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抗血管發(fā)生藥物為基礎(chǔ)的抗腫瘤組合物的制作方法

文檔序號(hào):1022548閱讀:312來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:抗血管發(fā)生藥物為基礎(chǔ)的抗腫瘤組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明一般性的涉及腫瘤治療領(lǐng)域,更具體地說(shuō),提供了具有協(xié)同或加和抗腫瘤效果的藥物組合物。
背景技術(shù)
腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma, RCC),起源于腎臟的上皮細(xì)胞,發(fā)病原因還不很清楚,早期沒有警示。多數(shù)腎癌病人以手術(shù)為治療手段,然而超過(guò)50%的患者在診斷時(shí)即有轉(zhuǎn)移或存在術(shù)后復(fù)發(fā)。轉(zhuǎn)移性腎癌平均生存時(shí)間為13個(gè)月。RCC—般對(duì)化療和放療都不敏感。在以受體蛋白激酶(RTKs)做靶標(biāo)之前,轉(zhuǎn)移性腎癌只能用細(xì)胞因子干擾素a(IFNa )或白細(xì)胞介素2 (interleukin-2)來(lái)處理。但是,這些藥劑的有效性很低(〈10%)。同時(shí)會(huì)產(chǎn)生較大的毒性作用。但是最近的幾年中腎癌治療有了革命性進(jìn)展,因?yàn)槊绹?guó)食物和藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)了一組藥物,包括索拉非尼(sorafenib),舒尼替尼(sunitinib)等。這組藥物的主要作用是用來(lái)通過(guò)抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體蛋白激酶(VEGFR)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)達(dá)到抑制腫瘤的血管生成。關(guān)于腫瘤的血管生成,美國(guó)哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Judah Folkman博士最早提出了“腫瘤生長(zhǎng)依賴于其血管發(fā)生(tumor angiogenesis)”的觀點(diǎn)。Folkman指出,一旦腫瘤發(fā)生,腫瘤細(xì)胞數(shù)量的增加,需要依賴于新毛細(xì)血管的形成。新生血管通過(guò)灌輸方式為腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)供給;如果沒有新血管形成/血管發(fā)生,腫瘤的營(yíng)養(yǎng)供給僅能靠基本的物理擴(kuò)散。這就嚴(yán)重地限制了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。之后,哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Harold Dvorak博士發(fā)現(xiàn)了有一種血管通透性因子(VPF),在腫瘤組織內(nèi)的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和血管生成中起作用。哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Yuen Shing和Michael Klagsbrun純化出首個(gè)血管生成因子-堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF);隨后一個(gè)最重要的血管生成因子血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)被Napoleone Ferrara和Jean Plouet發(fā)現(xiàn),并被證實(shí)就是Dvorak發(fā)現(xiàn)的血管通透性因子(VPF)。舒尼替尼(sunitinib)`、索拉非尼(sorafenib)這一類試劑就是通過(guò)選擇性地結(jié)合受體蛋白激酶的ATP結(jié)合位點(diǎn),從而抑制包括VEGFR等在內(nèi)的受體蛋白激酶活性,繼而影響到內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和移動(dòng)、血管通透性、周細(xì)胞(pericyte)的征召等,結(jié)果對(duì)腫瘤的血管發(fā)生造成抑制和破壞,導(dǎo)致腫瘤缺氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),抑制了腫瘤活性,最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞壞死。2005年,索拉非尼在III期臨床隨機(jī)試驗(yàn)中相對(duì)安慰劑組表現(xiàn)出明顯的延長(zhǎng)晚期腎癌患者生存期的作用,F(xiàn)DA批準(zhǔn)索拉非尼作為治療晚期腎癌患者的二線用藥。2006年,舒尼替尼獲得了美國(guó)FDA的批準(zhǔn),作為治療晚期腎癌和胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)的一線用藥。