一種防治雞大腸桿菌病的中草藥口服液及生產(chǎn)工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種防治雞大腸桿菌病的中草藥口服液及生產(chǎn)工藝。它由下述中草藥制成：生石膏、千里光、墨旱蓮、側(cè)柏葉、地錦草和黨參。本發(fā)明針對(duì)雞大腸桿菌臨床證候，科學(xué)組方，分別進(jìn)行了組方、生產(chǎn)工藝、體外抗菌、大腸桿菌攻毒保護(hù)等試驗(yàn)。結(jié)果表明該制劑能很好的預(yù)防和治療雞大腸桿菌病，且無(wú)毒副作用。
【專利說(shuō)明】—種防治雞大腸桿菌病的中草藥口服液及生產(chǎn)工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種防治雞大腸桿菌病的藥物，具體地說(shuō)是以中草藥原料制成的制劑。
【背景技術(shù)】
[0002]雞大腸桿菌是條件致病菌，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降后，某些血清型可導(dǎo)致機(jī)體發(fā)病，出現(xiàn)多種癥狀和病理變化，它是嚴(yán)重影響?zhàn)B雞健康發(fā)展和食品安全的病原菌。隨著養(yǎng)雞集約化程度的日益提高，大腸桿菌病的發(fā)病率居高不下，發(fā)病率為11~69%，死亡率為3.8~72.9 %。由于臨床藥物使用的不規(guī)范，大腸桿菌多重耐藥性日益嚴(yán)重，有些菌株甚至對(duì)22種抗生素具有耐藥性，造成抗菌藥物臨床治療效果差、藥物殘留高、潛在生物危害嚴(yán)重等問(wèn)題，因此，研究與開(kāi)發(fā)新型高效抗菌制劑已成為熱點(diǎn)。[0003]大量試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，中獸醫(yī)理論體系指導(dǎo)下研制的中藥制劑具有高效、長(zhǎng)效、低毒、低殘留、低副作用和不易產(chǎn)生耐藥性、消除耐藥質(zhì)粒等特點(diǎn)，已成為養(yǎng)雞業(yè)健康發(fā)展和保障食品安全的首選防治藥品。目前防治雞大腸桿菌病的中藥制劑有白頭翁湯、郁金散等，這些中藥制劑對(duì)雞大腸桿菌具有一定的防治效果，但是在防治效果方面仍待進(jìn)一步改善。為研制新型中藥抗菌制劑，我們進(jìn)行了抗菌中草藥的篩選研究，在此基礎(chǔ)上依據(jù)中獸醫(yī)學(xué)理法方藥要求，針對(duì)雞大腸桿菌臨床證候，科學(xué)組方，分別進(jìn)行了組方、生產(chǎn)工藝、體外抗菌、大腸桿菌攻毒保護(hù)等試驗(yàn)。結(jié)果表明該制劑能很好的預(yù)防和治療雞大腸桿菌病。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種防治雞大腸桿菌病的中藥制劑及生產(chǎn)工藝，該中藥制劑療效顯著，無(wú)毒副作用。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案為:一種防治雞大腸桿菌病的中草藥口服液，其特征是，由下述重量份的中草藥制成:生石膏28-32、千里光14-16、墨旱蓮14-16、側(cè)柏葉18-22、地錦草9~11和黨參9_11。
[0006]優(yōu)選配比(重量份):生石膏30、千里光15、墨旱蓮15、側(cè)柏葉20、地錦草10和黨參10。
[0007]生產(chǎn)工藝為:
[0008](I)藥物稱量:按上述重量份稱取各味中草藥，生石膏4層紗布單包；
[0009](2)第一次煎煮:生石膏與其余多味藥分別加溫水(40~50°C )浸泡0.5-1.5小時(shí)；生石膏先煎25-35分鐘，再加其余中草藥煮沸25-35分鐘，過(guò)濾；
[0010](3)第二次煎煮:濾渣再加入溫水(40~50°C )浸泡0.5-1.5小時(shí)，煮沸40-80分鐘,過(guò)濾,合并兩次濾液；
[0011](4)然后經(jīng)濃縮、澄清、精濾、防腐、灌裝，得到每毫升含生藥Ig的藥液。
