抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的組合藥物、藥物制劑以及檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的組合藥物、藥物制劑以及檢測方法。所述方法包括：選用指數(shù)生長期的肺癌細(xì)胞，采用由組分1和組分2組成的組合藥物對所述肺癌細(xì)胞進(jìn)行處理組成多組對比樣品，其中，多組樣品的組分1的濃度不同，多組樣品的組分2的濃度不同，所述組分1為3-[2,4-雙((3S)-3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5,6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺，所述組分2為ABT737，所述組分1在肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中作為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白的抑制劑；采用胰酶消化所述肺癌細(xì)胞，并用不含胎牛血清的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)后，對細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋；將細(xì)胞懸液加入至Transwell小室，并加入含胎牛血清的培養(yǎng)基至Transwell小室下方的培養(yǎng)孔里，在37℃和5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)后，用甲紫染色，顯微鏡下拍照檢測所述肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
【專利說明】抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的組合藥物、藥物制劑以及檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)療和醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的組合藥物，一種抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的藥物制劑以及一種肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肺癌是一種常見的肺部惡性腫瘤，惡性腫瘤是危害人類生命健康的細(xì)胞性疾病，腫瘤細(xì)胞從生物體內(nèi)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性細(xì)胞，其形態(tài)、功能、代謝和增殖等都會發(fā)生深刻變化，可以看作是細(xì)胞的異常分化導(dǎo)致的其具有永生性。
[0003]絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管粘膜上皮，近年來，隨著吸煙和各種環(huán)境因素的影響，肺癌的發(fā)病率和死亡率逐年增長其死亡率已占癌癥死亡率之首，世界各國特別是工業(yè)發(fā)達(dá)國家，肺癌的發(fā)病率和病死率均迅速上升，死于癌病的男性病人中肺癌已居首位。目前，市場上沒有非常好的藥物抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。如何抑制腫瘤細(xì)胞的無限轉(zhuǎn)移能力，是腫瘤治療中一個(gè)首要問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種新型的抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制。
[0005]為了解決上述問題，本發(fā)明公開了一種抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的組合藥物，所述肺癌細(xì)胞選自非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549，所述組合藥物由3-[2，4-雙((3S)_3_甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺以及ABT737組成，所述3-[2，4-雙((3S)-3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺在肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中作為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白的抑制劑。
[0006]優(yōu)選地，所述組合藥物中所述3-[2，4_雙((3S)-3_甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5, 6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺與所述ABT737的摩爾濃度比為1:1。
[0007]本發(fā)明還公開了一種抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的藥物制劑，以抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的組合藥物作為活性成分，并輔以可接受的要用載體；
[0008]所述肺癌細(xì)胞選自非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549 ；
[0009]所述組合藥物由3- [2，4-雙((3S) _3_甲基嗎啉_4_基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺以及ABT737組成，所述3- [2，4-雙((3S) -3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺在肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中作為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白的抑制劑。
[0010]優(yōu)選地，所述組合藥物中所述3-[2，4-雙((3S)-3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺與所述ABT737的摩爾濃度比為1:1。
[0011]優(yōu)選地，所述制劑 為口服液、膠丸、口服混懸液、固體分散體、膠囊、緩釋劑、顆粒劑、片劑、注射劑、軟膏、貼劑或植入劑。
[0012]本發(fā)明還公開了一種肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的檢測方法，所述肺癌細(xì)胞選自非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549,所述方法包括:[0013]選用指數(shù)生長期的肺癌細(xì)胞，采用由組分I和組分2組成的組合藥物對所述肺癌細(xì)胞進(jìn)行處理組成多組對比樣品，其中，多組樣品的組分I的濃度不同，多組樣品的組分2的濃度不同，所述組分I為3-[2，4-雙((3S)-3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6_e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺，所述組分2為ABT737，所述組分I在肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中作為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白的抑制劑；
[0014]采用胰酶消化所述肺癌細(xì)胞，并用不含胎牛血清的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
[0015]進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)后，對細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋；
[0016]將細(xì)胞懸液加入至Transwell小室,并加入含胎牛血清的培養(yǎng)基至Transwell小室下方的培養(yǎng)孔里，在37°C和5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)后，用甲紫染色，顯微鏡下拍照檢測所述肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