舒尼替尼組病人存活期的中間值(11個(gè)月)要比IFNa組(5個(gè)月)明顯變長(zhǎng);在次要終點(diǎn)評(píng)估(secondary endpoint)中,舒尼替尼組28%的病人有顯著的腫瘤縮小,而IFNa組僅有5%。通過(guò)抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體藥物來(lái)抑制腫瘤血管發(fā)生現(xiàn)已成為治療包括腎癌在內(nèi)地的多種癌癥的核心先進(jìn)方法。但是,雖然病人腫瘤的生長(zhǎng)受到阻礙,但是這種阻礙效果不夠完全也不持久,抗藥性繼而產(chǎn)生??顾幮允侨绾萎a(chǎn)生的問題是現(xiàn)在腎癌等研究的最重要前沿問題之一。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù),本發(fā)明的目的是提供一種抗血管發(fā)生藥物為基礎(chǔ)的抗腫瘤組合物,其中含有一種血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體蛋白激酶抑制藥物,即VEGFR抑制藥物;另一種成分為達(dá)偉可西尼,組合物還包括二者藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。所述達(dá)偉可西尼,其英文名為Deoxyverrucosidin,為已知化合物,已有相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行報(bào)道。所述VEGFR藥物是舒尼替尼,其英文名為Sunitinib,最先于2 0 0 6年被美國(guó)FD A批準(zhǔn)治療腎癌和對(duì)伊馬替尼(imatinib)有抗性的胃腸道間質(zhì)瘤(GIST),而現(xiàn)在已開始被用于其他的腫瘤。2010年11月,索坦(Sutent),是舒尼替尼在Pfizer公司的商標(biāo)名獲得了歐盟委員會(huì)的批準(zhǔn)可以用來(lái)治療胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(pancreatic neuroendocrinetumors).2011年5月,美國(guó)F D A也批準(zhǔn)了舒尼替尼用來(lái)治療胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。舒尼替尼的有效性也正在其他很多腫瘤上試驗(yàn),包括乳腺癌、肺癌、甲狀腺癌和接腸癌,而且初步結(jié)果顯示:同此類藥物治療腎癌類似,有一定的效果但是效果不完全、不持久。針對(duì)性藥物達(dá)偉可西尼的加入可有效解決其抗藥性問題。所述舒尼替尼和達(dá)偉可西尼的質(zhì)量比為:(10-70):40,優(yōu)選(25-55):40,更優(yōu)選40:40。所述抗腫瘤藥物組合物的劑型為:片劑、膠囊或注射劑。我們根據(jù)分子通路的特點(diǎn),選擇針對(duì)性的藥物,同VEGFR抑制藥物一同使用,從根本上解決對(duì)VEGFR抑制藥物抗藥性的問題,大大增加腫瘤治療的療效。申請(qǐng)人首次發(fā)現(xiàn)在腎癌與肺癌細(xì)胞接受抑·制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子藥物舒尼替尼的過(guò)程中,達(dá)偉可西尼對(duì)殺死腫瘤細(xì)胞有巨大的協(xié)同效應(yīng),動(dòng)物細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果均顯示很成功,成功的在很大程度上解決未來(lái)包括這些不同腫瘤在內(nèi)的各種腫瘤用抗VEGFR藥物治療產(chǎn)生的滯后抗藥性問題。


圖1為對(duì)786-0腎癌細(xì)胞移植模型治療效果結(jié)果示意圖。圖2為對(duì)A549肺癌細(xì)胞移植模型治療效果結(jié)果示意圖。圖3為組合物在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的效果結(jié)果示意圖。圖4體外細(xì)胞缺氧與缺營(yíng)養(yǎng)條件組合達(dá)偉可西尼的實(shí)驗(yàn)效果結(jié)果示意圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋。應(yīng)當(dāng)理解的是,以下實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明,而不是限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1 抗腫瘤藥物組合物的制備 配方如下:
舒尼替尼40毫克
達(dá)偉可西尼40毫克
IN HCl940 微升
Tween 8050 微升50 mM的朽1檬酸緩沖液 5毫升 1%的聚乙二醇PEG-300 I毫升 無(wú)菌水加至總量至10毫升
配制方法為:
將40毫克舒尼替尼加入到940微升0.1N HCl中,加50微升Tween 80,再加5毫升50mM的檸檬酸緩沖液,和I毫升1%的聚乙二醇PEG-300,最后加水到10毫升,激烈震蕩使之溶解;將40毫克達(dá)偉可西尼加到上述40毫克舒尼替尼/10毫升中。實(shí)施例2 配方如下:
舒尼替尼10毫克
達(dá)偉可西尼40毫克
IN HCl940 微升
Tween 8050 微升
50 mM的朽1檬酸緩沖液 5毫升
1%的聚乙二 醇PEG-300 I毫升
無(wú)菌水加至總量至10毫升
配制方法為:
將10毫克舒尼替尼加入到940微升0.1N HCl中,加50微升Tween 80,再加5毫升50mM的檸檬酸緩沖液,和I毫升1%的聚乙二醇PEG-300,最后加水到10毫升,激烈震蕩使之溶解;將40毫克達(dá)偉可西尼加到上述10毫克舒尼替尼/10毫升中。實(shí)施例3 配方如下:
舒尼替尼70毫克
達(dá)偉可西尼40毫克
IN HCl940 微升
Tween 8050 微升
50 mM的朽1檬酸緩沖液 5毫升
1%的聚乙二醇PEG-300 I毫升
無(wú)菌水加至總量至10毫升
配制方法為:
將70毫克舒尼替尼加入到940微升0.1N HCl中,加50微升Tween 80,再加5毫升50mM的檸檬酸緩沖液,和I毫升1%的聚乙二醇PEG-300,最后加水到10毫升,激烈震蕩使之溶解;將40毫克達(dá)偉可西尼加到上述70毫克舒尼替尼/10毫升中。實(shí)施例4 配方如下:
舒尼替尼25毫克
達(dá)偉可西尼40毫克
IN HCl940 微升
Tween 8050 微升50 mM的朽1檬酸緩沖液 5毫升 1%的聚乙二醇PEG-300 I毫升 無(wú)菌水加至總量至10毫升
配制方法為:
將25毫克舒尼替尼加入到940微升0.1N HCl中,加50微升Tween 80,再加5毫升50mM的檸檬酸緩沖液,和1毫升1%的聚乙二醇PEG-300,最后加水到10毫升,激烈震蕩使之溶解;將40毫克達(dá)偉可西尼加到上述25毫克舒尼替尼/10毫升中。實(shí)施例5 配方如下:
舒尼替尼55毫克
達(dá)偉可西尼40毫克
IN HCl940 微升
Tween 8050 微升
50 mM的朽1檬酸緩沖液 5毫升
1%的聚乙二醇PEG-300 I毫升
無(wú)菌水加至總量至10毫升 配制方法為:
將55毫克舒尼替尼加入到940微升0.1N HCl中,加50微升Tween 80,再加5毫升50mM的檸檬酸緩沖液,和I毫升1%的聚乙二醇PEG-300,最后加水到10毫升,激烈震蕩使之溶解;將40毫克達(dá)偉可西尼加到上述55毫克舒尼替尼/10毫升中。實(shí)施例6 配方如下:
舒尼替尼33毫克
達(dá)偉可西尼40毫克
IN HCl940 微升
Tween 8050 微升
50 mM的朽1檬酸緩沖液 5毫升
1%的聚乙二醇PEG-300 I毫升
無(wú)菌水加至總量至10毫升
配制方法為:
將33毫克舒尼替尼加入到940微升0.1N HCl中,加50微升Tween 80,再加5毫升50mM的檸檬酸緩沖液,和I毫升1%的聚乙二醇PEG-300,最后加水到10毫升,激烈震蕩使之溶解;將40毫克達(dá)偉可西尼加到上述33毫克舒尼替尼/10毫升中。實(shí)施例7 配方如下:
舒尼替尼48毫克
達(dá)偉可西尼40毫克
IN HCl940 微升
Tween 8050 微升50 mM的朽1檬酸緩沖液 5毫升 1%的聚乙二醇PEG-300 I毫升 無(wú)菌水加至總量至10毫升
配制方法為:
將48毫克舒尼替尼加入到940微升0.1N HCl中,加50微升Tween 80,再加5毫升50mM的檸檬酸緩沖液,和I毫升1%的聚乙二醇PEG-300,最后加水到10毫升,激烈震蕩使之溶解;將40毫克達(dá)偉可西尼加到上述48毫克舒尼替尼/10毫升中。實(shí)施例8對(duì)786-0腎癌細(xì)胞移植模型治療效果評(píng)價(jià)
將5百萬(wàn)個(gè)786-0腎癌細(xì)胞皮下注射到16個(gè)免疫缺陷裸鼠里,并讓他們長(zhǎng)到直徑10_。然后將老鼠分為4個(gè)組,分別用空白試劑,即作空白對(duì)照、與組合物中等量的舒尼替尼、于組合物中等量的達(dá)偉可西尼、實(shí)施例1所制備的組合物制劑來(lái)進(jìn)行口服處理,口服劑量均為10ml/kg。每隔5天測(cè)量腫瘤在垂直2個(gè)方向的大小。如圖1所示,注射組合物后的腫瘤大小有效得到控制,抑制率將近100%,是單獨(dú)使用舒尼替尼藥物的約5倍。實(shí)施例9對(duì)A549肺癌細(xì)胞移植模型治療效果評(píng)價(jià)
將5百萬(wàn)個(gè)A549肺癌細(xì)胞皮下注射到免疫缺陷裸鼠里,并讓他們長(zhǎng)到直徑10mm。然后將老鼠分為4個(gè)組,分別用空白試劑,即作空白對(duì)照、與組合物中等量的舒尼替尼、于組合物中等量的達(dá)偉可西尼、實(shí)施例1所制備的組合物制劑來(lái)進(jìn)行口服處理,口服劑量均為10ml/kg。每隔5天測(cè)量腫瘤在垂直2個(gè)方向的大小。如圖2所示,注射組合物后的腫瘤大小有效得到控制,抑制率將近100%,是單獨(dú)使用藥物的約4倍。實(shí)施例10
