千菌花菌菇復配多糖粉及其制備方法
【專利摘要】千菌花菌菇復配多糖粉及其制備方法，屬于保健功能食品和藥品領域。其菌菇多糖組分分別為灰樹花，蛹蟲草，猴頭菇，姬松茸，香菇，白靈菇，白背木耳，雙孢蘑菇，茯苓。本發(fā)明提供的千菌花菌菇復配多糖粉對人體細胞的修復和人體免疫細胞保持活力提供了天然的活性營養(yǎng)成分，明顯改善人體微循環(huán)作用，且制備過程操作簡單，使用方便，作用效果顯著。
【專利說明】千菌花菌菇復配多糖粉及其制備方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明屬于保健功能食品和藥品【技術(shù)領域】，具體涉及千菌花菌菇復配多糖粉及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]由于現(xiàn)代人的飲食、生活習慣等的不合理，工作、生活環(huán)境的惡劣，導致現(xiàn)在越來越多的人處于健康與非健康之間的一種亞健康狀態(tài)。隨著中過老齡化程度的加劇，老年人口的規(guī)模越來越大，根據(jù)2000年11月底全國第五次人口普查顯示，65歲以上老年人口已達8811萬人，占總?cè)丝诘?.96%。影響我國人民群眾身體健康的常見慢性病主要有心腦血管疾病、糖尿病、惡性腫瘤、慢性呼吸系統(tǒng)疾病等。慢性病發(fā)生和流行與經(jīng)濟社會、生態(tài)環(huán)境、文化習俗和生活方式等因素密切相關(guān)。伴隨工業(yè)化、城鎮(zhèn)化、老齡化進程加快，我國慢性病發(fā)病人數(shù)快速上升，現(xiàn)有確診患者2.6億人，是重大的公共衛(wèi)生問題。慢性病病程長、流行廣、費用貴、致殘致死率高。慢性病導致的死亡已經(jīng)占到我國總死亡的85%，導致的疾病負擔已占總疾病負擔的70%，是群眾因病致貧返貧的重要原因，若不及時有效控制，將帶來嚴重的社會經(jīng)濟問題。目前，市場上各種保健品參差不齊，效果也不盡相同，天然有效的保健品是目前研究的重點方向。
[0003]國內(nèi)外專家均以研究證明:所有的大型真菌(食用菌)，都含有免疫調(diào)節(jié)“多糖”。真菌多糖不是一般的“糖”，它是一種活性高分子化合物，對人體有很好的免疫促進作用。千菌花是由九大珍品菌菇配伍而成，它們分別是灰樹花(免疫之王)，猴頭菇(山珍猴頭，海味燕窩)，姬松茸(巴西蘑菇)，白靈菇(阿魏側(cè)耳，阿魏菇)，白背木耳(黑木耳)，茯苓(四時神藥，)蛹蟲草(北冬蟲夏草，北蟲 草)，慶元香菇(產(chǎn)自“中國香菇城”)，雙孢蘑菇(洋蘑菇，二孢蘑菇)，這些珍品菌菇均含有優(yōu)質(zhì)的免疫促進多糖，千菌花的功效是基于各種珍品菌菇的免疫促進的疊加，遠遠高于其中單一菌菇的作用，對人體細胞的修復和人體免疫細胞保持活力提供了天然的活性營養(yǎng)成分，明顯改善人體內(nèi)微循環(huán)，能有效的調(diào)節(jié)改善免疫能力低下的人群。
[0004]千菌花不僅是一種保健食品，而且它的研制還基于“清補消下”的中醫(yī)理論，不僅科學，而且實用。清:清除體內(nèi)毒素。補:補充微量元素，增強免疫力。消:增強消化、吸收的功能。下:除宿便，除積食。
[0005]千菌花集九種極品菌菇之精華，經(jīng)科學的方法提取其中的多糖，屬于綠色天然的食品保健品，能有效的提高亞健康患者，老人，慢性病患者，患重病的人群等的細胞修復機能，促進他們的免疫機能的提高，延緩衰老，促進疾病的快速康復。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設計提供一種千菌花菌菇復配多糖粉及其制備方法的技術(shù)方案，該千菌花菌菇復配多糖粉由9種菌菇多糖粉按照中醫(yī)理論合理配伍，對人體細胞的修復和人體免疫細胞保持活力提供了天然的營養(yǎng)成分。特別適用于亞健康人群、老年人群、慢性疾病人群及各種患重癥疾病的人群在家調(diào)理身體的天然菌菇
養(yǎng)生產(chǎn)品。
[0007]所述的千菌花菌菇復配多糖粉，其特征在于由以下重量百分比的組分構(gòu)成:
灰樹花多糖5%-30%、蛹蟲草多糖5%-25%、猴頭菇多糖5%-20%、姬松茸多糖5%_20%、香菇
多糖5%-30%、白靈菇多糖5%-25%、白背木耳多糖5%-30%、雙孢蘑菇多糖5%_25%和茯苓多糖5%-20%。
[0008]所述的千菌花菌菇復配多糖粉，其特征在于由以下重量百分比的組分構(gòu)成:
灰樹花多糖10%-25%，蛹蟲草多糖8%-20%，猴頭菇多糖8%-15%’姬松茸多糖8%-15%’香
菇多糖10%-25%，白靈菇多糖8%-20%，白背木耳多糖10%-25%，雙孢蘑菇多糖8%-20%，茯苓多糖 8%-15%。
