可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納材料與內(nèi)耳跨膜給藥緩釋制劑及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明介紹一種以白蛋白來(lái)制備兩種以上花樣結(jié)構(gòu)微納材料方法及其在內(nèi)耳跨膜載藥方面的應(yīng)用。涉及花樣結(jié)構(gòu)蛋白基載藥微納材料的制備技術(shù)與內(nèi)耳跨圓窗膜給藥緩釋制劑及其制備方法。內(nèi)耳跨膜給藥緩釋載藥平臺(tái)的建立，涉及一系列藥物如激素類(lèi)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子類(lèi)、抗自由基類(lèi)、氨基糖甙類(lèi)、顱內(nèi)抗腫瘤類(lèi)等藥物的內(nèi)耳轉(zhuǎn)運(yùn)。具體為：取血清白蛋白溶于含有一定濃度的碳酸鹽水溶液中，在一定速度的磁力攪拌下加入無(wú)水乙醇溶液，經(jīng)戊二醛交聯(lián)固化或在高溫水浴下熱變性固化后離心、水洗干燥得到花樣結(jié)構(gòu)的微納米載藥材料。以羅丹明B為模型藥物與該微納米材料共混依靠物理吸附形成粉紅色復(fù)合緩釋微納載藥制劑，并進(jìn)行小動(dòng)物活體成像和離體跨圓窗膜轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納材料與內(nèi)耳跨膜給藥緩釋制劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明介紹一種以白蛋白來(lái)制備多種花樣結(jié)構(gòu)微納材料的方法及其在內(nèi)跨膜載藥方面的應(yīng)用。涉及兩種以上花樣結(jié)構(gòu)蛋白基載藥微納材料的制備技術(shù)與內(nèi)耳跨圓窗膜給藥緩釋制劑及其制備方法。并指出可以攜帶一系列藥物如激素類(lèi)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子類(lèi)、抗自由基類(lèi)、氨基糖甙類(lèi)、顱內(nèi)抗腫瘤類(lèi)等藥物。

【背景技術(shù)】
[0002]內(nèi)耳病(包括耳蝸與前庭系統(tǒng))的臨床發(fā)病率約占耳科疾病的近1/3，如突發(fā)性耳聾、自身免疫性?xún)?nèi)耳病及梅尼埃病等，可導(dǎo)致不同程度的感音神經(jīng)性耳聾和平衡機(jī)能障礙，嚴(yán)重影響患者的工作能力與生活質(zhì)量。
[0003]長(zhǎng)期以來(lái)臨床上常采用全身給藥治療內(nèi)耳病，其中糖皮質(zhì)激素為有效的治療藥物之一。因高血壓、糖尿病等系統(tǒng)性疾病則為全身激素治療的禁忌，使得此類(lèi)藥物的應(yīng)用受到限制。同時(shí)由于血一迷路屏障的存在，阻抑了藥物在內(nèi)耳的分布與擴(kuò)散，導(dǎo)致治療效果并不理想。內(nèi)耳局部給藥的研究一直受到耳科醫(yī)師的關(guān)注。由于內(nèi)耳與中耳之間存在一種膜性間隔即圓窗膜，其具有生物半透膜的性質(zhì)，能允許多種藥物通過(guò)，這使得藥物可以不經(jīng)過(guò)體循環(huán)而直接進(jìn)入內(nèi)耳即避免了血迷路屏障。目前常用的方法是通過(guò)鼓膜向鼓室內(nèi)注射藥物溶液的策略最具微創(chuàng)性。但該方法的局限性在于不能調(diào)控到達(dá)圓窗膜的藥物濃度及難以有效控制藥物與圓窗膜的接觸時(shí)間，而后者是決定耳蝸內(nèi)藥物濃度的重要因素。結(jié)合近年來(lái)藥物緩釋劑型的發(fā)展，向鼓室內(nèi)注射藥物的緩釋劑型體現(xiàn)了緩釋技術(shù)與微創(chuàng)技術(shù)的結(jié)合，可能成為內(nèi)耳疾病最優(yōu)化的治療方式，成為近年研究熱點(diǎn)領(lǐng)域，鼓室跨膜給藥緩釋劑的研究尤為重要。