腎癌細(xì)胞786-0與肺癌細(xì)胞A549分別與空白試劑、150nM達(dá)偉可西尼、150nM舒尼替尼或?qū)嵤├?-5任一項(xiàng)所述配方的組合物孵育48小時(shí),所述組合物的加入量為保證最終舒尼替尼的濃度為150 nM,然后分析存活的細(xì)胞水平,用Promega的單溶液細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒,即:CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay 來(lái)分析,這是一個(gè)敏感而準(zhǔn)確的測(cè)定活細(xì)胞水平(細(xì)胞繁殖+細(xì)胞毒性)的方法。如圖3所示,對(duì)腎癌細(xì)胞786-0的抑制作用,組合物的抑制率達(dá)到69%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于單用舒尼替尼的10%和單用達(dá)偉可西尼的7% ;同樣,在肺癌細(xì)胞A549中,組合物的抑制率達(dá)到71%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于單用舒尼替尼的13%和單用達(dá)偉可西尼的5%。經(jīng)試驗(yàn)證明,實(shí)施例2-7任一項(xiàng)所述的組合物配比,分別經(jīng)過(guò)實(shí)施例8-10所述的檢測(cè)方法進(jìn)行效果驗(yàn)證,所得結(jié)果基本一致,同樣表明二者具有很好的協(xié)同作用。實(shí)施例11
腎癌細(xì)胞786-0與肺癌細(xì)胞A549分別與空白試劑、150nM達(dá)偉可西尼,在缺氧缺營(yíng)養(yǎng)或正常條件下分別進(jìn)行孵育48小時(shí),其中缺氧指氧含量0.5%,缺營(yíng)養(yǎng)指無(wú)糖,然后分析存活的細(xì)胞水平,用Promega的單溶液細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒來(lái)分析。其中缺氧缺營(yíng)養(yǎng)的條件即為VEGFR抑制類藥物的作用機(jī)理,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中可用來(lái)代替此類藥物的作用,視為同樣的細(xì)胞模型。

如圖4所示,通過(guò)缺氧缺營(yíng)養(yǎng)代替VEGFR抑制類藥物,如舒尼替尼,與達(dá)偉可西尼組合時(shí)有同樣的效果,在腎癌細(xì)胞786-0與肺癌細(xì)胞A549中抑制率分別達(dá)到82%和88%,進(jìn)一步證實(shí)了 2者合用的協(xié)同作用。從而說(shuō)明VEGFR抑制類藥物與達(dá)偉可西尼組合使用,具有很好的 協(xié)同效果。
權(quán)利要求
1.一種抗血管發(fā)生藥物為基礎(chǔ)的抗腫瘤組合物,其特征在于其中含有一種血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體蛋白激酶抑制藥物和達(dá)偉可西尼,及二者藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗血管發(fā)生藥物為基礎(chǔ)的抗腫瘤組合物,其特征在于所述血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體蛋白激酶抑制藥物是舒尼替尼。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗血管發(fā)生藥物為基礎(chǔ)的抗腫瘤組合物,其特征在于所述舒尼替尼和達(dá)偉可西尼的質(zhì)量比為(10-70) :40。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗血管發(fā)生藥物為基礎(chǔ)的抗腫瘤組合物,其特征在于所述舒尼替尼和達(dá)偉可西尼的質(zhì)量比為(25-55) :40。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗血管發(fā)生藥物為基礎(chǔ)的抗腫瘤組合物,其特征在于所述舒尼替尼和達(dá)偉可西尼的質(zhì)量比為40:40。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗血管發(fā)生藥物為基礎(chǔ)的抗腫瘤組合物,其特征在于所述抗腫瘤藥物組合物的劑型為片劑、膠囊或注射劑。
全文摘要
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù),本發(fā)明的目的是提供一種抗血管發(fā)生藥物為基礎(chǔ)的抗腫瘤組合物,其中含有一種血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體蛋白激酶抑制藥物,即VEGFR抑制藥物;另外,我們根據(jù)分子通路的特點(diǎn),選擇針對(duì)性的藥物達(dá)偉可西尼(Deoxyverrucosidin),及其藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑,同VEGFR抑制藥物及其藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑一同使用,從根本上解決對(duì)VEGFR抑制藥物抗藥性的問題,大大增加腫瘤治療的療效。
文檔編號(hào)A61K31/366GK103251586SQ20131013581
公開日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2013年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月18日
發(fā)明者朱曙東 申請(qǐng)人:朱曙東
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