專利名稱：制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有的人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的制備，由于工藝、處理劑等原因，處理時(shí)間長(zhǎng)，效率低，易造成組織結(jié)構(gòu)的破壞，影響產(chǎn)品質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種生產(chǎn)效率高，產(chǎn)品質(zhì)量好的制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:
一種制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法，其特征是:包括下列步驟:
(一)組織初加工:將人體或動(dòng)物的組織用機(jī)械方法去除表面脂肪，按臨床用途制備成臨床所需的各種形狀；
(二)病毒滅活、脫脂、脫細(xì)胞:
依次經(jīng)下列步驟處理:
(1)將經(jīng)過初加工的人體或動(dòng)物組織，用第一滅活、脫脂液進(jìn)行病毒滅活和脫脂處理10^30分鐘；所述第一滅活、脫脂液由0.1% 2%的過氧乙酸、1°/Γ5%的氯化鈉溶液、0.5 2%的表面活性劑及余量的水組成；
(2)將經(jīng)上述步驟處理的人體或動(dòng)物組織用第二滅活、脫脂液進(jìn)行病毒滅活和脫脂處理1(Γ30分鐘；所述第二滅活、脫脂液由1%_4%的燒堿、0.5%-2%的表面活性劑及余量的水組成；
(3)將經(jīng)上述步驟處理的人體或動(dòng)物組織用滅活、脫細(xì)胞液進(jìn)行病毒滅活和脫細(xì)胞處理10 30分鐘；所述滅活、脫細(xì)胞液由0.1% 2%的過氧乙酸、1°/Γ5%的氯化鈉溶液、0.5 2%的表面活性劑、0.2°/Γ2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水組成，并用0.1%-4%的純堿調(diào)pH值為5 7，處理溫度為30°C -40°C ；
(4)循環(huán)操作:根據(jù)組織的不同，將上述步驟(I)、(2)、(3)循環(huán)操作I 次；
(5)組織保存:將制備好的組織浸泡于保存液中，用PE或PVC材質(zhì)的密封袋保存，根據(jù)需要保存廣12個(gè)月；所述保存液由0.19Γ2%的過氧乙酸、19Γ5%的氯化鈉及余量的水組成，并用0.1%-4%的純堿調(diào)pH值為5 7 ；
(6)凍干、包裝、輻照消毒:將產(chǎn)品低溫冷凍干燥，成型包裝、再經(jīng)Y射線輻照或環(huán)氧乙烷消毒滅菌，即為成品。第一滅活、脫脂液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。第二滅活、脫脂液中的表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。滅活、脫細(xì)胞液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。
步驟(4)循環(huán)操作時(shí)，皮膚組織循環(huán)操作2 3次；胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜組織循環(huán)操作廣2次；血管、神經(jīng)、心臟瓣膜、骨、軟骨、肌腱組織循環(huán)操作3 7次。本發(fā)明生產(chǎn)效率高，產(chǎn)品質(zhì)量好；將人類或動(dòng)物的組織如:皮膚、胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜、血管、神經(jīng)、心臟瓣膜、骨、軟骨、肌腱等，用病毒滅活、脫脂、脫細(xì)胞等工藝處理后得到脫細(xì)胞組織，為一種無細(xì)胞的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組織，保留細(xì)胞外基質(zhì)成分。該方法制備的組織，可以作為人體植入性的修復(fù)材料，也可以作為組織工程細(xì)胞培養(yǎng)的支架材料。皮膚、胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜等也可作為創(chuàng)面覆蓋材料。下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例1:
一種制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法，包括下列步驟:
(一)組織初加工:將人體或動(dòng)物的組織(本實(shí)施例為:胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜或心包膜組織)用機(jī)械方法去除表面脂肪，按臨床用途制備成臨床所需的各種形狀；