[0012]適用范圍:家禽外感邪疫所致的惡寒發(fā)熱、喜飲，排料便或黃綠色、黃白色、血色稀便。[0013]使用方法:預(yù)防用量為，0.25~0.5ml/kg體重，飲水，2次/日，連用3~5日；治療，I~1.5ml/kg體重，飲水，2次/日，連用5~7日。
[0014]本發(fā)明所選中草藥的藥性及藥理分析如下:
[0015]生石膏:硫酸鹽類礦物硬石膏族石膏。味辛、甘，微寒。歸肺、胃經(jīng)。具清熱瀉火，生津止渴之功效。主治外感熱病，肺熱喘促，胃熱貪飲，壯熱神昏，狂躁不安。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)生石膏具有退熱，鎮(zhèn)痙、消炎、解渴，降糖，補(bǔ)鈣作用和硫酸多糖化作用，增強(qiáng)免疫力，促進(jìn)凝血，利膽和利尿作用。內(nèi)服經(jīng)胃酸作用，一部分變成可溶性鈣鹽，至腸吸收入血后能增加血清內(nèi)鈣離子的濃度，可抑制體溫調(diào)節(jié)中樞、減輕骨骼肌的興奮性、減少血管通透性，故有解熱、鎮(zhèn)痙、消炎等作用。
[0016]千里光:為菊科植物千里光Senecioscandens Buch, -Ham.的地上部分。味苦,性寒，歸肝腎經(jīng)。具清熱解毒、涼血消腫、清肝明目之功效。用于上呼吸道感染、扁桃體炎、眼結(jié)膜炎、痢疾、腸炎等。主要含毛莨黃素(flavoxanthin)、菊黃素(chrysanthema xanthin)、黃酮、鞣質(zhì)、生物堿等。研究證實(shí)千里光有廣譜抗生素作用，對(duì)金黃色葡萄球菌、傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌、乙型副傷寒桿菌、志賀、鮑氏、宋氏痢疾桿菌均有較強(qiáng)的抑制作用。
[0017]墨旱蓮:為菊科屬植物鱧腸Herba Echiptae的全草。味甘、酸，性涼，歸腎經(jīng)，具有涼血止血、補(bǔ)益肝腎、清熱解毒之功效。主要用于治療吐血、衄血、尿血、便血、血崩、腸炎、痢疾等。全草揮發(fā)油、鞣 質(zhì)皂甙約含1.32%。旱蓮草葉粉對(duì)狗半切斷股動(dòng)脈具有明顯的止血效果。
[0018]側(cè)柏葉:柏科植物側(cè)柏Platycladus orientalis (L.) Franco的嫩枝葉?？嗯?寒。入心、肝、大腸經(jīng)。具有涼血、止血，祛風(fēng)濕，散腫毒之功效。主要用于治療吐血、衄血、尿血、血痢、腸風(fēng)、崩漏，風(fēng)濕痹痛，細(xì)菌性痢疾，高血壓，咳嗽，丹毒，痄腿，燙傷。枝葉含側(cè)柏苦味素、側(cè)柏酮、槲皮素、小香酮(fenchone)、揮發(fā)油。側(cè)柏葉及所含黃酮類對(duì)小鼠具有鎮(zhèn)咳祛痰作用；可使小鼠氣管平滑肌松弛，可部分阻斷乙酰膽堿對(duì)平滑肌的作用；本品可使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物安靜閉目自由活動(dòng)減少，與苯巴比妥具有協(xié)同作用；對(duì)金黃色葡萄球菌、卡他球菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、白喉?xiàng)U菌等均有抑制作用。
[0019]地錦草:為大戟科植物地錦Euphorbia humifusa Willd.或斑地錦Euphorbiamaculata L.的干燥全草。味辛,性平。歸肝、大腸經(jīng)。具清熱解毒，涼血止血之功效。用于痢疾，泄瀉，咳血，尿血，便血，崩漏，瘡癤癰腫。地錦草含沒(méi)食子酸、沒(méi)食子甲脂、槲皮甙、槲皮素、肌醇和鞣酸等.沒(méi)食子酸為其主要抗菌有效成分.該品粉末局部使用，對(duì)于犬動(dòng)脈切開(kāi)出血有明顯的止血作用；地錦草能抑制白喉?xiàng)U菌的生長(zhǎng)，亦有中和白喉毒素的作用，能降低白喉?xiàng)U菌外毒素所致豚鼠死亡。該品抑菌、殺菌和中和白喉毒素的作用，以酊劑最好，煎劑次之，浸膏較差。