[0009]所述的千菌花菌菇復配多糖粉，其特征在于由以下重量百分比的組分構(gòu)成:
灰樹花多糖10%-18%，蛹蟲草多糖10%-15%，猴頭菇多糖10%-12%，姬松茸多糖10%_12%，
香菇多糖10%-18%，白靈菇多糖10%-15%，白背木耳多糖10%-18%，雙孢蘑菇多糖10%_15%，茯苓多糖10%-12%。
[0010]所述的千菌花菌菇復配多糖粉，其特征在于所述的灰樹花多糖由灰樹花細粉水提后醇提得到，所述的蛹蟲草多糖由蛹蟲草菌絲體粗粉水提得到，所述的猴頭菇多糖由猴頭菇粗粉水提后醇提得到，所述的姬松茸多糖由姬松茸粗粉醇提后水提得到，所述的香菇多糖由香菇粗粉水提后醇提得到，所述的白靈菇多糖由白靈菇粗粉醇提后水提得到，所述的白背木耳多糖由白背木耳粗粉水提后醇提得到，所述的雙孢蘑菇多糖由雙孢蘑菇粗粉水提后醇提得到，所述的茯苓多糖由茯苓粗粉水提后醇提得到。
[0011]所述的千菌花菌菇復配多糖粉的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟:
(O制備灰樹花多糖粉:取灰樹花細粉，加25-35倍重量的水，提取3-5小時，壓濾，加入1-2倍體積的95%乙醇醇沉，攪拌20-50分鐘，放置10-16小時，過濾，回收乙醇,沉淀加入適量水溶解，相對密度為0.8-1.2，再經(jīng)噴霧干燥，收集噴霧粉，過篩，得灰樹花多糖粉；
(2)制備蛹蟲草多糖粉:取蛹蟲草菌絲體粗粉，加15-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣再加6-8倍重量的水，提取1-2小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至相對密度為
1.09-1.1，再經(jīng)噴霧干燥，過篩，得蛹蟲草多糖粉；
(3)制備猴頭菇多糖粉:取猴頭菇粗粉，加入20-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣加入6-8倍重量的水，提取1-2小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至相對密度為1.15-1.16，加入3-5倍重量的95%乙醇醇沉，攪拌，靜置10-15小時，過濾，回收乙醇，經(jīng)噴霧干燥，過篩，得猴頭菇多糖粉；
(4)制備姬松茸多糖粉:取姬松茸粗粉，加入5-10倍重量的60%-85%乙醇，提取4-6小時,過濾，回收乙醇,濾渣加入15-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣再加入6-8倍重量的水，提取1-2小時，過濾，三次提取液合并，濃縮至密度為1.09-1.1，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得姬松茸多糖粉；
(5)制備香菇多糖粉:取香菇粗粉，加20-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣加入6-8倍重量的水，提取1-2小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.15-1.18，加入3-5倍重量的95%乙醇醇沉，攪拌20-50分鐘，靜置8-16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得香菇多糖粉；
(6)制備白靈菇多糖粉:取白靈菇粗粉，加入5-10倍重量的60%-85%乙醇，提取4-6小時,過濾，回收乙醇,濾渣加入15-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣再加入6-8倍重量的水，提取1-2小時，過濾，三次提取液合并，濃縮至密度為1.09-1.1，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得白靈菇多糖粉；
(7)制備白背木耳多糖粉:取白背木耳粗粉，加20-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣加入6-8倍重量的水，提取1-3小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.15-1.18，加入3-5倍體積的95%乙醇醇沉，攪拌20-40分鐘，靜置8_16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得白背木耳多糖粉；