(二)病毒滅活、脫脂、脫細(xì)胞:
依次經(jīng)下列步驟處理:
(1)將經(jīng)過初加工的人體或動(dòng)物組織，用第一滅活、脫脂液進(jìn)行病毒滅活和脫脂處理30分鐘；所述第一滅活、脫脂液由2%的過氧乙酸、I的氯化鈉溶液、2%的表面活性劑及余量的水組成；用過氧乙酸和氯化鈉溶液進(jìn)行滅活，同時(shí)加入表面活性劑進(jìn)行脫脂，在病毒滅活的同時(shí)又達(dá)到脫脂的效果，具有脫脂時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。(2)將經(jīng)上述步驟處理的人體或動(dòng)物組織用第二滅活、脫脂液進(jìn)行病毒滅活和脫脂處理20分鐘；所述第二滅活、脫脂液由4%的燒堿、1%的表面活性劑及余量的水組成；用2%的燒堿進(jìn)行病毒滅活，同時(shí)加入0.5%%的表面活性劑進(jìn)行脫脂，具有脫脂時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。(3)將經(jīng)上述步驟處理的人體或動(dòng)物組織用滅活、脫細(xì)胞液進(jìn)行病毒滅活和脫細(xì)胞處理30分鐘；所述滅活、脫細(xì)胞液由2%的過氧乙酸、1%的氯化鈉溶液、0.5%的表面活性齊[J、0.2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水組成，并用0.1%%的純堿調(diào)pH值為5，處理溫度為300C0C ;在病毒滅活的同時(shí)，進(jìn)行脫脂和脫細(xì)胞，具有脫脂時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。(4)循環(huán)操作:將上述步驟(1)、(2)、(3)循環(huán)操作廣2次；循環(huán)操作具有病毒滅活徹底，脫脂、脫細(xì)胞時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。一般情況下，在24小時(shí)內(nèi)完成組織脫細(xì)胞過程。(5)組織保存:將制備好的組織浸泡于保存液中，用PE或PVC材質(zhì)的密封袋保存，根據(jù)需要保存廣12個(gè)月；所述保存液由0.19Γ2%的過氧乙酸、19Γ5%的氯化鈉及余量的水組成，并用0.1%-4%的純堿調(diào)pH值為5 7 ;保存液的配方合理，保存工藝有利于進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，降低原料采購(gòu)成本和生產(chǎn)成本。(6)凍干、包裝、輻照消毒:將產(chǎn)品低溫冷凍干燥，成型包裝、再經(jīng)Y射線輻照或環(huán)氧乙烷消毒滅菌，即為成品。第一滅活、脫脂液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。第二滅活、脫脂液中的表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
滅活、脫細(xì)胞液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。實(shí)施例2:
一種制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法，包括下列步驟:
(一)組織初加工:將人體或動(dòng)物的組織(皮膚組織)用機(jī)械方法去除表面脂肪，按臨床用途制備成臨床所需的各種形狀；
(二)病毒滅活、脫脂、脫細(xì)胞:
依次經(jīng)下列步驟處理:
(I)將經(jīng)過初加工的人體或動(dòng)物的皮膚組織，用第一滅活、脫脂液進(jìn)行病毒滅活和脫脂處理10分鐘；所述第一滅活、脫脂液由0.1%的過氧乙酸、3%的氯化鈉溶液、1%的表面活性劑及余量的水組成；用過氧乙酸和氯化鈉溶液進(jìn)行滅活，同時(shí)加入表面活性劑進(jìn)行脫脂，在病毒滅活的同時(shí)又達(dá)到脫脂的效果，具有脫脂時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。(2)將經(jīng)上述步驟處理的人體或動(dòng)物的皮膚組織用第二滅活、脫脂液進(jìn)行病毒滅活和脫脂處理30分鐘；所述第二滅活、脫脂液由1%%的燒堿、2%的表面活性劑及余量的水組成；用4%的燒堿進(jìn)行病毒滅活，同時(shí)加入1%的表面活性劑進(jìn)行脫脂，具有脫脂時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。