用于治療脂肪沉積的方法
【專利摘要】本發(fā)明的實施方案包括用于治療脂肪沉積的方法和組合物。
【專利說明】用于治療脂肪沉積的方法
[0001]相關申請的交叉引用
[0002]本專利申請根據35U.S.C.§ 119(e)要求2011年7月20日提交的美國臨時專利申請序列N0.61/509，700的優(yōu)先權，其內容在此以全文引用的方式并入。
發(fā)明領域
[0003]本發(fā)明涉及用肉毒桿菌毒素治療脂肪沉積的方法。
[0004]背景
[0005]在美國肥胖已變成一種流行病，據報道60%的成年人群超重或肥胖(Khaitan，2005)。發(fā)達國家以及發(fā)展中國家都出現(xiàn)了這種健康問題(Prentice，2006)。肥胖的負擔可引起健康問題，而且引起尷尬、辨別力和抑郁的心理障礙(Villareal，2005)。多種療法存在靶向以降低總脂肪組織水平，諸如脂肪酶抑制劑和食欲抑制劑。此外，包括減肥手術或
LAPBAND?的手術干預可減少食物攝取，這引起總體脂肪水平降低。
[0006]近年來，已經提出A型肉毒桿菌毒素可在皮下脂肪細胞中減輕肥胖(Lim，2006)。這種情況發(fā)生的機理未知，然而可推測副交感神經信號傳導和毒素對各種脂質膜結構的干擾。脂肪分布被認為是在自主控制下通過神經信號傳導調節(jié)的。此外，副交感神經信號傳導顯示為高度參與肥胖。Balbo等.(2000)報道了脂肪堆積在切斷迷走神經的肥胖大鼠中減少。脂肪墊特異性迷走神經切斷術顯示降低了胰島素依賴的對脂肪組織中的葡萄糖和游離脂肪酸的攝取(Kreier，2002)。內臟肥胖顯示與高交感神經張力和副交感神經張力相聯(lián)系(Lindmark,2005)。
[0007]肉毒桿菌神經毒素的臨床作用
[0008]隨意運動神經(VoluntaryMotor Nerves)
[0009]肉毒桿菌毒素的第一用途且仍為首要用途是阻斷運動神經與肌肉纖維的聯(lián)系。將BT注射至靶肌肉內。然后將所述肉毒桿菌毒素內化至運動神經元內，在該運動神經元中肉毒桿菌毒素降低或停止神經遞質乙酰膽堿(AChE)的釋放，從而引起肌肉局部麻痹或麻痹。Scott引入向具體斜視眼疾患(斜視、內斜眼)局部肌肉注射肉毒桿菌毒素的概念。然后發(fā)現(xiàn)肉毒桿菌毒素可特別用于運動障礙諸如抽搐、痙攣、攣縮、抽筋和顫栗。最近，已發(fā)現(xiàn)向面部肌肉內注射肉毒桿菌毒素可改善與老化相關的皮膚皺縮和紋理。肉毒桿菌毒素的另一個最近的應用是降低在諸如頭痛和顳下頜關節(jié)綜合征的疾患中的伴隨肌張力的疼痛。
[0010]自主 運動神經元
[0011]自主神經系統(tǒng)被劃分成交副感神經系統(tǒng)和交感神經系統(tǒng)。副交感神經元使用乙酰膽堿作為其神經遞質，并且其可被肉毒桿菌毒素阻斷。交感神經系統(tǒng)使用去甲腎上腺素作為其神經遞質(唯一的例外是發(fā)汗)，并且神經遞質不被肉毒桿菌毒素阻斷。副交感神經系統(tǒng)的效應神經元神經支配(innervate)并控制平滑肌收縮。注射肉毒桿菌毒素已用于降低食道下端括約肌、食道、胃壁和幽門括約肌、奧狄括約肌、肛門括約肌和膀胱中的平滑肌的張力。
[0012]自主分泌神經元[0013]除了其平滑肌的神經支配，自主系統(tǒng)的神經元控制或調節(jié)多種其它功能，諸如遍及身體的各種腺體的分泌。注射肉毒桿菌毒素已用于減少胃分泌物(包括酸生成)、鼻分泌物和其它呼吸道分泌物、及流淚。
[0014]神經肽
[0015]除了在局部突觸部位處釋放的神經遞質之外，許多自主神經和感覺神經可沿著軸突的部分或全部長度釋放神經肽。這些肽在皮膚中作為炎癥、過敏反應和疼痛的介體最為顯著。例如，小區(qū)域內的皮膚損傷導致周圍區(qū)域中的反射性血管舒張。這些反應是神經介導的，并且依賴于神經肽的釋放。盡管皮膚的神經源性血管舒張被肉毒桿菌毒素阻斷，但其它現(xiàn)象諸如疼痛和腫脹是否被抑制仍然不確定。
[0016]A型肉毒桿菌毒素的作用機制直接影響乙酰膽堿的釋放，從而可在注射的肌肉部分影響迷走神經(vagotone)。另外，對7種血清型肉毒桿菌毒素A_G的機制的研究報道，其參與細胞膜脂質雙層和脂筏(以及其它脂肪細胞型脂肪結構)中的破壞。PH的改變、脂筏中的破壞和脂質雙層中離子通道的形成都已經公開為肉毒桿菌毒素的機制(Montecucco，1989 ；Petro,2006 ；Kamta, 1994 ;0blatt_Montal，1995)。脂肪細胞由各種類型的結構構成，諸如游離脂肪酸和磷脂。該毒素證明可在注射部位處破壞脂肪組織，但這些機理目前是未知的。
[0017]最近，Bagheri等(2010)通過用鹽水和2種不同劑量的A型毒素9次皮下注射至兔子腹部，研究了肉毒桿菌毒素的脂解作用。該研究小組報告了當檢查切除的腹部脂肪組織時，處理組相對 于安慰劑組的定量和定性改變。在脂肪層變薄、脂肪細胞內脂肪球尺寸減小、脂肪球破裂和破碎及脂肪球消失的過程中，觀察到腹部皮下脂肪組織中的變化(Bagheri，2010)。與安慰劑組兔子腹部相比，脂肪細胞體積減少65%和77%。脂肪細胞表面也顯著降低。