(8)制備雙孢蘑菇多糖:取雙孢蘑菇粗粉，加20-25倍重量的水，提取1-4小時，過濾，濾渣加入6-8倍重量的水，提取1-3小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.15-1.18，加入3-5倍重量的95%乙醇醇沉，攪拌20-50分鐘，靜置8_16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得雙孢蘑菇多糖粉；
(9)制備茯苓多糖粉:取茯苓粗粉，加20-30倍重量的水，提取1-4小時，過濾，濾渣加入6-10倍重量的水，提取1-3小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.15-1.18，加入3_5倍重量的95%乙醇醇沉，攪拌20-50分鐘，靜置8-16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得茯苓多糖粉；
(10)將所得的灰樹花多糖粉、蛹蟲草多糖粉，猴頭菇多糖粉、姬松茸多糖粉、香菇多糖粉、白靈菇多糖粉、白背木耳多糖粉、雙孢蘑菇多糖粉、茯苓多糖粉按所述的重量百分比稱取混勻，按常規(guī)工藝制成市場上可接受的劑型。
[0012]所述的千菌花菌菇復配多糖粉的制備方法，其特征在于所述的劑型為粉劑。
[0013]本發(fā)明中的原料 灰樹花、香菇產(chǎn)自“中國香菇城”慶元，生產(chǎn)基地均通過歐盟有機認證，有機證號:N0.110483、N0.110715。同時，也可以采用其它產(chǎn)地的灰樹花和香菇。
[0014]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明按照君臣佐使的中醫(yī)理論進行復配設計，本發(fā)明復配的原料灰樹花、蛹蟲草多糖粉具有提供人體免疫力、抑制癌細胞生長、防止癌細胞轉(zhuǎn)移的作用，為君藥；猴頭菇、姬松茸多糖粉具有抗腫瘤、修復細胞、增強免疫力、提供機體耐氧能力、調(diào)節(jié)人體酸堿平衡的功效，為臣藥；香菇、白靈菇、白背木耳、雙孢蘑菇多糖粉均能在一定程度上提高機體的免疫能力，具有一定的抗癌活性，經(jīng)常食用能改善神經(jīng)功能，降壓、降血脂、抗衰老等，為佐藥；茯苓多糖粉能增強機體免疫功能，具有明顯的抗腫瘤作用，經(jīng)常食用可健脾祛濕，助消化、壯體質(zhì)，為使藥。以上諸原料經(jīng)合理配比，可協(xié)同增效，達到提高機體免疫能力，預防各類疾病，調(diào)理身體機能的目的，并且能明顯改善人體微循環(huán)作用。
【具體實施方式】
[0015]以下結(jié)合實施例來進一步說明本發(fā)明。
[0016]實施例1:千菌花菌菇復配多糖粉制備
(1)灰樹花多糖粉的制備:將灰樹花細粉IOOKg置于30倍水中提取4小時，過濾，加入
1.5倍95%乙醇(體積比)醇沉，攪拌30分鐘，放置12小時，過濾，回收乙醇，沉淀加入適量水溶解至相對密度為1.02，經(jīng)噴霧干燥，收集噴霧粉，過篩，得灰樹花多糖粉；
(2)蛹蟲草多糖粉的制備:取蛹蟲草菌絲體粗粉lOOKg，加20倍水提取2小時，過濾，濾渣再加7倍量水，提取1.5小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.0,經(jīng)噴霧干燥，過篩，得蛹蟲草多糖粉；(3)猴頭菇多糖粉的制備:取猴頭菇粗粉IOOKg置于22倍水中提取2小時，過濾，濾渣再加入7倍量水，提取1.5小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至相對密度1.15，加入4倍95%的乙醇(質(zhì)量比)醇沉，攪拌，靜置12小時，過濾，回收乙醇，經(jīng)噴霧干燥，過篩，得猴頭菇多糖粉；
(4)姬松茸多糖粉的制備:取姬松茸粗粉lOOKg，加入7倍量75%乙醇提取5小時，過濾，回收乙醇，濾渣加入20倍水，提取2小時，過濾，濾渣再加入7倍水提取1.5小時，過濾，三次提取液合并，濃縮至密度為1.0，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得姬松茸多糖粉；
(5)香菇多糖粉的制備:取香菇粗粉IOOKg置于22倍水中提取2小時，過濾，濾渣加入7倍水，提取1.5小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至相對密度為1.16，加入4倍95%乙醇醇沉，攪拌30分鐘，靜置12小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得香菇多糖粉；
