一種地骨皮活性部位及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及中藥活性部位的制備領(lǐng)域，公開了一種地骨皮活性部位及其制備方法和應(yīng)用。所述制備方法包括如下步驟：S1.將地骨皮粉碎后，用水提取，再將提取液濃縮，加入乙醇進(jìn)行醇沉，取上清液濃縮得原液；S2.將原液通過大孔吸附樹脂，收集洗脫液，蒸干，濃縮得樣品1；S3.將樣品1通過強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂吸附，先用水洗樹脂柱，再用氨水洗脫，收集氨水洗脫液，濃縮得得樣品2；S4.將樣品2通過強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂吸附，收集水洗脫液，濃縮干燥即得地骨皮活性部位。本發(fā)明制備得到的地骨皮活性部位生物堿活性成分含量較高，可用于預(yù)防和治療糖尿病、肥胖癥、高血脂等疾病。
【專利說明】一種地骨皮活性部位及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥活性部位的制備領(lǐng)域，更具體地，涉及一種地骨皮活性部位及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]2009年10月份公布的的第四版糖尿病地圖數(shù)據(jù)顯示，中國(guó)糖尿病患者有4320萬之多，但2010年3月24日發(fā)表在《新英格蘭雜志》的最新流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，中國(guó)已經(jīng)取代印度成為全球糖尿病患者最多的國(guó)家。最新的這項(xiàng)研究反映出近些年來糖尿病患病率在中國(guó)的快速增長(zhǎng)?；诖耍琁DF預(yù)測(cè)世界糖尿病患病人群在2030年將直逼5億。國(guó)內(nèi)外治療糖尿病的藥物概括起來包括口服降糖藥、胰島素、外源性GLP-1受體激動(dòng)劑、GLP-1類似物等，雖然西藥降糖效果較好，但副作用大，不利于長(zhǎng)期使用且不能有效控制并發(fā)癥。中藥在治療糖尿病上具有顯著改善臨床癥狀和體質(zhì)、副作用小、并能在多個(gè)環(huán)節(jié)上防治并發(fā)癥等優(yōu)點(diǎn)。其中中藥地骨皮就有很好的降糖效果。地骨皮為茄科植物枸杞chinenseMill.或?qū)幭蔫坭絙arbarum L的干燥根皮。中國(guó)藥典記載地骨皮用于陰虛潮熱，骨蒸盜汗，肺熱咳嗽，咯血，衄血，內(nèi)熱消渴。地骨皮常于單味藥或者復(fù)方中用于治療糖尿病，藥理作用機(jī)理研究教多，但大多以粗提物為研究對(duì)象和治療材料，故療效不夠穩(wěn)定和非常樂觀，而如果對(duì)其提取物中主要活性物質(zhì)成分進(jìn)行精制，將對(duì)其療效和初步定性定量方法的確定都將有很大的益處。本發(fā)明提供的地骨皮活性部位的制備，操作非常簡(jiǎn)單，重復(fù)性良好。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，為了克服現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)地骨皮在治療糖尿病方面的上述不足，提供一種地骨皮活性部位的制備方法。
[0004]本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題是，提供一種由上述方法制備得到的地骨皮活性部位、及其質(zhì)量控制方法和保健與治療應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明所要解決的上述技術(shù)問題通過以下方案予以實(shí)現(xiàn):
一種地骨皮活性部位的制備方法，包括如下步驟:
51.將地骨皮粉碎后，用8~15倍的水，加熱回流提取，再將提取液濃縮至
原體積1/3~1/5，加入濃度(體積)為90%~?00%的乙醇進(jìn)行醇沉，至最終乙醇濃度(體積)為70-80%，取上清液濃縮得原液；
52.將原液通過101型大孔吸附樹脂，用水洗樹脂柱，收集洗脫液，濃縮得樣品1;
53.將樣品1通過強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂吸附，用3飛倍樹脂體積的水沖洗樹脂柱，棄去水洗脫液部分，再以3飛倍樹脂體積的0.2~1Ν氨水洗脫，收集洗脫液，蒸干，得樣品2 ；
54.將樣品2通過強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂吸附，用3飛倍樹脂體積的水洗脫，收集水洗脫液，濃縮干燥即得地骨皮活性部位。
[0006]作為一種優(yōu)選方案，S1中用10倍的水，于100°C條件下回流提取2次，每次120分鐘，再將提取液濃縮至原體積1/4，加入濃度為95%的乙醇進(jìn)行醇沉，至最終乙醇濃度為70~75%。
[0007]作為一種優(yōu)選方案，S2中所用大孔吸附樹脂的重量為地骨皮原藥材重量的f 3倍；用水量為大孔吸附樹脂柱體積的2飛倍。
[0008]作為一種最優(yōu)選方案，S2中所用的大孔吸附樹脂的重量為地骨皮原藥材重量的3倍；用水量為大孔吸附樹脂柱體積的3倍。