迄今鼓室內(nèi)藥物治療尚無(wú)標(biāo)準(zhǔn)方案，臨床應(yīng)用亟待規(guī)范。因此，研制新型跨圓窗膜緩釋制劑在耳內(nèi)科學(xué)中具有十分重要的應(yīng)用前景。在生物制藥和組織工程迅猛發(fā)展的今天，控釋系統(tǒng)作為新型的藥物載體具有緩釋、靶向、生物利用度高等特點(diǎn)，是一種非常有前途的控釋系統(tǒng)。血清白蛋白是血漿中的蛋白質(zhì)是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)之一。其非糖基化的單鏈多肽包含585個(gè)氨基酸，分子量為66kD。其可以運(yùn)輸脂肪酸、膽色素、氨基酸、類(lèi)固醇激素、金屬離子和許多治療分子等。本發(fā)明利用改良去溶劑法制備了兩種以上花樣結(jié)構(gòu)蛋白基載藥微納材料并應(yīng)用于內(nèi)耳跨圓窗膜緩定向給藥。
[0004]由于迄今為止臨床上還沒(méi)有一種真正的內(nèi)耳局部跨膜給藥的緩釋制劑在應(yīng)用，而應(yīng)用白蛋白制備蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納材料作為新型跨圓窗膜的緩釋藥物載體在國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)報(bào)道，故本發(fā)明有著廣泛的應(yīng)用前景。
[0005]理想的耳用跨圓窗膜緩釋制劑應(yīng)具備以下特點(diǎn):①藥物迅速在內(nèi)耳達(dá)到理想有效濃度，并維持此濃度適當(dāng)時(shí)間；②在機(jī)體其它部位無(wú)藥物分布或藥物濃度僅在最低范圍；③一旦治療目的達(dá)到，藥物立即從內(nèi)耳消除選擇的緩釋輔料對(duì)機(jī)體無(wú)毒副作用；⑤可注射性；⑥可實(shí)現(xiàn)商品化生產(chǎn)，使用簡(jiǎn)便，易于推廣。
[0006]蛋白基非球微納材料是一種相當(dāng)有前途的藥物載體，本發(fā)明是在以往制備白蛋白微納米球工藝技術(shù)基礎(chǔ)上進(jìn)行改良，優(yōu)化了制備工藝，即不再進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法將乙醇揮發(fā)出去，而是改用戊二醛交聯(lián)或高溫水浴熱變性的固化方法后利用離心和干燥技術(shù)制備出兩種以上蛋白基花樣結(jié)構(gòu)的微納材料，并加入模型藥物制備出具有緩釋效果的緩釋載藥制齊U。這樣有利于減少材料的細(xì)胞毒性使產(chǎn)物更安全，同時(shí)還保留了白蛋白表面大量的有用基團(tuán)，增強(qiáng)其對(duì)細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)作用和對(duì)細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用。另外，本發(fā)明將其引入到跨圓窗膜內(nèi)耳給藥領(lǐng)域，不僅能很好發(fā)揮白蛋白自身的營(yíng)養(yǎng)作用，同時(shí)由于其表面結(jié)構(gòu)的特殊性使其更易于吸附攜帶其他藥物而發(fā)揮緩釋轉(zhuǎn)運(yùn)作用。因此本發(fā)明最大的特點(diǎn)在于制備的蛋白基花樣結(jié)構(gòu)微納材料結(jié)構(gòu)完整，制備方法簡(jiǎn)單、可重復(fù)性良好，極低毒性、有很好的載藥、緩釋功能。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]基于目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)對(duì)內(nèi)耳病(如突發(fā)性耳聾、梅尼埃病、噪聲性耳聾)局部用藥的緩釋制劑在臨床上應(yīng)用。本發(fā)明的目的旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供一種可在鼓室腔內(nèi)注射給藥、并能跨圓窗膜實(shí)現(xiàn)內(nèi)耳藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的緩釋載藥微球的制備技術(shù)和工藝。這樣既減少了給藥量，增加了內(nèi)耳局部的藥物濃度，同時(shí)也大大降低了傳統(tǒng)給藥方式給患者帶來(lái)的全身毒副作用。