(6)白靈菇多糖粉:取白靈菇粗粉lOOKg，加入7倍量75%乙醇，提取5小時，過濾，回收乙醇，濾渣加入20倍水，提取2小時，過濾，濾渣再加入7倍水，提取1.5小時，過濾，三次提取液合并，濃縮至密度為1.0，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得白靈菇多糖粉；
(7)白背木耳多糖粉:取白背木耳粗粉IOOKg加20倍水，提取2小時，過濾，濾渣加入7倍水，提取1.5小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.16，加入4倍95%乙醇醇沉，攪拌30分鐘，靜置12小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得白背木耳多糖粉；
(8)雙孢蘑菇多糖:取雙孢蘑菇粗粉IOOKg加22倍水，提取2小時，過濾，濾渣加入7倍7K，提取1.5小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.16，加入4倍95%乙醇(質(zhì)量比)醇沉，攪拌30分鐘，靜置12小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得雙孢蘑菇多糖粉； (9)茯苓多糖粉:取茯苓粗粉IOOKg加25倍水，提取3小時，過濾，濾渣加入7倍水，提取2小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.16，加入4倍95%乙醇(質(zhì)量比)醇沉，攪拌30分鐘，靜置12小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得茯苓多糖粉；
(10)按灰樹花多糖粉15%，蛹蟲草多糖粉13%，猴頭菇多糖粉8%、姬松茸多糖粉12%、香菇多糖粉14%、白靈菇多糖粉8%、白背木耳多糖粉10%、雙孢蘑菇多糖粉12%、茯苓多糖粉8%，將各組分稱取后，混合均勻，制成粉劑，得到千菌花菌菇復配多糖粉。
[0017]實施例2:千菌花菌菇復配多糖粉制備
(1)灰樹花多糖粉的制備:將灰樹花細粉IOOKg置于25倍水中提取5小時，過濾，加入I倍95%乙醇(體積比)醇沉，攪拌50分鐘，放置10小時，過濾，回收乙醇,沉淀加入適量水溶解至相對密度為0.8，經(jīng)噴霧干燥，收集噴霧粉，過篩，得灰樹花多糖粉；
(2)蛹蟲草多糖粉的制備:取蛹蟲草菌絲體粗粉lOOKg，加15倍水提取3小時，過濾，濾渣再加6倍量水，提取2小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.09，經(jīng)噴霧干燥，過篩，得蛹蟲草多糖粉；
(3)猴頭菇多糖粉的制備:取猴頭菇粗粉IOOKg置于20倍水中提取3小時，過濾，濾渣再加入8倍量水，提取I小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至相對密度1.16，加入5倍95%的乙醇(質(zhì)量比)醇沉，攪拌，靜置10小時，過濾，回收乙醇，經(jīng)噴霧干燥，過篩，得猴頭菇多糖粉；
(4)姬松茸多糖粉的制備:取姬松茸粗粉lOOKg，加入5倍量85%乙醇提取6小時，過濾，回收乙醇，濾渣加入25倍水，提取3小時，過濾，濾渣再加入6倍水提取2小時，過濾，三次提取液合并，濃縮至密度為1.09，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得姬松茸多糖粉；(5)香菇多糖粉的制備:取香菇粗粉IOOKg置于20倍水中提取3小時，過濾，濾渣加入8倍水，提取2小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至相對密度為1.18，加入5倍95%乙醇醇沉，攪拌20分鐘，靜置8小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得香菇多糖粉；
(6)白靈菇多糖粉:取白靈菇粗粉lOOKg，加入10倍量60%乙醇，提取6小時，過濾，回收乙醇，濾渣加入15倍水，提取3小時，過濾，濾渣再加入8倍水，提取I小時，過濾，三次提取液合并，濃縮至密度為1.09，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得白靈菇多糖粉；
(7)白背木耳多糖粉:取白背木耳粗粉IOOKg加25倍水，提取3小時，過濾，濾渣加入8倍水，提取3小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.15，加入5倍95%乙醇醇沉，攪拌40分鐘，靜置16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得白背木耳多糖粉；