[0009]作為一種優(yōu)選方案，S3所述的強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂為交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸性樹脂；S4所述的強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂為交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)堿性樹脂。
[0010]作為一種最優(yōu)選方案，交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸性樹脂的型號(hào)為001X7或001X4或001 X 14.5 ;交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)堿性樹脂的型號(hào)為201X7。
[0011]作為一種優(yōu)選方案，S3所述的氨水的濃度為0.5N。
[0012]一種由上述制備方法制備得到的地骨皮活性部位。
[0013]作為一種優(yōu)選方案，所述的地骨皮活性部位，其主要成分為生物堿。
[0014]作為一種優(yōu)選方案，活性部位中主要成分的分子量范圍為125~193。
[0015]上述地骨皮活性部位在制備抑制α -葡萄糖苷酶活性的藥物中的應(yīng)用。
[0016]上述地骨皮活性部位在制備用于預(yù)防和治療糖尿病、肥胖癥或高血脂的藥物中的應(yīng)用。
[0017]有益效果:本發(fā)明制備得到的地骨皮活性部位生物堿活性成分含量較高，全部為天然的α-葡萄糖苷酶抑制劑，具有作用機(jī)理清晰，療效確切，成本低廉等特點(diǎn)，可用于預(yù)防和治療糖尿病、肥胖癥、高血脂等`疾病。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]圖1為本發(fā)明地骨皮活性部位的高效液相色譜圖。
[0019]圖2為本發(fā)明地骨皮活性部位對(duì)糖苷霉抑制曲線圖。
[0020]圖3地骨皮活性部位的ES1-MS測(cè)試圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0021]以下結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實(shí)施例對(duì)本發(fā)明不做任何形式的限定。
[0022]實(shí)施例1.地骨皮活性部位的制備方法
S1.將地骨皮粉碎后，用10倍的水，于100°C條件下加熱回流提取2次，每次120分鐘，將提取液抽濾濃縮至原體積1/4，加入95%乙醇進(jìn)行醇沉，終乙醇濃度約為75%，取上清液加壓濃縮得原液。
[0023]S2.將原液通過大孔吸附樹脂，地骨皮原藥材與樹脂的比例(重量)為1:3，用3倍的樹脂床體積的去離子水洗樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮得樣品I。
[0024]S3.將樣品I通過強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂交換(型號(hào)為001X7的交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸性樹脂)，用3倍樹脂體積去離子水沖洗樹脂柱，棄水洗脫液，再以3倍0.5N的氨水洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干，得樣品2。
[0025]S4.將樣品2通過強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂交換(型號(hào)為201X7交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)堿性樹脂)，用3倍的樹脂體積的去離子水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮冷凍干燥即得地骨皮活性部位。
[0026]實(shí)施例2.地骨皮活性部位的一種液相分析方法
FM0C-C1 (芴甲氧基羰酰氯)是一種較新的氨基衍生化試劑，主要適用于伯胺和仲胺的衍生化，反應(yīng)后的衍生物具有紫外吸收。而地骨皮的抗糖尿病活性分子中具有仲胺結(jié)構(gòu)，因此可以采用FM0C-C1作為衍生化試劑進(jìn)行衍生化。取實(shí)施例1中的樣品3溶液50 μ 1于1.5ml的離心管中，加入0.4mol/L硼酸鉀緩沖溶液200μ 1，再加入5mmol/L FM0C-C1 (50%乙腈配置)250μ 1,搖勻，室溫放置30分鐘,再加入lmol/L甘氨酸(Gly) 25 μ 1中止反應(yīng)，再加入體積分?jǐn)?shù)為1%的醋酸溶液80 μ 1,加水定容至1000 μ 1,最后溶液用有機(jī)膜過濾,即得測(cè)試液。結(jié)果如高效液相圖1所示。
[0027]實(shí)施例3地骨皮活性部位對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制