[0008]本發(fā)明所述的可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納材料與內(nèi)耳跨圓窗膜給藥緩釋制劑及其制備方法如下:
[0009]I)取血清白蛋白溶于一定濃度碳酸鹽水溶液中，得到含有血清白蛋白的水溶液；
[0010]2)在一定速度的磁力攪拌下加入無(wú)水乙醇溶液,形成乳白色白蛋白混懸液；
[0011]3)放入水浴鍋中在高溫下進(jìn)行熱變性固化處理，離心、干燥后形成穩(wěn)定的蛋白基花樣結(jié)構(gòu)的微納材料；
[0012]4)以羅丹明B為模型藥物與蛋白基花樣結(jié)構(gòu)的微納材料共混依靠物理吸附形成粉紅色復(fù)合緩釋微球載制劑。
[0013]可以包載一系列藥物如激素類(lèi)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子類(lèi)、抗自由基類(lèi)、氨基糖甙類(lèi)、顱內(nèi)抗腫瘤類(lèi)等藥物。制備過(guò)程中血清白蛋白配制的濃度是I?100mg/ml，所述的碳酸鹽水溶液的濃度為0.1M?2M。按體積比碳酸鹽水溶液與無(wú)水乙醇的加入比例為1:1?1: 20。無(wú)水乙醇的加入速度控制在0.1?10.0ml/min。磁力轉(zhuǎn)動(dòng)速度在100?2000rpm。熱變性溫度控制在50?100°C，固化時(shí)間控制在1rnin?24h。而采用50%戊二醛交聯(lián)固定時(shí)間控制在30min?24h。離心后處理為真空干燥或冷凍干燥。加入的模型藥物為物理混合吸附方式形成復(fù)合緩釋制劑。
[0014]總之，本發(fā)明采用改良去溶劑方法制備可注射白蛋白基花樣結(jié)構(gòu)緩釋載藥體，制備過(guò)程中血清白蛋白配制的濃度是I?100mg/ml，碳酸鹽水溶液的濃度控制在0.1M?2M之間，碳酸鹽水溶液與無(wú)水乙醇溶液的體積比為1:1?1: 20。磁力轉(zhuǎn)動(dòng)速度控制在100?2000rpm。無(wú)水乙醇的加入速度控制在0.1?10.0ml/min?？蓱?yīng)用熱變性固化法或戊二醛交聯(lián)法來(lái)進(jìn)行后處理。本發(fā)明經(jīng)過(guò)改良優(yōu)化工藝制備的白蛋白基花樣結(jié)構(gòu)微納材料結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，制備方法簡(jiǎn)單、毒性低、可以很好的攜帶藥、并具有緩釋功能，可望實(shí)現(xiàn)更大的經(jīng)濟(jì)效益?！緦?zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】:
[0015]圖1:放射狀花樣結(jié)構(gòu)白蛋白掃描電鏡下觀察⑴。
[0016]圖2:放射狀花樣結(jié)構(gòu)白蛋白掃描電鏡下觀察(2)。
[0017]圖3:扁平狀花樣結(jié)構(gòu)白蛋白掃描電鏡下觀察。
[0018]圖4:以FITC標(biāo)記的白蛋白制備的花樣結(jié)構(gòu)在熒光顯微鏡下觀察。
[0019]圖5:以羅丹明B標(biāo)記的白蛋白花樣結(jié)構(gòu)的熒光顯微鏡下觀察。
[0020]圖6:花樣結(jié)構(gòu)白蛋白的透射電鏡下觀察。
[0021]圖7:花樣結(jié)構(gòu)白蛋白的透射電鏡下進(jìn)一步放大照片，可見(jiàn)更微細(xì)結(jié)構(gòu)為管狀，其上有多孔。