(8)雙孢蘑菇多糖:取雙孢蘑菇粗粉IOOKg加25倍水，提取4小時，過濾，濾渣加入8倍水，提取I小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.15，加入5倍95%乙醇(質(zhì)量比)醇沉，攪拌50分鐘，靜置8小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得雙孢蘑菇多糖粉；
(9)茯苓多糖粉:取茯苓粗粉IOOKg加30倍水，提取4小時，過濾，濾渣加入10倍水，提取I小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.15，加入5倍95%乙醇(質(zhì)量比)醇沉，攪拌50分鐘，靜置8小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得茯苓多糖粉；
(10)按灰樹花多糖粉30%，蛹蟲草多糖粉20%,猴頭菇多糖粉5%、姬松茸多糖粉5%、香菇多糖粉10%、白靈菇多糖粉15%、白背木耳多糖粉5%、雙孢蘑菇多糖粉5%、茯苓多糖粉5%，將各組分稱取后，混合均勻，制成粉劑，得到千菌花菌菇復配多糖粉。
[0018]實施例3:千菌花菌菇復配多糖粉制備
(1)灰樹花多糖粉的制備:將灰樹花細粉IOOKg置于35倍水中提取3小時，過濾，加入2倍95%乙醇(體積比)醇沉，攪拌20分鐘，放置16小時，過濾，回收乙醇,沉淀加入適量水溶解至相對密度為1.2，經(jīng)噴霧干燥，收集噴霧粉，過篩，得灰樹花多糖粉；
(2)蛹蟲草多糖粉的制備:取蛹蟲草菌絲體粗粉lOOKg，加25倍水提取I小時，過濾，濾渣再加8倍量水，提取I小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.1，經(jīng)噴霧干燥，過篩，得蛹蟲草多糖粉；
(3)猴頭菇多糖粉的制備:取猴頭菇粗粉IOOKg置于25倍水中提取I小時，過濾，濾渣再加入6倍量水，提取2小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至相對密度1.15，加入3倍95%的乙醇(質(zhì)量比)醇沉，攪拌，靜置15小時，過濾，回收乙醇，經(jīng)噴霧干燥，過篩，得猴頭菇多糖粉；
(4)姬松茸多糖粉的制備:取姬松茸粗粉lOOKg，加入10倍量60%乙醇提取4小時，過濾，回收乙醇，濾渣加入15倍水，提取I小時，過濾，濾渣再加入8倍水提取I小時，過濾，三次提取液合并，濃縮至密度為1.1，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得姬松茸多糖粉；
(5)香菇多糖粉的制備:取香菇粗粉IOOKg置于25倍水中提取I小時，過濾，濾渣加入6倍水，提取I小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至相對密度為1.15，加入3倍95%乙醇醇沉，攪拌50分鐘，靜置16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得香菇多糖粉；
(6)白靈菇多糖粉:取白靈菇粗粉lOOKg，加入5倍量85%乙醇，提取4小時，過濾，回收乙醇，濾渣加入25倍水，提取I小時，過濾，濾渣再加入6倍水，提取2小時，過濾，三次提取液合并，濃縮至密度為1.1，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得白靈菇多糖粉；
(7)白背木耳多糖粉:取白背木耳粗粉IOOKg加22倍水，提取I小時，過濾，濾渣加入6倍水,提取I小時,過濾,兩次濾液合并,濃縮至密度為1.18，加入3倍95%乙醇醇沉，攪拌20分鐘，靜置8小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得白背木耳多糖粉；
(8)雙孢蘑菇多糖:取雙孢蘑菇粗粉IOOKg加20倍水，提取I小時，過濾，濾渣加入6倍水，提取3小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.18，加入3倍95%乙醇(質(zhì)量比)醇沉，攪拌20分鐘，靜置16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得雙孢蘑菇多糖粉；
(9)茯苓多糖粉:取茯苓粗粉IOOKg加20倍水，提取I小時，過濾，濾渣加入6倍水，提取3小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.18，加入3倍95%乙醇(質(zhì)量比)醇沉，攪拌20分鐘，靜置16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得茯苓多糖粉；