[0020]黨參:為桔?？泣h參屬植物黨參Codonopsis pilosula(Franch)Nannf.的根。味甘、微酸，性平；歸脾、肺經(jīng)。具有補(bǔ)中益氣(善益脾氣)、健脾益肺、抗癌、降壓、抗缺氧、抗衰老之功效，還可以增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提高超氧化物歧化酶的活性，增強(qiáng)消除自由基的能力，具有調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)、抗?jié)?、抑制胃酸分泌、降低胃蛋白酶活性的作用?br> [0021]配方解析:本發(fā)明中地錦草、墨旱蓮、側(cè)柏葉、千里光均具有涼血止血、清熱之功效，可有效緩解血熱妄行、臟器出血、纖維素性滲出之內(nèi)臟病變，共為主藥，體現(xiàn)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)之“留有一分血，保有一分命”的精髓；生石膏具清熱瀉火、生津止渴之功，可有效解除發(fā)熱、喜飲之主要癥狀，為輔藥；黨參補(bǔ)中益氣，健脾益肺，與生石膏配伍，凸顯益氣清熱之功，清熱不傷正，同時(shí)健脾補(bǔ)肺不戀邪，迅速恢復(fù)脾胃功能，水谷精微得以消化吸收，氣、血、津液生化之源充足，陰平陽(yáng)秘，機(jī)體康復(fù)為佐使藥。
[0022]雞大腸桿菌病的病因病機(jī):雞大腸桿菌病屬外感濕熱邪疫之癥。當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時(shí)，大腸桿菌首先侵襲外表、皮毛。由于肺和皮毛相表里，出現(xiàn)雜毛、發(fā)熱、畏寒、喜飲，繼而出現(xiàn)鼻腔有粘液，眼睛流淚等癥狀；熱邪侵入脾胃，脾胃腐熟食物功能失調(diào)，則出現(xiàn)完谷不化、料便，繼而導(dǎo)致腸分清泌濁受阻，出現(xiàn)黃綠稀便；如熱邪侵入心包絡(luò)，由于心主神志，出現(xiàn)精神萎靡、神昏、嗜睡，剖檢可見(jiàn)心包積液，心包膜混濁、增厚；如熱邪侵襲肝臟，導(dǎo)致肝臟腫大出血，肝被膜增厚甚或成纖維素滲出膜。由于正邪相搏，邪勝于正，血熱妄行，脾臟統(tǒng)血功能失調(diào)，血溢于脈管之外，而大量器官出血，如腺胃、氣管、喉頭、皮下、腸道等。因此，選用涼血止血之藥，解除內(nèi)在器官黏膜出血之主證；選用清熱瀉火之藥，清除體內(nèi)熱，以達(dá)標(biāo)本兼治之目的。
[0023]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明針對(duì)雞大腸桿菌臨床證候，科學(xué)組方，分別進(jìn)行了組方、生產(chǎn)工藝、體外抗菌、大腸桿菌攻毒保護(hù)等試驗(yàn)。結(jié)果表明該制劑能很好的預(yù)防和治療雞大腸桿菌病，且無(wú)毒副作用。本發(fā)明組方簡(jiǎn)單，與動(dòng)輒10幾味甚至20幾味的藥方相比，具有組方精煉，主次分明，針對(duì)性強(qiáng)，產(chǎn)品質(zhì)量易于控制，鑒別容易等優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0024]實(shí)施例1
[0025]配比(重量份):生石膏30、千里光15、墨旱蓮15、偵彳柏葉20、地錦草10、黨參10。
[0026](I)藥物稱量:按上述重量份稱取各味中草藥，生石膏4層紗布單包；
[0027](2)第一次煎煮:生石膏與其余多味藥分別加6倍量溫水(40~50°C )浸泡I小時(shí)；生石膏先煎30分鐘，再加其余中草藥煮沸30分鐘，過(guò)濾；
[0028](3)第二次煎煮:濾渣再加入4倍量溫水(40~50°C )浸泡I小時(shí)，煮沸I小時(shí)，過(guò)濾，合并兩次濾液；
[0029](4)濃縮:濾液真空減壓(<60kpa)濃縮至Ig生藥/Iml藥液；
[0030](5)澄清:36°C加入6% KBT_ZTC5%溶液(科立爾研發(fā)的天然中藥澄清劑)，攪拌，靜置30min，過(guò)夜；
[0031](6)精濾后加入0.3%苯甲酸鈉防腐；
[0032](7)灌裝:藥液溫度下降至50°C時(shí)，邊攪拌邊灌裝，封口。
[0033]使用方法:預(yù)防用量為，0.25~0.5g/kg體重，飲水，2次/日，連用3~5日；治療，I~1.5g/kg體重，飲水，2次/日，連用5~7日。
[0034]實(shí)施方式2復(fù)方中藥體外抗菌試驗(yàn)
[0035]I試驗(yàn)材料
