鎢酸染色lOmin，透射電鏡下觀察粒子的形態(tài)（圖3)。
[0053] 實(shí)施例9
[0054] X-粉末射線衍射圖譜見圖4,樣品測(cè)量參數(shù)：Cu祀管照射，1.5406 A, 40kV，IOOmA, 步寬：0.0Γ，2Θ掃描范圍：3-70°，結(jié)果可知羥基喜樹堿納米混懸劑中藥物以晶型形式 存在。
[0055] 實(shí)施例10
[0056] 羥基喜樹堿納米混懸劑的體外釋放實(shí)驗(yàn)
[0057] 方案：實(shí)驗(yàn)采用透析袋法對(duì)高壓均質(zhì)前后的HCPT納米混懸劑進(jìn)行體外釋放實(shí)驗(yàn)， 同時(shí)用市售的HCPT注射液（Injections)及HCPT原藥粉的水混懸液（Corse suspensions) 做對(duì)照。取以上樣品各ImL (含藥200 μ g)于透析袋（MWCO = 3500)中，分別置于IOOmL釋 放介質(zhì)中，于37°C、IOOrpm條件下恒溫?cái)嚢?，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取ImL釋放外液HPLC測(cè)其中的藥 物含量，同時(shí)補(bǔ)充等溫等體積的釋放介質(zhì)，計(jì)算累積釋放度，釋放介質(zhì)采用〇. lmol/L、pH7. 4 的PBS緩沖鹽或純水，同一樣品平行實(shí)驗(yàn)3份，結(jié)果如圖所示。
[0058] 結(jié)果：本節(jié)考察了 HCPT納米混懸劑的體外釋放行為，緩釋效果明顯，達(dá)24h，同時(shí) 避免像原藥粉水混懸液一樣釋放過快，符合Higuich釋放。
[0059] 實(shí)施例11
[0060] 羥基喜樹堿納米混懸劑在H22荷瘤小鼠體內(nèi)分布
[0061] 動(dòng)物模型的建立：將復(fù)蘇凍存的鼠源性H22肝癌細(xì)胞后，接種于5只ICR雄性小鼠 腹腔下傳代。按照無菌操作程序，7天后處死小鼠，取出含H22細(xì)胞的腹水，用無菌生理鹽 水調(diào)整瘤細(xì)胞懸液濃度為I X IO6個(gè)/mL備用。6周齡的ICR雄性小鼠右腋下注射0. 2mL的 H22細(xì)胞（I X IOfVmL)的生理鹽水懸液，腫瘤生長(zhǎng)至第7天，體積大于100mm3,篩選腫瘤大小 相對(duì)一致的80只小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
[0062] 給藥方案：取荷瘤小鼠80只，隨機(jī)分為市售注射劑和納米混懸劑2組，給藥前禁食 12h，自由飲水，按照8mg/kg劑量尾靜脈注射給藥。
[0063] 樣品采集：給藥后0.5、l、4、8、24h摘眼球取血后脫頸椎處死小鼠；取心、肝、 脾、肺、腎、腦及腫瘤組織，以生理鹽水洗凈浮血，濾紙吸干；各組織稱重后加3倍質(zhì)量的 生理鹽水進(jìn)行組織勻漿；離心，取各組織勻漿液200 μ L加冰醋酸20 μ L暗處轉(zhuǎn)化3h， 加乙酸乙酯ImL,潤旋振蕩lmin，IOOOOrpm離心IOmin ;取上清，氮?dú)獯蹈?，殘余物加?醇200 μ L超聲溶解，過0. 22 μ m針頭式濾器，取20 μ L以HPLC檢測(cè)。各參數(shù)用Phoenix WinNonlin (version6. 1)擬合計(jì)算。
[0064] 結(jié)果：納米混懸劑組給藥后在小鼠的各個(gè)組織中的AUCV24h及MRT明顯高于市售 注射劑組，其中以肝臟和腫瘤中最顯著。實(shí)際上，混懸劑組明顯延長(zhǎng)了藥物在各組織的滯 留時(shí)間，如肺、腎中的MRT分別為注射劑組的10. 02和10. 59倍，心、肝、脾、肺、腎組織中的 AUCV24h分別為注射劑的4· 16、7· 89、24· 04、80· 42倍。這說明IiiPEGicicici-HCPT穩(wěn)定的納米混 懸劑一定程度上實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤組織的被動(dòng)靶向，為提高抗腫瘤藥效的同時(shí)降低毒副作用奠 定了基礎(chǔ)。羥基喜樹堿納米混懸劑及市售注射劑在各組織中的分布參數(shù)如下表：

【權(quán)利要求】
1. 一種基于HCPT-PEG的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于：所述的納米 混懸劑由喜樹堿類藥物和穩(wěn)定劑組成，藥物與穩(wěn)定劑的質(zhì)量比為1 : 0.01?10。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的喜樹堿藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于：所述的穩(wěn) 定劑為HCPT-PEG，其結(jié)構(gòu)如下式，其中R可以為H、CH3、CH2CH3、CH2CH2COOH、CH2CH2NH2,n= 10-450。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1至2所述的喜樹堿藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于：所述的 喜樹堿類藥物，是喜樹堿或具有喜樹堿骨架的衍生物，包括喜樹堿、10-輕基喜樹堿、7-乙 基喜樹堿、7-乙基-10-羥基喜樹堿、9-硝基喜樹堿等。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3所述的喜樹堿藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于：所述的 喜樹堿類藥物，可以是權(quán)利要求3中所述的喜樹堿藥物中的一種或兩種或多種藥物的組合 物。
5. 如權(quán)利要求1至4所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于載藥量最 高可達(dá)98%，粒徑10-1000nm，優(yōu)選平均粒徑在20-200nm。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于：所述 的納米混懸劑包括納米混懸劑和納米晶。
7. 如權(quán)利要求1至6所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于其中的喜 樹堿類藥物基本上是以內(nèi)酯型存在。