[0018]厭氧的、革蘭氏陽性細菌肉毒梭菌產生有效的多肽神經毒素、肉毒桿菌毒素，其引起人和動物的神經性麻痹疾病(稱為肉毒中毒)。肉毒梭菌的孢子存在于土壤中，并且可在家用罐頭工廠(home based canneries)的不適當消毒和密封的食品容器中生長,其是很多肉毒中毒病例的原因。肉毒中毒的影響通常在吃了感染肉毒梭菌培養(yǎng)物或孢子的食物之后18至36小時出現(xiàn)。肉毒桿菌毒素顯然可無衰減地通過腸壁，并攻擊外周運動神經元。肉毒桿菌毒素中毒的癥狀可將行走、吞咽和說話困難發(fā)展到呼吸肌癱瘓和死亡。
[0019]A型肉毒桿菌毒素是人類已知的最致命的天然生物制劑。約50皮克的A型肉毒桿
菌毒素(購自Irvine, Calif.的Allergan, Inc.,商品名為BOTOXk )在小鼠中為LD50。
一個單位(U)的肉毒桿菌毒素被定義為當經腹膜內注射到Swiss Webster雌性小鼠(每只體重為18-20克)時的LD5tlt5七種免疫學上不同的肉毒桿菌神經毒素已被鑒定，其分別是肉毒桿菌毒素血清型A、B、C1、D、E、F和G，其通過用類型特異性抗體中和來區(qū)分。不同血清型的肉毒桿菌毒素在其影響的不同動物物種中和其引起的麻痹的嚴重程度和持續(xù)時間中變化。肉毒桿菌毒素明顯以高親和力與膽堿能運動神經元結合，并被易位至神經元，并阻斷乙酰膽堿的釋放。
[0020]肉毒桿菌毒素已在臨床背景中用于治療特征為過度活躍的骨骼肌的神經肌肉疾病。A型肉毒桿菌毒素已經被美國食品與藥品管理局批準用于治療瞼痙攣、斜視和偏側面肌痙攣、頸肌張力障礙和偏頭痛。B型肉毒桿菌毒素也已被FDA批準用于治療頸肌張力障礙。通常在注射一周內就觀察到A型外周肌內肉毒桿菌毒素的臨床效應。單次肌內注射A型肉毒桿菌毒素的癥狀緩解的典型持續(xù)時間平均約為三個月。
[0021]已報道，A型肉毒桿菌毒素已用于如下臨床背景中:
[0022]每次肌內注射約75-125U BOTOX' (多塊肌肉)以治療頸肌張力障礙；
[0023]每次肌內注射5-10U BOTOX?以治療眉間紋(眉部皺紋)(向降眉間肌肌內注射5U，并向每塊皺眉肌肌內注射10U)；
[0024]通過向恥骨直腸肌括約肌肌內注射約30-80U BOTOX'以治療便秘；
[0025]通過注射上眼臉的外側瞼板前眼輪阻肌(lateral pre-tarsal orbicularisoculi muscle)和下眼臉的外側瞼板前眼輪匝肌，向每塊肌肉肌內注射約1_5U BOTOX"以治療眼瞼痙攣。
[0026]為了治療斜視，已向眼外肌肌內注射約1-5U BOTOX ",注射量根據待注射肌肉
的尺寸和所需的肌肉麻痹程度而改變(即所需的屈光度矯正的量)。
[0027]為了治療中風后的上肢痙攣，通過向如下的五種不同的上肢屈肌肌內注射
BOTOXk:
[0028](a)指深屈肌-J.5U 至 30U
[0029](b)指淺屈肌:7.5U 至 30U
[0030](c)尺側腕屈肌:10U至40U
[0031](d)橈側腕屈肌:15U至60U
[0032](e)肱二頭肌:50U 至 200U。
[0033]已經在相同的治療期間對五種指示的肌肉的每一種進行注射，在每個治療階段通過肌內注射使得所述患者接受90U至360U的上肢屈肌BOTOXli。
[0034]為了治療偏頭痛，顱骨膜(對稱到眉間肌、額肌和顳肌)注射25U BOTOXx已經
顯示出作為預防性治療與媒介物相比的顯著益處，這通過25U注射后的三個月內偏頭痛發(fā)病率、最大嚴重程度、相關嘔吐和急性藥物使用的減少量度所測量的。
[0035]另外，肌內注射肉毒桿菌毒素已用于治療帕金森病患者的震顫，盡管已報道結果不顯著° Marjama-Jyons, J.，等，Tremor-Predominant Parkinson's Disease, Drugs&Agingl6(4);273-278:2000。
[0036]肉毒桿菌毒素除了在外周位置處具有藥理作用之外，還可在中樞神經系統(tǒng)中具有抑制作用。Weigand 等,Naunyn-Schmiedeberg's Arch.Pharmacol.1976; 292, 161-165 和Habermann, Naunyn-Schmiedeberg's Arch.Pharmacol.1974; 281，47-56 的工作顯不肉毒桿菌毒素能夠通過逆向運輸上升至脊髓區(qū)。因此，在外周位置處注射(例如肌內)的肉毒桿菌毒素可逆向運輸至脊髓。
[0037]美國專利N0.5，989，545公開了經化學共軛或重組融合至特定靶向部分的修飾的梭菌神經毒素或其片段，優(yōu)選為肉毒桿菌毒素，可通過將藥劑施用至脊髓來用于治療疼痛。
