專利名稱：含有吸收促進(jìn)劑的腸溶安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球在制備鎮(zhèn)痛抗炎的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于含有吸收促進(jìn)劑的安絡(luò)小皮傘糖蛋白腸溶微球的制備方法，以及以該微球?yàn)榛钚猿煞值乃幬锝M合物在鎮(zhèn)痛和抗炎方面的用途，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前世界疼痛的發(fā)病率大約為35% 45%，老年人的發(fā)病率較高，約為75 % 90 %。在以往對(duì)慢性疼痛的調(diào)查中發(fā)現(xiàn):35 %的美國人患有慢性疼痛，29%的加拿大人患有慢性疼痛，患有慢性疼痛的平均年數(shù)是10.7年。在對(duì)中國六大城市的慢性疼痛調(diào)查中發(fā)現(xiàn):成人慢性疼痛的發(fā)病率為40%，老年人慢性疼痛的發(fā)病率為65% 80%。近年來，用于止痛的醫(yī)療費(fèi)用在逐年上升。因此，疼痛不僅是一個(gè)世界范疇的醫(yī)學(xué)問題，也是目前我國主要的健康問題之一。炎癥是十分常見而又重要的基本病理過程，體表的外傷感染和各器官的大部分常見病和多發(fā)病(如癤、癰、肺炎、肝炎、腎炎等)都屬于炎癥性疾病。炎癥疾病也是影響人類健康的重要因素。安絡(luò)小皮傘(Maramins androsaceus Fr.)又稱鬼毛針,為白蘑科小皮傘屬真菌。其安絡(luò)小皮傘菌絲體為安絡(luò)小皮傘的菌種經(jīng)發(fā)酵獲得。在我國醫(yī)藥市場上已有銷售“安絡(luò)痛”是由安絡(luò)小皮傘菌絲體經(jīng)乙醇提取制成的制劑，該制劑通經(jīng)活絡(luò)，活血止痛。用于坐骨神經(jīng)痛、三叉神經(jīng)痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛等疾病的疾病的治療。多年的臨床應(yīng)用和研究發(fā)現(xiàn)，安絡(luò)痛尚主要存在以下不足之處:1、有效成分不清楚:一直以來，人們把一些脂溶性的小分子化合物作為安絡(luò)小皮 傘有效成分，忽略了大分子化合物的研究，致使臨床上的一些現(xiàn)象無法解釋；2、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)低:由于有效成分不明確，使得制劑標(biāo)準(zhǔn)中缺少含量測(cè)定項(xiàng)，影響藥品的質(zhì)量控制；3、提取工藝不合理:目前制劑的工藝沒有充分考慮有效部位的提取、分離，使得提取物中占有大量的不溶物及無效物質(zhì)，給患者服用帶來了不便。4、生物利用度低:我們研究確定安絡(luò)小皮傘鎮(zhèn)痛作用的有效成分為大分子的糖蛋白類化合物，該類化合物口服給藥時(shí)，容易在胃中被胃蛋白酶降解，使生物利用率降低，嚴(yán)重影響該類成分的療效。為了改善安絡(luò)痛的上述缺陷，提高其生物活性，我們對(duì)其工藝進(jìn)行了改進(jìn)，首先通過無水乙醇脫脂、水提取、再經(jīng)大孔樹脂純化的方法得到安絡(luò)小皮傘中真正有鎮(zhèn)痛抗炎活性的成分安絡(luò)小皮傘糖蛋白，為了進(jìn)一步提高安絡(luò)小皮傘糖蛋白的生物活性，通過藥劑學(xué)的方法，加入吸收促進(jìn)劑，制得含有吸收促進(jìn)劑的安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球。同時(shí)，為了防止胃中蛋白酶將該蛋白水解，采用腸溶包衣材料進(jìn)行包衣得腸溶安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球。通過這一工藝得到的安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球，克服了前述安絡(luò)痛的缺陷。整個(gè)工藝過程中除乙醇外沒有使用有機(jī)試劑，具有操作簡單、成本低，純度高、活性強(qiáng)的特點(diǎn)。