Sb505124在制備治療軟骨損傷的藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】SB505124在制備治療軟骨損傷的藥物中的應(yīng)用，涉及一種SB505124在制備治療軟骨損傷的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的效果在于：SB505124可以顯著的提高軟骨增長速率。用SB505124制備治療軟骨損傷的藥物，促進軟骨再生的效果顯著。
【專利說明】SB505124在制備治療軟骨損傷的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種SB505124在制備治療軟骨損傷的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]由于骨病、衰老、創(chuàng)傷等導(dǎo)致的軟骨缺損常見于臨床病例中，對于這些患者，軟骨的缺損對其以后的正常工作生活會造成一系列的影響，嚴(yán)重的甚至可以導(dǎo)致癱瘓，以致使患者失去自理能力。目前解決軟骨缺損這一問題最有效的方法是對缺損軟骨進行人工代替，而臨床上現(xiàn)有的替代材料主要是一些不可降解或可降解的生物材料，利用這些材料來修復(fù)缺損軟骨都有其缺陷。例如，不可降解的材料會引起機體的排異反應(yīng)，而可降解材料其降解產(chǎn)物又會對機體造成不良反應(yīng)。1984年瑞典醫(yī)學(xué)家Peterson等首次報道在兔關(guān)節(jié)軟骨缺損模型中，用可吸收縫合線將自體骨膜縫合于軟骨缺損周緣，然后將自體軟骨細胞懸液注入缺損部位，術(shù)后16周檢測證實關(guān)節(jié)軟骨缺損被透明軟骨修復(fù)。1987年瑞典哥德堡醫(yī)療中心Brittberg等報道采用該技術(shù)成功治療人關(guān)節(jié)軟骨缺損，這為隨后深入開展的軟骨組織工程推廣應(yīng)創(chuàng)造了有利條件。然而自體軟骨細胞卻不易獲得。
[0003]轉(zhuǎn)化生長因子-β(Transforming growth factor β , TGF-β )是新近發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)細胞生長和分化的一個超家族，TGF-β超家族包括TGF-β、生長分化因子(Growth anddifferentiation factor, GDF)、Nodal、活化素(Activin)和抑制素(Inhibin)等 30 多個成員。TGF-β信號傳導(dǎo)通路為=TGF-P在細胞表面與II型受體(TPRII)、I型受體(ΤβΚΙ，又稱ALK5)形成一個雙二聚體受體復(fù)合物，在這一過程中，III型受體(TiiRIII)也起到一定輔助作用。II型受體磷酸化激活I(lǐng)型受體，進而使得I型受體磷酸化其連接的Smad蛋白分子(Smad2/3)并釋放到胞漿中，與Smad4蛋白形成復(fù)合物轉(zhuǎn)移到細胞核內(nèi)發(fā)揮信號作用。因此，有很多人提出利用TGF-β抑制劑來治療和預(yù)防各種TGF-β參與的疾病。其中SB505124是一種TGF-β I型受體抑制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種SB505124在制備治療軟骨損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明SB505124在制備治療軟骨損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0006]SB505124促進軟骨再生的試驗，具體如下:
[0007]取胚胎發(fā)育14.5天的小鼠前肢的跖骨，去除骨膜，并用II型膠原酶在室溫下處理2分鐘,之后培養(yǎng)于組織培養(yǎng)基中，于含5 % CO2、37°C的溫箱中培養(yǎng)。將開始培養(yǎng)的日期記為培養(yǎng)第O天。在培養(yǎng)第I天，將跖骨分為5組，將5組跖骨分別置于含有不同濃度SB505124的組織培養(yǎng)基中培養(yǎng)，之后每天更換一次培養(yǎng)基。對軟骨進行照相觀察，并且利用ScionImage軟件分析軟骨區(qū)域大小。
[0008]隨著培養(yǎng)時間的延長，與對照組相比，經(jīng)過不同計量SB505124處理的軟骨組織不斷增大，并且在15.0 μ M濃度培養(yǎng)基中最大。利用第7天的軟骨面積與第I天的各組進行對比獲得軟骨增大率，15.0 μ M濃度SB505124處理的軟骨增大294.122±5.92499，其增大率為各濃度中最多。結(jié)果表明，SB505124可以顯著的提高軟骨增長速率，促進軟骨再生。
[0009]本發(fā)明的效果在于:用SB505124制備治療軟骨損傷的藥物，促進軟骨再生的效果顯著。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為實施例1中培養(yǎng)第I天各組跖骨軟骨區(qū)域生長狀態(tài)比較圖；圖2為實施例1中培養(yǎng)第4天各組跖骨軟骨區(qū)域生長狀態(tài)比較圖；圖3為實施例1中培養(yǎng)第7天各組跖骨軟骨區(qū)域生長狀態(tài)比較圖；圖4為實施例1中培養(yǎng)第11天各組跖骨軟骨區(qū)域生長狀態(tài)比較圖；圖5為培養(yǎng)第7天的各組軟骨與第I天的相比增大率的柱狀圖。