(3)將經(jīng)上述步驟處理的人體或動(dòng)物的皮膚組織用滅活、脫細(xì)胞液進(jìn)行病毒滅活和脫細(xì)胞處理20分鐘；所述滅活、脫細(xì)胞液由1%的過氧乙酸、3%的氯化鈉溶液、2%的表面活性劑、1%的胰酶或胰蛋白 酶及余量的水組成，并用0.1%的純堿調(diào)pH值為67，處理溫度為350C ;在病毒滅活的同時(shí)，進(jìn)行脫脂和脫細(xì)胞，具有脫脂時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。(4)循環(huán)操作:將上述步驟(1)、(2)、(3)循環(huán)操作2 3次；循環(huán)操作具有病毒滅活徹底，脫脂、脫細(xì)胞時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。一般情況下，在24小時(shí)內(nèi)完成組織脫細(xì)胞過程。(5)組織保存:將制備好的組織浸泡于保存液中，用PE或PVC材質(zhì)的密封袋保存，根據(jù)需要保存廣12個(gè)月；所述保存液由0.19Γ2%的過氧乙酸、19Γ5%的氯化鈉及余量的水組成，并用0.1%-4%的純堿調(diào)pH值為5 7 ;保存液的配方合理，保存工藝有利于進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，降低原料采購(gòu)成本和生產(chǎn)成本。(6)凍干、包裝、輻照消毒:將產(chǎn)品低溫冷凍干燥，成型包裝、再經(jīng)Y射線輻照或環(huán)氧乙烷消毒滅菌，即為成品。第一滅活、脫脂液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。第二滅活、脫脂液中的表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。滅活、脫細(xì)胞液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。實(shí)施例3:
一種制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法，包括下列步驟:
(一)組織初加工:將人體或動(dòng)物的組織(本實(shí)施例為血管、神經(jīng)、心臟瓣膜、骨、軟骨或肌腱組織)用機(jī)械方法去除表面脂肪，按臨床用途制備成臨床所需的各種形狀；
(二)病毒滅活、脫脂、脫細(xì)胞:依次經(jīng)下列步驟處理:
(I)將經(jīng)過初加工的人體或動(dòng)物組織，用第一滅活、脫脂液進(jìn)行病毒滅活和脫脂處理20分鐘；所述第一滅活、脫脂液由1%的過氧乙酸、5%的氯化鈉溶液、0.5%的表面活性劑及余量的水組成；用過氧乙酸和氯化鈉溶液進(jìn)行滅活，同時(shí)加入表面活性劑進(jìn)行脫脂，在病毒滅活的同時(shí)又達(dá)到脫脂的效果，具有脫脂時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。(2)將經(jīng)上述步驟處理的人體或動(dòng)物組織用第二滅活、脫脂液進(jìn)行病毒滅活和脫脂處理10分鐘；所述第二滅活、脫脂液由2%的燒堿、0.5%%的表面活性劑及余量的水組成；用1%%的燒堿進(jìn)行病毒滅活，同時(shí)加入2%的表面活性劑進(jìn)行脫脂，具有脫脂時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。(3)將經(jīng)上述步驟處理的人體或動(dòng)物組織用滅活、脫細(xì)胞液進(jìn)行病毒滅活和脫細(xì)胞處理10分鐘；所述滅活、脫細(xì)胞液由2%的過氧乙酸、1%的氯化鈉溶液、0.5%的表面活性齊U、2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水組成，并用4%的純堿調(diào)pH值為7，處理溫度為40°C ；在病毒滅活的同時(shí)，進(jìn)行脫脂和脫細(xì)胞，具有脫脂時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。(4)循環(huán)操作:將上述步驟(1)、(2)、(3)循環(huán)操作3 7次；循環(huán)操作具有病毒滅活徹底，脫脂、脫細(xì)胞時(shí)間短、效率高、對(duì)組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的特點(diǎn)。一般情況下，在24小時(shí)內(nèi)完成組織脫細(xì)胞過程。(5)組織保存:將制備好的組織浸泡于保存液中，用PE或PVC材質(zhì)的密封袋保存，根據(jù)需要保存廣12個(gè)月；所述保存液由0.19Γ2%的過氧乙酸、19Γ5%的氯化鈉及余量的水組成，并用0.1%-4%的純堿調(diào)pH值為5 7 ;保存液的配方合理，保存工藝有利于進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，降低原料采購(gòu)成本和生產(chǎn)成本。(6)凍干、包裝、輻照消毒:將產(chǎn)品低溫冷凍干燥，成型包裝、再經(jīng)Y射線輻照或環(huán)氧乙烷消毒滅菌，即為成品。