[0036]1.1供試藥劑:
[0037]組方一(白頭翁湯):白頭翁25、黃連25、黃柏25、秦皮25 ;水煎煮，Ig生藥/Iml藥液；
[0038] 組方二(郁金散):郁金12、大黃12、桅子12、黃芩15、黃柏12、黃連25、訶子12、白芍12 ;水煎煮，Ig生藥/Iml藥液；[0039]組方三(實(shí)施例1的藥物):生石膏30、千里光15、墨旱蓮15、側(cè)柏葉20、地錦草
10、黨參10。
[0040]1.2試驗(yàn)藥物均購(gòu)于濟(jì)南市建聯(lián)中藥有限公司，經(jīng)鑒別符合2010版《中華人民共和國(guó)獸藥藥典》(二部)要求；編號(hào)為09-29的大腸桿菌，血清型為O24，山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所分離的地方株；牛肉浸膏、蛋白胨、營(yíng)養(yǎng)瓊脂，北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠。
[0041]1.3主要儀器設(shè)備超凈工作臺(tái)，濟(jì)南杰康凈化設(shè)備廠產(chǎn)品；ZD_85A數(shù)顯氣浴恒溫振蕩器，常州普天儀器制造有限公司產(chǎn)品。雙碟，陶瓦蓋，鋼管等。
[0042]2試驗(yàn)方法
[0043]2.1藥液的制備上述制劑6000r/min離心3min,取上清液121°C高壓滅菌15min,4°C冰箱保存?zhèn)溆谩?br> [0044]2.2菌液制備取09-29菌液0.1mL接種于5mL普通NB培養(yǎng)基，至恒溫氣浴振蕩器中，150r/min，37°C培養(yǎng)過(guò)夜，細(xì)菌含量為30.0X 101(lCFU/mL。菌液低溫離心，取白色沉淀，用無(wú)菌PBS液稀釋至菌液體積備用。
[0045]2.3藥敏試驗(yàn)管碟法(抗生素效價(jià)測(cè)定法)用刻度吸管吸取普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基加于雙碟中，每碟20ml，蓋上陶瓦蓋，待凝固；取培養(yǎng)好的試驗(yàn)，按0.5%的比例將菌液加到冷至約45°C的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，混合均勻，用刻度吸管吸取加于鋪好底層的雙碟中，立即轉(zhuǎn)動(dòng)雙碟，使含菌培養(yǎng)基均勻鋪于底層之上，蓋上陶瓦蓋，待凝固；用鑷子將鋼管擺放于凝固好的培養(yǎng)基上，用微量移液器將中藥藥液加于鋼管中，每管300μ I。轉(zhuǎn)入37°C恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h，取 出測(cè)量抑菌直徑，取平均值。
[0046]3 結(jié)果
[0047]表1復(fù)方中藥體外抗菌效果(mm)
HIMI23
[0048]
抑菌 BI9.229.0016,38*
[0049]備注:*抑菌圈邊界透明清晰。
[0050]從表1可以看出:三種組方均有不同程度的抑菌作用，以組方3的抑菌圈直徑最大。
[0051]4結(jié)論:本發(fā)明的制劑體外抑菌效果最好，對(duì)大腸桿菌具有明顯的抑制作用。
[0052]實(shí)施方式2復(fù)方制劑體內(nèi)抗大腸桿菌試驗(yàn)
[0053]I試驗(yàn)材料
[0054]1.1試驗(yàn)藥物組方1、組方3中藥材均購(gòu)于濟(jì)南市建聯(lián)中藥有限公司，經(jīng)鑒別符合2010版《中華人民共和國(guó)獸藥藥典》(二部)要求；編號(hào)為09-29的大腸桿菌，血清型為024，山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所分離的地方株；19日齡SPF公雞，山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所試驗(yàn)場(chǎng)提供；牛肉浸膏、蛋白胨、營(yíng)養(yǎng)瓊脂，北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠。