(10)按灰樹花多糖粉15%，蛹蟲草多糖粉15%，猴頭菇多糖粉10%、姬松茸多糖粉10%、香菇多糖粉10%、白靈菇多糖粉10%、白背木耳多糖粉10%、雙孢蘑菇多糖粉10%、茯苓多糖粉10%，將各組分稱取后，混合均勻，制成粉劑，得到千菌花菌菇復配多糖粉。
[0019]實施例4細胞生物學實驗
1.實驗方法
對實施例1中配比的千菌花菌菇復配多糖粉進行細胞活性評價。
[0020]細胞活性評價指標:細胞抑制率(％)
細胞抑制率=(1-樣品組吸光度A值/空白對照組)X 100%
2.實驗步驟
2.1細胞培養(yǎng)
實驗選用人肝癌細胞H印G2、人非小細胞肺癌細胞A549、人胃癌細胞SGC、BGC:培養(yǎng)于含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液，37°C、5%C02和100%飽和濕度條件下孵育培養(yǎng)，細胞每2天傳代I次。傳代前先用D-Hanks液洗滌。2次，0.25%胰蛋白酶37°C條件下消化約3-5min, 1:2或1:3傳代分瓶培養(yǎng)。
[0021]2.2細胞毒活性測試
用MTT法測試目標化合物對人肝癌細胞H印G2、人胃癌細胞SGC/BGC、人乳腺癌細胞MCF-7的體外抗腫瘤活性。取處于指數(shù)生長期的狀態(tài)良好的細胞，胰蛋白酶消化，使貼壁細胞脫落，制成細胞懸液。將細胞懸液接種后，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，加入受試化合物，混合物用雙蒸水溶解后，離心，滅菌，調(diào)整濃度分別為010625，01125，0125，015，112mg/mL，培養(yǎng)72 h.加入MTT，培養(yǎng)箱中反應.吸去上清液，加入DMS0，在平板搖床上振搖.用酶聯(lián)免疫檢測儀在波長570 nm處測定每孔的吸收度，并計算細胞抑制率
2.3細胞培養(yǎng)上清液中NO的水平
采用經(jīng)典的Griess反應，利用NO檢測試劑盒檢測細胞上清液中的NO穩(wěn)定氧化代謝產(chǎn)物亞硝酸鹽(N02-)水平。依照實驗分組細胞培養(yǎng)72h后，取細胞培養(yǎng)上清液50 μ L加入到96孔平底酶標板中，嚴格按照試劑盒說明書操作，540 nm處用自動酶聯(lián)免疫標記儀測定吸光度值。根據(jù)標準品繪制標準曲線，求出所測樣品的對應濃度。
[0022]3.實驗結(jié)果
3.1樣品對細胞增值活性的變化
表1樣品不同濃度對不同的細胞抑制率
【權(quán)利要求】
1.千菌花菌菇復配多糖粉，其特征在于由以下重量百分比的組分構(gòu)成: 灰樹花多糖5%-30%、蛹蟲草多糖5%-25%、猴頭菇多糖5%-20%、姬松茸多糖5%_20%、香菇多糖5%-30%、白靈菇多糖5%-25%、白背木耳多糖5%-30%、雙孢蘑菇多糖5%_25%和茯苓多糖5%-20%。
2.如權(quán)利要求1所述的千菌花菌菇復配多糖粉，其特征在于由以下重量百分比的組分構(gòu)成: 灰樹花多糖10%-25%，蛹蟲草多糖8%-20%，猴頭菇多糖8%-15%’姬松茸多糖8%-15%’香菇多糖10%-25%，白靈菇多糖8%-20%，白背木耳多糖10%-25%，雙孢蘑菇多糖8%-20%，茯苓多糖 8%-15%。
3.如權(quán)利要求1所述的千菌花菌菇復配多糖粉，其特征在于由以下重量百分比的組分構(gòu)成: 灰樹花多糖10%-18%，蛹蟲草多糖10%-15%，猴頭菇多糖10%-12%，姬松茸多糖10%_12%，香菇多糖10%-18%，白靈菇多糖10%-15%，白背木耳多糖10%-18%，雙孢蘑菇多糖10%_15%，茯苓多糖10%-12%。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的千菌花菌菇復配多糖粉，其特征在于所述的灰樹花多糖由灰樹花細粉水提后醇提得到，所述的蛹蟲草多糖由蛹蟲草菌絲體粗粉水提得到，所述的猴頭菇多糖由猴頭菇粗粉水提后醇提得到，所述的姬松茸多糖由姬松茸粗粉醇提后水提得到，所述的香菇多糖由香 菇粗粉水提后醇提得到，所述的白靈菇多糖由白靈菇粗粉醇提后水提得到，所述的白背木耳多糖由白背木耳粗粉水提后醇提得到，所述的雙孢蘑菇多糖由雙孢蘑菇粗粉水提后醇提得到，所述的茯苓多糖由茯苓粗粉水提后醇提得到。