本發(fā)明中所使用的吸收促進(jìn)劑可以是膽酸鈉、吐溫或司盤類表面活性劑。本發(fā)明完成前未發(fā)現(xiàn)有關(guān)含有吸收促進(jìn)劑的腸溶安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球鎮(zhèn)痛抗炎方面的應(yīng)用，本發(fā)明具有廣泛的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是明確了安絡(luò)小皮傘菌絲體或子實(shí)體中的用于鎮(zhèn)痛消炎的活性成分主要為糖蛋白類，而非脂溶性的小分子化合物。本發(fā)明的目的之二是通過研究確定了含有吸收促進(jìn)劑的腸溶安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球的制備工藝，該工藝所需設(shè)備簡單、可操作性強(qiáng)，通過該工藝得到的糖蛋白微球直徑分布均勻，平均粒徑和跨距分別為:6.5μπι，跨距為11 μ m。微球含藥量測(cè)定結(jié)果表明糖蛋白的含量為70%以上。本發(fā)明的目的之三是將糖蛋白本身具有的特性和微球本身具有的優(yōu)勢(shì)巧妙地結(jié)合在一起，通過微球的特點(diǎn)將該糖蛋白本身固有的活性更有效地發(fā)揮出來，吸收促進(jìn)劑的加入可促進(jìn)該糖蛋白的吸收，提高生物利用度。而且通過用PH55包衣使該糖蛋白免于胃中蛋白酶的破壞。本發(fā)明中在人工胃液和水溶液中的溶解性能實(shí)驗(yàn)也表明此腸溶微球在水中可迅速溶解，而在人工胃液中不溶，達(dá)到了預(yù)想包衣效果，提高口服時(shí)安絡(luò)小皮傘糖蛋白的藥理作用。本發(fā)明的目的之四是含有吸收促進(jìn)劑的腸溶安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球在鎮(zhèn)痛和抗炎方面的用途。雖然在“安絡(luò)痛”也具有該用途，但本發(fā)明的工藝得到的成分主要是大分子糖蛋白，而“安絡(luò)痛”的工藝得到的是小分子脂溶性物質(zhì)，兩者的物質(zhì)基礎(chǔ)是完全不同的。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也表明大分子糖蛋白的活性比“安絡(luò)痛”好。特別是加入了吸收促進(jìn)劑的糖蛋白微球，其鎮(zhèn)痛和抗炎的活性不僅明顯高于安絡(luò)痛，而且與大分子糖蛋白相比，活性具有顯著的差異，因此，本發(fā)明的含有吸收促進(jìn)劑的安絡(luò)小皮傘糖蛋白腸溶微球具有實(shí)質(zhì)的技術(shù)進(jìn)步。本發(fā)明的目的之五是提供含有吸收促進(jìn)劑的腸溶安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球的藥物制劑。特別是膠囊劑、片劑、散劑等各種口服劑型。本發(fā)明的內(nèi)容是能過以下技術(shù)方案來實(shí)施的:一、含有吸收促進(jìn)劑安絡(luò)小皮傘糖蛋白腸溶微球的制備:1.安絡(luò)小皮傘糖蛋白的制取取安絡(luò)小皮傘菌絲體或子實(shí)體5kg，加無水乙醇回流提取I小時(shí)，濾過，反復(fù)提取2次，殘?jiān)?0倍量水，加熱提取I小時(shí)，濾過，反復(fù)提取2次，合并濾液，濃縮至10，000毫升，濃縮液上大孔樹脂經(jīng)水洗至無色后，再用95%的乙醇洗脫至無色，得到95%乙醇洗脫部分，回收乙醇，真空干燥，得安絡(luò)小皮傘糖蛋白650g。2.含吸收促進(jìn)劑的安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球的制備取安絡(luò)小皮傘糖蛋白50g，加入IOg膽酸鈉為吸收促進(jìn)劑，加300ml水，充分?jǐn)嚢枋雇耆芙?。取無水乙醇1000ml，在容器中攪拌(2500-5000轉(zhuǎn)/分鐘)下，加入安絡(luò)小皮傘糖蛋白與膽酸鈉的混合溶液，攪拌五分鐘，開始加熱該混懸溶液，在15-20分鐘內(nèi)使該混懸液達(dá)到沸騰，保持沸騰狀態(tài)至懸浮液體積減少至400ml，加入無水乙醇600ml，繼續(xù)加熱、攪拌，至懸浮液體積達(dá)到400ml。