[0017]優(yōu)選地，所述組合藥物中所述3_[2，4-雙((3S)-3_甲基嗎啉_4_基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺與所述ABT737的摩爾濃度比為1:1。
[0018]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明包括以下優(yōu)點(diǎn):
[0019]依據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，采用3-[2，4_雙((3S)-3-甲基嗎啉_4_基)吡啶并[5，6_e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺以及ABT737組成的組合藥物作用于選自非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549的肺癌細(xì)胞，通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明創(chuàng)新提出的組合藥物聯(lián)合用藥后較之兩種藥物單獨(dú)處理，其對肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力有顯著協(xié)同抑制作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1是本發(fā)明的一種肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的檢測實(shí)施例的流程圖；
[0021]圖2是本發(fā)明示例中不同濃度的組合藥物對肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的的檢測結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0022]為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0023]細(xì)胞遷移(cell migration)的基本原理是細(xì)胞在接收到遷移信號或感受到某些物質(zhì)的濃度梯度后而產(chǎn)生的移動。遷移過程中細(xì)胞不斷重復(fù)著向前方伸出突足，然后牽拉胞體的循環(huán)過程。癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移是指轉(zhuǎn)移是指腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位侵入淋巴管，血管或其他途經(jīng)被帶到它處繼續(xù)生長，形成與原發(fā)部位腫瘤相同類型的腫瘤，具有極大的危害，在治療肺癌的方向上，如何抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，就成為腫瘤治療中一個(gè)關(guān)鍵問題。
[0024]本發(fā)明提供了一種抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的組合藥物，所述肺癌細(xì)胞選自非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549，所述組合藥物由3-[2，4-雙((3S)- 3-甲基嗎啉_4_基)吡啶并[5，6_e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺以及ABT737組成。
[0025]A549細(xì)胞系是由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系，患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。24%的細(xì)胞是亞三倍體細(xì)胞，含有66條染色體，并且，產(chǎn)生64、65、67條染色體細(xì)胞的頻率也很高，大部分細(xì)胞都具有2條X和2條Y染色體。
[0026]其中，3-[2，4-雙((3S)-3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5, 6-e]嘧啶_7_基]-N-甲基苯甲酰胺即AZD2014,是mTOR (ammalian target of rapamycin,哺乳動物雷帕霉素革巴蛋白)的復(fù)合體 mTORCl (ammalian target of rapamycin complexl)和 mT0RC2 (ammaliantarget of rapamycin complex2)的雙重抑制劑,具有潛在的抗腫瘤活性胺。ABT737是棉酹乙酸(Gossypol acetic acid)的 R_(_)對映體，與 Bcl_2(B cell lymphoma/1ewkmia_2B細(xì)胞淋巴瘤/ 白血病-2，)，Bcl-xL(the Bcl_2_like survival factors)和Mcl-1 (Myeloidcell leukemia-1,髓細(xì)胞白血病基因-1)結(jié)合。ABT737 即 4_[4_[ (4，-Chloro [1，I’-biphenyl] -2-yl) methyl] -1-piperazinyl] -N- [ [4-[ [ (IR) -3- (dimethylamino) -1-[ (phenylthio)methyl]propyl] amino] -3-nitrophenyl] sulfonyl] -benzamide,是一種類 BH3 抑制劑，能同時(shí)抑制Bcl-xL，Bcl-2和Bcl-w。
[0027]本發(fā)明實(shí)施例中，優(yōu)選地，所述組合藥物中所述3- [2，4-雙((3S) -3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺與所述ABT737的摩爾濃度比為1:1。
[0028]相應(yīng)的，本發(fā)明還提供了一種抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的藥物制劑，以抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的組合藥物作為活性成分，并輔以可接受的要用載體。
[0029]其中，所述肺癌細(xì)胞選自非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549，所述組合藥物由3_ [2，4_雙((3S) -3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺以及ABT737組成，所述3-[2，4_雙((3S)-3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺在肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中作為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白的抑制劑。
[0030]本發(fā)明實(shí)施例中，優(yōu)選地，所述組合藥物中所述3_[2，4-雙((3S)-3_甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺與所述ABT737的摩爾濃度比為1:1。
[0031]本發(fā)明實(shí)施例中，優(yōu)選地，所述制劑可以為口服液、膠丸、口服混懸液、固體分散體、膠囊、緩釋劑、顆粒劑、片劑、注射劑、軟膏、貼劑或植人劑之中的任意一種。
[0032]相應(yīng)的，本發(fā)明還提供了一種肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的檢測方法，所述肺癌細(xì)胞選自非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549,所述方法包括:
[0033]步驟101、選用指數(shù)生長期的肺癌細(xì)胞，采用由組分I和組分2組成的組合藥物對所述肺癌細(xì)胞進(jìn)行處理組成多組對比樣品，其中，多組樣品的組分I的濃度不同，多組樣品的組分2的濃度不同，所述組分I為3-[2，4-雙((3S)-3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6_e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺，所述組分2為ABT737，所述組分I在肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中作為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白的抑制劑。