[0038]肉毒桿菌毒素已被建議用于治療鼻漏、多汗癥和自主神經系統(tǒng)介導的其它病癥(美國專利N0.5，766，605)、緊張性頭痛(美國專利N0.6，458，365)、偏頭痛(美國專利N0.5，714，468)、術后疼痛和內臟疼痛(美國專利N0.6，464，986)、通過脊柱內毒素施用的疼痛治療(美國專利N0.6，113，915)、通過顱內毒素施用的帕金森病和伴有運動障礙組分的其它疾病(美國專利N0.6，306，403)、毛發(fā)生長和毛發(fā)固位(美國專利N0.6，299，893)、銀屑病和皮炎(美國專利N0.5，670，484)、受損的肌肉(美國專利n0.6，423，319、各種癌癥(美國專利N0.6，139，845)、胰腺病癥(美國專利N0.6，143，306)、平滑肌病癥(美國專利N0.5，437，291，包括將肉毒桿菌毒素注射至食管上端和下端、幽門括約肌和肛門括約肌))、前列腺病(美國專利N0.6，365，164)、炎癥、關節(jié)炎和痛風(美國專利N0.6，063，768)、青少年腦癱(美國專利N0.6，395，277)、內耳疾病(美國專利N0.6，265，379)、甲狀腺病(美國專利N0.6，358，513)、甲狀旁腺病(美國專利N0.6，328，977)。另外，控釋毒素植入物是已知的(參見如美國專利N0.6，306，423和美國專利N0.6，312，708)。
[0039]概述
[0040]本發(fā)明的實施方案包括治療脂肪沉積的方法，所述方法包括向患者的受影響區(qū)域施用肉毒桿菌組合物。在實施方案中，所述患者是雌性。在實施方案中，所述肉毒桿菌是以50至300單位的量施用的A型肉毒桿菌。
[0041]示例性實施方案的描述
[0042]本發(fā)明的實施方案使用方法和包括肉毒桿菌毒素和類似物質的組合物以治療，例如，脂肪沉積，諸如，例如脂肪團、脂肪瘤等。在某些實施方案中，施用方法可以是全身的，例如，靜脈內或局部，諸如，例如經由注射、植入、局部制劑等。
[0043]在一個方面，本發(fā)明包括治療脂肪沉積的方法，所述方法包括向需要其的患者施用有效量的肉毒桿菌毒素組合物至皮膚或皮膚下。在某些實施方案中，例如，肉毒桿菌毒素組合物包括包封在磷脂膠束中的肉毒桿菌毒素、和/或一種或多種主穩(wěn)定劑、和/或一種或多種皮膚滲透促進劑。在替代實施方法中，注射A型肉毒桿菌毒素在皮膚的多個部位處進行，其中該鄰近注射的部位的`間隔為約0.1cm至IOcm,或約0.5cm至約5cm,或約1.5cm至約3cm。所述毒素可以是A、B、C、D、E、F和G型肉毒桿菌毒素的任一者。根據生產商的說明書、此類毒素等級和施用模式，施用的量可以在0.1U和1000U之間變化，合適的為約I至約40U,通常為約5U至約10U。因此，IU Botox等于約2_4單位的Dysport和約20-40單位的Myobloc0注射之間的距離可為約Imm至約IOcm,或約5mm至約5cm,或約Icm至約3cm。因此，例如可通過以約0.5cm至約IOcm(優(yōu)選為約2.5cm)的間隔真皮內注射約0.1U至約IOU而適當地施用肉毒桿菌A。肉毒桿菌B可以在1-500U的范圍內(優(yōu)選為100U)以1.5cm的間隔來施用。
[0044]以下定義應用于本文:
[0045]“約”是指大約或近似，并且在本文示出的數值或范圍的上下文中是指列舉或要求保護的數值或范圍的.+-.10%O
[0046]“痛苦”包括個體中的疾病、病癥、問題和/或美容上不需要的狀態(tài)或疾患。
[0047]“緩解”是指減少脂肪沉積相關癥狀的發(fā)生。因此，緩解可包括部分減少、顯著減少、幾乎完全減少和完全減少脂肪沉積相關癥狀。緩解作用可在向患者施用肉毒桿菌毒素后I至7天內臨床上不出現(xiàn)。
[0048]“肉毒桿菌毒素”是指肉毒桿菌神經毒素為純毒素(即約150kDa的分子重量)或復合物(即約300至約900kDa重量的復合物，其包括神經毒素分子和一種或多種相關的非毒性分子)，并且不包括非神經毒素的肉毒桿菌毒素(諸如細胞毒性肉毒桿菌毒素C2和C3)，但包括重組制備的、雜交的、修飾的和嵌合的肉毒桿菌毒素。
[0049]如應用于神經毒素的“有效量”是指該神經毒素的量通常足以影響受試者的所需變化。在一些實施方案中，可將神經毒素以約0.01U/kg至約35U/kg的量施用，并且治療的疼痛可顯著緩解約I個月至約27個月，例如約I個月至約6個月。
[0050]“改善的患者機能”是指由以下因子測量的改善，諸如減少的疼痛、減少的在床上度過的時間、更為光滑的皮膚、較少的皮膚異常、增加的行走活動、更健康的態(tài)度和更多樣的生活方式和/或正常的肌肉張力所許可的治愈。改善的患者機能含義與改善的生活質量(QOL)意義相同。例如，QOL可采用已知的SF-12或SF-36健康調查評分程序來評估。SF-36從生理機能、由于生理問題導致的作用限制、社會機能、身體疼痛、總體精神健康、由于情緒問題導致的作用限制、活力和總體健康觀念的八個方面評價患者的生理和精神健康。獲得的分數可以與適用于各種一般群體和患者群體的公開值比較。
[0051]“局部施用”或“局部地施用”是指施用(即通過皮下、肌內、皮下或經皮途徑)藥劑至患者的真皮或皮下位置附近。局部施用的合適方法可包括，例如，注射、局部施用、植入
等ο
[0052]“治療”是指臨時或永久地緩解(或者消除)至少一種脂肪沉積相關的癥狀，諸如皮膚異常，例如皮膚輪廓、質地或紋理的異常。
[0053]本發(fā)明涵蓋的藥物組合物包括適合于局部(topical)和區(qū)域(local)作用的藥物組合物。