停止加熱，繼續(xù)攪拌至懸浮液降到室溫。放置，待沉降后傾去上清，加入200ml無水乙醇洗滌，傾去乙醇，制得含吸收促進(jìn)劑的安絡(luò)小皮傘微球,干燥，放置備用。3.腸溶微球的制備取含吸收促進(jìn)劑的安絡(luò)小皮 傘微球50g,加入到容器中，加入無水乙醇500ml,攪拌(1000-1500轉(zhuǎn)/分)下，加入羥丙甲纖維素鄰苯二甲酸脂(PH55) IOg,加熱至PH55完全溶解,停止加熱,繼續(xù)攪拌4小時(shí)，放置，沉降。傾去上清,沉淀中加入200ml無水乙醇，攪拌10分鐘(1000-1500轉(zhuǎn)/分)，離心(2000rpm) 2分鐘，棄去上清。沉淀置于適當(dāng)容器中自然干燥。制得含吸收促進(jìn)劑的安絡(luò)小皮傘糖蛋白腸溶微球(以下簡稱腸溶微球)。二、關(guān)于安絡(luò)小皮傘糖蛋白的說明通過對(duì)原料藥中有效成分的提取、分離得到了安絡(luò)小皮傘糖蛋白，其基本化學(xué)表征為:該化合物為糖蛋白，其糖與蛋白是以化學(xué)鍵結(jié)合形式存在的；組成糖分析結(jié)果表明，該化合物主要由葡萄糖、甘露糖兩種單糖組成，蛋白質(zhì)分析結(jié)果表明是由絲氨酸等14種氨基酸組成。三、含有吸收劑的安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球理化性質(zhì)分析結(jié)果1、微球直徑分布范圍取制得的腸溶微球適量，加入0.0lM的鹽酸溶液，震搖，充分混勻。以LS-13320MW激光粒度分析儀(Beckman-Coulter)測(cè)定，得粒徑分布范圍。平均粒徑和跨距分別為:
6.5 μ m,跨距為 11 μ m。2、微球含藥量測(cè)定以苯酚-硫酸法測(cè)定腸溶微球中安絡(luò)小皮傘糖蛋白的含量。以安絡(luò)小皮傘糖蛋白為對(duì)照品。對(duì)照品溶液的制備:精密稱定充分干燥的安絡(luò)小皮傘糖蛋白15.38mg,置IOOml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(每一毫升中含安絡(luò)小皮傘糖蛋白153.8 μ g)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精 密吸取對(duì)照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置于具塞試管中。各補(bǔ)水至1.0ml,再加入5%苯酹水溶液1.0ml,旋潤混合,快速加入濃硫酸5.0ml,攪勻，冷卻至室溫。以O(shè)管為空白，照分光光度法，在490nm波長處測(cè)定吸收度，以安絡(luò)小皮傘糖蛋白微克數(shù)對(duì)應(yīng)的吸收度，計(jì)算回歸方程。樣品測(cè)定:精密稱定干燥的腸溶微球20mg，置IOOml量瓶中，加水溶液至刻度，搖勻，即得樣品溶液(每一毫升中含腸溶微球200 μ g)。分別取樣品0.4和0.8ml，置于具塞試管中。各補(bǔ)水至1.0ml。以下操作按標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定吸收度，根據(jù)回歸方程計(jì)算微球中安絡(luò)小皮傘糖蛋白的含量為70%。3、在人工胃液和水溶液中的溶解性能取腸溶微球10mg，置IOOml量瓶中，加水溶液至刻度，搖勻，即得樣品水溶液(每一毫升中含腸溶微球100 μ g)。觀察微球溶解情況和立刻離心后測(cè)定上清溶液在280nm處的吸收度(以水為空白)，并每隔30分鐘測(cè)定一次。另取腸溶微球10mg，置IOOml量瓶中，加人工胃液至刻度，搖勻，即得樣品溶液(每一毫升中含腸溶微球100 μ g)。觀察微球溶解情況和離心后立刻測(cè)定上清溶液在280nm處的吸收度(以人工胃液為空白)，并每隔30分鐘測(cè)定一次。另取安絡(luò)小皮傘糖蛋白配制成每一毫升中含70 μ g的溶液，測(cè)定吸收度。結(jié)果如表1.