【具體實施方式】
[0011]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
[0012]實施例1:
[0013]SB505124促進軟骨再生的試驗，具體如下:
[0014]一、取胚胎發(fā)育14 .5天的小鼠前肢的跖骨，去除骨膜，并用II型膠原酶在室溫下處理2分鐘，之后培養(yǎng)于500 μ I組織培養(yǎng)基中，于含5% CO2、37°C的溫箱中培養(yǎng)。將開始培養(yǎng)的日期記為培養(yǎng)第O天。所述組織培養(yǎng)基由500 μ I a -modified基礎(chǔ)培養(yǎng)基、0.05mg/ml維生素C、0.25g/ml 二性霉素、ΙπιΜβ甘油磷酸酯和體積濃度為0.2%的胎牛血清組成。
[0015]二、在培養(yǎng)24h后記為培養(yǎng)第I天，在培養(yǎng)第I天，將跖骨分為5組，然后將5組跖骨分別置于含有不同濃度SB505124的組織培養(yǎng)基中培養(yǎng)，5種濃度分別為0、0.5μΜ、1.5 μ Μ、4.5 μ M和15.0 μ Μ，其中沒有添加SB505124的為對照組，其他4組為實驗組，之后每天更換一次培養(yǎng)基。
[0016]三、在培養(yǎng)的第1、4、7、11天分別在普通光學(xué)顯微鏡下對軟骨進行照相觀察，保證每次拍照時顯微鏡的放大倍數(shù)相同，然后利用Scion Image軟件分析軟骨區(qū)域大小。
[0017]所述a -modified基礎(chǔ)培養(yǎng)基為購買自Invitrogen公司的a -modifiedessential medium without nucleosides, 二性霉素購買自 Invitrogen 公司的Fungizone,β甘油磷酸酯購買自Merck公司的β -glycerophosphate,胎牛血清購買自Gibco公司，SB505124購買自Simga公司。
[0018]結(jié)果分析:
[0019]實驗組與對照組跖骨軟骨區(qū)域生長狀態(tài)見圖1至圖4所示，圖1為培養(yǎng)的第I天各組跖骨軟骨區(qū)域生長狀態(tài)比較圖，圖2為培養(yǎng)的第4天各組跖骨軟骨區(qū)域生長狀態(tài)比較圖，圖3為培養(yǎng)的第7天各組跖骨軟骨區(qū)域生長狀態(tài)比較圖，圖4為培養(yǎng)的第11天各組跖骨軟骨區(qū)域生長狀態(tài)比較圖。
[0020]由圖1-4可知，在經(jīng)SB505124處理第I天，實驗組與對照組跖骨軟骨區(qū)域大小基本相等；而培養(yǎng)第7天，經(jīng)SB505124處理跖骨軟骨普遍大于對照組，其中SB505124濃度15.0 μ M的組最為顯著，培養(yǎng)第11天，同樣也為SB505124濃度15.0 μ M的組處理的跖骨軟骨區(qū)域生長最顯著。
[0021]利用第7天的各組跖骨軟骨區(qū)域面積與第I天的進行對比計算軟骨增大率，如表1所示，經(jīng)各濃度SB505124處理跖骨軟骨增大率均顯著高于對照組，其中經(jīng)15.0 μ MSB505124處理的跖骨軟骨增大率最大，為294.1222±5.92449。培養(yǎng)第7天的各組軟骨與第I天的相比增大率的柱狀圖如圖5所示。
[0022]結(jié)論:
[0023]本發(fā)明對SB505124的作用機制進行探究，SB505124的作用機制是阻斷TGF-β信號。TGF-β 超家族大體上可分為 TGF-β/Activin/Nodal 和 BMP/⑶F/MIS(Muellerianinhibiting substance)兩個亞家族,其中，TGF-β超家族信號通路的配體、配體拮抗分子、受體、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子均在軟骨內(nèi)成骨過程發(fā)揮各自獨特的作用，參與調(diào)控軟骨細胞的譜系分化、增殖、成熟、凋亡和礦化，BMP信號能起始間充質(zhì)細胞向軟骨細胞分化并維持軟骨細胞的特性，在軟骨發(fā)生過程中其主導(dǎo)作用。SB505124是TGF- β I型受體抑制劑，經(jīng)SB505124處理前軟骨細胞ATD5可以阻斷細胞內(nèi)源性TGF-β信號，進而抑制軟骨細胞的分化、細胞外基質(zhì)合成。
[0024]SB505124，作為一種能溶于水的TGF-β抑制劑，可以促進離體培養(yǎng)的小鼠前肢跖骨軟骨再生，效果顯著。可用SB505124制備治療軟骨損傷的藥物。
[0025]表1
[0026]
【權(quán)利要求】
1.SB505124在制備治療軟骨損傷的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/4439GK103961352SQ201410200906
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年5月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月13日
【發(fā)明者】顧寧, 胡海龍, 郭倩, 毛軻 申請人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)