[0054]本文所用的術語“局部”涉及如本文所述的組合物的用途，該組合物摻入于合適的藥用載體中并且施用于一個或多個脂肪沉積部位處用于發(fā)揮局部作用。因此，此類局部組合物包括那些藥物劑型，其中通過與待治療的皮膚表面接觸來外部施加該化合物。用于此目的的常規(guī)藥物劑型包括軟膏劑、搽劑、乳膏劑、洗發(fā)劑、洗劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑等，并可以以貼劑或浸潰敷料施用，這取決于待治療的身體部位。術語“軟膏劑”包括具有油性、水溶性和乳液型基質的制劑(包括乳膏劑)，如凡士林、羊毛脂、聚乙二醇以及其混合物。
[0055]該組合物可在一段持續(xù)時間內以規(guī)則或不規(guī)則間隔單次施用或反復施用。在某些實施方案中，本發(fā)明的組合物可被局部施用于待治療的身體部位，例如大腿、臀部、腿等。在某些實施方案中，本發(fā)明的組合物可被全身施用，諸如，例如，靜脈內施用。
[0056]為了對身體局部施用，通過加入藥學上可接受的緩沖液和鹽，該組合物可被配制成顯示出生理上可接受的滲透性的水溶液、乳膏劑，軟膏劑或油劑。取決于分配器，此類制劑可以或可以不含有防腐劑(諸如苯扎氯銨、氯己定、三氯叔丁醇、對羥基苯甲酸和苯汞鹽(諸如硝酸苯汞、氯化苯汞、乙酸苯汞、硼酸苯汞))或抗氧化劑，以及添加劑(如作為添加劑的EDTA、山梨醇、硼酸等)。此外，特別是水溶液可含有增粘劑，諸如多糖(如，甲基纖維素)、粘多糖(如透明質酸和硫酸軟骨素)或多元醇(如聚乙烯醇)。還可以使用各種緩釋的凝膠和基質，以及可溶性和不溶性眼用嵌入劑(例如基于形成原位凝膠的物質)。取決于使用的實際制劑和化合物，可使用各種量的藥物和不同劑量的方案。
[0057]所述肉毒桿菌毒素選自由A、B、C、D、E、F和G型肉毒桿菌毒素組成的組。A型肉毒桿菌毒素是優(yōu)選的肉毒桿菌毒素。[0058]用于本發(fā)明的肉毒桿菌毒素可以在容器中在真空壓下以冷凍、真空干燥的形式貯藏或作為穩(wěn)定的液體貯藏。凍干前，肉毒桿菌毒素可以與藥學上可接受的賦形劑、穩(wěn)定劑和/或載體(諸如白蛋白)聯(lián)合?？捎名}水或水復溶冷凍材料，以制成待向患者施用的含有肉毒桿菌毒素的溶液或組合物。
[0059]如本領域所知，示例性的、市售的含有肉毒桿菌毒素的組合物包括但不限
于，BOTOX、(A型肉毒桿菌毒素神經毒素與人血清白蛋白和氯化鈉的復合物，購自
Irvine, Calif的Allergan, Inc.,在100單位小瓶中，凍干粉末狀,使用前用0.9%氯化鈉復
溶)、DYSPORIk (在制劑中有A型肉毒梭菌毒素血細胞凝集素與人血清白蛋白以及乳
糖的復合物，購自Ipsen Limited, Berkshire, U.K.,粉末狀,使用前用0.9%氯化鈉復溶)，
如在本文的每種情況示出，其可以以約3至約4倍量的BOTOX'w使用，及MYOBLOC'
(包含B型肉毒桿菌毒素、人血清白蛋白、琥珀酸鈉和氯化鈉的注射溶液，pH值約5.6，購自Solstice Neurosciences, Inc., South San Francisco, Calif.),如在本文的每種情況不
出，其可以以約30到約50倍量的BOTOX?使用。XEOMIN?! (150kDaA型肉毒桿菌毒
素制劑，購自Merz Pharmaceuticals, Potsdam, Germany)是另一種有用的神經毒素，如在本
文的每種情況示出，其 可以以約I至約2倍量的BOTOX使用。
[0060]在額外的實施方案中，將不少于約IOU和不多于400U BOTOX i ;小少于約30U和
不多于約1600U DYSPORTx以及不少于約250U和不多于約20000U MYOBLOCx在每個部位、在每個患者治療階段施用。
[0061]在另外進一步的實施方案中，將不少于約20U和不多于300U BOTOX?;不少于約60U和不多于約1200U DYSPORTu以及不少于約1000U和不多于約15000 UMYOBLOC?在每個部位、在每個患者治療階段施用。
[0062]盡管該組合物只含有單一類型的肉毒桿菌毒素，諸如，例如A型作為活性組分，然而其它治療組合物可包括兩種或更多種類型的肉毒桿菌毒素。例如，向患者施用的組合物可包括A型肉毒桿菌毒素和B型肉毒桿菌毒素。施用含有兩種不同神經毒素的單一組合物可使得每種神經毒素的有效濃度低于在向患者施用單一神經毒素時同時仍獲得理想的治療效果的濃度。向患者施用的組合物還可含有與神經毒素或神經毒素類組合的其它藥物活性成分，諸如，例如，蛋白受體或離子通道調節(jié)劑等。
[0063]在某些實施方案中，本發(fā)明的組合物可包括重新靶向的內肽酶，該內肽酶是通過用靶向結構域替代梭菌屬毒素的天然存在的結合結構域而得到的分子，其顯示對存在于感興趣的細胞中的非梭菌屬毒素受體具有選擇性結合能力。對結合結構域進行的此類修飾形成一種能夠選擇性地結合至存在于靶細胞上的非梭菌屬毒素受體的分子。重新靶向的內肽酶可結合至靶受體、易位至胞質內，并發(fā)揮其對感興趣的神經元或非神經元的靶細胞的SNARE復合物的蛋白水解作用。