5.如權(quán)利要求1、2或3所述的千菌花菌菇復配多糖粉的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟: (O制備灰樹花多糖粉:取灰樹花細粉，加25-35倍重量的水，提取3-5小時，壓濾，加入1-2倍體積的95%乙醇醇沉，攪拌20-50分鐘，放置10-16小時，過濾，回收乙醇,沉淀加入適量水溶解，相對密度為0.8-1.2，再經(jīng)噴霧干燥，收集噴霧粉，過篩，得灰樹花多糖粉； (2)制備蛹蟲草多糖粉:取蛹蟲草菌絲體粗粉，加15-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣再加6-8倍重量的水，提取1-2小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至相對密度為.1.09-1.1，再經(jīng)噴霧干燥，過篩，得蛹蟲草多糖粉； (3)制備猴頭菇多糖粉:取猴頭菇粗粉，加入20-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣加入6-8倍重量的水，提取1-2小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至相對密度為1.15-1.16，加入3-5倍重量的95%乙醇醇沉，攪拌，靜置10-15小時，過濾，回收乙醇，經(jīng)噴霧干燥，過篩，得猴頭菇多糖粉； (4)制備姬松茸多糖粉:取姬松茸粗粉，加入5-10倍重量的60%-85%乙醇，提取4-6小時,過濾，回收乙醇,濾渣加入15-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣再加入6-8倍重量的水，提取1-2小時，過濾，三次提取液合并，濃縮至密度為1.09-1.1，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得姬松茸多糖粉； (5)制備香菇多糖粉:取香菇粗粉，加20-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣加入6-8倍重量的水，提取1-2小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.15-1.18，加入3-5倍重量的95%乙醇醇沉，攪拌20-50分鐘，靜置8-16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得香菇多糖粉；(6)制備白靈菇多糖粉:取白靈菇粗粉，加入5-10倍重量的60%-85%乙醇，提取4-6小時,過濾，回收乙醇,濾渣加入15-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣再加入6-8倍重量的水，提取1-2小時，過濾，三次提取液合并，濃縮至密度為1.09-1.1，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得白靈菇多糖粉； (7)制備白背木耳多糖粉:取白背木耳粗粉，加20-25倍重量的水，提取1-3小時，過濾，濾渣加入6-8倍重量的水，提取1-3小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.15-1.18，加入3-5倍體積的95%乙醇醇沉，攪拌20-40分鐘，靜置8_16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得白背木耳多糖粉； (8)制備雙孢蘑菇多糖:取雙孢蘑菇粗粉，加20-25倍重量的水，提取1-4小時，過濾，濾渣加入6-8倍重量的水，提取1-3小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.15-1.18，加入3-5倍重量的95%乙醇醇沉，攪拌20-50分鐘，靜置8_16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得雙孢蘑菇多糖粉； (9)制備茯苓多糖粉:取茯苓粗粉，加20-30倍重量的水，提取1-4小時，過濾，濾渣加入6-10倍重量的水，提取1-3小時，過濾，兩次濾液合并，濃縮至密度為1.15-1.18，加入3-5倍重量的95%乙醇醇沉，攪拌20-50分鐘，靜置8-16小時，經(jīng)噴霧干燥、過篩，得茯苓多糖粉； (10)將所得的灰樹花多糖粉、蛹蟲草多糖粉，猴頭菇多糖粉、姬松茸多糖粉、香菇多糖粉、白靈菇多糖粉、白背木耳多糖粉、雙孢蘑菇多糖粉、茯苓多糖粉按所述的重量百分比稱取混勻，按常規(guī)工藝制成市場上可接受的劑型。
6.如權(quán)利要求5所述的千菌花菌菇復配多糖粉的制備方法，其特征在于所述的劑型為粉劑。
【文檔編號】A61K9/14GK103989699SQ201410222227
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月23日
【發(fā)明者】徐財泉 申請人:浙江方格藥業(yè)有限公司