[0034]本發(fā)明實(shí)施例中，首先從非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549選取肺癌細(xì)胞，選用指數(shù)生長期的肺癌細(xì)胞。
[0035]本發(fā)明實(shí)施例中，采用組 合藥物處理肺癌細(xì)胞，并對肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移進(jìn)行檢測，組合藥物由組分I和組分2構(gòu)成，組分I為3-[2，4-雙((3S)-3-甲基嗎啉_4_基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺，組分2為ABT737，組分I在肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中作為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白的抑制劑。
[0036]驗(yàn)證組合藥物的效果，可以采用多種不同組合的樣品處理所述肺癌細(xì)胞，在多組樣品中，組分I的濃度不同，組分I的濃度也分別不同，從而形成比對，可以得出組分I和組分2的加入量對抑制肺癌細(xì)胞增殖效果的影響。
[0037]步驟102、采用胰酶消化所述肺癌細(xì)胞，并用不含胎牛血清的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。[0038]采用胰酶消化肺癌細(xì)胞，并進(jìn)一步采用不含胎牛血清(FBS)的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
[0039]步驟103、進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)后，對細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋。
[0040]進(jìn)一步還可以進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)后，對細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋，終濃度維持在一定濃度。
[0041]步驟104、將細(xì)胞懸液加入至Transwell小室，并加入含胎牛血清的培養(yǎng)基至Transwell小室下方的培養(yǎng)孔里，在37°C和5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)后，用甲紫染色，顯微鏡下拍照檢測所述肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
[0042]Trans-這個(gè)詞根有轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)運(yùn)、穿過等意思，well有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透性的杯狀的裝置，根據(jù)Corning公司的Transwell說明書中的介紹,可以認(rèn)為這是一種膜濾器(Membrane filters),也可認(rèn)為是一種有通透性的支架(permeablesupports)。將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細(xì)胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細(xì)胞生長、運(yùn)動等的影響。
[0043]將細(xì)胞懸液加入至Transwell小室后，加入含胎牛血清(FBS)的培養(yǎng)基至Transwell小室下方的培養(yǎng)孔里，并在37°C和5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)一段時(shí)間后，可采用酒精固定，然后用甲紫染色，顯微鏡下拍照檢測所述肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
[0044]為了使本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明，通過具體的示例對本發(fā)明的肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的檢測方法進(jìn)行說明。
[0045]本發(fā)明前期通過選擇ABT737的濃度分別為O、1、2、5、10、15、20、30和40ymol/L處理A549細(xì)胞株，選擇AZD2014的濃度分別為O、2、5、10、15、20和30 μ mo 1/L處理A549細(xì)胞株，處理時(shí)間分別為24h和48h。
[0046]通過MTT (3- (4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽)分析，分別選用ABT737為20 μ mol/L、AZD201420 μ mo 1/L的濃度。(MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。MTT結(jié)果顯示當(dāng)ABT737為20 μ mol/L、AZD201420 μ mol/L時(shí)，這兩種藥物的聯(lián)合抑制指數(shù)小于1，于是選用這兩個(gè)組合濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
[0047]選用指數(shù)生長期的A549細(xì)胞，種6孔板，細(xì)胞密度約為70%，細(xì)胞貼壁后，分別用這兩種藥物單獨(dú)處理及聯(lián)合處理A549細(xì)胞。
[0048]處理24h后，用0.25%的胰酶消化細(xì)胞，并用不含F(xiàn)BS的1640培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，分別進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)后，對細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋，終濃度為I X 105/ml。
[0049]加入100 μ L細(xì)胞懸液至Transwell小室，并加入250 μ L含10%FBS的1640培養(yǎng)基至Transwell小室下方的培養(yǎng)孔里，置于37°C，5%C02培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，48h后，75%酒精固定，然后用甲紫染色，顯微鏡下拍照觀察。
[0050]圖2為示例中不同濃度的組合藥物對肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的的檢測結(jié)果。其中，濃度包括:ABT737的濃度為OuM，AZD2014的濃度為OuM ；ABT737的濃度為20uM，AZD2014的濃度為 OuM ；ABT737 的濃度為 OuM，AZD2014 的濃度為 20uM ；ABT737 的濃度為 20uM，AZD2014 的濃度為20uM。
[0051]Transwell的基本原理是將transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱為上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱為下室，上室內(nèi)添加上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)添加下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以膜相隔。圖中顯示的是用不同濃度的組合藥物處理肺癌細(xì)胞A549后，A549穿過Transwell小室細(xì)胞的數(shù)目，圖中顯示，未用藥物處理的細(xì)胞穿過Transwell小室細(xì)胞的數(shù)在170左右，只用20uM ABT737處理后穿過Transwell小室A549細(xì)胞數(shù)約135，只用20uM AZD2014處理后穿過Transwell小室A549細(xì)胞數(shù)95左右，20uM ABT737和20uMAZD2014聯(lián)合處理后穿過Transwell小室A549細(xì)胞數(shù)為40左右，聯(lián)合用藥、、藥物處理后穿過Transwell小室A549細(xì)胞數(shù)明顯少于單獨(dú)用藥處理后的細(xì)胞數(shù)。