表I腸溶微球在不同溶液中溶解時(shí)間
權(quán)利要求
1.含有吸收促進(jìn)劑的腸溶安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球在制備鎮(zhèn)痛抗炎的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述的腸溶安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球制備方法為: (1)取安絡(luò)小皮傘菌絲體或子實(shí)體5kg，加無水乙醇回流提取2次，每次I小時(shí)，濾過，殘?jiān)铀?0倍量，加熱提取2次，每次I小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮至10，000毫升，濃縮液上DlOl大孔樹脂，先用水洗脫至洗脫液無色，再用95%的乙醇洗脫至洗脫液無色，收集95%乙醇洗脫液，回收乙醇，真空干燥，得安絡(luò)小皮傘糖蛋白； (2)取安絡(luò)小皮傘糖蛋白50g，加吸收促進(jìn)劑10g，加水300ml，充分?jǐn)嚢枋雇耆芙?；取無水乙醇IOOOml,2500-5000轉(zhuǎn)/分鐘攪拌，將上述安絡(luò)小皮傘糖蛋白與吸收促進(jìn)劑的混合溶液加入，加熱攪拌5分鐘，在15-20分鐘內(nèi)使該混懸液達(dá)到沸騰，保持沸騰狀態(tài)至懸浮液體積至400ml,加入無水乙醇600ml,繼續(xù)加熱、攪拌,至懸浮液體積達(dá)到400ml ;停止加熱，繼續(xù)攪拌至懸浮液降到室溫，放置，待沉降后傾去上清，加入200ml無水乙醇洗滌，傾去乙醇，制得含吸收促進(jìn)劑的安絡(luò)小皮傘微球，干燥，放置備用； (3)取含吸收促進(jìn)劑的安絡(luò)小皮傘微球50g，加入到容器中，加入無水乙醇500ml，1000-1500轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?，加入羥丙甲纖維素鄰苯二甲酸脂PH5510g，加熱至PH55完全溶解，停止加熱，繼續(xù)攪拌4小時(shí)，放置，沉降，傾去上清，沉淀中加入200ml無水乙醇，1000-1500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌10分鐘，2000rpm離心2分鐘，棄去上清；沉淀置于適當(dāng)容器中自然干燥，制得含吸收促進(jìn)劑的安絡(luò)小皮傘糖蛋白腸溶微 球。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的腸溶安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球制備方法，其特征在于:所述的吸收促進(jìn)劑可以為膽酸鈉、吐溫、司盤。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于:含有有效治療劑量的含吸收促進(jìn)劑的腸溶安絡(luò)小皮傘糖蛋白微球以及一種或多種藥學(xué)上可接受的藥用賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了含有吸收促進(jìn)劑的安絡(luò)小皮傘糖蛋白腸溶微球的制備方法及其在制備鎮(zhèn)痛抗炎的藥物中的新用途。該微球可保護(hù)安絡(luò)小皮傘糖蛋白在胃中不被溶解，而且可在腸道環(huán)境下迅速釋放。同時(shí)，該微球還含有吸收促進(jìn)劑，可促進(jìn)安絡(luò)小皮傘糖蛋白在腸道中的吸收，提高口服時(shí)安絡(luò)小皮傘糖蛋白的藥理作用。
文檔編號(hào)A61K47/14GK103223159SQ201310150040
公開日2013年7月31日 申請(qǐng)日期2013年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月26日
發(fā)明者高陽, 姜瑞芝, 徐多多, 高其品 申請(qǐng)人:高其品