海南冬青總?cè)铺崛∥锛捌渲苽浞椒ㄅc用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種海南冬青總?cè)铺崛∥?，它是從冬青科冬青屬植物海南冬青葉中提取分離得到的海南冬青總?cè)频奶崛∥?。?jīng)藥效學(xué)及毒理學(xué)試驗證明，該提取物對腫瘤具有較好的治療效果，有效成分較明確，有利于保證藥物使用的安全性和有效性。有效組分提取得率高，成本低，操作簡便，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，具有廣闊的醫(yī)藥學(xué)工業(yè)應(yīng)用前景。
【專利說明】海南冬青總?cè)铺崛∥锛捌渲苽浞椒ㄅc用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種海南冬青總?cè)祁惖闹苽浞椒?，以及該方法制得的提取成分在惡性腫瘤治療中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]癌癥(惡性腫瘤)是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病。主要是機(jī)體在各種致癌因素作用下，局部組織的某個細(xì)胞在基因水平上失去對其生長的正常調(diào)控，導(dǎo)致其克隆性異常增生而形成異常病變，其惡性程度高，治愈率低，死亡率高。目前，癌癥的臨床治療主要采用手術(shù)治療與化療，化療藥物在殺傷癌細(xì)胞的同時對正常細(xì)胞的殺傷作用亦很強(qiáng)，因此毒性大、不良反應(yīng)嚴(yán)重。本專利應(yīng)用冬青科冬青屬植物海南冬青(Ilex hainanensis Merr.)干燥葉片的主要有效部位總?cè)?total triterpenoid),通過考察提取用乙醇濃度、加量、提取時間與溫度對所得總浸膏的影響，綜合提取率及其總?cè)坪看_定出最佳制備方案。確立藥材和有效部位總?cè)瀑|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并進(jìn)行抗腫瘤藥效研究，將其應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞增殖、荷瘤小鼠，發(fā)現(xiàn)其具有多靶點作用、療效好，毒副作用小，具有良好的抗惡性腫瘤應(yīng)用前景。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的在于優(yōu)化海南冬青提取工藝，完善了藥材和有效部位總?cè)频馁|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本方法可以從提取工藝、富集工藝等方面提高藥材利用率以及總?cè)频暮?；同時，提取方法的重復(fù)性及穩(wěn)定性好；通過試驗確立了藥材和有效部位總?cè)频馁|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行藥效學(xué)實驗，從而保證了療效的穩(wěn)定性。
[0004]本方法采用的技術(shù)方案如下:
[0005]海南冬青飲片用乙醇`回流提取，合并提取液，回收乙醇；浸膏加乙醇后離心,沉淀部分加乙醇溶解，再以石油醚萃取脫色，下層溶液減壓濃縮得浸膏，自然晾干，粉碎，過60目篩，得海南冬青總?cè)朴行Р课弧?br>
[0006]提取用的乙醇為高濃度醇(50%以上)。
[0007]洗滌所用的溶劑為水或濃度30%以下乙醇。
[0008]本發(fā)明還公開了所述海南冬青總?cè)铺崛∥镌谥苽渲委煇盒阅[瘤的藥物中應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明優(yōu)選技術(shù)方案為:
[0010]取海南冬青藥材5kg，用乙醇浸泡24小時，加熱回流2次，每次2h。合并提取液，減壓回收乙醇，濃縮得稠浸膏，以4000r.rniiT1離心lOmin，分離得出沉淀，將沉淀部分以乙醇溶解，再用適量的石油醚萃取2次脫色，收集下層溶液，用水洗滌后，減壓濃縮，自然晾干，粉碎，過60目篩，得海南冬青總?cè)?有效部位)粉末580g。平均得率11.6%。
[0011]上述發(fā)明中的干燥方法為減壓干燥。
[0012]上述海南冬青總?cè)凭哂幸种茞盒阅[瘤細(xì)胞增殖，對整體荷瘤小鼠的抑瘤作用強(qiáng)，能用于制備成抗腫瘤藥物，可以制成片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸、顆粒劑、注射劑及粉針劑等各種劑型。[0013]海南冬青提取物總?cè)坪繙y定:
[0014]海南冬青總?cè)频闹饕煞譃槎嗨?含量達(dá)15.3%)，下面以冬青素作為對照品檢測總?cè)坪俊?br>
[0015]對照品溶液制備精密稱取105°C下干燥至恒重的冬青素作為對照品2mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，即得(每Iml含冬青素0.08mg)。