第一滅活、脫脂液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。第二滅活、脫脂液中的表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。滅活、脫細(xì)胞液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。
權(quán)利要求
1.一種制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法，其特征是:包括下列步驟: (一)組織初加工:將人體或動(dòng)物的組織用機(jī)械方法去除表面脂肪，按臨床用途制備成臨床所需的各種形狀； (二)病毒滅活、脫脂、脫細(xì)胞: 依次經(jīng)下列步驟處理: (1)將經(jīng)過初加工的人體或動(dòng)物組織，用第一滅活、脫脂液進(jìn)行病毒滅活和脫脂處理10^30分鐘；所述第一滅活、脫脂液由0.1% 2%的過氧乙酸、1°/Γ5%的氯化鈉溶液、0.5 2%的表面活性劑及余量的水組成； (2)將經(jīng)上述步驟處理的人體或動(dòng)物組織用第二滅活、脫脂液進(jìn)行病毒滅活和脫脂處理1(Γ30分鐘；所述 第二滅活、脫脂液由1%_4%的燒堿、0.5%-2%的表面活性劑及余量的水組成； (3)將經(jīng)上述步驟處理的人體或動(dòng)物組織用滅活、脫細(xì)胞液進(jìn)行病毒滅活和脫細(xì)胞處理1(Γ30分鐘；所述滅活、脫細(xì)胞液由0.1°/Γ2%的過氧乙酸、1°/Γ5%的氯化鈉溶液、0.5 2%的表面活性劑、0.2°/Γ2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水組成，并用0.1%-4%的純堿調(diào)pH值為5 7，處理溫度為30°C -40°C ； (4)循環(huán)操作:根據(jù)組織的不同，將上述步驟(I)、(2)、(3)循環(huán)操作I 次； (5)組織保存:將制備好的組織浸泡于保存液中，用PE或PVC材質(zhì)的密封袋保存，根據(jù)需要保存廣12個(gè)月；所述保存液由0.19Γ2%的過氧乙酸、19Γ5%的氯化鈉及余量的水組成，并用0.1%-4%的純堿調(diào)pH值為5 7 ； (6)凍干、包裝、輻照消毒:將產(chǎn)品低溫冷凍干燥，成型包裝、再經(jīng)Y射線輻照或環(huán)氧乙烷消毒滅菌，即為成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法，其特征是:第一滅活、脫脂液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法，其特征是:第二滅活、脫脂液中的表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法，其特征是:滅活、脫細(xì)胞液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法，其特征是:步驟(4)循環(huán)操作時(shí)，皮膚組織循環(huán)操作2 3次；胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜組織循環(huán)操作f 2次；血管、神經(jīng)、心臟瓣膜、骨、軟骨、肌腱組織循環(huán)操作3 7次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備人體或動(dòng)物脫細(xì)胞組織的方法，該方法是將人類或動(dòng)物的組織如皮膚、胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜、血管、神經(jīng)、心臟瓣膜、骨、軟骨、肌腱等，用病毒滅活、脫脂、脫細(xì)胞等工藝處理后得到的脫細(xì)胞組織，為一種無細(xì)胞的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組織，保留細(xì)胞外基質(zhì)成分。該方法制備的組織，可以作為人體植入性的修復(fù)材料，也可以作為組織工程細(xì)胞培養(yǎng)的支架材料。皮膚、胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜等也可作為創(chuàng)面覆蓋材料。
文檔編號(hào)A61L27/36GK103191466SQ20131012840
公開日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2013年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月15日
發(fā)明者潘華倩 申請(qǐng)人:潘華倩