8. 如權(quán)利要求1至7所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于其中的藥 物具有良好的緩釋作用，沒有突釋。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1至8所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于：采用 反溶劑法、高壓均質(zhì)法中的一種或兩種結(jié)合來制備。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于，制備方法 包括以下步驟： (1) 喜樹堿類藥物和穩(wěn)定劑溶于能與水混溶的有機(jī)溶劑中； (2) 超聲或攪拌條件下將含有藥物和穩(wěn)定劑的有機(jī)溶劑加入到水中； (3) 減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或透析法除去有機(jī)溶劑，或高速離心（至上清檢測(cè)不到納米粒存在） 收集沉淀后在加水懸浮； (4) 必要時(shí)高壓均質(zhì)進(jìn)一步減小粒徑。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9至10所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑的制備方法，其特 征在于：步驟⑴所述的有機(jī)溶劑選自DMS0、DMF、甲醇、乙醇、丙醇、乙腈、異丙醇、PEG400、 PEG600中的一種或兩種或多種的混合體系；或者以上溶劑與乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲 烷等于水不相混溶的有機(jī)溶劑的混合體系，只要混合體系能和水混溶同時(shí)能很好滴溶解 藥物和輔料即可。藥物在有機(jī)溶劑中的濃度為0.001 %?20 % (w/v)，穩(wěn)定劑的濃度為 0.001 %?50 % (w/v);步驟（2)中有機(jī)溶劑與水相的體積比為1 : 2?100 (v/v);步驟（3) 中高速離心條件為2000?60000rpm離心1?60min，棄去上清，沉淀加水超聲復(fù)溶；步驟 (4)高壓均質(zhì)條件為溫度0?80°C，壓力500-4000bar，其中理想均質(zhì)條件為25°C、2000? 2500bar、彡10次循環(huán)。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9至11所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑的制備方法，其特 征在于：步驟（3)和步驟（4)還可以通過冷凍干燥、噴霧冷凍干燥或噴霧干燥等進(jìn)一步固 化，所用凍干保護(hù)劑可以是PVP、葡萄糖、海藻糖、麥芽糖、半乳糖、甘露醇中的一種或兩種及 兩種以上的組合，優(yōu)選PVP為凍干保護(hù)劑；凍干保護(hù)劑的用量為納米粒重量的0-100%，優(yōu) 選納米粒重量的10-30%的凍干保護(hù)劑。
13. 根據(jù)權(quán)利要求9至11所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑的制備方法，其 特征還在于：步驟（3)和步驟（4)通過冷凍干燥、噴霧冷凍干燥固化時(shí)，在某些時(shí)候（如 Cholesterol-PEGIOOO、合適的藥載比），甚至可以不用任何凍干保護(hù)劑，直接凍干，加水后 即可重建為原來的納米分散體系。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1至13所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，可用于制備注射 齊U，所述的注射劑包括注射液和無菌粉針；水相分散介質(zhì)可用高濃度的葡萄糖水溶液調(diào)成 5%葡萄糖生理等滲體系，適應(yīng)臨床應(yīng)用；本發(fā)明的羥基喜樹堿納米粒凍干粉可加入適量的 無菌藥用5 %葡萄糖水溶液稀釋，重建成供靜脈給藥用的分散體系，適應(yīng)臨床使用。
15. 如權(quán)利要求1至14所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于注射給 藥后，可以較傳統(tǒng)注射劑獲得更好的藥物濃度、更長(zhǎng)的血漿半衰期和更高的血藥濃度-時(shí) 間曲線下面積（AUC);靜脈注射后能增加藥物的體內(nèi)組織分布，尤其是在肝臟和腫瘤中的 分布。
16. 如權(quán)利要求1至14所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，如權(quán)利要求1至12 所述的喜樹堿類藥物的納米粒，其特征在于給藥后，可以獲得較傳統(tǒng)注射劑更好的抗腫瘤 效果，且能顯著降低對(duì)骨髓等器官的毒副作用。
17. 如權(quán)利要求1至14所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，其特征還在于：納 米混懸劑中的藥物，出羥基喜樹堿類藥物之外，還可以聯(lián)合包載適量紫杉醇、多西紫杉醇、 鬼臼毒素等脂溶性抗腫瘤藥物。
18. 如權(quán)利要求1至17所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于：納 米混懸劑表面還可以再用具有腫瘤靶向作用的各種配體進(jìn)行修飾（如穩(wěn)定劑處方中加 入適量的HCPT-PEG-葉酸、HCPT-PEG-肽段、HCPT-PEG-單抗、HCPT-PEG-核酸適配體、 HCPT-PEG-半乳糖、HCPT-PEG-半乳糖胺、HCPT-PEG-乳糖酸），從而具有腫瘤、肝臟主動(dòng)靶向 作用。
19. 如權(quán)利要求1至16所述的喜樹堿類藥物的高載藥納米混懸劑，其特征在于：膽固 醇-PEG是必不可少的核心穩(wěn)定劑；為進(jìn)一步改善載藥納米粒的性質(zhì)，還可以加入有其他藥 劑上可以接受的各種輔料作為非必需的輔助穩(wěn)定劑，這些輔料包括但不限于PCL-PEG、磷 月旨、聚乙烯醇等。
【文檔編號(hào)】A61K9/10GK104274401SQ201410362571
【公開日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月25日
【發(fā)明者】王向濤, 楊林潔, 洪靖怡, 邸靜 申請(qǐng)人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所