[0022]圖8:花樣結(jié)構(gòu)白蛋白的掃描電鏡下進(jìn)一步放大照片，可見(jiàn)更微細(xì)結(jié)構(gòu)為管狀。
[0023]圖9:花樣結(jié)構(gòu)白蛋白的掃描電鏡下進(jìn)一步放大照片，可見(jiàn)更微細(xì)結(jié)構(gòu)為管狀，并可見(jiàn)其表面有微孔結(jié)構(gòu)。
[0024]圖10:載有羅丹明b的花樣結(jié)構(gòu)白蛋白在豚鼠圓窗膜表面附著的熒光顯微鏡下所見(jiàn)。
[0025]圖11:載有羅丹明b的花樣結(jié)構(gòu)白蛋白在豚鼠圓窗膜表面附著的熒光顯微鏡下所見(jiàn)，進(jìn)一步放大，可見(jiàn)花樣牛血清白蛋白。
[0026]圖12:載有羅丹明b的花樣結(jié)構(gòu)白蛋白行豚鼠聽(tīng)泡內(nèi)注射后，在豚鼠圓窗膜表面附著的掃描電鏡下所見(jiàn)。
[0027]圖13:載有羅丹明b的花樣結(jié)構(gòu)白蛋白行豚鼠聽(tīng)泡內(nèi)注射后，在豚鼠圓窗膜表面附著的掃描電鏡下所見(jiàn)。
[0028]圖14:花樣結(jié)構(gòu)白蛋白在豚鼠離體狀態(tài)下的圓窗膜附著實(shí)驗(yàn)，并在掃描電鏡下觀察。(包括圓窗膜大體觀、圓窗膜表面附著的低倍和高倍下所見(jiàn))
[0029]圖15:材料的細(xì)胞(L929細(xì)胞、Hale細(xì)胞)毒性(MTT法)
[0030]圖16:載有激素類(lèi)藥物如潑尼松龍的花樣結(jié)構(gòu)白蛋白的掃描電鏡觀察。
[0031]圖17:以FITC標(biāo)記的牛血清白蛋白作為模型藥物與花樣結(jié)構(gòu)白蛋白相互吸附的掃描電鏡下觀察。
[0032]圖18:①豚鼠聽(tīng)泡內(nèi)注入以羅丹明B為模型藥物的花樣結(jié)構(gòu)白蛋白水凝膠IH時(shí)的活體成像；②豚鼠聽(tīng)泡內(nèi)注入以羅丹明B為模型藥物的花樣結(jié)構(gòu)白蛋白水凝膠48H時(shí)的活體成像；
[0033]圖19:花樣結(jié)構(gòu)白蛋白與兔原代培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)的鏡下影象。
[0034]圖20:花樣結(jié)構(gòu)白蛋白與HELA細(xì)胞共培養(yǎng)的鏡下影象。
[0035]圖21:花樣結(jié)構(gòu)白蛋白與成纖維細(xì)胞L929共培養(yǎng)的鏡下影象。

【具體實(shí)施方式】
:
[0036]具體實(shí)施例一:
[0037]取白蛋白溶于0.1M碳酸鹽水溶液中，得到含有血清白蛋白的水溶液；在速度為1200rpm的磁力攪拌下加入無(wú)水乙醇溶液,加入速度為lml/min,形成乳白色白蛋白混懸液；放入水浴鍋中在90°C下進(jìn)行熱變性固化處理lOmin，離心、水洗、干燥后形成穩(wěn)定的蛋白基花樣結(jié)構(gòu)的微納材料。(圖1、圖6)
[0038]具體實(shí)施例二:
[0039]取白蛋白溶于0.1M碳酸鹽水溶液中，得到含有血清白蛋白的水溶液；在速度為1200rpm的磁力攪拌下加入無(wú)水乙醇溶液,加入速度為lml/min,形成乳白色白蛋白混懸液；加入50%戊二醛進(jìn)行交聯(lián)固化處理12H，離心、水洗、干燥后形成穩(wěn)定的蛋白基花樣結(jié)構(gòu)的微納材料。(圖2、圖7)
[0040]具體實(shí)施例三:
[0041]取白蛋白溶于IM碳酸鹽水溶液中，得到含有血清白蛋白的水溶液；在速度為100rpm的磁力攪拌下加入無(wú)水乙醇溶液,加入速度為1.5ml/min,形成乳白色白蛋白混懸液；放入水浴鍋中在90°C下進(jìn)行熱變性固化處理lOmin，離心、水洗、干燥后形成穩(wěn)定的蛋白基花樣結(jié)構(gòu)的微納材料。(圖3)
[0042]具體實(shí)施例四:
[0043]取白蛋白溶于IM碳酸鹽水溶液中，得到含有血清白蛋白的水溶液；在速度為100rpm的磁力攪拌下加入無(wú)水乙醇溶液,加入速度為1.5ml/min,形成乳白色白蛋白混懸液；加入50%戊二醛進(jìn)行交聯(lián)固化處理12H，離心、水洗、干燥后形成穩(wěn)定的蛋白基花樣結(jié)構(gòu)的微納材料。(圖3)
[0044]具體實(shí)施例五:
[0045]取白蛋白溶于2M碳酸鹽水溶液中，得到含有血清白蛋白的水溶液；在速度為600rpm的磁力攪拌下加入無(wú)水乙醇溶液,加入速度為2ml/min,形成乳白色白蛋白混懸液；放入水浴鍋中在90°C下進(jìn)行熱變性固化處理lOmin，離心、水洗、干燥后形成穩(wěn)定的蛋白基花樣結(jié)構(gòu)的微納材料。并與潑尼松龍共混形成載藥制劑(圖16)。與FITC標(biāo)記的白蛋白共混后掃描電鏡下觀察(圖17)。
[0046]具體實(shí)施例六:
[0047]取FITC標(biāo)記的白蛋白溶于2M碳酸鹽水溶液中，得到含有血清白蛋白的水溶液；在速度為600rpm的磁力攪拌下加入無(wú)水乙醇溶液,加入速度為2ml/min,形成乳白色白蛋白混懸液；加入50%戊二醛進(jìn)行交聯(lián)固化處理12H，離心、水洗、干燥后形成穩(wěn)定的蛋白基花樣結(jié)構(gòu)的微納材料。(圖4)
[0048]具體實(shí)施例七:
[0049]取白蛋白溶于1.5M碳酸鹽水溶液中，得到含有血清白蛋白的水溶液；在速度為800rpm的磁力攪拌下加入無(wú)水乙醇溶液,加入速度為1.2ml/min,形成乳白色白蛋白混懸液；放入水浴鍋中在70°C下進(jìn)行熱變性固化處理30min，離心、水洗后形成穩(wěn)定的蛋白基花樣結(jié)構(gòu)的混懸液。取1ml該混懸液加入羅丹明B5mg共混孵育IH形成載藥制劑(圖5)。
[0050]具體實(shí)施例八:
[0051]取白蛋白溶于1.5M碳酸鹽水溶液中，得到含有血清白蛋白的水溶液；在速度為800rpm的磁力攪拌下加入無(wú)水乙醇溶液,加入速度為1.2ml/min,形成乳白色白蛋白混懸液；加入50%戍二醒進(jìn)行交聯(lián)固化處理24H,離心、水洗后形成穩(wěn)定的蛋白基花樣結(jié)構(gòu)的混懸液。取1ml該混懸液加入羅丹明B5mg共混孵育IH形成載藥制劑(圖5)。
[0052]具體實(shí)施例九:
[0053]將載有羅丹明B的花樣結(jié)構(gòu)白蛋白微納材料加入PBS中形成混懸液裝入4mlEP管中備用。給予豚鼠腹腔內(nèi)注射麻醉，麻醉成功后放置解剖臺(tái)，取耳后切口，暴露聽(tīng)泡，在顯微鏡下分離解剖出完整的耳蝸，可見(jiàn)圓窗膜。并將其放入EP管中，在37°C搖床中10rpm速度下共混30min后取出，干燥后在掃描電鏡下觀察(圖14)。
[0054]具體實(shí)施例十:
[0055]將載有羅丹明B的花樣結(jié)構(gòu)白蛋白微納材料加入PBS中形成混懸液裝入2ml注射器中備用。給予豚鼠腹腔內(nèi)注射麻醉，麻醉成功后放置解剖臺(tái)，取左耳后切口，暴露聽(tīng)泡，在顯微鏡下在聽(tīng)泡上打孔，用自制彎注射針頭向聽(tīng)泡內(nèi)注入0.1ml上述制備的混懸液?？p合封閉切口，碘伏消毒。以同法行右耳操作。之后在小動(dòng)物活體呈像中按1H，24H進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察及記錄(圖18)。之后將豚鼠處死解剖內(nèi)耳，暴露圓窗膜，在熒光顯微鏡下進(jìn)一步觀察該處圓窗膜的表面花樣結(jié)構(gòu)白蛋白微納材料附著情況(圖10、圖11)。并在掃描電鏡下進(jìn)一步觀察附著情況，可見(jiàn)花樣結(jié)構(gòu)白蛋白(圖12、圖13)。
【權(quán)利要求】
1.可注射白蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納材料與內(nèi)耳跨膜給藥緩釋制劑及其制備方法，其特征在于其步驟如下: 1)取白蛋白溶于一定濃度的碳酸鹽水溶液中，得到含有白蛋白的水溶液； 2)在磁力攪拌下加入無(wú)水乙醇溶液，形成乳白色白蛋白混懸液； 3)經(jīng)過(guò)戊二醛交聯(lián)固化或放入水浴鍋中在高溫下進(jìn)行熱變性固化處理，離心、干燥后形成穩(wěn)定的花樣結(jié)構(gòu)的蛋白基微納材料； 4)以羅丹明B為模型藥物與花樣結(jié)構(gòu)的蛋白基微納材料共混依靠物理吸附形成粉紅色復(fù)合緩釋花樣微納材料載藥體。