[0064]本發(fā)明的某些實施方案可使用植入物來施用。可用于實施本文公開的方法的植入物可通過將所需量的穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素(諸如非復溶的BOTOX? )或重新靶向
的內肽酶混合至溶解于二氯甲烷中的合適聚合物的溶液內。可在室溫制備溶液。然后可將溶液轉移至皮氏培養(yǎng)皿，并在真空干燥器中蒸發(fā)二氯甲烷。根據所需的植入物尺寸和因此摻入的藥物的量，將合適量的干燥的摻有神經毒素的植入物在模具中在約8000ρ.s.1.壓制5秒或在3000p.s.1.壓制17秒，以形成包封神經毒素的植入盤。參見如.FungLK.等，Pharmacokinetics of Interstitial Delivery of Carmustine4-Hydroperoxycyclophosphamide and Paclitaxel From a Biodegradable Polymer Implant in the MonkeyBrain, Cancer Research58;672-684:1998。
[0065]此外，在一些實施方案中，如在治療患有疾患或病癥的患者時通常所做的，醫(yī)生可在每種情況中根據疾患嚴重性的評估來改變劑量。此外，在一些實施方案中，取決于疾患的嚴重性和患者的總體健康，治療可能需要再重復至少一次，在一些情況下重復多次。例如，如果患者被認為身體上是不合適完全施用肉毒桿菌毒素，或者如果對于任何原因，完全施用是非需要的，在多種情況下，較小劑量可被證明是有效的。
[0066]當然，一般熟練的醫(yī)療供應商可以確定適當的劑量和施用頻率，以達到最佳臨床結果。也就是說，醫(yī)學領域普通技術人員能夠將適量的毒素(例如，A型肉毒桿菌毒素)在適當時間施用，以有效地治療該病癥。待施用的神經毒素的劑量取決于多種因素，包括眼部病癥的嚴重程度。根據本發(fā)明使用的毒素的劑量可等于根據本文所述的本發(fā)明所用的
BOTOXli的劑量。在本發(fā)明的各種方法中，可施用約0.0iu/kg(每千克患者體重的肉毒桿菌毒素U數)至約15U/kg BOTOXs0在一些實施方案中，可施用約0.?υ/kg至約20U/
kg BOTOX?。 使用約0.?υ/kg至約30U/kg BOTOX?是在根據本公開的發(fā)明實施方法的
范圍內。在一個實施方案中，可施用約0.lU/kg至約150U/kg的肉毒桿菌毒素(例如A型)。
[0067]顯然，本發(fā)明的范圍內的方法可提供改善的患者功能。
[0068]例如，可以以每個受影響部位IOU至1000U肉毒桿菌毒素的劑量，或以每個受影響部位20U至800U肉毒桿菌毒素的劑量施用肉毒桿菌毒素，或以每個受影響部位50U至500U肉毒桿菌毒素的劑量，或以每個受影響部位IOOU至400U肉毒桿菌毒素的劑量，或以每個受影響部位200U至300U肉毒桿菌毒素的劑量等施用所述肉毒桿菌毒素組合物。
[0069]在一些實施方案中，受影響的區(qū)域可包括多個毒素施用部位。
[0070]在一些實施方案中，可以以每個受影響部位0.01U至20U肉毒桿菌毒素的劑量，或以每個受影響部位0.05U至15U肉毒桿菌毒素的劑量，或以每個受影響部位0.1U至IOU肉毒桿菌毒素的劑量,或以每個受影響部位IU至5U肉毒桿菌毒素的劑量或以這些范圍內的量等施用所述肉毒桿菌毒素組合物。在某些實施方案中，施用可以繼續(xù)進行，例如持續(xù)I天至8周。在實施方案中，以每個施用部位0.1U至IOU肉毒桿菌毒素的劑量每天施用肉毒桿菌毒素組合物，持續(xù)I至2周。在另一實施方案中，以IU至5U的劑量施用肉毒桿菌毒素組合物，持續(xù)2天至10天。在另一實施方案中，以每個受影響部位2U至3U肉毒桿菌毒素的劑量每天施用肉毒桿菌毒素組合物，持續(xù)5至7天。
[0071 ] 適于包含在組合物中的活性成分包括A型、B型、C型、D型、E型、F型和G型肉毒桿菌毒素。其它活性成分可包括但不限于，雄激素類、雄烯二醇和雄異噁唑(適于合成代謝紊亂)、睪酮(性腺功能減退、肌萎縮、男性陽萎、女性絕經后癥狀)、去氫睪留酮(性腺功能減退、肌肉萎縮)、去氫表雄酮(肌肉萎縮、脂肪減少、健康)；雌激素(絕經后癥狀、節(jié)育)，17 β -雌二醇、雌二醇-3，17- 二乙酸酯、雌二醇-3-乙酸酯、雌二醇-17-乙酸酯、雌二醇_3，17-戊酸酯、雌二醇-3-戊酸酯、雌二醇-17-戊酸酯、炔雌醇、雌酮；孕酮(預防子宮內膜異位，預防子宮內膜癌，控制習慣性流產，抑制發(fā)情期或使發(fā)情期同步化、促進毛發(fā)生長)、孕酮(孕 _4_ 烯 _3，20- 二酮)、塊諾酮、norgestrieone、norgestadienone、甲基塊諾酮、諾孕酯、促黃體素、二氫孕酮、諾美孕酮(nomagesterol)。睪酮激素可以任何其常見的形式使用，諸如乙酸酯、丙酸酯、17-β -環(huán)戍燒丙酸酯、庚酸酯(enanthanate)、異丁酸酯、十一酸酯等。類似地，雌二醇可另外以任何已知的或新開發(fā)的形式使用，諸如，例如新戊酸酯、丙酸酯、環(huán)戊丙酸酯、苯甲酸酯和其它酯。