地骨皮活性部位(實(shí)施例1制備得到)對(duì)α -葡萄糖苷酶活性的抑制:取ρΗ6.8磷酸鹽緩沖溶液L 85 ml，依次加入0.1 U.πι 1的α -葡萄糖苷酶50 μ L，不同濃度的地骨皮活性部位溶液(0、1、2、3、4、5、6、7 mg ?π 1) 50 μ L,0.0116 mol.L-1 pNPG 50 yL，將上述反應(yīng)體系在37°C恒溫水浴保溫30 min后，立即加入0.1 mol 的Na2C03溶液8 ml終止反應(yīng)，每個(gè)濃度平行做3份，取平均值。
[0028]根據(jù)上述的方法和計(jì)算公式得到地骨皮活性部位對(duì)α -葡萄糖苷酶的抑制作用圖，如圖2所示。從圖中可以明顯地看出，地骨皮活性部位對(duì)α-葡萄糖苷酶具有很強(qiáng)的抑制作用。
[0029]實(shí)施例4地骨皮活性部位對(duì)正常小鼠餐后血糖的影響
地骨皮活性部位(實(shí)施例1制備得到)對(duì)正常小鼠餐后血糖的影響將體重18~22 g的正常小鼠按體重隨機(jī)分為空白對(duì)照組(生理鹽水)、陽性對(duì)照組(4.0 mg / kg阿卡波糖)和2個(gè)給藥組,每組8只，2個(gè)給藥組分別給藥劑量為4.0mg/kg、8.0mg/kg。室溫條件下喂養(yǎng)，飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水，試驗(yàn)前16h禁食不禁水，分別取一定濃度的地骨皮精制部位、阿卡波糖給正常小鼠灌喂，同時(shí)灌喂淀粉(3g/kg)，分別在給藥后0分鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘斷尾采血，采用血糖儀測(cè)定小鼠血糖值。并做好實(shí)驗(yàn)記錄。
[0030]表1.地骨皮活性部位對(duì)正常小鼠糖耐量的影響
【權(quán)利要求】
1.一種地骨皮活性部位的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: S1.將地骨皮粉碎后，用8~15倍的水，加熱回流提取，再將提取液濃縮至 原體積1/3~1/5，加入濃度為90%~?00%的乙醇進(jìn)行醇沉，至最終乙醇濃度為70~80%，取上清液濃縮得原液； S2.將原液通過大孔吸附樹脂，用水洗樹脂柱，收集洗脫液，濃縮得樣品I; S3.將樣品I通過強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂吸附，用3飛倍樹脂體積的水沖洗樹脂柱，棄去水洗脫液部分，再以3飛倍樹脂體積的0.2~1Ν氨水洗脫，收集洗脫液，蒸干，得樣品2 ； S4.將樣品2通過強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂吸附，用3飛倍樹脂體積的水洗脫，收集水洗脫液，濃縮干燥即得地骨皮活性部位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，SI中用10倍的水，于 100°C條件下回流提取2次，每次120分鐘，再將提取液濃縮至原體積1/4，加入濃度為95%的乙醇進(jìn)行醇沉，至最終乙醇濃度為70-75%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，S2中所用大孔吸附樹脂 的重量為地骨皮原藥材重量的f 3倍；用水量為大孔吸附樹脂柱體積的2飛倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，S2中所用的大孔吸附樹 脂的重量為地骨皮原藥材重量的3倍；用水量為大孔吸附樹脂柱體積的3倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，S3所述的強(qiáng)酸型陽離子 交換樹脂為交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸性樹脂；S4所述的強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂為交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)堿性樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，S3所述的氨水的濃度為0.5N。
7.權(quán)利要求1飛任一項(xiàng)所述的制備方法制備得到的地骨皮活性部位。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的地骨皮活性部位，其特征在于，其主要成分為生物堿。
9.權(quán)利要求7所述的地骨皮活性部位在制備抑制α-葡萄糖苷酶活性的藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于制備用于預(yù)防和治療糖尿病、肥胖癥或高血脂的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P3/10GK103690677SQ201310299042
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年7月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月16日
【發(fā)明者】周光雄, 焦呈亮 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)