[0016]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取上述對照品溶液0.2,0.3,0.4,0.5,0.6ml，分別置具塞試管中，水浴中揮發(fā)去除溶劑。冷卻，準(zhǔn)確加入0.4ml香草醛-冰醋酸溶液與高氯酸，混勻，加塞密封。于70°C恒溫水浴加熱，取出放冷，加入冰醋酸，分光光度計540nm處測吸光度。溶劑為空白對照管，以吸光度作縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0017]含量測定供試品溶液:取海南冬青總?cè)?0mg，置25ml容量瓶，加甲醇溶解并定容，即供試品溶液。精密量取供試品溶液0.4ml按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法，自“分別置具塞試管，水浴揮發(fā)去溶劑”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中冬青素的含量，計算含量，得出總?cè)坪繛?8.6%。
[0018]以HPLC法測得冬青素含量為15.3% (三次試驗數(shù)據(jù)的平均值)。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:經(jīng)藥效學(xué)試驗證明，海南冬青總?cè)凭哂休^好的抑制多種惡性腫瘤的作用，有效成分明確。其主要有效成分為總?cè)?，且總?cè)坪枯^高，雜質(zhì)較少，可減少服用量，在一定程度上相應(yīng)減輕了副作用，更有利于保證藥物的安全性和有效性。本發(fā)明的提純工藝中，海南冬青藥材用乙醇提取，成本低，而且乙醇可回收循環(huán)使用，成本低；再則海南冬青為茶飲植物，幾無毒性，具有良好的抗腫瘤效果，安全有效。
【具體實施方式】
[0020]為了使本發(fā)明目的、技術(shù)方 案和優(yōu)點更加清晰，一下結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地說明。
[0021]實施例1
[0022]取海南冬青藥材5kg，用乙醇浸泡24小時，加熱回流，每次2h，共提取2次，合并提取液，減壓回收乙醇，濃縮成浸膏，4000r ?mirT1離心IOmin,將沉淀部分以乙醇溶解,再以石油醚萃取、脫色，將下層溶液水洗后，減壓濃縮自然晾干，粉碎，過篩，得海南冬青總?cè)朴行Р课环勰?80g。平均得率11.6%。
[0023]實施例2
[0024]海南冬青總?cè)埔种颇[瘤細(xì)胞生長增殖的生物活性
[0025]表1.海南冬青總?cè)茖θ薙GC7901胃癌細(xì)胞增殖(48h)的抑制作用Cf =.s.n=4)
總?cè)?SiHepGlii ,
g(ug/ml)_ODg_(%)..150.7^0.0202X4
[0026]300.71=0,020*29.3.600.53=0.020*46.7.1200.51=0.030*48.9-
2400.44=0.030*55.l.+[0027]注:與陰性對照組比較，*P < 0.05
[0028]如表1所示，海南冬青總?cè)婆cSGC7901胃癌細(xì)胞作用48h后，隨藥物濃度增加抑制率上升，在30 ii g/ml、60 u g/ml、120 u g/ml和240 u g/ml濃度下對7901細(xì)胞增殖有明顯抑制作用，顯 示劑量依賴關(guān)系。
【權(quán)利要求】
1.一種海南冬青總?cè)铺崛∥铮涮卣髟谟谕ㄟ^下述方法制得:海南冬青藥材用乙醇回流提取，合并提取液，回收乙醇；浸膏加乙醇后離心，沉淀部分以乙醇溶解，再以醚類萃取至脫色，收集下層溶液，洗滌后減壓濃縮，自然晾干，粉碎，過60目篩，得海南冬青總?cè)啤?br>
2.一種制備權(quán)利要求1所述海南冬青總?cè)铺崛∥锏姆椒ǎ涮卣髟谟? 海南冬青藥材用乙醇回流提取，合并提取液，回收乙醇；浸膏加乙醇后離心，沉淀部分以乙醇溶解，再以醚類萃取至脫色，收集下層溶液，洗滌后減壓濃縮，自然晾干，粉碎，過60目篩，得海南冬青總?cè)啤?br>
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:提取所用的乙醇為濃度50%以上乙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:洗滌所用的溶劑為水或濃度30%以下乙醇。
5.權(quán)利要求1所述海南冬青總?cè)铺崛∥镌谥苽渲委煇盒阅[瘤的藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物制劑形式是片劑、膠囊、軟膠囊、顆粒劑、注射劑及粉針劑。
【文檔編號】A61K36/185GK103494846SQ201310434765
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月23日
【發(fā)明者】孫云, 王強(qiáng), 楊昊, 劉暢, 楊杰 申請人:揚(yáng)州大學(xué)