[0072]本發(fā)明的組合物還可包括胰島素、胰島素樣生長因子、疫苗、胰高血糖素樣肽(GLP)、胰島素樣生長因子(IGF)、肝素、水蛭原(hirugen)、水蛭聯(lián)(hirulos)、水蛭素(huridine)、流行性腮腺炎、麻疹和風疹疫苗、傷寒疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、單純性皰疹病毒、細菌類毒素、霍亂毒素B亞單位、流感疫苗病毒、百日咳博德特氏菌(bordetala pertussis)、痘苗病毒、腺病毒、金絲雀痘病毒、脊髓灰質炎疫苗病毒(poliovaccine virus)、惡性痕原蟲、卡介苗(BCG)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、HIV包膜糖蛋 白、牛生長激素(bovine somatropine)、雌激素、雄激素、胰島素生長因子、白細胞介素-1、白細胞介素-1l和細胞因子、小分子藥物(諸如NSAID、麻醉劑和各種其它肽、遺傳物質和小分子)。
[0073]其它活性成分可包括各種類型的抗氧化劑?？砂ㄔ诮M合物中的自由基清除劑的一些實例包括但不限于，維生素A、C和E、礦物鋅和硒、番茄紅素、N-乙?；?半胱氨酸氨基酸及天然植物葡萄皮、越桔和綠茶的提取物。
[0074]在某些實施方案中，本發(fā)明的組合物可包括促進愈合的劑。例如，諸如硝酸甘油和一硝酸甘油酯的血管擴張劑可包封在磷脂膠束中，并且然后將其與膠原蛋白和/或彈性蛋白在洗劑或乳膏劑制劑中結合，并施用到皮膚。不受該解釋的限制，認為與例如經由皮膚貼劑的施用相比，組合物中血管擴張劑的配方增強滲透率。過氧化氫和/或全氟碳的包含可進一步增強氧合和愈合。
[0075]該組合物可含有單一活性組分，或者在同一組合物中含有多種活性組分。預期活性成分的各種組合包含于該組合物中。
[0076]促進皮膚對活性成分的吸收的皮膚滲透促進劑也可包括在組合物中。特別地，一種或多種皮膚滲透促進劑可用于促進肉毒桿菌毒素滲透通過患者的皮膚。皮膚滲透促進劑的實例包括但不限于醇(諸如短鏈醇、長鏈醇或多元醇)、胺和酰胺(諸如脲、氨基酸或其
酯、酰胺)、AZONE?、AZONE?鈉衍生物、吡咯烷酮、或吡咯烷酮衍生物；萜和萜的衍生物；脂肪酸及其酯；大環(huán)化合物；表面活性劑；或亞砜(諸如癸基甲基亞砜)。脂質體、傳遞體、卵磷脂囊泡、脂質體、醇質體、水表面活性劑(諸如陰離子、陽離子和非離子表面活性劑)、多元醇和精油還可以作為皮膚滲透促進劑。
[0077]本發(fā)明的實施方案可包括磷脂膠團。在某些實施方案中，例如,磷脂膠束可包含鞘氨醇和腦苷脂等。在一些實施方案中，例如，主穩(wěn)定劑可包括彈性蛋白和膠原等。在一些實施方案中，一種或多種皮膚滲透促進劑可選自下組，該組包括，例如，d-檸檬烯、尿囊素、富里酸(fulvic acid)、沒藥、氫醌 glyquin(hydroquinone glyquin)、皂樹(QTS)、acanthophyllum squarrusom(ATS)等，它們可以是單獨或組合的。
[0078]在實施方案中，肉毒桿菌毒素組合物包括:
[0079]約1% 至 40%w/w 膠原；
[0080]約1%至40%w/w彈性蛋白；
[0081 ] 約0.1%至15%w/w鞘氨醇磷脂；和
[0082]約0.1%至15%w/w腦苷脂磷脂。
[0083]所述組合物也可以一定形式用于局部施用，由此該組合物穿透皮膚并經皮切除肌肉下的神經。
[0084]所述組合物可包括d-檸檬烯，以增強活性成分通過真皮層的滲透。已發(fā)現(xiàn)檸檬烯在0.30%時是有效的皮膚滲透促進劑，使A型肉毒桿菌毒素的皮膚滲透增強大約四倍。
[0085]阜樹(QTS)和Acanthophyllum squarrusom (ATS)總阜苷是兩種還可被包括在組合物中的天然皮膚滲透促進劑。作為皮膚滲透促進劑，它們顯示出適度活性。
[0086]尿囊素也可被包括在組合物中。尿囊素用作皮膚保護劑和溫和的中性皮膚滲透促進劑。
[0087]富里酸還可以作為皮膚滲透促進劑被包括在組合物中。富里酸是低分子量的抗氧化劑，其增強身體通過經皮途徑吸收藥物。
[0088]沒藥還可作為皮膚滲透促進劑被包括在組合物中。沒藥是從阿拉伯和索馬里灌木提取的樹膠脂。
[0089]對苯二酹(Eldopaque)或氫醌glyquin還可作為皮膚滲透促進劑被包括。
[0090]膠原(與彈性蛋白以及鞘氨醇和腦苷脂組合)在組合物中的用途是保持復合物的完整性而不變性或碎裂或解毒。因此，肉毒桿菌毒素可被穩(wěn)定，并且穩(wěn)定的毒素可以被成功地經皮遞送，以得到與那些肌內注射肉毒桿菌毒素所獲得的結果相似的結果。與主要靶向至眼睛和前額周圍的區(qū)域的肉毒桿菌毒素注射液相比，該制劑可應用于整個臉部、頸部、腋窩和手以減少皺紋。
[0091]所述組合物可以包括微球。所述組合物是化妝品組合物，其包括水和其它常用于化妝品中的添加劑。例如，其可包括增稠劑、防腐劑、乳化劑、香料、染料或著色劑、植物油或礦物油、殺菌劑、酸化劑或堿化劑、維生素、抗UV劑、表面活性劑、溶劑、pH穩(wěn)定劑和已知在皮膚上有效的其它活性成分。所述組合物還可被包括在化妝品制劑(諸如，例如粉底等)中。