[0055]1.2主要儀器設(shè)備超凈工作臺(tái)，濟(jì)南杰康凈化設(shè)備廠產(chǎn)品；ZD_85A數(shù)顯氣浴恒溫振蕩器，常州普天儀器制造有限公司產(chǎn)品，SPF雞飼養(yǎng)隔離器，蘇州馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)設(shè)備有限公司產(chǎn)品。
[0056]2、試驗(yàn)方法
[0057]2.1菌液制備取09-29菌液0.1mL接種于5mL普通NB培養(yǎng)基，至恒溫氣浴振蕩器中，150r/min，37°C培養(yǎng)過(guò)夜，細(xì)菌含量為30.0X 101(lCFU/mL。菌液低溫離心，取白色沉淀，用無(wú)菌PBS液稀釋至菌液體積備用。
[0058]2.2大腸桿菌LD50測(cè)定選用19日齡SPF公雛，分為0.2mL、0.3mL、0.4mL組，每組10只雞，腹腔接種菌液。經(jīng)統(tǒng)計(jì)0.4mL組48h死亡率為50%，此即為大桿菌LD5tl,依此確定為接種劑量。
[0059]2.3人工感染雞大腸桿菌模型構(gòu)建選取19日齡SPF公雛，無(wú)菌腹腔接種離心菌液
0.4mT,/ 只。
[0060]2.4試驗(yàn)分組試驗(yàn)分中藥組、攻菌組和空白對(duì)照組，每組30只雞。中藥組分別設(shè)預(yù)防組、治療組，編號(hào)為1-1、1-2等。
[0061]2.5用藥方法攻菌前、后均按2mL/kg體重分上下午兩次灌服，試驗(yàn)組提前I天灌藥，攻菌對(duì)照組與空白對(duì)照組，同步灌服等量生理鹽水。
[0062]2.6數(shù)據(jù)處理詳細(xì)記錄攻菌24h和48h累計(jì)死亡率。所有數(shù)據(jù)均以平均值土標(biāo)準(zhǔn)差表示，并統(tǒng) 計(jì)其差異性。
[0063]3 結(jié)果
[0064]3.1最早死亡時(shí)間預(yù)防效果1-1、1_2、攻菌對(duì)照均為攻菌后8h，其余各組均為攻菌后 24h ο
[0065]3.224h死亡率1_1組極顯著高于3_1組，1-2組與3_2組差異不顯著，1-2組、3_1組均極顯著低于攻菌對(duì)照組，3-2組顯著低于攻菌對(duì)照組。
[0066]3.396h存活率1_1組、1-2組均極顯著低于5_1組、5_2組，與攻毒對(duì)照組差異不顯著；5-1組、5-2組均極顯著高于攻菌對(duì)照組。
[0067]表2復(fù)方中藥體內(nèi)抗菌效果表(h、% )
[0068]
【權(quán)利要求】
1.一種防治雞大腸桿菌病的中草藥口服液，其特征是，由下述重量份的中草藥制成:生石膏28-32、千里光14-16、墨旱蓮14-16、側(cè)柏葉18-22、地錦草9-11和黨參9-11。
2.如權(quán)利要求1所述的一種防治雞大腸桿菌病的中草藥口服液，其特征是，由下述重量份的中草藥制成:生石膏30、千里光15、墨旱蓮15、側(cè)柏葉20、地錦草10和黨參10。
3.權(quán)利要求1或2所 述的中草藥口服液的生產(chǎn)工藝，其特征是， (1)藥物稱量:按上述重量份稱取各味中草藥，生石膏4層紗布單包； (2)第一次煎煮:生石膏與其余多味中草藥分別加溫水浸泡0.5-1.5小時(shí)；生石膏先煎25-35分鐘，再加其余中草藥煮沸25-35分鐘，過(guò)濾； (3)第二次煎煮:濾渣再加入溫水浸泡0.5-1.5小時(shí)，煮沸40-80分鐘，過(guò)濾，合并兩次濾液； (4)然后經(jīng)濃縮、澄清、精濾、防腐、灌裝，得到藥液。
【文檔編號(hào)】A61K36/47GK103977058SQ201410225687
【公開(kāi)日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年5月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月26日
【發(fā)明者】黃中利, 林樹(shù)乾, 宋敏訓(xùn), 趙增成, 傅劍, 李桂明, 馮敏燕 申請(qǐng)人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所