2.如權(quán)利要求1所述的內(nèi)耳跨膜給藥即可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納緩釋材料的制備方法，其特征為可以包載一系列藥物如激素類(lèi)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子類(lèi)、抗自由基類(lèi)、治療美尼埃病的氨基糖甙類(lèi)、顱內(nèi)抗腫瘤類(lèi)等藥物。無(wú)論水溶性和非水溶性藥物均可被吸附。
3.如權(quán)利要求1所述的內(nèi)耳跨膜給藥即可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納緩釋材料的制備方法，其特征在于所述的制備過(guò)程中血清白蛋白配制的濃度是I?100mg/ml。
4.如權(quán)利要求1所述的內(nèi)耳跨膜給藥即可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納緩釋材料的制備方法，其特征在于所述的碳酸鹽水溶液中的主要成分為碳酸氫鈉和無(wú)水碳酸鈉，配制的濃度為0.1M?2M。
5.如權(quán)利要求1所述的內(nèi)耳跨膜給藥即可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納緩釋材料的制備方法，其特征在于按體積比碳酸鹽水溶液與無(wú)水乙醇的加入比例為1:1?1: 20。
6.如權(quán)利要求1所述的內(nèi)耳跨膜給藥即可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納緩釋材料的制備方法，其特征在于無(wú)水乙醇的加入的速度控制在0.1?10.0ml/min。
7.如權(quán)利要求1所述的內(nèi)耳跨膜給藥即可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納緩釋材料的制備方法，其特征在于磁力轉(zhuǎn)動(dòng)速度在100?2000rpm。
8.如權(quán)利要求1所述的內(nèi)耳跨膜給藥即可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納緩釋材料的制備方法，其特征在于熱變性溫度控制在50?100°C，固化時(shí)間控制在1min?24h。
9.如權(quán)利要求1所述的內(nèi)耳跨膜給藥即可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納緩釋材料的制備方法，其特征在于亦可采用50%戊二醛交聯(lián)固定30min?24h，加入的劑量為10 μ I?Iml0
10.如權(quán)利要求1所述的內(nèi)耳跨膜給藥即可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納緩釋材料的制備方法，其特征在于離心、水洗后處理為真空干燥或凍干。
11.如權(quán)利要求1所述的內(nèi)耳跨膜給藥即可注射蛋白基花樣結(jié)構(gòu)載藥微納緩釋材料的制備方法，其特征在于加入的模型藥物為物理混合吸附方式形成復(fù)合緩釋制劑。
【文檔編號(hào)】A61K9/16GK104368007SQ201310348097
【公開(kāi)日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2013年8月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月12日
【發(fā)明者】于湛 申請(qǐng)人:于湛