[0092]還可包括附加組分以將所述組合物配制成適用于局部施用的其它形式，諸如乳膏齊?、洗劑、噴霧劑、面膜(mask)、凝膠劑等。如果配制成乳膏劑或溶液，則所述組合物應該含有足夠濃縮量的活性成分，以使得所述組合物不會從施用區(qū)域滴落。
[0093]所述組合物還可以被在貼劑上供應，所述貼劑黏附地固定于皮膚上，使得活性成分諸如肉毒桿菌毒素可從貼劑透過皮膚。
[0094]一種制備用于局部施用的穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素組合物的優(yōu)選方法如下所示。簡言之，將等量的膠原和彈性蛋白溶解于鹽水中。在單獨的燒瓶中，將等量的鞘氨醇和腦苷脂溶于乙醇中。然后去除醇。將A型肉毒桿菌毒素溶解于鹽水中，并然后加入至燒瓶中，并且將燒瓶渦旋，以用磷脂膠束涂層涂覆所述肉毒桿菌毒素蛋白。然后將該溶液加入至膠原和彈性蛋白的溶液。該方法可用于制備含有其它類型的肉毒桿菌毒素的組合物。
[0095]可在制備方法的不同階段包括皮膚滲透促進劑。例如，當將所述膠束組合物加入到膠原和彈性蛋白的混合物的同時，可將它們加入到穩(wěn)定組合物。優(yōu)選地，在配制穩(wěn)定組合物期間將皮膚滲透促進劑引入到藥物或化妝品制劑中。
[0096]如從上下文、本說明書和本領域普通技術人員的知識中顯而易見的，本文描述的任何特征或特征的組合都包括在本發(fā)明范圍內，只要包括在任何這樣的組合的特征不互相矛盾。
[0097]當然，一般熟練的醫(yī)療提供者可以確定適當的劑量和施用頻率，以達到最佳臨床結果。也就是說，醫(yī)學領域普通技術人員將能夠在適當的時間施用適量的肉毒桿菌毒素，例如A型肉毒桿菌毒素，以有效治療脂肪沉積。待施用的神經毒素的劑量取決于多種因素，包括脂肪沉積的嚴重程度。本發(fā)明還提供用于治療哺乳動物中的脂肪沉積的組合物。
[0098]已知A型肉毒桿菌毒素的效能可長達12個月(EuropeanJ.Neurology6(增刊4):S111-S1150:1999),并且在某些情況下長達27個月。TheLaryngoscopel09:1344-1346:19990然而，肌內注射A型肉毒桿菌的常見持續(xù)時間通常為約3至4個月。
實施例[0099]實施例1
[0100]肉毒桿菌毒素組合物的制備
[0101]將肉毒桿菌毒素(BOTOX?)小瓶在無菌鹽水溶液(0.9%)中復溶。輕輕振搖小瓶
以溶解肉毒桿菌毒素。將復溶的小瓶冷凍保存，并在復溶I小時內應用。
[0102]在50mL容量的圓底燒瓶中，將IOmg可溶性膠原和IOmg彈性蛋白合并。在持續(xù)攪拌下將混合物溶解于IOmL無菌鹽水溶液(0.9%)中。在單獨的50mL圓底燒瓶中，將5mg鞘氨醇和5mg腦苷脂合并。將該混合物溶解于ImL純乙醇中。通過旋轉真空蒸發(fā)，完全去除乙醇，以在燒瓶壁上獲得鞘氨醇和腦苷脂的均勻涂層。向該燒瓶加入800單位的肉毒桿菌毒素在6ml(0.9%)鹽水中的溶液。將燒瓶渦旋，然后在室溫連續(xù)攪拌5分鐘，以用鞘氨醇和腦苷脂膠束涂料均勻地涂覆肉毒桿菌毒素。然后將該涂覆并保存的膠束狀肉毒桿菌毒素溶液，加入至含有膠原和交聯(lián)的低分子量彈性蛋白的混合物的燒瓶中。將溶液攪拌約5分鐘，并然后室溫保存于棕色玻璃小瓶中。
[0103]實施例2
_4] 肉毒桿菌毒素乳膏劑制劑
[0105]將實施例1的穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素組合物配制成如下文概述的用于局部施用的乳膏劑。乳膏的總體積(400mL):
[0106]相A:去電離水74.7%EDTA四鈉0.5-0.7%對羥基苯甲酸甲酯0.2%丙二醇
3.0%-4.0% 丙三醇 3.0%-4.0%
[0107]相B:鯨蠟醇(Adol52NE) 2.0%鯨蠟硬脂醇2.0%硬脂酸甘油酯2.0%PEG_100硬脂酸酯1-2%硬脂酸(Emersol 132) 4.5%脫水山梨糖醇棕櫚酸酯0.5-0.7%聚山梨醇酯-851.0%聚山梨醇酯600.5-1%羊毛脂醇(Ritachol) 1.0%霍霍巴油0.5-1%羊毛脂1-2%生育酚乙酸酯0.5-1% 二甲硅油2000.7-1.0%ΒΗΑ0.1%對羥苯甲酸丙酯0.1%重氮烷基咪唑脲0.2%[0108]相C:芳香劑(丁香、茉莉)(如需要)蘆薈(粉末)1.5%-2.0%CoQ-100.5%視黃醇
0.03-0.05% 透明質酸(純)1.0-1.5% 滑石粉末(Τ?02) 1.0-1.5%
[0109]相D:d-檸檬烯 0.7% 尿囊素 0.5% 富里酸 0.5% 皂樹(QTS)0.3%Acanthophyllumsquaimsom (ATS) 0.3% 沒藥提取物 0.2% 氫醌 Glyquin4.0%
[0110]相E:在膠原基質中穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素(800單位)
[0111]程序:在振蕩下分別將相A和相B加熱至75°C。將相A加入至相B，并在75V混合30分鐘。冷卻至20-22°C，并然后加入相C、D和E，并繼續(xù)振蕩直至均質的一相。