[0052]綜上所述 ，上述檢測結(jié)果顯示本發(fā)明實(shí)施例的ABT737和AZD2014聯(lián)合用藥后較之兩種藥物單獨(dú)處理，其對肺癌細(xì)胞A549的轉(zhuǎn)移能力有顯著協(xié)同抑制作用。
[0053]依據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，采用3_[2，4-雙((3S)-3-甲基嗎啉_4_基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺以及ABT737組成的組合藥物作用于選自非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549的肺癌細(xì)胞，通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明創(chuàng)新提出的組合藥物聯(lián)合用藥后較之兩種藥物單獨(dú)處理，其對肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力有顯著協(xié)同抑制作用。
[0054]對于方法實(shí)施例，為了簡單描述，故將其都表述為一系列的動作組合，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知悉，本發(fā)明并不受所描述的動作順序的限制，因?yàn)橐罁?jù)本發(fā)明，某些步驟可以采用其他順序或者同時(shí)進(jìn)行。其次，本領(lǐng)域技術(shù)人員也應(yīng)該知悉，說明書中所描述的實(shí)施例均屬于優(yōu)選實(shí)施例，所涉及的動作和部件并不一定是本發(fā)明所必須的。
[0055]以上對本發(fā)明所提供的一種抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的組合藥物，一種抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的藥物制劑以及一種肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的檢測方法進(jìn)行了詳細(xì)介紹，本文中應(yīng)用了具體個(gè)例對本發(fā)明的原理及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想；同時(shí)，對于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明的思想，在【具體實(shí)施方式】及應(yīng)用范圍上均會有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。
【權(quán)利要求】
1.一種抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的組合藥物，其特征在于，所述肺癌細(xì)胞選自非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549，所述組合藥物由3-[2，4-雙((3S)_3_甲基嗎啉_4_基)吡啶并[5，6_e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺以及ABT737組成，所述3- [2，4-雙((3S) -3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺在肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中作為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白的抑制劑。
2.如權(quán)利要求1所述的組合藥物，其特征在于，所述組合藥物中所述3-[2，4-雙((3S) -3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺與所述ABT737的摩爾濃度比為1:1。
3.一種抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的藥物制劑，其特征在于，以抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的組合藥物作為活性成分，并輔以可接受的要用載體； 所述肺癌細(xì)胞選自非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549 ； 所述組合藥物由3-[2，4-雙((3S)-3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺以及ABT737組成，所述3- [2，4-雙((3S) -3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺在肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中作為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白的抑制劑。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物制劑，其特征在于，所述組合藥物中所述3-[2，4-雙((3S) -3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺與所述ABT737的摩爾濃度比為1:1。
5.如權(quán)利要求3所述的 藥物制劑，其特征在于，所述制劑為口服液、膠丸、口服混懸液、固體分散體、膠囊、緩釋劑、顆粒劑、片劑、注射劑、軟膏、貼劑或植入劑。
6.一種肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的檢測方法，其特征在于，所述肺癌細(xì)胞選自非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549,所述方法包括: 選用指數(shù)生長期的肺癌細(xì)胞，采用由組分I和組分2組成的組合藥物對所述肺癌細(xì)胞進(jìn)行處理組成多組對比樣品，其中，多組樣品的組分I的濃度不同，多組樣品的組分2的濃度不同，所述組分I為3-[2，4_雙((3S)-3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6_e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺，所述組分2為ABT737，所述組分I在肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中作為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白的抑制劑； 采用胰酶消化所述肺癌細(xì)胞，并用不含胎牛血清的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞； 進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)后，對細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋； 將細(xì)胞懸液加入至Transwell小室，并加入含胎牛血清的培養(yǎng)基至Transwell小室下方的培養(yǎng)孔里，在37°C和5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)后，用甲紫染色，顯微鏡下拍照檢測所述肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
7.如權(quán)利要求6所述的組合方法，其特征在于，所述組合藥物中所述3-[2，4-雙((3S) -3-甲基嗎啉-4-基)吡啶并[5，6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺與所述ABT737的摩爾濃度比為1:1。
【文檔編號】A61P35/04GK103908452SQ201410055267
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2014年2月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月18日
【發(fā)明者】湯郡, 陳穎, 聶培培, 鄒爭志, 何娟, 莊元元, 彭碧玲 申請人:廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心有限公司