[0112]實施例3 [0113]肉毒桿菌毒素膠束溶液的制備
[0114]獲得為冷凍干產物的A型肉毒桿菌毒素(BOtOX' Allergan)，并將其復溶于無菌
鹽水溶液(0.9%)中。將小瓶振搖以溶解肉毒桿菌辟尜(BOTOX?)。將復溶的小瓶冷凍保存并在復溶I小時內如下所述地使用。
[0115]在50mL容量的圓底燒瓶中，稱量IOmg可溶性膠原、IOmg彈性蛋白。將混合物溶解于IOmL無菌鹽水溶液(0.9%)中。將混合物持續(xù)攪拌。
[0116]在單獨的50mL圓底燒瓶中，稱量5mg磷脂酰膽堿和5mg膽固醇。將混合物溶解于約lmL70%乙醇中。向該溶液中加入IOmg十二烷基硫酸鈉(SDS)和IOmg 二甲亞砜(DMSO)，
并將其溶解以制備均勻同質的溶液。向該燒瓶加入1000單位的肉毒桿菌毒素(Botox?)在
5ml (0.9%)鹽水中的溶液。將燒瓶渦旋，并然后室溫持續(xù)攪拌5分鐘。將膠原和彈性蛋白的溶液加入至該溶液中。將溶液緩慢攪拌約5分鐘，然后室溫保存在棕色玻璃小瓶中。
[0117]局部用乳膏劑的制備
[0118]局部用基質組合物的制備如下所述。
[0119]局部用基質成分的組合物:
[0120]丙三醇(保濕劑)4.0Og[0121 ] 鋁鋯絡合物或鋁10.0g
[0122]氫氯酸鹽(膠凝劑)
[0123]環(huán)六亞甲基四胺(皮膚滲透促進劑8.00和涂層劑，和凝膠形成化合物)
[0124]十二烷基硫酸鈉0.1Og
[0125]DMS00.10 變性醇 5.0Og
[0126]DMDM乙內酰脲(防腐劑)0.20g
[0127]嬰兒爽身粉(芳香劑)0.1Og
[0128]卡波姆940聚合物或羥丙基纖維素5.0Og
[0129]向該基質組合物加入如上部分(a)所述制備的穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素組合物，以獲得以下濃度:2單位A型肉毒桿菌毒素/ImL所得的乳膏劑。將所得乳膏劑緩慢攪拌約30-45分鐘，以得到均質的組合物。然后將如此制備的乳膏劑在室溫或低于室溫下儲存以備將來使用。
[0130]實施例4
[0131]注射施用以治療脂肪團
[0132]將200-300單位注射至肥胖個體的皮下脂肪內。[0133]據報告，一名患有超過二十年肥胖癥的42歲女性患者抱怨嚴重嗜睡和抑郁。她不能夠再進行過去的活動，并已嘗試多種丸劑和療法以試圖并降低其體重。她向醫(yī)生抱怨她的臀大肌下的脂肪團，醫(yī)生確定該脂肪團是臀褶。她的腰圍測量為60英寸。用A型肉毒神經毒素對其治療，每100單位用4mL稀釋液(增加擴散)。如下對其注射:
[0134]將臀褶劃分為正好從臀部下開始的4X6方形網格。
[0135]將120單位施用至24個注射部位，向雙腿的每個注射部位(對于雙腿，總共有240單位)施用大約5單位的A型肉毒桿菌毒素。將A型肉毒神經毒素靶向至皮下脂肪組織。4周后，她回來并報告脂肪團出現(xiàn)減少。她被該結果激起興趣，并已被要求在3個月期間進行復治。
[0136]總之，通過將A型肉毒桿菌神經毒素靶向至肥胖成人的皮下脂肪組織，該種新型注射范式導致對注射的和鄰近的脂肪組織有脂解作用。復治時，這種脂肪過多將繼續(xù)變薄并使皮下脂肪和脂肪細胞/脂細胞中的脂肪球破碎。
[0137]實施例5
[0138]局部施用以治療脂肪瘤
[0139]局部施用50-100U至脂肪瘤的脂肪組織
[0140]58歲女性患者前來就醫(yī)，因為有相當大的脂肪瘤再現(xiàn)于其鎖骨和頸部之間?；颊吒械讲皇娣?，并由于手術去除不是永久的，她對其它選項感興趣。醫(yī)生用A型乳膏劑肉毒桿菌神經毒素治療脂肪瘤。由于這是第一次治療，在一次向脂肪瘤的直接施用中使用50U。4周后檢查該患者，并記錄到脂肪瘤尺寸顯著降低。醫(yī)生決定復治該患者，在3個月后再施用50U。
【權利要求】
1.一種治療脂肪沉積的方法，其包括向患者的受影響區(qū)域施用肉毒桿菌組合物，從而治療所述脂肪沉積。
2.根據權利要求1所述的方法，其中所述患者是雌性。
3.根據權利要求1所述的方法，其中所述肉毒桿菌組合物包括A型肉毒桿菌。
4.根據權利要求3所述的方法，其中以約200單位至約300單位的量施用所述A型肉毒桿菌。
5.根據權利要求4所述的方法，其中約每2個月至約每6個月再次施用所述肉毒桿菌毒素。
6.根據權利要求1所述的方法，其中所述施用包括局部施用。
7.根據權利要求6所述的方法，其中所述肉毒桿菌組合物包括A型肉毒桿菌。
8.根據權利要求1所述的方法，其中所述施用包括經由注射的施用。
9.根據權利要求8所述的方法，其中所述肉毒桿菌組合物包含A型肉毒桿菌。
10.根據權利要求9 所述的方法，其中所述A型肉毒桿菌包含900kDA型復合物。
【文檔編號】A61P3/04GK103702681SQ201280035860
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2012年7月19日 優(yōu)先權日:2011年7月20日
【發(fā)明者】K·策爾諾克, K·馬丁內茲 申請人:阿勒根公司